Revista Cubana de Medicina Tropical

6th International Workshop "Leptospirosis Havana 2012". 1^st Pre-congress course "Lyme borreliosis: from vector to the disease". 2^nd International Congress of Leptospirosis, Syphilis and Borreliosis "Spirochetes Havana 2012"

**Update on Borrelia burgdorferi sensu lato and Lyme disease**

Introducción: Borrelia burgdorferi sensu lato es el agente etiológico de la enfermedad de Lyme, zoonosis emergente de difícil diagnóstico, prevención y control, reportada fundamentalmente en el hemisferio norte. Objetivo: facilitar información actualizada acerca de Borrelia burgdorferi. Métodos: se realizó una revisión de la literatura científica y especializada sobre los principales aspectos relacionados con este agente y su enfermedad; como son las características de las borrelias y el ciclo de vida, epidemiología, manifestaciones clínicas en humanos, diagnóstico de laboratorio, definición actual de caso, tratamiento, profilaxis, prevención y control. Resultados: se expone información actualizada y valiosa sobre los temas seleccionados, útil para el personal interesado en las enfermedades infecciosas transmitidas por vectores. Se muestra además información sobre los estudios realizados en Cuba. Conclusiones: se aporta información de utilidad para el manejo epidemiológico, clínico y microbiológico de casos con sospechas de la infección por Borrelia burgdorferi sensu lato.

Introduction: Borrelia burgdorferi sensu lato is the causative agent of Lyme disease, an emerging zoonosis, whose diagnosis, prevention and control are difficult and it is mainly reported in the northern hemisphere. Objective: to provide updated information about Borrelia burgdorferi. Methods: a review of scientific and specialized literature on the key aspects of this agent and the disease such as characteristics and life cycle of borrelias, epidemiology, clinical manifestations in humans, laboratory diagnosis, current case definition, treatment, prophylaxis, prevention and control. Results: current valuable information on selected items was set forth, which is useful for the personnel involved in vector-borne infectious diseases. Additionally, information about studies conducted in Cuba was provided. Conclusions: this paper offers updated information for the epidemiological, clinical and microbiological management of suspected cases of infection with Borrelia burgdorferi sensu lato.

Seroprevalence of human leptospirosis in a settlement of the urban area in Guatemala city

Introducción: aunque la leptospirosis es considerada una enfermedad de ambientes rurales, la reciente aparición de epidemias urbanas la hace emerger como un problema en salud pública. En Guatemala (2008), se demostró una seroprevalencia de 51,8 % en áreas rurales, por lo que es importante llevar a cabo estudios en áreas urbanas que permitan establecer el impacto que pudiera tener en la población guatemalteca. Objetivos: determinar la seroprevalencia de leptospirosis humana en un asentamiento ubicado en la ciudad de Guatemala, así como los serovares de Leptospira interrogans circulantes y los factores de riesgo asociados a la exposición con esta bacteria. Métodos: participaron 119 habitantes con 6 años y más de los 2 sexos, que aceptaron, previo consentimiento informado. Con una entrevista estructurada se recolectaron los datos sociodemográficos y las muestras de sangre venosa. La técnica de microaglutinación y ELISA IgG se utilizaron para la detección de anticuerpos. Los sueros se enfrentaron a 20 serovariedades de Leptospira interrogans sensu lato. La prevalencia se determinó con un IC95% y las variables sociodemográficas con chi cuadrado, la razón de prevalencia con Epi Info 3.5.1. Resultados: la seroprevalencia de leptospirosis en la población estudiada resultó de 30,3 %, (IC95%). Los serovares más frecuentes fueron Australis y Lanka (11,1 % ambos). El título más frecuente fue de 1:80 por microaglutinación. En la población se encontraron distintos factores de riesgo, pero ninguno mostró una asociación significativa con la presencia de anticuerpos anti-Leptospira (p> 0,05). Conclusiones: la seroprevalencia de leptospirosis detectada fue de 30,3 % en los habitantes del asentamiento ubicado en la ciudad de Guatemala, la cual es comparable a las áreas urbanas de países en donde esta enfermedad es hiperendémica, por lo que es importante implementar medidas de prevención y de control de la enfermedad en la comunidad, en forma conjunta con la municipalidad del distrito.

Introduction: although leptospirosis is considered a rural environment disease, recent urban epidemics make it emerge as a public health problem. A seroprevalence of 51.8 % has been found in rural areas of Guatemala; therefore it is important to establish the impact that this disease may have on the Guatemalan urban population. Objectives: to determine the seroprevalence of human leptospirosis in a settlement of Guatemala city and also to identify urban Leptospira interrogans serovars and risk factors associated with exposure to the bacteria. Methods: there were selected 119 people aged 6 years old and over from both sexes, who agreed to participate after giving their informed consent. Sociodemographic data were collected and venous blood samples were taken. The microagglutination test (MAT) and ELISA IgG were used to detect antibodies. Sera were tested against 20 serovars of Leptospira interrogans sensu lato. The seroprevalence was determined with a 95% confidence interval, and sociodemographic variables were evaluated with Chi square and Odds Ratio using Epi Info 3.5.1. Results: a 30.3 % seroprevalence of leptospirosis was found in the study population (CI, 95%). The more frequently serovars founded were Australis and Lanka (11.1 % each). The most common titer was 1:80 (MAT). Different risk factors were found, but none showed a significant association with the presence of Leptospira IgG antibodies (p> 0.05). Conclusion: the prevalence of IgG anti-Leptospira antibodies detected in the residents of the settlement is comparable to that of the urban areas of other countries where leptospirosis is hyperendemic. For avoiding outbreaks in these areas, it is important to prevent and control the infection in the community.

**Isolation of Leptospira borgpetersenii in water sources in Argentina**

Introducción: las especies del género Leptospira son los agentes causales de la leptospirosis, enfermedad considerada como la zoonosis de mayor distribución en el mundo.En Argentina reviste carácter endémico. La provincia de Santa Fe registra el mayor número de casos humanos. Desde mediados de la década de 1980, las especies patógenas de leptospiras aisladas de animales y humanos fueron diferenciadas sobre la base de estudios de hibridización ADN-ADN, surgiendo nuevas especies: L. interrogans, L. kirschneri, L. weilii, L. noguchii, L. borgpetersenii, L. santarosai, L. meyeri, L. inadai, L. faineri y L. alexanderi. Objetivo: aislar y caracterizar mediante métodos moleculares, leptospiras de fuentes de agua que vierten en un canal que atraviesa la ciudad de Casilda, Santa Fe, en Argentina. Métodos: se sembraron 6 muestras de agua de las vertientes al canal, previa filtración con filtros Millipore de 0,22 µm, en medios EMJH y Fletcher para aislamiento de leptospiras. Se incubaron en estufa a 30 °C durante 15 días, se observaron semanalmente mediante microscopia de campo oscuro. Se implementó la técnica de reacción en cadena de la polimerasa bajo las condiciones específicas (Sugathan, 2005), con dos juegos de cebadores (Gravekamp, 1993), que permiten detectar la presencia de ADN de leptospiras patógenas. La técnica molecular utilizada para genotipificar fue multiple-locus variable-number tandem repeats analysis (MLVA). Resultados: se obtuvieron 5 aislamientos de Leptospira spp., de los cuales 2 resultaron positivos a la reacción en cadena de la polimerasa, determinando que se trataba de leptospiras patógenas. Mediante la genotipificación por MLVA se pudo observar que uno de los aislamientos patógenos mostró un patrón correspondiente a la especie Leptospira borgpetersenii, no siendo identificable la otra cepa. Conclusiones: en la ciudad del estudio, que tiene alrededor de 40 000 habitantes, se logró identificar por primera vez una cepa de Leptospira borgpetersenii de fuentes de aguas urbanas, con el peligro potencial que esto representa para la población humana y animal.

Introduction: the Leptospira genus species are causative agents of leptospirosis, a disease that is considered the most widely spread zoonotic disease worldwide. In Argentina, leptospirosis is endemic and Santa Fe province has the highest number of human cases. Since mid-1980's, the pathogenic leptospira species isolated from animals and humans have been differenciated through DNA-DNA hybridization tests, resulting in new species: L. interrogans, L. kirschneri, L. weilii, L. noguchii, L. borgpetersenii, L. santarosai, L. meyeri, L. inadai, L. faineri y L. alexanderi. Objectives: to isolate and to characterize by molecular test leptospiras from water poured into a channel that runs through Casilda City in Santa Fe Province, Argentina. Methods: six samples of water from the channel were cultured after having been filtered through 0.22 µm, Millpore filtres in EMJH and Fletcher media to isolate leptospires. They were incubated at 30 °C for 15 days, and weekly observed through dark field microscopy. Polymerase chain reaction assay was used under specific conditions (Sugathan, 2005), with two sets of primers (Gravekamp, 1993), to determine whether the isolates were pathogenic. The molecular technique for genotyping was Multiple-Locus Variable-number tandem repeats Analysis (MLVA). Results: five Leptospira spp. isolates were obtained of which 2 were positive to PCR, all of which determined that they were pathogenic leptospiras. MLVA genotyping allowed the observation of a pattern similar to that of L. borgpetersenii species in one pathogenic isolates, but the other isolate was not identified. Conclusions: in the City where the study was carried out, with a population of about 40,000 inhabitants, a L. borgpetersenii species was identified for the first time in urban water sources, with the potential risk that it may pose for human and animal populations.

**Seropositivity of Leptospira interrogans found in dogs from the city of Rosario, Argentina**

Introducción: la leptospirosis es una de las zoonosis más difundidas mundialmente. La aparición de epidemias urbanas ocasionadas por las inundaciones, la transformaron en un grave problema para la salud pública. Una de las especies animales más afectadas por la leptospirosis es la canina. Los perros se infectan con Leptospira interrogans y padecen la enfermedad, que constituye uno de los factores de riesgo más importante en la transmisión de leptospiras en zonas urbanas. El diagnóstico de certeza de la leptospirosis, debido a la característica polisindromática de la enfermedad, solo es posible a través de los resultados de laboratorio. Objetivo: estimar la tasa de seropositividad a distintos serovares de Leptospira interrogans en caninos de la ciudad de Rosario. Métodos: se realizó un estudio epidemiológico descriptivo transversal en una población de perros de Rosario. Se estudiaron perros de los 2 sexos, de cualquier edad, sin distinguir raza ni estado de vacunación. Las muestras se analizaron mediante la técnica de aglutinación microscópica (MAT), estandarizada a nivel internacional. En el ensayo se emplearon los serovares de Leptospira interrogans siguientes: Pomona, Icterohaemorrhagiae, Canicola, Bratislava, Grippotyphosa, Pyrogenes y Castellonis. El punto de corte utilizado para la técnica fue 1:100. Se procesaron 156 muestras de sueros. Resultados: de las muestras analizadas 134 resultaron negativas y 22 positivas a la técnica de aglutinación microscópica. Se hallaron 12 (54,54 %) positivas a Castellonis, 7 (53,84 %) a Canicola; 1 (4,54 %) a Pyrogenes, 1 (4,54 %) a Pomona y 1 (4,54 %) a Icterohaemorrhagiae. Los títulos más altos fueron de 1:200 y correspondieron a Castellonis. Conclusión: los resultados sugieren que el serovar Castellonis es el detectado con mayor frecuencia en la actualidad para la población canina de Rosario y que debería tenerse en cuenta en la formulación de inmunógenos contra la leptospirosis canina.

Introduction: leptospirosis is one of the most widespread zoonoses worldwide. The urban epidemics caused by floods, became a serious problem for public health. Canine species is the most affected by leptospirosis. Dogs become infected with Leptospira interrogans and the disease, which represents one of the most important risk factors in the transmission of leptospires in urban areas. Definitive diagnosis of leptospirosis due to multisyndromic feature of the disease is only possible through laboratory results. Objective: the objective was to estimate the rate of seropositivity to different serovars of L. interrogans in dogs in the city of Rosario. Methods: a descriptive cross-sectional epidemiological study in a dog population of Rosario, which included dogs of both sexes, all ages, regardless of race or vaccination status. The samples were analyzed by internationally standardized Microscopic Agglutination (MAT). This experiment used the following serovars of L. interrogans: Pomona, Icterohaemorrhagiae, canicola, Bratislava, grippotyphosa, and castellonis Pyrogenes. The cutoff point for the technique was 1:100. One hundred fifty six samples were processed. Results: of the analyzed samples, 134 were negative and 22 positive to MAT. There were 12 (54.54 %) positive to Castellonis, 7 (31.81 %) to Canicola, 1 (4.54 %) to Pyrogenes, 1 (4.54 %) to Pomona and 1 (4.54 %) to Icterohaemorrhagiae. The highest titers were 1:200 and in Castellonis serovar. Conclusions: the results of this study indicate that serovar Castellonis is the most frequently detected one for the canine population of Rosario at present, and it should be considered in the formulation of immunogens against canine leptospirosis.

Stratification of the risk of becoming ill and dying from human leptospirosis

Introducción: la leptospirosis humana constituye la zoonosis de mayor impacto en salud pública. En Cuba, durante los últimos 10 años se notificaron brotes en varias provincias. Objetivos: estratificar la morbilidad y mortalidad por leptospirosis humana según variables epidemiológicas y estructura territorial en La Habana durante los años 2001-2010. Métodos: se realizó un estudio ecológico de series temporales, utilizando el alisamiento exponencial para la tendencia, el indicador único para la estratificación y la estructura territorial basada en los criterios de ordenamiento territorial. Resultados: en 2002 se registró el mayor riesgo de enfermar con 4,51/100 000 habitantes. Entre 2001 y 2005, Boyeros y Cotorro se ubicaron en el estrato de alto riesgo. Durante 2006-2010, todos los municipios alcanzaron incidencias por debajo de 3/100 000 habitantes. Según el riesgo de morir, Regla y San Miguel del Padrón se encuentran en los estratos más altos. La letalidad mostró el valor más elevado en 2006, la tendencia es al descenso. Conclusiones: la incidencia de leptospirosis mostró diferencias en su distribución geográfica según estratos temporales, con un período de alta incidencia en tres municipios vinculados geográficamente y un período posterior de baja endemicidad en toda la provincia. La zona periférica según criterios de ordenamiento territorial concentra a la población con mayor exposición a los riesgos de enfermar y morir por leptospirosis.

Introduction: human leptospirosis is the zoonosis carrying the major impacts on the public health in Cuba. During the last 10 years, several outbreaks have been notified in different provinces. Objectives: to stratify morbidity and mortality due to human leptospirosis according to the epidemiological and spatial structure of Havana from 2001 to 2010. Methods: an ecological study of time series using the exponential smoothing for trend, the single indicator for stratification and the territorial structure based on land-use criteria. Results: the year 2002 registered the greatest risk of becoming ill with 4.51/100 000 inhabitants. Between 2001 and 2005, Boyeros and Cotorro municipalities were in the high-risk stratum. During the 2006-2010 period, all municipalities had incidence rates lower than 3/100 000 inhabitants. According to the risk of dying, Regla and San Miguel del Padron were found in highest-risk strata. The fatality rate showed the highest value in 2006, but there has been a decreasing trend since then. Conclusions: leptospirosis incidence showed differences in its geographical distribution by time-strata, with a period of high incidence in three geographically linked municipalities and subsequent periods of low endemicity throughout the province. According to land-use criteria, the population at the highest risk of becoming ill or dying is concentrated in the outskirts of the city.

Detection of IgM antibodies to leptospires by using a commercial ELISA-IgM system

Introducción: la leptospirosis humana es una zoonosis sistémica y transmisible producida por bacterias invasivas del complejo Leptospira interrogans sensu lato. Numerosos métodos se utilizan para el serodiagnóstico de esta entidad clínica, dentro de los cuales se encuentra ELISA. Objetivos: aplicar un nuevo sistema serológico comercial de ELISA, para la pesquisa de anticuerpos IgM contra leptospiras e identificar los serogrupos de leptospiras presentes en los sueros positivos por este sistema. Métodos: de pacientes sospechosos de leptospirosis se estudiaron 27 y 61 sueros con anticuerpos contra leptospiras y sin estos, respectivamente. La técnica de microaglutinación con antígenos vivos (MAT) se utilizó como método de referencia. Los sistemas comerciales de SD Leptospira ELISA-IgM, SD flujo lateral Leptospira IgM y la hemoaglutinación indirecta (HAT) fueron comparativamente empleados. Resultados: 27 sueros con anticuerpos contra leptospiras resultaron positivos por SD Leptospira ELISA-IgM, 20 por SD flujo lateral Leptospira IgM y 9 por hemoaglutinación indirecta. De 61 sueros sin anticuerpos contra leptospiras, 9 y 8 resultaron positivos, respectivamente, por SD Leptospira ELISA-IgM y por SD flujo lateral Leptospira IgM. Los serogrupos Ballum y Canicola predominaron en los sueros positivos por el sistema comercial. La coincidencia entre SD Leptospira ELISA-IgM y la técnica de microaglutinación con antígenos vivos fue de 89,77 %. Conclusiones: SD Leptospira ELISA-IgM muestra una mayor positividad en los sueros estudiados, lo que avalaría su posible introducción en Cuba. Se confirma la amplia reactividad del antígeno usado en SD Leptospira ELISA-IgM, lo cual sugiere mantener una activa vigilancia de laboratorio sobre los serogrupos de leptospiras, a nivel nacional.

Introduction: human leptospirosis is a communicable systemic zoonosis caused by the invasive bacteria Leptospira interrogans sensu lato complex. Numerous methods are used for serodiagnosis of this disease, including the ELISA tests. Objectives: to implement a new commercial serological ELISA test (SD Leptospira ELISA-IgM, SD Bioline, Korea) for screening of IgM antibodies and for identification of Leptospira serogroups in positive sera. Methods: twenty seven and sixty one sera, with/without IgM antibodies to leptospires, respectively, were studied. They had been taken from patients suspected of having leptospirosis. The microscopic agglutination test with live antigens (MAT) was the reference method. In addition, other commercial systems such as SD Leptospira IgM Lateral Flow and indirect hemagglutination (HAT) tests were comparatively used. Results: all the 27 sera with antibodies against Leptospira were positive according to SD Leptospira ELISA-IgM, 20 sera were found positive by SD Lateral Flow Igm test and 9 sera by the indirect HAT test. Of the 61 sera without antibodies to leptospires, 9 and 8 were positive by SD Leptospira ELISA-IgM and SD Leptospira IgM Lateral Flow test, respectively. Serogroups Canicola and Ballum were predominant in positive sera tested by the commercial system under evaluation. The agreement coefficient between SD Leptospira ELISA-IgM and MAT was 89.77 %. Conclusions: SD Leptospira ELISA-IgM showed higher positivity rate than the other systems in the studied sera; this aspect would support its possible introduction in Cuba. The great reactivity of the antigen used in the system was confirmed, which indicates that active laboratory surveillance of leptospiral serogroups should be kept nationwide.

Detection of leptospiral DNA in fresh tissues from dead people in Cuba, 2008-2011

Introducción: la leptospirosis como importante zoonosis reemergente a nivel mundial presenta una mortalidad asociada entre 15 y 25 %. El diagnóstico postmortem de esta enfermedad es laborioso. Diferentes métodos moleculares se utilizan en su confirmación, entre ellos la reacción en cadena de la polimerasa. En Cuba, desde 2008 se realiza el diagnóstico molecular de los fallecidos con sospecha de leptospirosis en el Laboratorio Nacional de Referencia de Leptospiras del Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí" (LNRL-IPK). Objetivo: diagnosticar leptospirosis a partir de tejidos frescos de fallecidos por un método molecular. Métodos: de 50 fallecidos: 3 de 2008, 7 de 2009, 15 de 2010 y 25 de 2011, se estudiaron 171 muestras de tejidos frescos de diferentes órganos, mediante la reacción en cadena de la polimerasa simple que amplifica un fragmento del gen lipl32. De los fallecidos, 9 disponían de un suero, utilizado para los estudios serológicos. Resultados: se confirmó 32 % de los casos (16/50), correspondiendo 2 (66,7 %) a 2008, 2 (28,6 %) a 2009, 1 (6,7 %) a 2010 y 11 (44 %) a 2011. El pulmón mostró 25 % de positividad (12/48); el hígado 25,6 % (11/43); el riñón 22,5 % (9/40); el cerebro 6,3 % (1/16); el corazón 7,1 % (1/14); el bazo 12,5 %(1/8) y el músculo 50 % (1/2). Un caso resultó positivo por serología y negativo por la reacción en cadena de la polimerasa. Otros 3 casos dieron positivos por reacción en cadena de la polimerasa y negativos por serología. La concordancia global entre ambos métodos para el estudio de los sueros fue de 55,5 % (5/9). Conclusiones: la reacción en cadena de la polimerasa, como herramienta para el diagnóstico postmortem contribuye a la confirmación en fallecidos con sospecha de leptospirosis. La serología puede usarse en estos casos para una mejor interpretación de los resultados, sin embargo, es una muestra que no se remite frecuentemente al laboratorio para su estudio.

Introduction: leptospirosis is an important re-emerging zoonosis worldwide, with an associated mortality ranging 15-25 %. Post-mortem diagnosis of the disease is painstaking. Different molecular methods for diagnosis of leptospirosis have been implemented. In Cuba, the National Reference Laboratory for Letospires of "Pedro Kourí" Institute of Tropical Medicine (LNRL-IPK) performs laboratory diagnosis of fatal cases suspected of leptospirosis. Objective: to diagnose leptospirosis in fresh tissue samples from dead people by using a molecular method. Methods: of 50 deceased individuals- 3 in 2008, 7 in 2009, 15 in 2010 and 25 of 2011- from different Cuban regions, 171 samples of fresh tissues of different organs were studied. A singleplex polymerase chain reaction that amplifies lipl32 gene fragment was used. Additionally, a serological diagnosis of leptospirosis was performed in 9 cases. Results: the laboratory confirmed 32 % of cases as positive (16/50). Of these, 2 (66.7 %) in 2008, 2 (28.6 %) in 2009, 1 (6.7 %) in 2010 and 11 (44 %) in 2011. The positivity rate of the different sample was 25 % in the lung (12/48), 25.6 % in the liver (11/43), 22.5 % in the kidneys (9/40), 6.3 % in the brain (1/16), 7.1 % in the heart (1/14), 12.5 % in the spleen (1/8) and 50 % in the muscles (1/2). Of the nine cases that underwent serology, three were positive by PCR and negative by serological testing, whereas one case was found positive in the serology but negative in the PCR. The overall agreement coefficient between serology and PCR was 55.5 % (5/9). Conclusions: polymerase chain reaction, as a molecular tool for diagnosis of leptospirosis at the LNRL-IPK, has allowed making post-mortem confirmation of that disease in Cuba. It is recommended to continue shipping serum samples from fatal cases to the LNRL-IPK for confirmation, which will allow a better interpretation of the results by using serology.

Proposal and evaluation of a statistical model for the quality control of veneral disease research laboratories/rapid plasma reagin serologies

Introducción: la finalidad de todo laboratorio de control de la calidad del diagnóstico serológico de sífilis es controlar su correcta realización. Objetivo: evaluar una propuesta de modelo estadístico para tabular los resultados de los laboratorios adscritos al control de la calidad de diagnóstico de serología VDRL (venereal disease research laboratories)/RPR (rapid plasma reagin) para la evaluación y atención diferenciada a estos. Métodos: se elaboró un modelo para la recogida de información de los 21 laboratorios de la red en Villa Clara durante 2006-2010 y se hicieron modificaciones hasta llegar a la versión final. Se definieron las variables sueros enviados, total discordantes, discordantes no reactivas, discordantes reactivas, envío por mes, y evaluación integral. Se establecieron criterios de estimación para cada variable. Se presenta la evaluación del modelo con la información del trimestre enero-marzo de 2011. Resultados: la propuesta permitió detectar que las principales dificultades radican en el no cumplimiento del número de sueros enviados, no se recepcionan muestras mensualmente y además se presentan resultados discordantes. El modelo resulta justo al valorar porque se utilizan criterios cuantitativos generalizados que posibilitan dar una evaluación cualitativa individualizada, y se corresponde con las técnicas evaluativas actuales que se aplican en diferentes esferas del quehacer social. Conclusiones: el modelo estadístico valorado permite la tabulación de datos desde el laboratorio provincial de control de la calidad, a través de las variables propuestas y así evaluar a cada laboratorio.

Introduction: the purpose of every quality control laboratory for the serological diagnosis of syphilis is to monitor the accuracy of test performance. Objective: to evaluate the proposal of a statistical model to tabulate the results of the laboratories involved in the quality control of the veneral disease research laboratories-rapid plasma reagin serology for the assessment of and customized attention to them. Methods: a model for the collection of information from the 21 laboratories of Villa Clara's provincial network in the 2006-2010 period was designed and refined until the final version was reached. The defined variables comprised Number of sent sera, Total discordant, Nonreactive Discordant, Reactive Discordant, Shipping by month and Final evaluation were defined. Evaluation criteria were set for each variable. This paper presented the evaluation of the model with information from January to March, 2011. Results: the suggested model allowed the detection of the main difficulties such as the non-compliance with the number of sent sera, non-reception of samples monthly and also current conflicting results. The model is fair when making evaluation, since it uses generalized quantitative criteria that enable individualized qualitative assessment and it is also in line with current evaluative techniques applied in different fields of social endeavor. Conclusions: the statistical model allows provincial quality control laboratory to tabulate data by using the suggested variables and thus evaluate each laboratory in Villa Clara.

Evaluation of the functional characteristics of the set of reagents called VDRL Plus

Introducción: la prueba de VDRL (venereal disease research laboratories) es una técnica no treponémica de microfloculación en lámina para la detección cualitativa y semicuantitativa de reaginas plasmáticas. El VDRL Plus es un juego de reactivos que contiene una suspensión antigénica estabilizada (no alcohólica), basada en una mezcla de cardiolipina, colesterol y lecitina en tampón fosfato. Objetivo: determinar un conjunto de parámetros funcionales que caracterizan el desempeño diagnóstico o clínico del juego de reactivo VDRL Plus producido en Centro de Isótopos (CENTIS). Métodos: los parámetros del desempeño diagnóstico evaluados fueron: sensibilidad y especificidad diagnóstica, valores predictivos positivo y negativo, razón de verosimilitud positiva y negativa. Se determinaron además los índices de Youden y de concordancia Kappa. Se emplearon como métodos de referencia TPHA (Treponema pallidum hemagglutination) y RPR (rapid plasma reagin)-carbón producidos en el CENTIS. Se utilizaron muestras de sueros obtenidas en diferentes instituciones de salud de La Habana y el estudio se realizó con dos lotes del producto. Resultados: para los dos lotes evaluados se obtuvieron valores de sensibilidad de 100 % y de especificidad diagnóstica de 81 y 84 %. Los valores predictivos positivos resultaron de 71 y 75 %, y los negativos de 100 %. Por su parte, las razones de verosimilitud negativas fueron de 0 % y las positivas de 5,3 y 6,3 %, para cada lote estudiado. Los índices de Youden obtenidos (0,84 y 0,81) y la concordancia expresada mediante Kappa muestran que existe una adecuada correlación entre los resultados con el método en evaluación y los de referencia. Conclusiones: las características funcionales evaluadas evidencian que el diagnosticador VDRL Plus es apto para el uso previsto y que estas son consistentes entre los lotes estudiados.

Introduction: the VDRL test (venereal disease research laboratories) is a no-treponemal slide microaglutination test for the qualitative and semi-quantitative detection of plasma reagins in human serum. The VDRL Plus contains non alcoholic stabilized antigen suspension based in cardiolipin, lecithin and cholesterol in phosphate buffer. Objective: to determine a group of functional parameters in the diagnostic or clinical performance of the VDRL Plus set of reagents produced by the Center of Isotopes (CENTIS). Methods: several parameters, such as, sensitivity, specificity, positive and negative predictive values and positive and negative likelihood ratios were evaluated. Likewised, Youden and Kappa indexes were calculated. Two references methods were employed, that is, TPHA (Treponema pallidum hemagglutination) and RPR-Carbon (rapid plasma reagin)-carbon, both from CENTIS. Serum samples were collected from several health centers in Havana city. Two different product batches were evaluated. Results: the sensitivity value for both evaluated batches was 100 % and the specificity was 81 and 84 %. The positives predictive values were 71 and 75 % and negative predictive value was 100 %. The positive likelihood ration were 5.3 and 6,3 % respectively and negative likelihood ration was 0 % for both batches. The Youden indexes obtained (0.84 and 0.81) and Kappa's indexes showed that there was an adequate correlation between the results obtained and the evaluation and reference methods. Conclusions: the evaluated functional characteristics showed that they are consistent among studied batches and that the VDRL Plus assay is suitable for the intended use.

**Point mutations in the dihydropteroate synthetase gene of Plasmodium falciparum in Bolivar, Colombia**

Introducción: la resistencia antimalárica dificulta el control del paludismo en Colombia. La vigilancia molecular de mutaciones puntuales en blancos terapéuticos es fundamental en el estudio de la resistencia a los antimaláricos. Objetivo: identificar mutaciones puntuales en el gen de la dihidropteroato sintetasa de Plasmodium falciparum (pfdhps), asociadas con resistencia in vitro a sulfadoxina. Métodos: la fuente de ADN de Plasmodium falciparum consistió en láminas de gota gruesa de 55 individuos con infección malárica, reportados en el departamento de Bolívar, Colombia. El ADN se extrajo con solución de Chelex-100 al 5 %. Las mutaciones se identificaron mediante PCR-RFLP (polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism) y secuenciación. Resultados: 17 muestras (31 %) amplificaron un fragmento de 438 pb de pfdhps. La PCR-RFLP mostró frecuencia del genotipo mutante G-437 en 65 % de los amplificados, el mixto A/G-437 en 29 % y el silvestre A-437 en 6 %. Los alelos mutantes G-437, F-436 y el alelo silvestre K-540 se identificaron en todas las muestras secuenciadas. Conclusiones: este es el primer reporte de mutaciones puntuales en el gen dhps de Plasmodium falciparum en el departamento de Bolívar, Colombia, lo cual contribuye al conocimiento de la resistencia a los antimaláricos en el Caribe colombiano.

Introduction: antimalarial drug resistance hinders the control of malaria in Colombia. The molecular surveillance of point mutations in therapeutic targets is essential in the study of antimalarial drugs. Objective: to identify point mutations at dihydropteroate synthetase gene of Plasmodium falciparum (pfdhps) associated with sulfadoxine resistance. Methods: source of P. falciparum DNA was blood thick smears of 55 individuals with malaria infection, reported in Bolivar, Colombia. The DNA was extracted with 5 %. Chelex-100 solution. The mutations were identified by PCR-RFLP and sequencing. Results: seventeen samples (31 %) amplified a 438 bp fragment of pfdhps. The PCR-RFLP (polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism) showed a frequency of mutant genotype (G-437) in 65 % of amplicons, mixed genotype (A/G-437) in 29 % and wild genotype (A/G-437) in 6 %. The mutant alleles G-437, F-436 and the wild allele K-540 were identified in all sequenced samples. Conclusions: this is the first report of point mutations in the P. falciparum dhps gene in Bolivar, Colombia. This result contributes to the knowledge of antimalarial drug resistance in the Colombian Caribbean region.

Intestinal parasitosis found in patients with epilepsy of unknown etiology

Introducción: la epilepsia es una alteración del sistema nervioso central que afecta a un estimado de 50 millones de personas en el mundo, de los cuales 85 % vive en países en desarrollo. Alrededor de 20 % de las epilepsias son de difícil control o refractarias. En Cuba no existen antecedentes de estudios acerca del comportamiento de las parasitosis intestinales en estos pacientes, por lo cual se decidió realizar la presente investigación en un grupo de pacientes con epilepsia de origen desconocido del Instituto de Neurología y Neurocirugía de La Habana. Objetivos: determinar la prevalencia y las manifestaciones clínicas de las parasitosis intestinales, y relacionar estas infecciones con la existencia de epilepsia refractaria a los fármacos antiepilépticos. Métodos: se aplicó un cuestionario y se recogió una muestra de heces por cada paciente, se realizaron técnicas de diagnóstico coproparasitológico, como son el examen directo, el método de concentración de Willis y el procedimiento cuantitativo de Kato Katz. Resultados: el 41,7 % de los pacientes con epilepsia estudiados estuvieron infectados por algún parásito o comensal; la diarrea resultó la única característica clínica que prevaleció en los individuos parasitados. La ausencia de epilepsia refractaria a los fármacos antiepilépticos estuvo asociada a una frecuencia mayor de infección con comensales o protozoos de patogenicidad discutida, que en los que tenían esta condición. Conclusiones: se encontró una alta prevalencia de parasitosis intestinales en pacientes con epilepsia, a pesar de haber sido tomada una sola muestra fecal para cada individuo, y hubo un predominio de infecciones con protozoos sobre las de helmintos. Los resultados al comparar el grupo de pacientes con epilepsia refractaria a los fármacos antiepilépticos con los que no tenían esta condición, pudieran indicar algún efecto de estos fármacos sobre las infecciones con protozoos comensales o de patogenicidad discutida, lo cual avala la continuidad de estudios de parasitismo intestinal y su potencial influencia en la terapia antiepiléptica o viceversa.

Introduction: the epilepsy is an alteration of the central nervous system (CNS) which roughly affects 50 millions of persons worldwide; almost 85 % of them live in developing countries. Approximately 20 % of epilepsies are difficult to control or they are called refractory epilepsies. Taking into account the lack of Cuban reports about the behavior of intestinal parasitic infections in these patients, it was decided to carry out this research study in a group of epileptic patients with unknown etiology, from the Institute of Neurology and Neurosurgery in Havana. Objectives: to determine the prevalence and the clinical manifestations of intestinal parasitic infections, and the possible association of these infections with epilepsy refractory to the antiepileptic drugs. Methods: a questionnaire was applied and one fecal sample was taken per patient. Various parasitological techniques were implemented, including direct wet mount, Willis concentration technique, and Kato Katz quantitative procedure. Results: of the studied epileptic patients, 41.7 % were found infected by parasites or commensals, and diarrhea was the only clinical characteristic that prevailed in parasitized persons. The group of patients without epilepsy refractory to antiepileptic drugs had higher frequency of infections with commensal or protozoa with controversial pathogenicity. Conclusions: a high frequency of intestinal parasitic was observed in epileptic patients although just one sample was taken per person, and the protozoal infections prevailed over the helminthic infections. The comparison of the results from the group of patients with refractory epilepsy to antiepileptic drugs and the group without this condition may indicate a possible effect of this treatment over infections with commensal protozoa or of controversial pathogenicity. All this supports the continuity of studies about intestinal parasitic infection and their potential influence on antiepileptic treatment or vice versa.

**Value in practice of the cerebrospinal fluid in Treponema pallidum hemagglutination test for confirmation of neurosyphilis**

Introducción: la hemaglutinación de Treponema pallidum (TPHA: Treponema pallidum hemagglutination assay) permite la detección de anticuerpos contra esta bacteria. Esta es la única prueba confirmatoria para el diagnóstico de sífilis utilizada en Cuba y es aplicable solo en muestras de suero. Objetivos: evaluar y aplicar muestras de líquido cefalorraquídeo (LCR) en la TPHA (Centro de Isótopos: CENTIS) para la confirmación de neurosífilis. Métodos: se estudiaron 78 LCR y 12 sueros de 78 pacientes con sospecha de neurosífilis; 11 LCR y 5 sueros de 11 pacientes con sospecha de neuroborreliosis; 16 LCR de pacientes con sospecha de meningitis bacteriana y 3 LCR de pacientes con sospecha de meningitis por leptospirosis. Las muestras se analizaron por VDRL (venereal disease research laboratories) y TPHA según procedimientos descritos para suero. Se determinaron los parámetros cualitativos y de desempeño de la TPHA. Resultados: al estudiar las muestras de pacientes con sospechas de neurosífilis se obtuvo 9,0 % (7/78) de LCR reactivos por VDRL, y 85,7 % (6/7) positivos por TPHA, lo que confirma neurosífilis. De los 12 casos con muestras de sueros y LCR, 3 resultaron positivos por TPHA, aunque para uno el LCR fue no reactivo por VDRL, lo que sugiere una mayor sensibilidad de la TPHA para este tipo de muestra; para los otros 3 casos los sueros resultaron positivos por VDRL y TPHA, pero los LCR fueron negativos (no neurosífilis). Un caso resultó falso positivo a neurosífilis. Se confirmó neurosífilis en LCR y suero de un paciente con sospechas de neuroborreliosis, y marcadores de neurosífilis pasada y tratada en un paciente con sospecha de meningitis bacteriana. Las muestras de pacientes con sospechas de leptospirosis resultaron negativas. Los parámetros cualitativos y de desempeño de la TPHA en LCR fueron aceptables. Conclusión: El LCR constituye una muestra útil para la confirmación de neurosífilis por TPHA.

Introduction: Treponema pallidum hemagglutination (TPHA) allows the detection of antibodies to Treponema pallidum. The TPHA (Centis) is the only confirmatory test for the diagnosis of syphilis used in Cuba and is applicable only in serum samples. Objectives: to evaluate and to apply samples of the cerebrospinal fluid (CSF) in the TPHA (CENTIS) for neurosyphilis confirmation. Methods: this research studied 78 CSF and 12 sera from 78 patients with suspected neurosyphilis, 11 CSF and 5 sera from 11 patients with suspected neuroborreliosis, 16 CSF from patients with suspected bacterial meningitis and 3 CSF of patients with suspected meningitis by leptospirosis. Samples were analyzed by VDRL (venereal disease research laboratory) and TPHA (Centis) according to procedures described for serum. Qualitative and performance parameters of the TPHA were determined. Results: the study of samples from patients with suspected neurosyphilis yielded 9.0 % (7/78) of reactive CSF according to the VDRL test, and 85.7 % (6/7) of them were positive for TPHA, thus confirming neurosyphilis. Of the 12 cases with serum and CSF samples, three were positive in TPHA, although the CSF in one case was not reactive according to VDRL, which indicates a greater sensitivity rate of the TPHA for this type of sample. In the three other cases, sera were positive in VDRL and TPHA but the CSFs samples were negative (meaning no neurosyphilis). One case was false positive for neurosyphilis. The disease was confirmed in the CSF and the serum from a patient with suspected neuroborreliosis and markers of past and treated neurosyphilis in a patient with suspected bacterial meningitis. Samples from patients with suspected leptospirosis were negative. The qualitative and performance parameters of the TPHA in terms of the CSF were acceptable. Conclusion: the cerebrospinal fluid is a useful sample for confirmation of neurosyphilis by using Treponema pallidum hemagglutination test (Centis).

Treponema pallidum hemagglutination for confirmation of syphilis in Cuba

Introducción: la sífilis es una infección de transmisión sexual reemergente en países desarrollados y en vías de desarrollo. En Cuba permanece como problema de salud y para su diagnóstico serológico solo se emplean pruebas no treponémicas. La hemaglutinación de Treponema pallidum (HATP) se usa exclusivamente en el Laboratorio Nacional de Espiroquetas del Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí" (LNE-IPK), por lo que se trabajó en su descentralización a los laboratorios provinciales del país como prueba confirmatoria. Objetivo: mostrar los resultados de la aplicación de la HATP para la confirmación de sífilis. Métodos: se estudiaron 1 015 muestras de sueros con resultados reactivos por VDRL/RPR (venereal disease research laboratorios/rapid plasma reagin) (622 de embarazadas, 25 de puérperas y 368 de otros individuos) en 11 provincias de Cuba. A todas se les aplicó la HATP en el laboratorio provincial y después en el LNE-IPK como control de la calidad. A partir de estos últimos resultados se determinó el porcentaje de confirmación serológica, los porcentajes de resultados falsos positivos por VDRL/RPR y la tasa específica de resultados falsos positivos según el trimestre de gestación de las embarazadas. Resultados: el control de la calidad realizado en el LNE-IPK mostró valores de discordancia entre los resultados de 0 a 30 %. Se confirmó sífilis en 65,0 % de las muestras. El 33,9 % de los resultados reactivos por VDRL/RPR en embarazadas constituían falsos positivos, el 20,0 % en puérperas y 38,3 % en otros individuos. En el caso de las embarazadas los trimestres I y III contribuyen mayormente a este tipo de resultado. Conclusión: estos resultados refuerzan la necesidad de incluir pruebas no treponémicas y treponémicas en el diagnóstico serológico de la sífilis en Cuba, sobre todo en embarazadas.

Introduction: syphilis is a reemerging sexually transmitted infection in industrial and developing countries. It remains a health problem in Cuba and for the serological diagnosis, nontreponemal tests are the only used. Treponema pallidum hemagglutination (TPHA) is used exclusively in the National Laboratory of Spirochetes at "Pedro Kourí" Institute of Tropical Medicine (LNE-IPK), so it was decided to decentralize the conduction of this test, in order that the provincial laboratories throughout the country can perform it as a confirmatory test. Objective: to show the results of applying the TPHA to confirm syphilis. Methods: one thousand fifteen serum samples with reactive results in the VDRL/RPR(venereal disease research laboratorios/rapid plasma reagin) (622 from pregnant women, 25 from postpartum women and 368 from other individuals) were studied in 11 provinces. TPHA was applied to all sera in the provincial laboratories and later in the LNE-IPK as quality control. From these last results, the percentage of serological confirmation, the rates of false positive results according to the VDRL/RPR and the specific rate of false positives by trimester of pregnancy were all determined. Results: the quality control performed in the LNE-IPK showed discordance values among the results of 0 to 30 %. Syphilis was confirmed in 65% of the samples. Of the reactive VDRL/RPR results, 33.9 % were false positives in pregnant women, 20.0 % in puerperas and 38.3 % in other individuals. The first and third trimesters of pregnancy contributed a lot to this type of result. Conclusions: these results support the need of including nontreponemal and treponemal tests in the serological diagnosis of syphilis in Cuba, mainly for pregnant women.

The urgent need of community involvement in fighting back dengue fever

Introducción: el dengue y la fiebre amarilla son dos importantes enfermedades tropicales trasmitidas por Aedes aegypti, que tienen en la actualidad una alarmante (re)emergencia. Objetivo: exponer la impostergable participación comunitaria en la lucha contra el dengue, a partir del comportamiento que está asumiendo el Ae. aegypti en la provincia de Camagüey. Métodos: se realizó un estudio descriptivo retrospectivo mediante revisión documental de los libros de registro de muestras de tres áreas de Camagüey, durante el trimestre octubre-diciembre de 2011. Las colectas de larvas y adultos según técnicas descritas para la red nacional de control de vectores de Cuba, en las inspecciones intradomiciliar y peridomiciliar del universo urbano en ciclos de trabajo de 22 días, se fijaron en pequeños frascos con alcohol 70 %, y se hicieron acompañar de las correspondientes etiquetas de focos. Resultados: de los 31 tipos de depósitos positivos al vector, resultaron ser la minoría los permanentes, útiles y no modificables (38,70 %); sin embargo, en ellos se incluye 74,37 % de los depósitos positivos, lo que denota la relevancia que tienen y la prioridad que debe darle la familia en su vigilancia y adecuada protección. Conclusiones: atendiendo al importante aporte de los depósitos permanentes, útiles y no modificables a la focalidad del Ae. aegypti, que ha propiciado el propio hombre en tres áreas de la provincia de Camagüey, es impostergable la participación comunitaria en la vigilancia y control de esos depósitos, para realmente impactar en el proceso de prevención del dengue.

Introduction: dengue and yellow fever, two Aedes aegypti-borne life-threatening tropical diseases, are currently showing an alarming (re)emergence. Objective: to discuss the urgent need of community involvement in counterchecking dengue fever, considering the Aedes aegypti occurrence in Camaguey province. Methods: a retrospective-descriptive study was conducted through the review of sampling records of three health care areas of Camagüey, during the October-December 2011 quarter. Larval and adult insect collection was performed following Cuba's National Vector Control Network guidelines by checking the inside and surrounding areas of urban houses in 22-day cycles, during which samples were kept in vials containing 70% alcohol and then labeled with their corresponding breeding site data. Results: out of the 31 types of containers that tested positive for the vector, the minority amounting to 38.70 %, was made up of permanent, usable and unmodifiable containers. However, among them were included 74.37 % of containers that had tested positive, which indicates that local families must give them top priority in terms of their adequate surveillance and management. Conclusions: considering the relevant role of permanent, usable and nonmodifiable containers in the human-induced risk of Aedes aegypti breeding in three health care areas of Camagüey province, there is a pressing need for community involvement in the surveillance and control of such containers so as to have a real impact on the dengue prevention process.

**Artificial infection assay of Cuban ticks with Borrelia burgdorferi sensu stricto**