Revista Cubana de Hematología, Inmunología y Hemoterapia

Stem cell therapy: new step forward in western Cuba

Trali, a masked threat: definition, epidemiological and clinical aspects

El daño pulmonar agudo relacionado con la transfusión o TRALI, como más comúnmente se le conoce, por definición no se diferencia de otros tipos de distrés respiratorios, salvo por su origen demostrable y su estrecha relación temporal con la transfusión. Constituye una de las reacciones adversas más peligrosas del uso de productos sanguíneos y sus peculiares características le permiten enmascararse entre los muchos factores que pueden desencadenar un daño pulmonar agudo, especialmente en algunos pacientes que resultan más susceptibles a su desarrollo. El propósito de esta revisión es hacer un recordatorio de su existencia, sobre todo a aquellos médicos que manejan cotidianamente pacientes demandantes de componentes sanguíneos y cuya condición clínica favorece su aparición. Sus principales variables epidemiológicas (ej: incidencia y mortalidad) varían, a veces de manera notable, entre los distintos informes. La heterogeneidad de criterios aun después de la consecución de consensos internacionales para su diagnóstico, dificulta aprovechar al máximo los datos obtenidos de los distintos estudios realizados sobre su comportamiento y ha promovido la aparición de no pocos resultados contradictorios. Su diagnóstico clínico representa un reto al presentarse en medio de contextos clínicos que hacen plantear otras causas para la aparición del distrés respiratorio. Por ello, muchas veces pasa inadvertido o es mal identificado.

Transfusion-related acute lung injury better known as TRALI, has not differences with other kinds of acute respiratory distress, except for its close relation with transfusion. It is considered among the greatest hazards on blood products use. With its peculiar characteristics it mimics within the many factors that may trigger an acute respiratory distress, especially among those patients at high risk for suffering lung damage after transfusion. The main purpose of this review is to make a recall of the existence of TRALI for those physicians who deal with high transfusion-demanding patients or those with conditions which could represent a risk for its development. TRALI´s main epidemiological variables (such as incidence and mortality) show important variations among different investigations. The criteria heterogeneity, even after the consecution of international diagnostic consensus, has made it difficult to take advantage of the data arose from multiple studies about its behavior, promoting the report of not a few contradictory results on worldwide publications. Diagnosing TRALI represents a real challenge for the clinician since it often appears within the context of various possible causes for an acute respiratory distress. This is why TRALI is frequently overlooked or misdiagnosed.

Inmunomodulatory properties of mesenchymal stem cells

Las estrategias de terapia celular se han utilizado con fines tan diversos como la regeneración de tejidos, la potenciación de la respuesta inmune antígeno específicas para la terapia antitumoral, la liberación de drogas en tejidos dañados y la restauración de la homeostasis en sitios con procesos inflamatorios crónicos. Dentro de las poblaciones celulares con mayor potencial para este tipo de alternativa terapéutica se incluyen las células madre mesenquimales (CMM), un grupo heterogéneo de células estromales multipotentes que se caracterizan por su baja inmunogenicidad y que ha demostrado una elevada versatilidad respecto a sus efectos inmunomoduladores. El presente trabajo recoge evidencias que se han acumulado en la última década que permiten valorar el potencial de las CMM para la terapia celular.

Cellular therapy is a versatile therapeutic approach that has been assessed on tissue regeneration, on the enhancement of tumor specific immune response, on the delivery of drugs to damage tissues and on the restoring of tissue homeostasis at chronic inflamed sites. Among the cell populations used for cellular therapy, multipotent mesenchymal stem cells (MSC) appear as a heterogeneous group of cells with the highest potentiality based on its low immunogenicity and its ability to exert a plethora of immunomodulatory effects. This paper reviews the experimental evidences accumulated during the last decade in order to estimate the relevance of MSC for therapies based on cellular transference.

Frequency of HLA genes in patients with chronic kidney insufficiency, from western and central Cuba

Introducción: el trasplante es la terapia que permite la mayor sobrevida a los pacientes con insuficiencia renal crónica. Para prevenir el rechazo del órgano, en primer lugar es necesario un estudio de la compatibilidad de los antígenos leucocitarios humanos (HLA) del paciente y de los posibles donantes. En Cuba solo se había realizado la tipificación HLA por métodos serológicos, pero en la actualidad se emplean técnicas moleculares. Objetivo: caracterizar el polimorfismo de los alelos HLA A, B, DR y DQ por métodos moleculares en pacientes cubanos en espera de trasplante renal. Métodos: se estudiaron 410 pacientes con insuficiencia renal crónica de las regiones occidental y central del país a los que se les realizó tipificación molecular de los loci mencionados. Los resultados se expresaron según la nueva nomenclatura y fueron registrados en una base de datos confeccionada al efecto. Se compararon las frecuencias alélicas de la población blanca y no blanca y se determinó el porcentaje de frecuencia de los haplotipos para los alelos clase I y II. Resultados: los alelos A*11, A*30, A*74, B*42, B*51 y B*53 fueron más frecuentes en la población blanca mientras que los alelos B*58 y DRB1* 15 predominaron en los no blancos. Las frecuencias haplotípicas más encontradas en la clase I en la población blanca fueron A*02 B*51, A*02 B*44, A*02 B*35; y en la no blanca, A*01B*08, A*02B*51, A*02B*44. Para los alelos de la clase II, en la población blanca fueron DQB1*03, DRB1*04, DQB1*06, DRB1*13, DRB1*05, DRB1*01; y en los no blancos, DQB1*03, DRB1*04, DQB1*06, DRB1*13, DQB1*05, DRB1*01. Conclusiones: la caracterización de los pacientes con insuficiencia renal crónica con respecto a su tipificación HLA permitirá trazar estrategias futuras relacionadas con la donación y el trasplante en todo el país.

Introduction: transplantation is the therapy allowing the highest possible survival in patients with chronic kidney insufficiency. To prevent rejection of the organ, first of all it is necessary to make a compatibility test of human leukocyte antigens (HLA) from the patient and the possible donors. In Cuba, only serological HLA typing had been made but at present, molecular techniques are being applied. Aim: characterization of polimorfirsm of alleles HLA A, B, DR y DQ by molecular techniques in Cuban patients awaiting renal transplantation. Methods: four hundred and ten patients with chronic kidney insufficiency from Western and Central Cuba were studied by molecular typing of the above mentioned loci. Results were expressed by the new nomenclature and were registered In a data base prepared for that purpose. Allele frequencies of white and no white population were compared and percentage of haplotype frequencies for alleles class I and II were determined. Results: alleles A*11, A*30, A*74, B*42, B*51and B*53 were more frequent in white population while B*58 y DRB1*, 15 were mostly found in no whites. Haplotypic frequencies most found in class I in white population were A*02 B*51, A*02 B*44, A*02 B*35; and in no whites, A*01B*08, A*02B*51, A*02B*44. For class II alleles, DQB1*03, DRB1*04, DQB1*06, DRB1*13, DRB1*05, DRB1*01 were the most found in white population; and in no whites, DQB1*03, DRB1*04, DQB1*06, DRB1*13, DQB1*05, DRB1*01. Conclusions: characterization of patients with chronic kidney insufficiency in respect to HLA typing will allow future strategies related to kidney donation and transplantation in the whole country.

Hematic biometry in medical training monitoring of cuban high-performance athletes

Introducción: el control médico del entrenamiento deportivo lleva implícita la medición de parámetros hematológicos y de los índices eritrocitarios, incluido el conteo de reticulocitos, además de controles bioquímicos para velar por el estado de salud del deportista y obtener mejores resultados deportivos. Objetivo: analizar el comportamiento de las variables de los estudios hematológicos realizados a los deportistas de las preselecciones que participaron en los juegos Panamericanos Guadalajara 2011. Método: se realizó un estudio descriptivo transversal que tuvo como universo a 804 deportistas de alto nivel que integraban las preselecciones nacionales que se preparaban para constituir los equipos nacionales que participarían en los Juegos Panamericanos en Guadalajara, México, 2011. A todos se les realizó el perfil hematológico como parte del pasaporte biológico establecido para este tipo de competición. Además, a 328 se les realizó electroforesis de hemoglobina. Resultados: se encontraron cifras de hemoglobina y hematocrito significativamente más bajas en el sexo femenino. La concentración de hemoglobina corpuscular media presentó diferencias significativas por grupo de deporte. En los deportistas a quienes se les realizó electroforesis de hemoglobina se encontraron 15 AS. Conclusiones: los hallazgos de esta investigación son de gran utilidad para el diagnóstico y seguimiento de la salud de los deportistas de alto rendimiento sometidos a fuertes cargas físicas de trabajo.

Introduction: medical management of sports training implies the measurement of hematological parameters, red cell indices, reticulocyte count and biochemical controls to care for the athletes´ health condition and to obtain higher sports scores. Objective: to analyze the behavior of the variables in hematological studies of athletes who participated in the presets Pan American Games Guadalajara 2011. Methods: a descriptive cross-sectional study was carried out with a universe of 804 high-performance athletes from national teams, who were training to participate in the Pan American Games in Guadalajara, Mexico, 2011. Hematological profile was performed as part of the biological passport established for this type of competition. Additionally, a hemoglobin electrophoresis was carried out in 328 of them. Results: significantly lower hemoglobin and hematocrit figures were found in females. The Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration (MCHC) showed significant differences by group of sports. In athletes who underwent electrophoresis, Hb 15 AS were found. Conclusions: the findings of this research are useful for diagnosis and health monitoring of athletes of high-performance, under heavy physical workloads.

Histocompatibility: past, present and future

La histocompatibilidad es la rama de la Inmunología que estudia o tipifica los antígenos expresados en la superficie de los leucocitos, de gran polimorfismo, determinados genéticamente por diferentes variantes alélicas, implicados en el rechazo del trasplante de órganos y tejidos por su alto grado de inmunogenicidad. El desarrollo de la especialidad de Inmunología en Cuba desde la década de los años 70 del pasado siglo, ha permitido la introducción gradual de tecnologías que han posibilitado la tipificación de estos antígenos y el desarrollo del trasplante renal y hematopoyético en nuestro país. La aplicación de la biología molecular en esta área ha hecho posible la identificación más precisa y de nuevas variantes antigénicas anteriormente no conocidas, que han contribuido a ampliar las posibilidades del trasplante hematopoyético a donantes no familiares y con células del cordón umbilical, lo que incrementa las opciones de curación de diversas enfermedades.

Histocompatibility is the area of Immunology for the study or typing of antigens expressed in the surface of leukocytes, of high polymorfirsm, genetically determined by different allelic variants, implied in organs and tissues reject due to its high level of immunogenicity. The development of Immunology in Cuba since the 1970´s has allowed the gradual introduction of technologies that made it possible to type these antigens and the development of hematopoietic and kidney transplants in our country. The use of molecular biology in this area has made it possible the most precise identification of existing and new antigenic variants previously not known, which have contributed to enlarge new possibilities for hematopoietic transplant to non related donors and with blood cord cells, which increased the options for cure in different diseases.

Optimization of deoxyribonucleic acid extraction for molecular typing of human leukocyte antigens

Para la tipificación de los antígenos leucocitarios humanos (HLA) por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con el método de cebador específico de secuencia (SSP), se necesitan entre 3 y 6 µg de ácido desoxirribonucleico (ADN) de elevada pureza. Se realizó un estudio en el Centro de Ingeniería Celular y Trasplante de Órganos y Tejidos del Instituto de Hematología e Inmunología, para determinar las condiciones y las muestras óptimas para la realización de esta prueba. El ADN se extrajo de muestras de sangre fresca y de sangre total y capa leucocitaria almacenadas en congelación, así como de sangre coagulada y plasma de 15 voluntarios, y de una suspensión de linfocitos. Se utilizó un extractor “QIAcube” y el sistema “QIAamp DNA Blood Mini”. La concentración y pureza del ADN se determinaron mediante un espectrofotómetro de microgotas “EPOCH” con software “Gen 5”. A partir de 200 µL de sangre total y de capa leucocitaria se obtuvieron como promedio 5.8 y 22.4 µg de ADN, respectivamente; sobrepasando siempre los 3 µg. El 100 % de las muestras de plasma y el 6,6 % de sangre coagulada proporcionaron menos de 3 µg. De una suspensión de 30 x 10(6) linfocitos se obtuvieron 40 µg. La razón A260/A280 estuvo siempre entre 1.7 y 2. La sangre total y la capa leucocitaria, tanto frescas como congeladas, rindieron en todos los casos una cantidad óptima de ADN, no así el plasma y la sangre coagulada. La mayor cantidad de ADN se extrajo de una suspensión de linfocitos. Todos los eluatos tuvieron adecuada pureza independientemente del tipo de muestra.

For typing the Human Leukocyte Antigens (HLA) by Polymerase Chain Reaction using the Specific Sequence Primer (SSP) method, between 3 and 6 µg of high pureness Deoxyribonucleic Acid (DNA) are needed. In order to establish the best conditions for DNA extraction, as well as the optimal samples, an investigation was carried out in the Center for Cellular Engineering and Organs and Tissues Transplantations in Havana, Cuba. DNA was extracted from fresh and frozen samples of blood, buffy coat, coagulated blood and plasma from 15 volunteers and also extracted from a lymphocyte suspension. A “QIAcube” extractor anda Kit “QIAamp DNA Blood Mini” were used. The DNA concentration and pureness was measured by an “EPOCH” microdot spectrophotometer running “Gen 5” software. From 200 µL of blood or buffy coat means of 5.8 and 22.4 µg of DNA, respectively, were obtained and in all cases the amount of DNA was over 3 µg. One hundred percent of plasma samples and the 6,6 % of coagulated blood samples yielded less than 3 µg of DNA. Forty µg of DNA were extracted from a cell suspension containing 30 x 10(6) lymphocytes. The A260/A280 ratio was between 1.7 and 2 in all eluates. The fresh or frozen blood and buffy coat yielded an optimum amount of DNA in the experiments, but not in plasma nor in coagulated blood. The highest amount of DNA was extracted from a lymphocyte suspension. All eluates were of fine pureness.

New international standards for cell therapy and cord blood cell transplantation

El trasplante de células de sangre de cordón umbilical se aplica con éxito en el tratamiento de diversas enfermedades por el elevado potencial que representan sus características ventajosas en cuanto a plasticidad y compatibilidad; pero para alcanzar mayor aplicabilidad, en ocasiones se requiere la expansión ex vivo a través de cultivos celulares. Como productos celulares expandidos para el trasplante clínico, su seguridad preclínica debe ser objeto de una gran atención antes de su empleo. Los programas de trasplante y de terapia celular deben cumplir requisitos de calidad, tanto nacionales como internacionales, y varias organizaciones se han dedicado a establecer los procesos de acreditación basados en estándares. Se comentan los borradores de dos documentos recién emitidos por organizaciones internacionales: la 6ta edición de los estándares internacionales que proponen de manera conjunta la Fundación para la Acreditación de la Terapia Celular y el Comité de Acreditación Conjunto de la Sociedad Internacional de Terapia Celular y la Sociedad Europea para el Trasplante de Sangre y Médula (FACT-JACIE); y los llamados “ Estándares Comunes para la Terapia Celular”, ambos dedicados a la gestión de calidad en la terapia celular, ya que ellos establecen las guías de trabajo mínimas para los programas, instalaciones y personas que realizan trasplante celular y terapia, o que proporcionan servicios de apoyo a tales procedimientos. Se muestran evidencias de la utilidad de estos procesos de acreditación y su importancia para alcanzar mejores resultados de trabajo en el trasplante y la terapia celular.

Cord Blood Cell (CBC) transplantation is successfully applied for the treatment of various diseases due to the great potential of its advantageous characteristics regarding plasticity and compatibility. Nevertheless, in order to achieve greater levels of applicability, CBC ex vivo expansion cultures are required in certain occasions. As cellular expanded products for transplantation, pre-clinical safety is a great matter of concern before its use. Transplantation and Cellular Therapy Programs should fulfill quality requirements, both national and international, and a certain number of organizations have been dedicated to establish accreditation processes based on standards. Since the draft of the 6th Edition of the International Standards, jointly proposed by The Foundation for the Accreditation of Cellular Therapy and the Joint Accreditation Committee of the International Society for Cellular Therapy and the European Society for the Blood and Bone Transplant (FACT-JACIE), as well as the draft for review and comment of The Common Standards for Cellular Therapies were published, both quality management documents are commented, due to the fact that they establish minimal working guidelines for Programs, Facilities, and Persons working on Cellular Therapies and Transplantation or giving support services for such procedures. Some evidences of the usefulness of this accreditation processes and their importance for achieving better working results in transplantation and cellular therapy are shown.

AML-1/ETO fusion gene and mutation NPM-1A in myeloid chronic leukemia in myeloid blast crisis

La leucemia mieloide crónica es una neoplasia mieloproliferativa de naturaleza clonal que generalmente y de manera progresiva transita por tres fases: crónica, acelerada y crisis blástica. Alrededor del 80 % de los enfermos con leucemia mieloide crónica son diagnosticados durante la fase crónica, 10 % en fase acelerada y otro 10 % durante la crisis blástica. A la presencia del cromosoma Filadelfia y la formación del gen de fusión BCR/ABL, que se traduce en la proteína quimérica pBCR/ABL, le sigue una gran inestabilidad genómica y la adquisición de alteraciones cromosómicas y moleculares adicionales. Algunas alteraciones moleculares, que suelen estar presentes en otras hemopatías malignas, pueden ser adquiridas durante la progresión de la leucemia mieloide crónica a crisis blástica. Se presenta el caso de un paciente que debutó con una leucemia mieloide crónica en crisis blástica, con positividad del gen de fusión BCR/ABL, el gen de fusión AML-1/ETO y la mutación NPM-1A.

Chronic myeloid leukemia is a clonal myeloproliferative neoplasm which generally and progressively goes through three phases: chronic, accelerated and blast crisis. About 80 % of patients with chronic myeloid leukemia are diagnosed in chronic phase, 10 % in accelerated phase and 10 % in blast crisis. The presence of Philadelphia chromosome and the formation of BCR/ABL fusion gene, resulting in the chimeric protein pBCR/ABL, generates a large genomic instability and the acquisition of additional chromosomal and molecular alterations. Some molecular alterations, which are usually present in other hematological malignancies, could be acquired during the progression of chronic myeloid leukemia to blast crisis. This report presents the case of a patient with de novo chronic myeloid leukemia in blast crisis, with positivity of BCR/ABL fusion gene, AML-1/ETO fusion gene and mutation NPM-1A.

Congenital acute myeloid leukemia with thymic aplasia

La leucemia congénita es una entidad rara que se diagnostica entre el momento del nacimiento y los primeros 30 días de vida. Menos del 1 % de las leucemias de la infancia se diagnostican en el neonato. La hipoplasia severa o aplasia del timo se observa en el síndrome de Di George, que incluye varias malformaciones congénitas y déficit inmunológico, principalmente de células T por hipoplasia del timo, aunque se puede observar aplasia del timo en pacientes sin diagnóstico de Di George. Se presenta un caso diagnosticado como leucemia mieloide aguda congénita. En el momento del nacimiento presentó palidez mucocutánea intensa, petequias, equímosis generalizadas y hepatoesplenomegalia. El diagnóstico se confirmó por la presencia de blastos mieloides en periferia y médula ósea y por la caracterización inmunofenotípica de estas células. La necropsia confirmó la aplasia del timo.

Congenital leukemia is a rare disease in which a leukemic process is presented at birth or during the first 30 days of life. Less than 1 % of childhood leukemia is diagnosed in newborns. The severe hypoplasia or total thymic aplasia is seen at Di George syndrome which includes several birth defects and immune deficit, mainly of T cells by thymic hypoplasia; nevertheless, severe thymic hypoplasia can be observed in patients without diagnosis of Di George. We report a case of congenital acute myeloid leukemia who presented intense paleness generalized petechiae and ecchymoses as well as hepatosplenomegaly. The diagnosis was confirmed by the presence of blasts in peripheral blood smear and bone marrow aspirate. Immunophenotyping was performed and contributed to a definitive diagnosis. The autopsy confirmed the thymic aplasia.

Advances of histocompatibility studies in transplantation in Cuba

Cuban Journal of Hematology, Immunology and Hemotherapy: past, present and future

Considerations about platelet function studies at the institute of Hematology and Immunology

Hepatitis C in patients with sickle cell anemia