Revista de Protección Vegetal

USE OF CUCUMBER PLANTS FOR THE DETECTION OF HOP STUNT VIROID (HSVd) IN CITRUS

El viroide del enanismo del lúpulo (HSVd) es el agente causal de la cachexia de los cítricos, enfermedad que puede ocasionar pérdidas importantes en este cultivo. En Cuba se ha informado la presencia del HSVd en cítricos en un alto porcentaje de plantas y se dispone de métodos de detección basados en ensayos biológicos en plantas y su combinación con el análisis de los ácidos nucleicos mediante electroforesis en geles de poliacrilamida e hibridación de ácidos nucleicos. Estos métodos involucran un paso previo de inoculación en un amplificador biológico cítrico, a partir del cual se analizan los ácidos nucleicos, lo cual impone como limitante el requisito de al menos tres meses de incubación. El objetivo del presente trabajo ha sido desarrollar una metodología para la detección de las variantes de secuencias del HSVd presentes en cítricos mediante el empleo de plantas de pepino (Cucumis sativus L. var. Japonés) como amplificador biológico intermedio que supera en rapidez al existente en la actualidad sin detrimento de su eficacia. Para ello se evaluaron controles positivos de plantas de cítricos provenientes de campo. Los resultados definieron una metodología para el diagnóstico del HSVd en plantas cítricas provenientes de campo en la que se combina la amplificación biológica intermedia en plantas de pepino y la detección mediante la hibridación de ácidos nucleicos. Esta metodología presentó una eficacia de un 98.9% y requirió un tiempo de replicación del viroide en la planta de 14 días, el cual resulta inferior al de la metodología empleada actualmente. Su empleo podría disminuir el tiempo para la toma de decisiones de medidas de control y el período de riesgo, aspectos de gran relevancia para los servicios especializados que garantizan la calidad fitosanitaria del material de propagación.

Hop stunt viroid (HSVd) is the etiological agent of citrus cachexia and it can cause considerable losses in this crop. In Cuba, HSVd has been reported occurring in a high percentage of plants in different citrus areas, and works concerning its detection have been mainly based on biological assays and their combination with nucleic acid analysis by polyacrilamida gel electrophoresis and nucleic acid hybridization. These methods involve a previous step of inoculating a citrus biological amplifier before nucleic acids can be analyzed. It imposes a restrictive requirement of incubation for at least three months. The objective of the present work was to develop a new methodology for detecting HSVd in citrus plants using cucumber plants (Cucumis sativus L. var. Japanese) as an intermediate biological amplifier that requires a shortest incubation time than the amplifier presently used without affecting its effectiveness. Positive citrus plants controls from field were evaluated and compared with reference methods. The results defined a methodology for HSVd diagnosis in citrus where the intermediate biological amplification in cucumber plants is combined with detection by nucleic acid hybridization. This methodology showed an effectiveness of 98.9% and required a replication time of the viroid in the plant of 14 days, shorter than that presently required. Its use could diminish the time of decision taken of control measures and the risk period, both aspects that are of great importance for the specialized services that guarantee the propagation material phytosanitary quality.

EMERGENCE OF BEGOMOVIRUSES IN CUBA

Begomoviruses are plant pathogens that caused important losses to crops of economic interest in tropical and subtropical regions in the last decade. In Cuba, nine begomoviruseshave been identified affecting tomato, beans, tobacco, pepper, squash, potato and weeds of different botanical families. The intergenic sequence (IR) and the N-terminal regions of the replication associated protein (Rep) of begomoviruses identified in Cuba were analysed using sequence data of gene collections (GeneBank). Statistical programs were used for the alignments, phylogenetic analysis and searching of significant recombination fragments. The detection of possible recombination events was carried out for p=0.05, based on 10000 permutations. Eleven IR recombination event sites between Macroptilium Yellow Mosaic Virus (MaYMV ) and Tobacco Leaf Rugose Virus (TLRV), and 15 between Tomato Mottle Taino Virus (TMoTV) and Dicliptera Yellow Mosaic Virus (DiYMoV ) were found. Sixteen recombination event sites between MaYMV and Sida Golden Yellow Vein Virus (SiGYVV ) were also found in the Rep region. Jatropha Mosaic Virus (JMV) from Jatropha gossipifolia and Tomato Yellow Leaf Curl Virus TYLCV-IL( CU) from tomato and pepper showed base sequences in the alignments that were present in all the polymorphic sites detected and homologous to monomorphic sites. TMoTV and DiYMoV showed 3 and 4 polymorphic sites in the Rep N-terminal region, respectively. All these sites constitute evidences of old recombination events destroyed during the evolution, and they may define the characteristics of the begomovirus species identified.

Los begomovirus son patógenos de plantas que en las últimas décadas han causado importantes pérdidas a cultivos de interés económico, en regiones tropicales y subtropicales. En Cuba se han identificado nueve begomovirus afectando cultivos de importancia económica como tomate, fríjol, tabaco, pimiento, calabaza, papa, y malezas de diferentes familias botánicas. En este trabajo se analizaron las secuencias de la región intergénica (RI) y la región N- Terminal de la proteína asociada a la replicación (Rep) de los diferentes begomovirus identificados en Cuba, referidas en el banco de datos de genes (Genebank), utilizando programas estadísticos para los alineamientos, análisis filogenéticos y búsqueda de recombinaciones. La detección de posibles eventos de recombinaciones fue realizada para p=0 .05, basado en 10000 permutaciones. En la región intergénica se detectaron entre 11 y 15 sitios de recombinaciones, entre el virus del mosaico amarillo del Macroptilium (MaYMV) y los virus de la hoja rugosa del tabaco (TLRV), el virus moteado taino del tomate (TMoTV) y el virus del mosaico amarillo de Dicliptera (DiYMoV). En la región N-Terminal de la Rep., se detectaron además, 16 sitios de recombinaciones entre MaYMV y el virus amarillo dorado de la Sida (SiGYVV). Los virus del mosaico de Jatropha (JMV) procedente de Jatropha gossipifolia , y los aislamientos de TYLCV-IL(CU) de tomate y pimiento, mostraron secuencias que se encuentran en todos los sitios polimórficos detectados y que son homólogas a los sitios monomórficos, de los alineamientos analizados. En la región N-Terminal de la Rep del TTMoV y DiYMoV, se detectaron 3 y 4 sitios polimórficos respectivamente, con características similares a los anteriores y constituyen evidencia de recombinaciones pasadas y destruida en la evolución. Todos los sitios identificados en estos aislamientos pueden definir características de las especies de begomovirus identificados.

USING A RIBOSOMAL PROBE FOR THE DETECTION OF THE PHYTOPLASMA ASSOCIATED WITH ´BUNCHY TOP SYMPTOM OF PAPAYA´ (BTS) IN PLANT AND INSECT HOST

Recently, a phytoplasma of the 16SrII, Candidatus Phytoplasma aurantifolia group was associated with Bunchy Top disease (BTD) in eastern Cuba. Total DNA from more than 200 plant and insect leaf samples surveyed during 2005 and infected by the 16SrII phytoplasma was indexed by a non-radioactive nucleic acid hybridization assay (nrNAH). Phytoplasma 16S rDNA PCR products of selected samples were purified, labeled with alakaline phosphatase and used as a probe for the detection of such phytoplasma by the system of direct alkaline phosphatase labelling and chemiluminiscent detection (AlkPhos, Amersham LIFE SCIENCE, UK). The nrNAH assay detected the BTD phytoplasma in both papaya plants and Empoasca papayae Oman. The probe yielded hybridization signals reacting with reference controls and samples infected with the BTD phytoplasma. The nrNAH is considered a valuable diagnostic tool for the national phytosanitary surveillance, seed certification and breeding programs and a pathway to develop further specific assays.

Recientemente, el grupo fitoplásmico 16SrII, Candidatus Phytoplasma aurantifolia fue asociado con la enfermedad similar al cogollo arrepollado, Bunchy Top disease (BTD) en el Este de Cuba. El ADN total de más de 200 muestras de plantas e insectos se muestreó durante el 2005, y las que resultaron infectadas por el fitoplasma BTD, fueron evaluadas mediante un ensayo de hibridación de ácidos nucleicos no radioactiva (nrNAH). Los productos de PCR correspondientes al ARN ribosomal 16S de muestras seleccionadas se purificaron, marcaron con fosfatasa alcalina y se utilizaron como sonda para la detección de este fitoplasma mediante el sistema de marcaje directo con fosfatasa alcalina y detección quimioluminiscente (AlkPhos, Amersham Life Science, UK). El ensayo nrNAH detectó el fitoplasma BTD tanto en plantas de fruta bomba como en Empoasca papayae Oman. La sonda arrojó señales de hibridación al reaccionar con los controles de referencia y las muestras infectadas con el fitoplasma BTD. El ensayo nrNAH se considera una valiosa herramienta diagnóstica para los programas de vigilancia fitosanitaria, certificación de semilla y mejoramiento genético, y una vía para desarrollar futuros ensayos específicos.

UNVEILING THE AETIOLOGY OF PAPAYA DISEASES IN CUBA, DEMOCRATIC REPUBLIC OF CONGO (DRC) AND ETHIPIA

Papaya is amongst the most common fruits grown in Ethiopia and it is being affected by a decline disorder recently reported as causing yield losses over 30% in the major farms. In North Kivu, DRC, papaya is the major cash crop grown for latex, which is exported to Europe for papaine production. Since 1997, a disease has been gradually spread and seriously affected the papaya crop and latex yields. In Cuba, papaya has become one of the most important export crops, mainly for the Canadian and European markets. Recently, a papaya bunchy top like disease (PBT-like) has been associated with the 16SrII phytoplasma group, Candidatus Phytoplasma aurantifolia, in the east of Cuba; however, there is no information about the situation of the disease throughout the country. On the other hand, it is required to know the pathogens associated with papaya diseases in Ethiopia and DRC. During 2005-06, leaf samples, including from healthy plants, were collected from symptom papaya plantations surveyed in the three countries and they were tested for rickettsias, papaya ringspot virus and phytoplasmas, which have been the most common plant pathogens associated with papaya diseases worldwide. Total DNA and RNA were extracted and indexed by PCR assays and sequencing of target genes. A 16SrII phytoplasma was identified in more than 95 % of the samples affected with PBT-like in Cuba and the decline disorder in Ethiopia, while a Moroccan Watermelon Mosaic Virus (MWMV) isolate (Potyviridae family) was associated with the papaya disease in DRC.

La fruta bomba se encuentra entre los frutales más comunes que se cultivan en Etiopía. Está siendo afectada por un desorden tipo declinamiento, recientemente informado en las principales parcelas, y causando pérdidas superiores al 30%. En North Kivu, DRC, es el principal cultivo de supervivencia, cultivado para la obtención de látex que se exporta a Europa, para la producción de papaína. Desde 1997, la enfermedad se ha expandido gradualmente, afectando seriamente los niveles de látex. En Cuba, la fruta bomba se ha convertido en uno de los más importantes cultivos de exportación, principalmente para los mercados canadiense y europeo. Recientemente, la enfermedad similar al cogollo arrepollado, papaya bunchy top like-disease (PBT-like) ha sido asociada con el grupo fitoplásmico, 16SrII, Candidatus Phytoplasma aurantifolia, en el este de Cuba; sin embargo, no existe información acerca de la situación de la enfermedad a lo largo del país. Por otra parte, se requiere conocer los patógenos asociados con las enfermedades de la fruta bomba en Etiopía y DRC. Durante el 2005-06, se colectaron muestras foliares de los tres países, incluyendo plantas sanas, las cuales fueron evaluadas para ricketsias, virus de la mancha anular y fitoplasmas, los cuales han sido los patógenos de plantas comúnmente asociados con enfermedades de la fruta bomba a nivel mundial. El ADN y ARN total fueron extraídos y analizados mediante ensayos de PCR y secuenciación de genes blanco. El fitoplasma 16SrII fue identificado en más del 95% de las muestras afectadas con PBT-like en Cuba y declinamiento en Etiopía. Por otra parte, se asoció un aislado del virus del mosaico del melón de Marruecos, Moroccan watermelon mosaic virus (MWMV) (familia Potyviridae) con la enfermedad en fruta bomba en DRC.

**OPTIMIZATION OF THE SEROLOGIC METHODS FOR THE DETECTION OF Ralstonia solanacearum (SMITH) YABUUCHI**

La marchitez bacteriana causada por Ralstonia solanacearum, afecta a varios cultivos económicamente importantes. El manejo seguro de esta enfermedad depende del diagnóstico preciso y temprano. El objetivo del presente trabajo fue la optimización de métodos serológicos para la detección de R. solanacearum. Se obtuvieron anticuerpos policlonales para ser utilizados en las técnicas serológicas. Se determinó la sensibilidad y especificidad de los métodos. El límite de detección fue desde 10(4) a 10(6) UFC/mL para los extractos de plantas y tubérculos mediante el sistema ultramicroanalítico (SUMA), DAS- ELISA, Dot-blot, aglutinación con partículas látex e inmunofluorescencia. Cuando las muestras fueron previamente incubadas en caldo SMSA, antes de ser evaluadas, se incrementó la detectabilidad, siendo tan baja como 10² UFC/mL. Los aislados pertenecientes a los biovares 1 y 2 fueron detectados adecuadamente por estas técnicas. No se observó la presencia de reacciones cruzadas con otros géneros y especies de bacterias estudiadas. Los parámetros analíticos para las técnicas serológicas fueron superiores al 90%.

The bacterial wilt, caused by Ralstonia solanacearum, affects various economically important crops. A successful disease management depends on the precise and early diagnostic. The objective of the present work was to optimize the serologic methods to detect R. solanacearum. Antibody polyclonal was obtained for being used in the serological techniques. The sensitivity and specificity of methods were determined. The detection limit was from 10(4) to 10(6) CFU/mL detected in plant extracts and tubercles by ultramicroanalytic system, ELISA, Dot-blot, latex agglutination and immunofluorescence. When the sample was first incubated in SMSA broth prior testing, the sensitivity of pathogen detection used was as low as 10² CFU/ml. R. solanacearum isolates belonging to biovars 1 and 2 were successfully detected with this technique. No cross-reactions was obtained with other genera and bacteria species studied. The analytical parameters to serology tests were estimated above 90%.

BION AND FITOMAS EFFECT AS RESISTANCE INDUCERS IN RICE PLANTS INFESTED WITH Steneotarsonemus spinki

El empleo de inductores de resistencia en plantas se presenta como una alternativa amigable con el ambiente y atractiva para los productores. En el presente trabajo se estudió el efecto del Fitomas en la inducción de diferentes sistemas enzimáticos relacionados con los mecanismos de defensa en plantas de arroz infestadas con Steneotarsonemus spinki y se comparó con el efecto provocado por el BION en idénticas condiciones. Los resultados indican que la aplicación del Fitomas fue tan efectiva en la disminución de las poblaciones del ácaro como la aplicación del BION y que provocó la activación de enzimas como las peroxidasas, polifenoloxidasas, fenilalanil amonio liasas y quitinasas.

The use of resistance inducers in plants appears as an ecologically amicable and attractive alternative for producers. In this work, the effect of Fitomas on the induction of different enzymatic systems associated with the defense mechanisms in rice plants inoculated with Steneotarsonemus spinki was studied and compared with that caused by BION under identical conditions. Fitomas was shown to be as effective in decreasing the mite population as when BION was applied. It caused the activation of enzymes such as peroxidases, polyphenol oxidases, phenylalanine ammonia liases and chitinases.

**PHYTOTOXICITY TESTING OF THE STRAIN IMI SD 187 of Pochonia chlamydosporia var. catenulata ON Zea mays L. AND Phaseolus vulgaris L.**

Las evaluaciones de fitotoxicidad en plantas terrestres no-diana de los plaguicidas utilizados en la agricultura requieren un adecuado número de ensayos en diferentes especies. En este estudio se evaluó el efecto de un hongo nematófago, sobre la germinación, el crecimiento y la sobrevivencia de dos especies de plantas de importancia económica: maíz (clase monocotiledónea) y fríjol (clase dicotiledónea). También se determinó la concentración del hongo en los tallos, hojas y raíces. Los resultados mostraron que la aplicación del hongo no afectó la germinación ni el crecimiento de las plantas. El análisis de la concentración tisular indicó que el hongo no se acumuló en las partes aéreas de las plantas y tuvo un crecimiento endófito en las raíces sin producir toxicidad en estas dos plantas no-diana.

Analysis Assessment of pesticide phytotoxicity on nontargetedplants requires an appropriate number of data from multiple species. In this study, the effect of a new microbial agent developed to control of root-knootand cyst nematodes was determined on germination, growth and plant survival of two valuable economic crops species: maize (class monocotyledon) and bean (class dicotyledon). Concentrations of the fungus in stems, leaves and roots were also measured. The results showed that plant germination and growth were not affected by the fungus applicationof tissue concentrations indicated that the fungus did not accumulate in the aerial parts of the plants showing an endophytic growth in the roots with no toxicity effect on plants.

In vitro ANTIFUNGAL ACTIVITY OF K1 AND SIGMA CHITOSANS AGAINST Bipolaris oryzae (B. de Haan) Shoem

Con el objetivo de determinar la actividad antifúngica de la quitosana sobre Bipolaris oryzae, patógeno de mayor incidencia en el síndrome del manchado del grano de arroz y agente causal de la enfermedad de la mancha parda de la hoja, se estudió el efecto in vitro de diferentes concentraciones (300, 500, 700 y 1000 mg/L) de las quitosanas K1 (INCA) y SIGMA sobre el crecimiento micelial del hongo. Para ello se midió el diámetro de las colonias a los 3, 4, 5, 6 y 7 días, y se calculó el porcentaje de inhibición del crecimiento del hongo, con respecto al control no tratado. Para los tratamientos que mostraron total inhibición se determinó el efecto fungicida. Los resultados indicaron que ambos productos tienen un efecto inhibidor del crecimiento del hongo a las concentraciones evaluadas. Se obtuvo una inhibición total a la concentración de 1000 mg/L de quitosana SIGMA, para la cual se mostró, además, un efecto fungicida.

To determine the antifungal activity of chitosan against Bipolaris oryzae, which is a pathogen with the highest incidence in the rice spotted grain disease and the causal agent of brown leaf spot, the in vitro effect of different concentrations (300, 500, 700 and 1000 mg/L) of K1 (INCA) and SIGMA chitosans on fungal mycelial growth was studied. The colony diameter was measured after 3, 4, 5, 6 and 7 days, and the inhibition percentage of fungal mycelial growth compared with the non-treated control was calculated. The fungicide effect of the product for the treatment that totally inhibited the fungus was determined. The results indicated that both products had an inhibitory effect on fungal growth at all evaluated concentrations. SIGMA chitosan showed a total inhibition at 1000 mg/L, besides its fungicide effect.

MEALYBUG (HEMIPTERA: PSEUDOCOCCIDAE) FAUNA ASSOCIATED TO PLANTS OF INTEREST: IV ORNAMENTAL PLANTS

Con el propósito de conocer la fauna de chinches harinosas asociadas a plantas ornamentales, se realizaron muestreos en diferentes localidades del país en jardines, avenidas, parques y viveros. Se determinó la frecuencia de las especies colectadas y se utilizó el análisis de cluster por el método de Ward y la distancia Euclidiana para agruparlas de acuerdo a sus hospedantes. Se hallaron en 25 especies de plantas ornamentales, 14 especies de chinches harinosas, de los géneros: Dysmicoccus Ferris; Ferrisia Fullaway; Nipaecoccus Sulc ; Paracoccus Ezzat y Mc Connell; Phenacoccus Cokerell; Planococcus Ferris y Pseudococcus Westwood . Las especies de mayor frecuencia fueron Paracoccus marginatus, Pseudococcus longispinus , Dysmicoccus bispinosus y Dysmicoccus brevipes. De ellas Paracoccus marginatus fue la especie que estuvo presente en un mayor número de plantas, mientras que en las especies Hibiscusrosa-sinensis y Codiaeum variegatum, se encontró la mayor diversidad de chinches harinosas.

In order to know the fauna of the mealybugsassociated to ornamental plants, samplings were carried out in gardens, avenues, parks and nurseries in different regions of the country. The frequency of such species collected was determined, and cluster analysis by Ward method and Euclidiana distance were used for grouping them according their hosts. In 25 ornamental plants, 14 mealybug species belonging to the genera: Dysmicoccus Ferris, Ferrisia Fullaway, Nipaecoccus Sulc, Paracoccus Ezzat and Mc Connell, Phenacoccus Cokerell , Planococcus Ferris and Pseudococcus Westwood were found. The greatest frequency species were Paracoccus marginatus , Pseudococcus longispinus, Dysmicoccusbispinosusand Dysmicoccus brevipes. Among them, Paracoccus marginatus was present in a greater number of plants, while the greatest mealybug host diversity was found in Hibiscus rosa-sinensis and Codiaeum variegatum.

**FIRST REPORT OF Colletotrichum gloesporioides CAUSING DIE BACK IN Rosmarinum officinalis L. IN BUENOS AIRES, ARGENTINA**

El cultivo del romero, Rosmarinum officinalis L. es de gran interés por sus múltiples usos como aromática y medicinal. En el año 2004, en el sur de la provincia de Buenos Aires (Argentina) se observaron plantas de romero, crecidas en campo e invernáculo, con lesiones necróticas progresivas en hojas, tallos y ramas. El presente trabajo se enfocó en la identificación del agente causal. Se escogieron 10 plantas, de un total de cuarenta examinadas y se obtuvieron segmentos de tejidos sintomáticos, estos fueron desinfectados con una solución de hipoclorito de sodio al 2%, enjuagados con agua destilada estéril y colocados en placas Petri con agar papa glucosado al 2% (APG). Sobre todos los segmentos sembrados creció una colonia blanco-grisácea, y acérvulos con conidios en masa de color naranja y setas oscuras. Los conidios de forma cilíndrica germinaron formando apresorios o micelio. El aislamiento fue identificado como Colletotrichum gloesporioides (Penz.) Penz. & Sacc. Para confirmar su patogenicidad, hojas y ramas, obtenidas de diez plantas sanas, se inocularon con una suspensión del hongo utilizando una jeringa hipodérmica; el testigo fue inoculado con agua destilada estéril. Este material se sembró en placas Petri con APG. Esta prueba reprodujo los síntomas observados en el campo e invernáculo. Entre las 24 _ 48 h después de la inoculación todos los tejidos desarrollaron necrosis. El patógeno se reaisló de hojas y ramas siguiendo los postulados de Koch. Los testigos permanecieron asintomáticos. Este es el primer informe de C. gloesporioides como agente causal de muerte regresiva en R. officinalis en Argentina.

Cultivation of the shrub Rosmarinum officinalis L. is of great interest due to its aromatic and medicinal properties. In 2004, in the south of Buenos Aires province (Argentina), rosemary plants showing wilt and necrotic lesions in leaves, stems and twigs (die back) were observed in the field and the greenhouse. This work has focused on the identification of the causal agent of the above mentioned pathology. Forty plants were examined and segments of the symptomatic tissues from ten of them were disinfected with a 2% sodium hypochlorite solution, rinsed in sterile water and plated into Petri dishes with potato dextrose agar (PDA, 2%). The plates were incubated at 22ºC for eight days. Grayish white colonies and acervuli with conidia in orange masses and dark setae were observed on the all tissue segments. The cylindrical shaped conidia germinated developing mycelium or apressoria. The isolate was identified as Colletotrichum gloesporioides (Penz) Penz & Sacc. To confirm its pathogenicity, leaves and twigs taken from ten healthy plants were inoculated with a suspension of the fungus using a hypodermic syringe, the control was inoculated with sterile distilled water. This material was cultured in Petri dishes with PGA. This test reproduced the symptoms observed in the field and greenhouse. Between 24_48 h after inoculation, all the tissues developed necrosis. The pathogen was then reisolated from leaves and twigs fulfilling Koch´s postulates. The controls remained symptomless. This is the first report of Colletotrichum gloesporioides as the causal agent of die back in Rosmarinum officinalis in Argentina.

EFFECT OF THE BIOLOGICAL CONTROLS TRIFESOL AND NEMACID ON ROOT-KNOT NEMATODES IN SHELTERED VEGETABLE PRODUCTION

Los nematodos de las agallas (Meloidogyne spp.), se han convertido en uno de los principales problemas fitosanitarios en la producción protegida de hortalizas en Cuba. Para su manejo se han empleado numerosas tácticas, muchas de las cuales han dado resultados positivos. Con el objetivo de buscar alternativas para sustituir al bromuro de metilo, se evaluó el efecto de los medios biológicos Trifesol y Nemacid sobre los nematodos de las agallas en cultivo protegido. El estudio se desarrolló en una Casa de Cultivo Protegido del INIFAT, la cual presentaba un alto nivel de infestación de nematodos de las agallas (Meloidogyne incognita raza 2). En parcelas de 2,40 m² se evaluó el efecto de los productos Nemacid, Trifesol, en comparación con Dazomet (Nematicida químico) y un testigo sin aplicar. Se utilizó como planta indicadora el pepino (Cucumis sativus L.) híbrido HA 456. Antes de la aplicación de los tratamientos y la siembra del pepino se extrajeron muestras de suelo, a las cuales se les determinó el grado de infestación por nematodos de las agallas y se repitió nuevamente a los 60 días de la siembra. El Trifesol redujo la población M. incognita de grado 3,03 e índice infestación de 50,04% a grado 1,2 e índice de infestación 28,0%, mientras que el Nemacid la redujo de grado 3,10 e índice infestación de 51,5 a grado 1,3 e índice de infestación 32,5% respectivamente, con diferencia significativa con el testigo sin tratar. En ambos casos, se observó un aumento significativo del crecimiento del pepino, en el primer mes después de la siembra con respecto al testigo. Estos tratamientos fueron superados por el Dazomet. Este resultado demuestra que los medios biológicos Trifesol y Nemacid pueden utilizarse como una alternativa al bromuro de metilo, dentro de un programa de manejo integrado de esta plaga en la producción protegida de hortalizas.

Root-knot nematode (Meloidogyne spp.) has become one of the main phytosanitary problems in sheltered vegetable production in Cuba. Several tactics have been used to its management with positive results. The biological controls Trifesol and Nemacid were evaluated as alternatives of methyl bromide to control the root-knot nematode (M. incognita race 2) in a sheltered crop system. The study was carried out in a protected crop house at the INIFAT with a high level of infestation of this nematode. The effect of Nemacid and Trifesol was compared with Dazomet (chemical nematicide) and an untreated control in plots of 2,40 m². Cucumber (Cucumis sativus L.), hybrid HA 456, was used as indicator plant. Trifesol reduced the nematode population from grade 3,03 and infestation indexes of 50,04% to 1,2 and of 28,0%, respectively, and Nemacid from grade 3,10 and indexes of 51,5% to 1,3 and 32,5%, respectively, which were significantly (p<0,05%) better values than those of the untreated control. With both products, a significant increase of cucumber growth was observed one month after planting when compared with the control. In all cases, the best results were obtained with Dazomet. However, Trifesol and Nemacid were shown to be good alternatives to methyl bromide for being used in an integrated management programme in protected vegetable production.

Bolacothrips striatopennatus (SCHMUTZ) (THYSANOPTERA: THRIPIDAE), NEW REPORT FOR CUBA

Se informa, por primera vez en Cuba, la presencia del género Bolacothrips, representado por la especie Bolacothrips striatopennatus, colectado en las vainas de la hoja del cultivo del arroz y otras poaceas circundantes.

The presence of the genus Bolacothrips represented by Bolacothrips striatopennatus is first reported in Cuba. It was collected in rice leaf sheaths and other Poaceae.

**IDENTIFICACIÓN Y CONTROL in vitroCON quitosanay Trichoderma spp. DE HONGOS QUE CAUSAN EL MANCHADO DEL GRANO EN ARROZ (Oryza sativa L.)**

The presence of the genus Bolacothrips represented by Bolacothrips striatopennatus is first reported in Cuba. It was collected in rice leaf sheaths and other Poaceae.