Revista Cubana de Medicina Tropical

Cuban Society of Microbiology and Parasitology

Leishmaniasis diagnosis: going from microscopic observation of parasite to DNA detection

Introducción: la leishmaniasis es una enfermedad causada por varias especies del género Leishmania, de la cual se han incrementado los reportes en los últimos años. Diversos factores genéticos, inmunológicos y asociados al parásito determinan el establecimiento de la infección y la ocurrencia de enfermedad, que se presenta en formas clínicas muy diversas, lo cual condiciona, entre otros elementos, el método diagnóstico que se aplica. Métodos: se hizo una revisión de la literatura básica y actualizada sobre aspectos generales de la leishmaniasis: la enfermedad y su situación epidemiológica, el ciclo de vida y la transmisión, vectores, presentaciones clínicas y diagnóstico; este último acápite contiene información sobre los principales métodos que se utilizan en el presente. Se puntualizó en la forma en que se apoya el diagnóstico desde el grupo de Leishmania del Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí", que constituye el centro nacional de referencia para esta enfermedad tropical. Resultados: se muestra información actualizada sobre los temas escogidos, con un enfoque orientador y práctico, dirigido al personal de salud que debe enfrentar casos con sospecha de leishmaniasis. Se muestran tablas y gráficos que resumen de manera organizada aspectos relevantes, así como el algoritmo de trabajo que se sigue en el instituto con relación al diagnóstico de esta enfermedad, con énfasis especial en las aplicaciones al diagnóstico molecular que ha realizado el grupo de trabajo. Conclusiones: debido a que la leishmaniasis permanece aún sin control, el diagnóstico oportuno continúa siendo una necesidad. Todos los métodos aportan información de utilidad para la toma de decisiones en el tratamiento clínico, la imposición del tratamiento y el enfoque epidemiológico de esta parasitosis. Entre ellos, proponemos un algoritmo de trabajo en nuestro laboratorio, con el empleo de los métodos que resultan más útiles de acuerdo a nuestras condiciones y experiencias.

Introduction: leishmaniasis is a disease caused by several species from Leishmania genus, which has been increasingly reported in the last few years. Several genetic, immunological factors and others related to this parasite have been associated to the outcome of the infection, and the occurrence of illness in varied clinical forms. All the aforementioned has an impact on the diagnostic method that should be used. Methods: a basic and recent literature review was made, mainly focused on general aspects of leishmaniasis as epidemiological situation of disease, life cycle and transmission, vectors, clinical presentation and diagnosis; the latter shows information about the main methods used at present. The procedure followed by the Leishmania group at "Pedro Kourí" Institute of Tropical Medicine to support the diagnostic activities was presented as well. Results: updated practical information about the chosen topics was presented, with a practical guiding approach aimed at the health personnel that must face suspected leishmaniasis cases. Tables and figures summarized relevant aspects in an organized form, as well as the working algorithm of Institute concerning diagnosis was presented. The application of molecular diagnosis by this working team was particularly underlined. Conclusions: as leishmaniasis is still out of control, opportune diagnosis remains a must. All the methods provide useful information for taking decisions on clinical management, treatment and epidemiology of this parasitosis; hence, a working algorithm was submitted in our lab based on the most useful methods under our present conditions and experience.

**Antimicrobial susceptibility of Escherichia coli isolates from river water ecosystems**

Introducción: la resistencia antimicrobiana constituye uno de los mayores problemas que afronta la salud pública mundial. La aparición de cepas resistentes no solo de origen clínico sino también ambiental agrava la situación. Entre los microorganismos que presentan esta característica se destaca la especie bacteriana Escherichia coli debido a su doble papel como indicador de contaminación fecal y como patógeno. Objetivos: aislar e identificar hasta especie aislamientos de Escherichia coli a partir de muestras de agua procedentes de ríos contaminados de La Habana y determinar la susceptibilidad antimicrobiana in vitro de estos aislados. Métodos: se estudiaron 113 aislamientos de bacterias coliformes aislados de 10 estaciones de muestreo ubicadas en la zona urbana de los ríos capitalinos Almendares, Quibú y Luyanó en el período comprendido de febrero de 2008 hasta junio de 2010. La identificación de los aislados, la determinación de la susceptibilidad antimicrobiana y la búsqueda de b-lactamasas de espectro extendido se realizó mediante el método automatizado VITEK. Resultados: se identificaron 113 cepas ambientales de Escherichia coli. Se demostró que 23 % de los aislamientos resultaron resistentes al menos a uno de los antimicrobianos evaluados. Los mayores porcentajes de resistencia se observaron frente a ampicilina, sulfametoxazol-trimetropin y ciprofloxacina. Conclusiones: la presencia de aislados de E. coli con multirresistencia antimicrobiana en estos ríos indica claramente el riesgo biológico que implica el uso de sus aguas.

Introduction: antimicrobial resistance is one of the biggest problems facing global public health. The emergence of resistant clinical and environmental strains worsens the situation. Among the microorganisms with antimicrobial resistance, Escherichia coli species stands out due to its dual role as fecal contamination indicator and pathogen. Objectives: to isolate and identify Escherichia coli isolates from water samples from polluted rivers located in La Habana, and to determine their antimicrobial in vitro susceptibility. Methods: one hundred thirteen isolates of coliform bacteria isolated from 10 sampling stations in the capital´s urban areas near Almendares, Quibú and Luyanó rivers were studied in the period of February 2008 to June 2010. The identification of isolates, the determination of antimicrobial susceptibility and the search for extended-spectrum b-lactamase were all performed using VITEK automated method. Results: one hundred thirteen environmental strains of Escherichia coli were identified. It showed that 23 % of the isolates were resistant to at least one of the tested antimicrobials. The highest percentages of resistance were observed to ampicilline, sulfamethoxazole-trimethoprim and ciprofloxacin. Conclusions: the presence of E. coli isolates with multiple antimicrobial resistances in these rivers clearly indicates the biological risk involving the use of their waters.

**Assessment of the CromoCen ENT^® chromogenic medium for clinical diagnosis of Enterococcus species**

Introducción: la frecuente incidencia de Enterococcus en los hospitales y su creciente resistencia antimicrobiana a nivel mundial, ha incrementado la necesidad de su vigilancia y control intrahospitalario, por lo que resulta imprescindible contar con medios diagnósticos más sensibles y exactos. Objetivo: ampliar la evaluación de la funcionalidad del medio cromogénico CromoCen® ENT para el aislamiento e identificación de Enterococcus spp. procedentes de muestras clínicas. Métodos: se analizaron 150 muestras clínicas (orina, sangre, fecales, exudados vaginales, exudados de lesiones de piel y de catéteres) desde enero hasta abril de 2010, empleando el medio cromogénico y los medios convencionales correspondientes como controles, se evaluó la incidencia de Enterococcus spp. Se identificaron los aislamientos con un conjunto de 12 pruebas bioquímicas. A partir de los datos de la identificación bioquímica se determinaron los indicadores de calidad tanto para el medio CromoCen® ENT como para los medios de referencia. Resultados: el medio cromogénico promovió el crecimiento de Enterococcus spp. en solo 24 h, lo cual permitió su fácil reconocimiento por la coloración rosada de las colonias. Los indicadores de calidad diagnóstico mostraron valores superiores a 95 %. El mayor porcentaje de aislamientos se obtuvo en las muestras de orina. Enterococcus faecalis resultó la especie mayormente encontrada en el total de las muestras. Conclusiones: CromoCen® ENT permitió la correcta y rápida identificación de Enterococcus spp. procedentes de diversas muestras clínicas.

Introduction: the frequent incidence of Enterococci at hospitals and their growing antimicrobial resistance worldwide make the in-hospital surveillance and control a pressing need; consequently, it is indispensable to avail of more sensitive and accurate diagnostic means. Objective: to broaden the evaluation of functionality of CromoCen® ENT chromogenic medium for the isolation and identification of Enterococcus spp. from clinical samples. Methods: one hundred and fifty clinical samples were analyzed (urine, blood, feces, vaginal smears, skin lesion exudates and exudates from catheters) in the January-April period, 2010 by using the chromogenic medium and the corresponding conventional culture media as controls; the incidence of Enterococcus spp was evaluated. The isolations were identified with 12 biochemical tests. From the biochemical identification data, it was possible to determine the quality indicators for both CromoCen® ENT and the reference media. Results: the chromogenic medium encouraged the growth of Enterococcus species in 24 hours, allowing their easy recognition due to the pink coloration of the colonies. The diagnostic quality indicator values were over 95 %. The highest percentage of isolates was observed in the urine samples. Enterococcus faecalis was the mostly found species. Conclusions: CromoCen® ENT allowed quick and accurate identification of Enterococcus spp. from various clinical samples.

Response to therapy in multiple drug resistant tuberculosis patients

Introducción: la tuberculosis multidrogorresistente constituye un problema médico de gran importancia, porque implica la diseminación de microorganismos para los que es necesario aplicar medicamentos de la llamada "segunda línea", cuya efectividad es menor, requiere un tiempo de tratamiento más prolongado que aumenta la frecuencia de efectos indeseables, además de ser mucho más costoso que el tratamiento convencional. Objetivos: identificar la respuesta terapéutica al tratamiento individualizado en pacientes tuberculosos multidrogorresistentes no seropositivos al VIH. Métodos: se realizó un estudio descriptivo en una muestra de enfermos tuberculosos multidrogorresistentes tratados por al menos 1 año con esquemas individualizados, entre los años 2000 y 2010 en el Hospital Neumológico "Benéfico Jurídico". Se obtuvieron los datos de las historias clínicas individuales y las fichas bacteriológicas. Resultados: de los 42 pacientes, 85,7 % era de hombres y la edad media resultó 48,8 años. La categoría de caso más frecuente que motivó el ingreso fue la de crónico (40,5 %). El tiempo medio para el resultado negativo del examen directo fue de 4,6 meses y del cultivo 6 meses; resultó menor en los pacientes clasificados como fracasos y mayor en los clasificados como recaída. El mayor porcentaje de curación se obtuvo en los pacientes clasificados como crónicos y fracasos, con 23,8 y 21,4 %, respectivamente. Conclusiones: el cumplimiento del tratamiento individualizado directamente observado para tuberculosis multidrogorresistente resultó eficaz en más de la mitad de los casos.

Introduction: multiple drug resistant tuberculosis is an increasingly significant medical problem, because it means the spread of microorganisms for which "second line" drugs are required to eliminate them; therapeutic effectiveness is lower, it takes longer to treat it, leading to more adverse effects in addition to being more expensive than the conventional treatment. Objective: to identify the response to individualized treatment in multiple drug resistant tuberculosis patients, who are non-HIV seropositive. Method: a descriptive study was conducted in a sample of multiple drug resistant patients, who were treated for a year under individualized courses of treatment from 2000 to 2010 in Hospital Neumológico "Benéfico Jurídico". Data were collected from their medical histories and from bacteriological records. Results: out of 42 patients, 85.7 % were males and the average age was 48.8 years. The most common category on admission was chronically-ill patient (40.5 %). The average time for negative results in direct exam was 4.6 months and in culturing was 6 months; this indicator was lower in patients regarded as failures and higher in those classified as relapses. The highest healing percentage was found in chronic patients and in those classified as failures, accounting for 23.8 and 21.4 % respectively. Conclusions: the compliance with individualized treatment under direct observation in multiple drug resistant tuberculosis proved to be effective in over half of the cases.

Trends and predictions of tuberculosis, and challenges towards tuberculosis eradication in Havana City

Objetivo: describir la variación y tendencia de las notificaciones de casos nuevos de tuberculosis en La Habana desde 1995 hasta 2010, así como su proyección y ocurrencia para los años 2011-2013. Métodos: se realizó un estudio de series temporales, se analizaron los porcentajes de variación total y media anual de las tasas según categoría clínica y bacteriológica, edad, distribución por municipios y coinfección tuberculosis/virus de la inmunodeficiencia humana. Las proyecciones se obtuvieron mediante el alisamiento exponencial con 2 parámetros. Resultados: la tasa de nuevos casos de tuberculosis notificados disminuyó de 16,8 en 1995 hasta 9,5 por 100 000 habitantes en 2010 (43,5 % y 2,9 % de variación total y variación media anual, respectivamente). La tasa descendió en 80 % de los municipios y en los grupos de edades de 15 a 64 años y con 65 años o más. La Habana Vieja y Centro Habana mantuvieron las tasas más altas durante casi todo el período. La coinfección tuberculosis/virus de la inmunodeficiencia humana se incrementó de 3/369 (0,8 %) hasta 37/202 (18,3 %) en 2010. Se pronostica un ligero incremento para el trienio 2011-2013 (9,5; 10 y 10,5, respectivamente) y un continuo aumento del número de casos con coinfección tuberculosis/virus de la inmunodeficiencia humana. Conclusiones: la tuberculosis muestra una tendencia descendente casi sostenida en La Habana de 1995 a 2010, con una reducción importante en el período. Sin embargo se observa una tendencia creciente de los casos de tuberculosis/virus de la inmunodeficiencia humana/sida que amenaza la posibilidad de la eliminación. Las notificaciones de casos de tuberculosis se ajustan a los valores esperados, ligeramente por encima de lo pronosticado.

Objectives: to describe the variation and the trend of new tuberculosis case reports in Havana from 1995 to 2010, as well as their projection and occurrence for 2011-2013. Methods: a time series study was conducted, and the annual total and mean variation percentages of rates by clinical and bacteriological categories, age, municipal distribution and TB/HIV co-infection were analyzed. Estimation of projections by using two-parameter exponential smoothing techniques was made. Results: the rate of new reported TB cases decreased from 16.8 in 1995 to 9.5 per 100 000 inhabitants in 2010 (43.5 % and 2.9 % of annual total variation and mean variation respectively). The rate declined by 80 % in the municipalities and in 15-64 and ³ 65 years age groups. Habana Vieja and Centro Habana municipalities kept the highest rates throughout the whole period. TB/HIV coinfection notification increased from 3 out of 369 (0.8 %) cases in 1995 to 37 out of 202 (18.3 %) cases in 2010. A slight increase was estimated for the 2011-2013 period (9.5; 10.0; 10.5 per 100 000 population respectively) in addition to continuous rise of the number of cases with TB/HIV co-infection. Conclusions: the TB trend showed a steady decline in Havana from 1995 to 2010, with substantial reduction in the study period, except for TB/HIV co-infection in which the number of cases increases. The TB case report rates are within the expected values, although slightly above the predictions.

Residual effectiveness of temephos observed in a Mexican southeast city affected by dengue

Objetivo: investigar en qué medida la actividad residual del temefos aplicado a 1 ppm en tanques de cemento domiciliares es afectada por la extracción y reposición de agua derivada de las actividades diarias en el hogar. Métodos: el estudio se realizó en 2 etapas: primero la determinación de la efectividad del temefos granular en poblaciones silvestres de Aedes aegypti para establecer una línea basal de monitoreo y, segundo, la medición de la tasa media de extracción de agua domiciliar y su efecto sobre la residualidad de temefos. Resultados: la efectividad del temefos granular fue de CL95= 0,095 ppm (IC95 %: 0,079 0,118). Se encontró que, en promedio, se usa y repone diariamente el 69,2 % del agua almacenada en tanques de cemento, lo cual indica dilución significativa. Para simplificar los experimentos de residualidad se extrajo y repuso el agua a una tasa de 50 % diaria durante 2 semanas, encontrándose que la efectividad del temefos disminuye significativamente a partir del día 7 de su aplicación. Conclusiones: la extracción de agua a la tasa encontrada tiene efectos importantes en la residualidad de temefos. Si se considerara esta tasa de extracción de agua y la CL95 del temefos granular en el cálculo de su dosificación, se tendrían efectos positivos en el control de Aedes aegypti y muy posiblemente en la aparición de resistencia.

Objective: to study the effect of water extraction and renewal on the residual action of temephos applied at 1ppm to cement water-storage containers at home. Methods: the study was conducted in two stages: one, determination of the granular temephos effectiveness on wild Aedes aegypti populations in order to set the monitoring baseline; and second, the measurement of the mean rate of water extraction at home and its effect on the residual activity of temephos. Results: the effectiveness of granular temephos was CL95= 0.095 ppm (IC95 %: 0.079-0.118). As average, it was found that 69.2 % of water stored in cement containers was daily used and renewed, which means significant dilution. For the purpose of simplifying the experiments on residual activity, water was extracted and renewed at a rate of 50 % every day for 2 weeks. It was found that temephos effectiveness significantly declined from day 7 on after application. Conclusions: this rate of water extraction under study has an important effect on the residual activity of temephos. If this rate and the CL95 of granular temephos are considered in estimating the dosing, positive effects on the control of Aedes aegypti and more likely on the occurrence of resistance will be attained.

Biological properties of virus dengue-3 strains isolated during the epidemic ocurred in Havana, 2001-2002

Introducción: durante epidemias de dengue ocurridas en Cuba se ha observado de forma reiterada, un incremento de severidad clínica con la progresión de las epidemias en el tiempo, particularmente en infecciones secundarias. Se considera que este incremento pudiera estar relacionado con cambios genéticos del virus circulante. Objetivo: estudiar algunas propiedades biológicas de cepas aisladas en diferentes momentos de la epidemia de La Habana, 2001-2002. Métodos: se estudiaron 9 cepas de dengue virus-3, se evaluó el efecto citopatogénico y el crecimiento viral en las líneas celulares C6/36 HT y Vero, tamaño de las placas virales, sensibilidad a la temperatura, neurovirulencia en ratones lactantes y la influencia del pH en la unión del virus a la célula, así como en el medio de multiplicación de este. Resultados: las cepas de dengue virus-3 resultaron más citopatogénicas en células Vero, sin embargo, en C6/36 HT se obtuvieron títulos superiores. El conjunto de cepas mostró reducción del título viral y del tamaño de placa al aumentar la temperatura y fueron poco neurovirulentas. En cuanto a la unión del virus a la célula, a pH básico se observaron los mejores títulos, mientras que a pH ácido solo se observó el crecimiento de algunas cepas aisladas al final de la epidemia. El medio de multiplicación del virus a pH 6,5-7 favoreció el crecimiento de las cepas del inicio de la epidemia, mientras que las cepas del final tuvieron títulos superiores a pH 7-8. Conclusiones: se pudo comprobar la existencia de cambios fenotípicos entre cepas de diferentes momentos de la epidemia, que pudieran estar asociados con diferencias en cuanto a su adecuación viral o en su potencial virulento. No obstante, algunas de las propiedades biológicas estudiadas sugieren que las cepas de dengue virus-3 son menos virulentas que las cepas cubanas de dengue virus-2 de 1997.

Introduction: during dengue epidemics in Cuba, an increase in clinical severity with the epidemics progression in time, particularly in secondary infections, have been frequently observed. It is considered that this increase could be related with genetic changes in the circulating virus. Objective: to study some biological attributes related to strains isolated at different points of time during the dengue epidemic occurred in Havana city, 2001-2002. Methods: nine DENV-3 strains were studied. Cytopathogenic effect, viral growth in C6/36 HT and Vero cell lines, viral plaque sizes, temperature sensitivity, neurovirulence in newborn mice and pH influence in the binding of the virus and the cell as well as in the multiplication medium were evaluated. Results: DENV-3 strains were more cytopathogenic in Vero Cells. However, higher titres were obtained in C6/36 HT cells. All the strains showed reduction of viral titres and plaque size with temperature increasing and low neurovirulence. Basic pH favoured virus-cell binding whereas acid pH was only permissive for some strains isolated at the end of the epidemic. On the other hand, at pH 6.5-7, the viral multiplication medium favoured the growth of strains isolated at the beginning of the epidemic whereas the growth of those isolated at the endof the epidemic was noticeable at pH 7-8. Conclusions: this study proved the phenotypical changes among strains isolated at different points of time in the epidemic. They might be related to differences in viral fitness or in virulent potential. Nevertheless, some of the studied biological properties suggest that dengue virus-3 strains are less virulent than the Cuban dengue virus 2 strains isolated in 1997.

Culicidae of medical-veterinary importance in natural breeding sites located in three areas of Camagüey province in Cuba

Introducción: la malaria actualmente es un grave problema de salud pública, que afecta a casi la mitad de la población en más de 100 países, y que tiene un elevado riesgo de reintroducirse en Cuba. Objetivos: identificar las especies de culícidos presente en criaderos naturales de tres área del municipio Camagüey, con énfasis en los anofelinos. Métodos: se realizaron encuestas larvales entre mayo y junio de 2010 en el municipio Camagüey, en 66 criaderos naturales de Anopheles albimanus ubicados en 3 áreas de este municipio, siguiendo la metodología de la Organización Mundial de la Salud. Se determinaron los sitios de cría preferenciales de Anopheles albimanus y con que otras especies de culícidos se asoció. Resultados: presencia de culícidos en 28,78 % de los criaderos encuestados, y de ellos con Anopheles albimanus 63,51 %, especie que se colectó junto a Culex quinquefasciatus, Culex nigripalpus, Culex erraticus, Culex corniger, Psorophora confinnis, Psorophora howardii y Ochlerottatus scapularis, en cuerpos de agua poco contaminados como lagunas (58,34 %) y arroyos (25,0 %), y en otros con cierto nivel de polución como zanjas (8,33 %) y picas (8,33 %). Conclusiones: la presencia de especies de marcada relevancia médico-veterinaria con destaque para Anopheles albimanus en las áreas estudiadas, obliga a mantener un constante monitoreo de estas especies, para establecer estrategias integradas con énfasis en la lucha biológica, junto a la inserción de la participación comunitaria en el proceso y con ello, coadyuvar a evitar la aparición de casos o brotes epidémicos de malaria importada.

Introduction: malaria is a serious public health problem at present; it affects almost half of the population from over 100 countries and poses a high risk of reintroduction in Cuba. Objective: to identify the Culicidae species present in natural breeding sites located in three areas of Camagüey municipality, particularly anopheles. Methods: larval inspections were carried out in 66 natural breeding sites of Anopheles almimanus located in three areas of Camagüey municipality from May to June 2010, according the World Health Organization methodology. The preferential breeding sites of Anopheles albimanus and the association of this species with other Culicidae were ascertained. Results: presence of Culicidae in 28.78 % of inspected breeding sites, being Anopheles albimanus the prevailing one with 63.51 %. This species was captured together with Culex quinquefasciatus, Culex nigripalpus, Culex erraticus, Culex corniger, Psorophora confinnis, Psorophora howardii and Ochlerottatus scapularis, in low polluted water bodies such as lagoons(58.34 %) and streams(25 %), and in others more polluted such as ditches(8.33 %) and narrow trails (8.33 %). Conclusions: the existence of species of medical and veterinary importance, particularly Anopheles albimanus, in the studied areas calls for constant monitoring of these species in order to draw up integrated strategies focused on the biological fight, and the involvement of the community in this process to help in preventing the emergence of cases or epidemic outbreaks of imported malaria.

Segregation of Aedes aegypti and Culex quinquefasciatus (Diptera: Culicidae) niche under laboratory conditions

Introducción: Aedes y Culex constituyen 2 géneros de mosquitos de importancia epidemiológica, destacándose en las zonas urbanas las especies Aedes aegypti y Culex quinquefasciatus. Es común encontrarlas asociadas en los mismos criaderos compartiendo un gran número de recursos a pesar de lo descrito en la literatura. Objetivo: determinar si existe competencia ínterespecífica entre estas 2 especies cuando coexisten en un mismo recipiente en condiciones de laboratorio. Métodos: se utilizaron larvas de primer estadio, mantenidas en el insectario del Departamento de Control de Vectores. Se hicieron 3 bioensayos con volúmenes de 2 000 mL, 1 000 mL y 500 mL de agua declorinada. Las larvas fueron alimentadas a diario con 0,7 g de harina de pescado, la temperatura se mantuvo de 26 °C ± 2 °C. Resultados: el ciclo larval para Aedes aegypti fue de 6 d tanto en las mezclas como en los controles, mientras que para Culex quinquefasciatus fue de 8 d, lo cual ocurrió independiente de la variación en el número de cada especie y en cada bioensayo. Las larvas de cada especie se desarrollaron totalmente al no escasear el alimento y al permanecer constante el espacio habitacional, es válido mencionar que el agua no estuvo del todo traslúcida ni tuvo indicadores de polución. El índice sexual para cada especie se determinó al emerger los adultos y se mantuvo próximo a 1:1 para los 2 sexos. Conclusiones: estas especies en condiciones de laboratorio no compitieron por el espacio ni por el alimento y ocurrió una segregación de nicho que favorece su coexistencia.

Introduction: Aedes and Culex are two mosquito genuses of epidemiological importance, being Aedes aegypti and Culex quinquefasciatus the predominant ones in urban areas. It is common to find both of them associated in the same breeding sites where they share a lot of things despite the literature. Objective: to determine if there is inter-specific competence between these two species when they co-exist in a single reservoir under lab conditions. Methods: first staging larvae, which had been kept in the insect storage deposit of the Vector Control Department, were used. The three bioassays used 2 000 mL, 1 000 mL and 500 mL of dechlorinated water. The larvae were daily fed on with 0.7 g of fish flour; temperature was 26 °C ± 2 °C. Results: the larval cycle for Aedes aegypti was 6 days in crossbreds and in controls whereas it was 8 days for Culex quinquefasciatus, regardless of variation in the number of individuals of each species and in each bioassay. The larvae of each species completely developed since food was always provided and the living space remained the same. It should be noticed that the water was not totally translucent but no pollution indicators were observed. The sexual index for each species was determined after adult vectors emerged, with 1:1 ratio for both sexes approximately. Conclusions: under lab conditions, these species did not compete one against the other for either food or living space and there was segregation of niche that favored their co-existence.

Prayer Gustavo Kourí Flores In Memoriam