Revista de Salud Animal

Implementation in Cuba of a molecular assay for the detection of Brucella spp. in humans

RESUMEN La brucelosis es una zoonosis que puede cursar con síntomas leves o con manifestaciones severas. Las técnicas moleculares son muy sensibles y específicas en la detección oportuna y precoz del ADN de Brucella spp., tanto al inicio de la infección como en las recidivas y en las fallas terapéuticas. El propósito de la presente investigación fue implementar una PCR convencional (bcsp) que permita el diagnóstico oportuno de la brucelosis humana en Cuba, y así contribuir a evitar la aparición de complicaciones que pueden provocar secuelas invalidantes en el paciente. Se realizó una investigación de servicios y sistemas en el Laboratorio Nacional de Referencia de Brucelas del IPK para evaluar la PCR-bcsp. Se determinaron los parámetros de sensibilidad y especificidad analíticas, así como sensibilidad y especificidad diagnósticas. La PCR convencional se aplicó a 86 sueros de casos sospechosos de brucelosis humana que resultaron negativos a los ELISAs IgM e IgG para Brucella . La PCR-bcsp presentó un límite de detección de 6,403 fg/µL, la especificidad analítica fue del 100 %, mientras que la sensibilidad y la especificidad diagnósticas mostraron valores de 96,3 % y 100 %, respectivamente. Tras su aplicación en sueros de casos probables de brucelosis humana negativos por serología se alcanzó un 85 % de positividad. La presente investigación fortaleció el diagnóstico microbiológico de la brucelosis humana en Cuba porque quedó implementada una herramienta molecular que garantiza el diagnóstico temprano de la enfermedad en nuestro medio.

ABSTRACT Brucellosis is a zoonosis that may cause mild symptoms or severe manifestations. Molecular techniques are very sensitive and specific in the timely and early detection of Brucella spp. DNA, both at the beginning of the infection and in relapses and therapeutic failures. The aim of the present research was to implement a conventional PCR-bcsp that would allow the timely diagnosis of human brucellosis in Cuba, and thus contribute to avoid the occurrence of complications that can lead to disabling sequelae in the patient. A service and system research was carried out at the National Reference Laboratory for Leptospira and Brucella at IPK to evaluate the PCR-bcsp. The parameters of analytical sensitivity and specificity, as well as diagnostic sensitivity and specificity were determined. Conventional PCR was applied to 86 sera from suspected cases of human brucellosis that were negative to the IgM and IgG ELISAs for Brucella. PCR-bcsp presented a detection limit of 6.403 fg/µL. Analytical specificity was 100 %, while the diagnostic sensitivity and specificity showed values of 96.3 % and 100 %, respectively. After its application to sera from serologically negative probable cases of human brucellosis, 85 % positivity was reached. The present research strengthened the microbiological diagnosis of human brucellosis since a molecular tool guaranteeing the early diagnosis of the disease in Cuban environment has been implemented.

VIUSID VET^® on the growth, frequency and severity of pneumonia in pre-fattening pigs

RESUMEN El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto de VIUSID VET® líquido (CATALYSIS) en la ganancia media diaria de peso (GMD), la frecuencia y la gravedad de la neumonía en precebas porcinas. Se utilizaron cerdos mestizos al destete (26 días) alojados en grupos de 10 individuos a razón 4,76 m2/cerdo, sobre piso plástico ranurado, dentro de una instalación cerrada con ventilación mecánica mediante extractores. Dos tratamientos consistentes en VIUSID VET® líquido al 0,2 % en el agua de bebida o control se asignaron aleatoriamente. En la evaluación de la GMD se utilizaron 80 precebas porcinas divididas en igual cantidad entre el grupo tratado con VIUSID VET® y el control. Para comparar las de proporciones de pulmones neumónicos se incluyeron 314 individuos (161 tratados con VIUSID VET® y 153 controles), mientras la gravedad de la neumonía incluyó 63 precebas (29 tratadas y 34 controles). VIUSID VET® propició asimetría positiva en la GMD con mayor número de animales por encima de la media del grupo mientras el control mostró asimetría negativa. El tratamiento con VIUSID VET® promovió una prevalencia de neumonía significativamente menor (41,61 % vs 62,74 %), así como tendencia a menor gravedad de este trastorno con valores medios equivalentes a los de la mitad del grupo control. La reducción significativa de la prevalencia de neumonía promovida por VIUSID VET®, permite esperar que su uso en precebas porcinas se acompañe de mejoras del desempeño productivo con beneficios en la economía del productor, así como ambientales como alternativa a los antibióticos.

ABSTRACT The aim of the present study was to evaluate the effect of liquid VIUSID VET® (CATALYSIS) on average daily weight gain (ADG), frequency and severity of pneumonia in pre-fattening pigs. Crossbred pigs at weaning (26 days) were housed in cubicles with grooved plastic floors, in groups of 10 individuals at a rate of 4,76 m2/pig, inside a closed facility with forced ventilation by means of extractors. Two treatments consisting of 0.2% liquid VIUSID VET® in the drinking water or control were randomly assigned. In ADG evaluation, 80 pre-fattening pig equally divided between the VIUSID VET®-treated group and the control were used. To compare the proportions of pneumonic lungs, 314 individuals were included (161 treated with VIUSID VET® and 153 controls), while the severity of pneumonia included 63 pre-fattening pigs (29 treated and 34 controls). VIUSID VET® promoted a positive asymmetry in ADG with more animals above the group mean, while the control showed a negative asymmetry. Treatment with VIUSID VET promoted a significantly lower prevalence of pneumonia (41.61 % vs. 62.74 %), as well as a trend towards lower severity of this disorder with mean values equivalent to those of half of the control group. The significant reduction in the prevalence of pneumonia promoted by VIUSID VET®, leads to expect that its use in swine herds will be accompanied by improvements in the productive performance with benefits in the producer's economy, as well as environmental benefits as an alternative to antibiotics.

Multidrug-resistant bacteria recovered from the respiratory and reproductive tracts of horses from Mayabeque, Cuba

Abstract Antimicrobial resistance in bacteria isolated from horses represents a threat to global health due to the close relationship of these animals with humans. This study aimed to elucidate the antimicrobial susceptibility profiles of bacteria with pathogenic and zoonotic potential, isolated from the respiratory and genital tracts of horses in Mayabeque, Cuba. Nasal and genital exudates were collected from twenty-three horses, and the isolates obtained were identified using the analytical profile index and mass spectrometry. The minimum inhibitory concentration (MIC) of thirteen antibiotics was determined for the isolates. Twenty-three bacterial isolates, including one Streptococcus uberis, sixteen Enterococcus spp., three Staphylococcus sciuri, one Morganella morganii, and two Stenotrophomonas maltophilia, were obtained. S. uberis showed resistance to gentamicin, enrofloxacin, and doxycycline, while enterococci isolates displayed resistance to doxycycline (n=16), rifampicin (n=8), erythromycin (n=7), enrofloxacin (n=3), and chloramphenicol (n=1). All S. sciuri isolates were resistant to at least six antibiotics, including methicillin, with high MIC values for erythromycin (>8192 µg/ml), doxycycline (128 µg/ml), and gentamicin (64 µg/ml). M. morganii isolate was resistant to three antibiotics, with MICs of 128 μg/ml and 256 μg/ml for cefquinome and doxycycline, respectively. S. maltophilia isolates exhibited resistance to cefquinome, with MIC values of 512 μg/ml and 128 μg/ml, respectively. The 91.3% of the isolates were multiresistant to antimicrobials, which represents the first detection in Cuba of bacteria with multiresistance phenotypes, isolated from samples of the nasal and genital mucosa of horses.

Resumen La resistencia a antimicrobianos en bacterias aisladas de caballos representa una amenaza para la salud mundial debido al estrecho vínculo de estos animales con los humanos. El objetivo de este estudio fue describir los perfiles de susceptibilidad a antimicrobianos de bacterias con potencial patogénico y zoonótico, aisladas de los tractos respiratorio y genital de caballos procedentes de Mayabeque, Cuba. Se recopilaron exudados nasales y genitales de veintitrés caballos, y se utilizó el índice de perfil analítico y espectrometría de masas para realizar la identificación de los aislados obtenidos. Se determinó la concentración mínima inhibitoria (CMI) de trece antibióticos, frente a los aislados. Se obtuvieron veintitrés aislados bacterianos (un Streptococcus uberis, dieciséis Enterococcus spp., tres Staphylococcus sciuri, un Morganella morganii y dos Stenotrophomonas maltophilia). S. uberis mostró resistencia a gentamicina, enrofloxacina y doxiciclina. Los aislados de enterococci fueron resistentes a doxiciclina (n=16), rifampicina (n=8), eritromicina (n=7), enrofloxacina (n=3) y cloranfenicol (n=1). Todos los aislados de S. sciuri fueron resistentes al menos a seis antibióticos incluyendo meticilina, con altos valores de CMI para eritromicina (>8192 µg/ml), doxiciclina (128 µg/ml) y gentamicina (64 µg/ml). El aislado de M. morganii fue resistente a tres antibióticos con CMIs de 128 μg/ml y 256 μg/ml para cefquinoma y doxiciclina, respectivamente. Los aislados de S. maltophilia mostraron resistencia a cefquinoma con valores de CMI de 512 y 128 μg/ml respectivamente. El 91,3% de los aislados resultaron multirresistentes a antimicrobianos, lo cual representa la primera detección en Cuba de bacterias con fenotipos de multirresistencia, aisladas de muestras de la mucosa nasal y genital de caballos.

Health status of Melipona beecheii Bennett hives in two urban scenarios of Cuba

RESUMEN El objetivo de esta investigación fue evaluar el estado de salud de Melipona beecheii Bennett en dos meliponarios ubicados en áreas urbanas de las provincias de Matanzas y Mayabeque, Cuba, sobre la base de la inspección clínica y la productividad de las colmenas. De cada uno se seleccionaron, al azar, 12 colmenas del modelo racional Fernando Oliveira/INPA. Se aplicó el método clínico diseñado para colmenas de la abeja melífera, con las consideraciones relativas a la especie. Se obtuvo el registro de cosecha (productividad) de ambos meliponicultores, en 2019. Los resultados mostraron colmenas fuertes, la presencia de abejas guardianas en las entradas y la ausencia de síntomas de enfermedad durante la inspección interna. La producción de miel en el año satisfizo las exigencias de los productores y les permitió acumular reservas, además de abundante polen ensilado. Se evidenció la factibilidad del manejo de meliponarios en escenarios urbanos y el mantenimiento de su estado de salud que, en la concepción gerencial, comprende no solo la ausencia de manifestaciones clínica de enfermedad, sino también la obtención de la productividad esperada, al tratarse de una especie ganadera.

ABSTRACT This research aimed to evaluate the health status of Melipona beecheii Bennett in two colonies located in urban areas of Matanzas and Mayabeque provinces, Cuba. This was carried out by the clinical inspection and productivity of hives. Twelve hives were randomly selected from Fernando Oliveira/INPAD rational model in each scenario. The clinical method designed for honey bee hives was applied, considering the species.Harvest record (productivity) was obtained from both honey beekeepers for 2019. Results showed strong hives, the presence of guard bees at the hive's entrance and the absence of disease symptoms during internal inspection. Honey production during the year satisfied the producers' demands and allowed them to keep stocks, as well as abundant silage pollen. The feasibility of managing beehive colonies in urban scenarios and keeping them healthy was evidenced, which included not only the absence of clinical manifestations of diseases, but also the obtaining of the productivity expected, since it is a livestock species.

Component 3 Initial Workshop. FEF CUBA SystemAgrOH Project: Sustainable management of food systems and co-innovation in Cuba, as part of the "One Health" approach

Report of enzootic calcinosis associated with the consumption of CESTRUM DIURNUM (day blooming jasmine) in a red deer (CERVUS ELAPHUS) from the national zoo of Cuba

RESUMEN Se reportó un caso de ciervo rojo cautivo (Cervus elaphus) del Parque Zoológico Nacional de Cuba que presentaba adelgazamiento y cifosis con dificultades para caminar. En el cuartón donde se encontraba pastoreando había proliferado Cestrum diurnum, el cual ingirió durante un período aproximado de dos meses de sequía en el que además consumió poco forraje. El animal falleció y en la necropsia se encontraron como hallazgos más sobresalientes, mineralización de tejido en la aorta y las arterias carótidas y pulmonares, y calcificación de todo el parénquima pulmonar. Además, se observó atrofia serosa de la grasa coronaria del corazón y del tejido celular subcutáneo como señales de desnutrición. En este sentido, se concluye que la combinación de factores dados por la sequía intensa, la exposición abundante a Solanum glaucophyllum y el cuadro morfopatológico encontrado, se trataba de un caso de calcinosis enzoótica asociado al consumo de Cestrum diurnum.

ABSTRACT There was a report of a case of a captive red deer (Cervus elaphus) from the National Zoo of Cuba showing weight loss and kyphosis with walking difficulties. Cestrum diurnum had proliferated in the pasture where it was grazing and was ingested during a period of approximately two dry months, in which it also consumed little forage. The animal died, and at necropsy, the most outstanding findings were tissue mineralization of the aorta, carotid and pulmonary arteries, and calcification of the entire lung parenchyma. Additionally, a serous atrophy of the coronary heart fat and subcutaneous cellular tissue was observed as evidence of malnutrition. In this sense, it is concluded that the combination of factors given by the intense drought, the abundant exposure to Solanum glaucophyllum and the morphopathological picture found, represented a case of enzootic calcinosis associated with the consumption of Cestrum diurnum.

Management of Aethina tumida (Murray) with Beauveria bassiana (Bals) and Metarhizium anisopliae (L.) In vivo assay

Resumen El trabajo se realizó en el Laboratorio III de la Facultad de Ciencias Agropecuarias en la Universidad de Sancti Spíritus para determinar el efecto de cuatro dosis de las cepas LBb-111 y LBb-1234 de Beauveria bassiana Bals. y la Ma-34 de Metarhyzum anisopliae L. en la mortalidad de larvas y adultos de Aethina tumida colectados en apiarios infectados. Para el desarrollo del experimento, se elaboró una mezcla con 375g de suelo + 100g de arena lavada + cuatro dosis de los entomopatógenos. Luego se colocaron 500g de la mezcla en boxes (6,2cm de alto x15,5cm de diámetro). En un primer ensayo, se colocaron 10 larvas/boxes/dosis y en otros, 10 adultos/boxes/dosis con siete réplicas por tratamiento, respectivamente. Cada 24 horas se determinó el porcentaje de mortalidad y se realizó un análisis factorial con interacción entre las dosis y las cepas empleadas. La cepa LBb-111 de B. bassiana y Ma-34 de M. anisopliae alcanzaron el mayor porcentaje de mortalidad de adultos con 40g y 60g, con valores superiores al 50 % en 96 horas. El mayor porcentaje de mortalidad de larvas se alcanzó con la dosis de 60g con la cepa LBb-111de B. bassiana en 96 horas.

Abstract The work was carried out at Laboratory III, Agricultural Sciences Faculty, University of Sancti Spíritus. Its aim was to determine the effect of four doses of strains LBb-111 and LBb-1234 of Beauveria bassiana Bals. and Ma-34 of Metarhyzum anisopliae L. on the mortality of Aethina tumida larvae and adults collected in infected beehives. A mixture of 375 g of soil + 100 g of washed sand + four doses of entomopathogens was used for the experiment. Then, 500 g of the mixture were placed in boxes (6.2 cm high x 15.5 cm diameter). Ten larvae/boxes/dose were placed in a first assay and 10 adults/boxes/dose in others, with seven replicates per treatment, respectively. Mortality percentages were determined every 24 hours and a factorial analysis was carried out with an interaction between the doses and the strains used. As a result, Strain LBb-111 of B. bassiana and Ma-34 of M. anisopliae reached the highest percentage of adult mortality with 40g and 60g, with values higher than 50 % in 96 hours. The highest percentage of larval mortality was reached with the 60g dose with strain LBb-111 of B. bassiana in 96 hours.

Regional Short Course on Disaster Risk Reduction and Management in the Agricultural Sector

Towards a One Health Surveillance System for avian influenza

Microbiological study of goat milk with subclinical mastitis in two geographical regions of Ecuador

Resumen Para determinar la situación de la mastitis subclínica caprina en Ecuador, se muestrearon 255 cabras de 47 explotaciones distribuidas en dos zonas geográficas (Montaña y Llano). De cada cabra se registraron los resultados del análisis bacteriológico en muestras de leche previo al ordeño y de la leche ordeñada la producción de leche, el recuento de células somáticas (RCS), la composición química y el punto de congelación. La prevalencia de infección intramamaria (IIM) subclínica fue del 42,4 %, y varió significativamente (p<0,05) en los factores raza (más elevada en las razas Otras 61,9 % y Cruces 52,6 % respecto a las razas Saanen 41,0 % y Criolla 35,4 %) y la zona geográfica (superior en granjas de Montaña 49,2 % que en Llano 36,1 %). La prevalencia también fue ligeramente mayor en cabras de ≥3 partos, si bien el factor número de parto no alcanzó a ser significativo. El 90 % de las IIM fueron causadas por estafilococos coagulasa negativo (ECN), un 5 % por Staphylococcus aureus (S. aureus) y el 5 % restante por bacterias Gram negativas. Las cabras con mastitis subclínica mostraron un RCS más elevado en comparación con las cabras libres de IIM (logRCS cels/mL = 5,98±0,06 vs. 5,74±0,05, p<0,001). Las IIM por S. aureus fueron las que mostraron mayor incremento del RCS (logRCS cels/mL = 6,52±0,23), seguidas por los ECN (5,93±0,05) y las no infectadas (5,66±0,04), presentando diferencias significativas (p<0,05) entre sí. Las bacterias Gram negativas aisladas apenas modificaron el RCS (logRCS = 5,68±0,21). La producción de leche y las variables registradas de calidad de la leche no difirieron significativamente entre las ubres sanas y las afectadas por IIM.

Abstract To determine the situation of subclinical mastitis in Ecuador, 255 goats were sampled from 47 farms distributed in two geographic regions (mountain and plain). The results of bacteriological analysis of pre-milking and milking milk samples milk production, somatic cell count (SCC), chemical composition, and freezing point, were obtained from each goat. The prevalence of subclinical intramammary infection (IMI) was 42,4 %. It varied significantly (p<0,05) by breed; higher in the breeds: Others 61,9 % and Crossbreeds 52,6 % compared to Saanen 41,0 % and Creole 35,4 %). Regarding geographical regions, it was higher in farms in the mountain region 49,2 % than in the plain region 36,1 %. Prevalence was also slightly higher in goats with ≥3 births, although the number of births was not significant. A 90 % of IMI were caused by coagulase-negative staphylococci (CNS), 5 % by Staphylococcus aureus (S. aureus) and the remaining 5 % by Gram-negative bacteria.. Goats with subclinical mastitis showed higher SSC compared to IMI-free goats (logSCC cels/mL = 5,98±0,06 vs. 5,74±0,05, p<0,001). IMI by S. aureus exhibited the highest increase in SSC (logSSC cels/mL = 6,52±0,23), followed by CNS (5,93±0,05) and those not infected (5,66±0,04), showing significant differences (p<0,05) among them. The isolated Gram-negative bacteria hardly modified SCC (logSCC = 5,68±0,21). Milk yield and the milk quality variables registered did not differ significantly between healthy and IMI-affected udders.

Beneficial effects of vero cells on the developmental capacity of in vitro-produced bovine embryos

Resumen El cocultivo de embriones es una alternativa efectiva para mejorar la capacidad de desarrollo de embriones producidos in vitro bajo condiciones subóptimas. Embriones bovinos producidos por las técnicas de fertilización in vitro (FIV) y clonación somática (CS) fueron cocultivados sobre monocapas células Vero y evaluados los porcentajes de desarrollo alcanzados. En los embriones obtenidos por FIV se observó un incrementó altamente significativo en el porcentaje de la primera división embrionaria 75,4 % (n=614/814) vs. 60,9 % (n=564/926) (p<0,0052), y la producción de blastocistos 17,8 % (n=145/814) vs. 8,1 % (p<0,0001), en ambos casos, en condiciones de cocultivo o no, con células Vero, respectivamente. En el grupo de embriones clonados se observaron diferencias significativas en la producción de blastocistos 28,9 % (n=193/668) vs 10,2 % (n=83/814) (p<0,0001) cocultivados con o sin células Vero, respectivamente. Se obtuvo un promedio de 101±61,0 núcleos/embrión (n=12 blastocistos) cuando fueron cocultivados en monocapas de células Vero. Los resultados confirman la capacidad del cocultivo con las células Vero para incrementar los porcentajes de producción de blastocistos bovinos por las técnicas de fertilización in vitro y clonación somática.

Abstract Embryo co-culture is an effective alternative to improve the developmental capacity of embryos produced in vitro under suboptimal conditions. Bovine embryos produced by in vitro fertilization (IVF) and somatic cell nuclear transfer (SCNT) techniques were co-cultured on Vero cell monolayers and the development percentages reached were assessed. In IVF-derived embryos, a highly significant increase was observed in the percentage of first cleavage 75.4 % (n=614/814) vs. 60.9 % (n=564/926) (p<0.0052), and blastocyst production 17.8 % (n=145/814) vs. 8.1 % (p<0.0001); in both cases, under co-culture and non-culture conditions, using Vero cells, respectively. A mean of 101±61.0 nuclei/embryo (n=12 blastocysts) was obtained when co-cultured in Vero cell monolayers. The results confirm the ability of co-culture with Vero cells to increase the production percentages of bovine blastocysts by IVF and SCNT techniques.

Trend and spatio-temporal clustering of fasciolosis in Granma province, Cuba (2012-2018)

Resumen El objetivo del estudio fue evaluar la tendencia y la existencia de agrupamientos espacio-temporales de los hallazgos de hígados bovinos afectados por Fasciola hepatica. Se recopilaron 2 555 observaciones a partir de los registros del matadero de la provincia Granma, Cuba, entre 2012 y 2018. Se realizó análisis estadístico descriptivo mediante la aplicación RStudio y el paquete ggplot2 para visualizar los datos, y se aplicó un modelo probabilístico de SaTScan™ para evaluar si los hallazgos se distribuían espaciotemporalmente de forma homogénea. La detección de hígados afectados por Fasciola hepatica mostró picos sobre 80 casos semanales y períodos de estabilidad entre 30 y 40 casos. La prevalencia general de hígados afectados durante el periodo de estudio fue 23,34% (IC 0,95; 22,88 - 23,80) con diferencias significativas entre algunos años. De otra parte, existió correlación negativa alta (-0,7857) entre el número de bovinos faenados anualmente y las prevalencias de hígados afectados. Los casos de fasciolosis no se distribuyeron espaciotemporalmente de manera homogénea y mostraron agrupamientos de altas tasas (AT) y bajas tasas (BT) de ocurrencia en algunas zonas. Se detectaron siete conglomerados, cuatro de AT y tres de BT. El estudio sugirió zonas prioritarias para intervenciones específicas relacionadas con la identificación de factores protectores o de riesgo para transmisión, al tiempo que sustenta la asignación prioritaria de recursos para la prevención y el control basados en evidencias.

Abstract The aim of the present study was to evaluate the trend and presence of spatio-temporal clusters of bovine livers condemned by Fasciola hepatica. Data were collected in a slaughterhouse in Granma province, Cuba, during seven consecutive years (2012 - 2018), totaling 2 555 observations. Descriptive statistical analysis was performed using RStudio and the ggplot2 package to visualize the data. A probabilistic SaTScan™ model was applied to assess whether the findings were spatiotemporally distributed homogeneously. The detection of affected livers peaked over 80 cases weekly, while periods of stability ranged 30 to 40 cases. The overall prevalence of affected livers during the study period was 23.34% (Confidence Interval 0.95, 22.88 - 23.80), although there were significant differences between years. On the other hand, there was a high negative correlation (-0.7857) between the number of cattle slaughtered annually and the prevalence of seized livers. The cases of fasciolosis were not spatiotemporally distributed homogeneously and showed high rates (HR) and low rates (LR) clusters of occurrences in some areas. In total, seven clusters were detected, four of HR and three of LR. The study suggested priority zones for specific interventions related to the identification of protective or risk factors for transmission, while supporting the prioritization of resources for evidence-based prevention and control interventions.