Revista de Protección Vegetal

**BIOLOGY AND LIFE TABLE OF Myzus persicae (SULZER) (HEMIPTERA: APHIDIDAE) UNDER LABORATORY CONDITIONS**

La problemática de los áfidos se ha convertido en una limitante para el desarrollo óptimo de cultivos hortícolas, particularmente las crucíferas, una de las más afectadas. Entre las especies de áfidos más dañinas se encuentra Myzus persicae (Sulzer), conocido como el pulgón verde del duraznero, especie polífaga asociada a hortalizas como la col, acelga y coliflor. El presente estudio estuvo encaminado a determinar los principales parámetros biológicos y poblacionales de esta especie sobre Beta vulgaris var. cicla (L.) en condiciones de laboratorio, con una temperatura de 24,5 ± 0,28 ºC y 66,6 ± 9,2% de humedad relativa. En 40 ninfas obtenidas a partir de hembras adultas, se evaluó el momento de la muda, momento en que alcanzan el estado adulto, la descendencia por hembra y la fecha de muerte de los adultos. La duración del período ninfal osciló entre 4 y 5 días, mientras la longevidad media fue de 16, 3 días, alcanzando M. persicae un ciclo de vida de 20,6 días como promedio. La fecundidad diaria de la especie fue de 3 a 4 individuos por hembra y la supervivencia describe una curva de tipo I y II. Los parámetros poblacionales de la especie, tasa intrínseca de incremento (rm), tasa neta de reproducción (Ro), tiempo generacional (T) y tiempo de duplicación (D) fueron de 0,04; 16,0; 2,73 y 7,53 respectivamente.

The aphid problem has become a limiting factor for the optimal development of horticultural crops, particularly in the cruciferous vegetables among the most affected. Myzus persicae (Sulzer), known as the peach tree green aphid, is a polyphage species found among the most harmful aphid species associated with vegetables such as cabbage, beet and cauliflower. The present work is aimed at determining the main biological and population parameters of this species on Beta vulgaris var. cicla (L.) under laboratory conditions, at the temperature of 24.5 ± 0.28ºCand 66.6 ± 9.2 % of relative humidity. In 40 nymphs obtained from adult females, the molting times, the time of reaching the adult stage, the descendant by female and the adult death date, were evaluated. The duration of the nymphal period ranged from 4 to 5 days while the average life longevity was 16, 3 days, M. persicae reaching a life cycle of 20.6 days on average. The daily fecundity of the species was 3 to 4 individuals by female and the survival describes a curve of the type I and II. The population parameters of the species, intrinsic rate of increase (rm), net reproductive rate (Ro), generation time (T) and duplication time (D) were 0.04, 16.0, 2.73 and 7.53 respectively.

MOLECULAR CHARACTERIZATION OF Cladosporium fulvum Cooke ISOLATES FROM TOMATO IN SHELTERED CROP CONDITIONS

El moho de la hoja, causado por el hongo Cladosporium fulvum Cooke, es una enfermedad muy común y destructiva en el cultivo del tomate. Aunque existen cultivares portadores de uno o más genes de resistencia, el hecho de que el hongo muta fácilmente trae como consecuencia un uso limitado de los mismos. De ahí que, el conocimiento de las poblaciones del patógeno contribuye a los esfuerzos realizados en el programa de mejoramiento y al desarrollo de estrategias que alarguen la vida útil de los materiales obtenidos. El objetivo de este trabajo fue la caracterización molecular de 37 aislados de C. fulvum provenientes de plantas de tomate de diferentes localidades. La caracterización incluyó la identificación de los aislamientos por la amplificación de la región 28S del gen que codifica para el ARNr, la PCR con cebadores específicos dirigidos a diferentes genes relacionados con la patogenicidad (Avr2, Avr4, Avr4E, Avr9, Ecp1, Ecp2, Ecp4 y Ecp5) y los RAPDs. Todos los aislados fueron clasificados como C. fulvum. Ningún aislado amplificó para el gen Avr9, aunque se encontraron elevados porcentajes de amplificación para los genes Avr2, Avr4 y Avr4E. La virulencia de las razas 2, 4, y 2.4 está más relacionada con la presencia de la proteína Ecp2 (100%) que con la Ecp1. Todos los marcadores empleados confirmaron un elevado nivel de variabilidad molecular, aunque en ninguno de los casos hubo relación con el origen geográfico.

The leaf mold caused by Cladosporium fulvum Cooke, is a very common and destructive disease in the tomato crop. Although there are cultivars with one or more resistance genes, the fact that the fungus has a very high mutation level, results in a limited use of such materials. For that reason, the knowledge of the pathogen populations contributes to the breeding program efforts to develope strategies to extent the useful life of the materials obtained. The objective of this work was the molecular characterization of the variability in a group of C. fulvum isolates from tomato plants. The molecular characterization was carried out for 37 isolates, including identification by the 28S region encoding for RNAr amplification, PCR with specific primers directed to different genes related to pathogenicity (Avr2, Avr4, Avr4E, Avr9, Ecp1, Ecp2, Ecp4 y Ecp5) and RAPDs. All the isolates were classified as C. fulvum. Any of them amplified for the Avr9 gene, although there were high amplification percentages for the Avr2, Avr4 and Avr4E genes. The virulence of the races 2, 4, and 2.4 were more related to the presence of the Ecp2 protein (100%) than to Ecp1. All the markers used confirmed a high level of molecular variability, although no relation the geographical origin was found.

**BIOCHEMICAL CHARACTERIZATION OF SIX ISOLATES OF Beauveria bassiana (BALSAMO) VUILLEMIN**

Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin es un agente de control biológico para artrópodos plaga. En el proceso de desarrollo de un agente de control biológico como producto, es necesario el estudio de su modo de acción, los metabolitos que en el participan y su expresión en las cepas del hongo, a fin de garantizar conocimiento útil para la selección, optimización de la producción, formulación e identidad de la cepa. El objetivo del presente trabajo fue la caracterización bioquímica de seis cepas de B. bassiana a través de un estudio de dinámica de inducción en diferentes medios de cultivo. Para ello se sembraron discos de micelio de seis cepas de Beauveria bassiana en medio basal como control, medio basal suplementado con gelatina y medio basal suplementado con quitina. Se realizaron determinaciones de proteínas totales, actividad quitinasa y actividad glucanasa, a los 3, 5 y 7 días postinoculación. De manera general, las cepas 33 y 9 mostraron los mayores niveles de producción de los parámetros evaluados. El medio suplementado con quitina resultó más favorable para la producción de proteínas totales y de quitinasa, mientras que el medio suplementado con gelatina fue el mejor para la producción de glucanasa.

Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin is a promisoring biological control agent for invertebrate pests. In the development of a product based on a biological control agent, the study of the mode of action and the metabolites involved and their expression by the promisoring strains is needed for selection, mass rearing, formulation and strain identity. The aim of this work was the biochemical characterization of six B. bassiana isolates by a time course experiment in different culture media. Mycelia disk of six B bassiana isolates were grown in a basal medium as the control, basal medium supplemented with chitin and basal medium supplemented with gelatine. Total proteins, chitinase and glucanase activities were assayed at 3, 5 and 7 days post inoculation. In general, isolates 33 and 9 showed the highest levels for all the parameters studied. The medium supplemented with chitin was the best for total protein and chitinase activity expression, while the media supplemented with gelatine was the best for glucanase production.

**BIOCHEMICAL CHARACTERIZATION OF PROMISING ISOLATES OF Trichoderma spp. AS BIOLOGICAL CONTROL AGENTS. II. EXPRESSION OF GLUCANASE ACTIVITY**

Los hongos pertenecientes al género Trichoderma secretan enzimas hidrolíticas que le permiten penetrar la pared celular de los hongos fitopatógenos. Las glucanasas son enzimas que hidrolizan los b-glucanos de la pared celular de fitopatógenos como Sclerotium rolfsii, Rhizoctonia solani y Pythium sp. El objetivo de este trabajo fue realizar la dinámica de inducción de glucanasas de diez aislamientos de Trichoderma spp. evaluando la actividad enzimática específica de estas enzimas al primer, tercer, quinto y séptimo días, en los sobrenadantes de los cultivos en tres medios líquidos distintos: medio basal, medio basal suplementado con quitina al 0,5% y medio basal suplementado con gelatina al 0,2%. Los aislamientos 1, 13 y 17 alcanzaron los mayores niveles de actividad enzimática específica glucanasa durante la inducción con el medio suplementado con gelatina. El medio basal también resultó ser un buen inductor de estas enzimas.

Trichoderma species fungi secret hydrolytic enzymes which allow them to penetrate the cell walls of phytopathogenic fungi. The glucanases are enzymes that hydrolyze the b-glucans of the cell wall of phytopathogens such as Sclerotium rolfsii, Rhizoctonia solani and Pythium sp. The aim of this work was to carry out the dynamics of glucanase induction of ten Trichoderma spp. isolates evaluating the enzymatic activities at the first, third, fifth and seventh days of the cultures in three liquid media: basal medium, basal medium supplemented with chitin 0,5% and basal medium supplemented with gelatine 0,2%. The isolates 1, 13 y 17 reached the highest levels of glucanase specific activity during the induction with the basal medium supplemented with gelatine. The basal medium also resulted to be a good inductor of those enzymes.

RESPONSE OF RICE VARIETIES (Oryza sativa L.) TO POPULATIONS OF Steneotarsonemus spinki SMILEY (ACARI: TARSONEMIDAE) IN PANAMÁ, 2007

Para la introducción de nuevas variedades de arroz al sistema de producción, es recomendable caracterizar su comportamiento ante las plagas clave del cultivo, por lo que el objetivo de este trabajo fue conocer la respuesta de ocho variedades obtenidas en el IDIAP y el cultivar Vioal en presencia del ácaro Steneotarsonemus spinki. El conteo de las poblaciones de S. spinki se realizó cada ocho días, a partir de los 27 días después de la germinación. Se seleccionaron al azar cinco tallos por tratamiento y se realizaron tres repeticiones. Se determinó la masa de los granos vanos, tiza y llenos, así como el rendimiento agrícola. Se evaluó la reacción de los materiales a las enfermedades y sus características agronómicas. La densidad de S. spinki se comparó mediante análisis de varianza simple, la influencia de los factores climáticos quedó evidenciada mediante análisis de componentes principales, un análisis de clúster permitió el agrupamiento varietal de acuerdo a la masa de granos llenos y las regresiones polinomiales evidenciaron las tendencias poblacionales. Todas las variedades fueron resistentes o moderadamente resistentes a las enfermedades comunes del cultivo. La humedad relativa mínima cambiante por la acción de las precipitaciones influyó marcadamente en la dinámica del ácaro. Las variedades que presentaron las mayores masas de granos llenos, obtuvieron los mejores rendimientos agrícolas. La respuesta varietal puede estar en función de la ocurrencia de altas poblaciones de S. spinki en las edades cercanas a la floración, que pueden influir directamente en la disminución del peso de granos llenos y los rendimientos agrícolas.

For the introduction of new varieties into the production system, it is recommendable to characterize their behavior in the presence of the common key pests of this crop; therefore the objective of this experiment was to know the response of eight IDIAP varieties and the cultivar Vioal to the presence of populations of the mite Steneotarsonemus spinki. Mite populations were counted every eight days from the 27th day after germination. Five stems per treatment were randomly selected for each of three replications. The weights of whole, vain and chalky grains and the yields were determined. The response to diseases and the agronomic characteristics were evaluated. S. spinki density was compared by simple variance analysis, the influence of the climatic factors was evidenced by main component analysis; a cluster analysis permitted the grouping of varieties according to their full grain weights, and the polynomial regressions evidenced the population tendencies. All the varieties were resistant or moderately resistant to common diseases of the crop. The minima relative humidity changed by the action of rainfall and influenced in the mite dynamic markedly. The highest yields were spowntobe by the varieties with the highest weights of whole grains. The varietal response may be in function of the occurrence of high populations of the mite in stages near flowering, which may directly influence on the decrease or increase of whole grain weights and agricultural yields.

BIOCHEMICAL CHARACTERIZATION OF SIX PROMYSSORY TOMATO GENOTYPES OBTAINED IN IMPROVEMENT PROGRAMS TO TYLCV RESISTANCE

El tomate es uno de los cultivos hortícolas más importante a nivel mundial. El virus del encrespamiento amarillo de la hoja del tomate (TYLCV) es uno de los patógenos más agresivos para esta hortaliza. La obtención de variedades resistentes para su manejo, depende de la disponibilidad de materiales promisorios para ser empleados como parentales. Aspectos relacionados con la resistencia de los hospedantes y el efecto de los patógenos sobre el metabolismo de los mismos, han sido estudiados a nivel bioquímico, a través del empleo de las isoenzimas. El objetivo de este trabajo fue caracterizar seis genotipos de tomate obtenidos en programas de mejoramiento a partir de la determinación de las actividades específicas de tres sistemas enzimáticos y el contenido de compuestos fenólicos. Según los resultados obtenidos, el genotipo 3 parece ser el más promisorio para estos propósitos.

Tomato is one of the most important crops of the world. The tomato yellow leaf curl virus (TYLCV) is one of the most aggressive pathogen to this vegetable. The resistant varieties for the TYLCV control depend on the availability of promissory genotypes. The isoenzymes have been used to investigate the aspects related to the host resistance and the pathogens effect on host metabolism at a biochemical level. The aim of this work was to characterize six promissory tomato genotypes obtained in breeding programs for TYLCV resistance by means of enzymatic activities and phenolyc compound determination. The results showed that the 3 genotypes could be the most promissory for these purposes.

PROMISORY ACTIVITY OF ESSENTIAL OILS FROM SPECIES BELONGING TO PIPEREAE TRIBU AGAINST Artemia salina AND Xanthomonas albilineans

Los géneros Piper y Lepianthes han sido empleados como fuente de insecticidas y en la medicina natural. Son conocidas las propiedades antifúngica, insecticida, antialimentaria, estimulante, bactericida y citotóxica de muchos de sus extractos. El objetivo de este trabajo fue establecer las potencialidades de tres aceites esenciales de especies de estos géneros como candidatos para el desarrollo de productos con actividad plaguicida y antitumoral. Los aceites esenciales de P. auritum (CA1), P. aduncum subsp. ossanum (PAO1) y L. umbellata (LU1) fueron obtenidos por hidrodestilación empleando un equipo Clevenger y se evaluaron frente a Artemia salina, organismo indicador de actividad plaguicida y antitumoral. La actividad antibacteriana de los aceites esenciales frente a Xanthomonas albilineans (los serovares I y III) se evaluó empleando los métodos de difusión en agar y envenenamiento del medio. La evaluación de la actividad plaguicida y antitumoral de los aceites esenciales evidenció un 100% de mortalidad de las artemias, a las 24 horas a las concentraciones de 250, 500 y 1000 µg/mL (LC50<100 µg/mL; LC50<125 µg/mL; LC50<250 µg/mL) para CA1, LU1 y PAO1 respectivamente. Al evaluar la acción antimicrobiana de los aceites esenciales PAO1 y CA1 se observó una inhibición del crecimiento bacteriano a una concentración mínima inhibitoria (CMI) menor de 1,25 µL/mL frente al serovar I y una concentración mínima inhibitoria de 0,5 y 1 µL/mL de CA1 y PAO1 respectivamente, frente al serovar III. CA1, LU1 y PAO1 son candidatos botánicos con actividad plaguicida y antitumoral promisorias.

The genera Piper and Lepianthes have been used as a source of insecticides and natural medicines. The antifungal, insecticide, antifeeding, stimulant, bactericidal and cytotoxic properties of many of their extracts are known. The aim of this study was to establish the potential of essential oils from three species of these genera as candidates for the development of products with pesticide and antitumoral activity. The essential oils from P. auritum (CA1), P. aduncum subsp. ossanum (PAO1) and L. umbellata (LU1) were obtained by hydrodistillation in a Clevenger-type apparatus and they were studied for their antitumoral activity by the brine shrimp lethality bioassay. The essential oils were tested against Xanthomonas albilineans (serovars I and III) for antibacterial properties using agar diffusion and poisoning medium methods. The essential oils showed 100 % of mortality of Artemia at 24 hours at concentrations of 250, 500 y 1000 µg/mL (LD50<100 µg/mL; LD50<125 µg/mL; LD50<250 µg/mL) for CA1, LU1 and PAO1 respectively. The bioassay for antimicrobial activity showed that the essential oils PAO1 and CA1 had a strong bactericidal activity. An inhibition of bacterial growth was at a minimum inhibitory concentration (MIC) less than 1,25 mL/mL against serovar I and a minimum inhibitory concentration of 0,5 and 1 mL/mL of CA1 and PAO1, respectively, against serovar III observed. CA1, LU1 and PAO1 are botanical candidates with pesticide and antitumoral potential.

CHEMICAL CHARACTERIZATION AND ACARICIDAL ACTIVITY OF THE ESSENTIAL OIL FROM Piper aduncum subsp. ossanum against Varroa destructor

La varroosis de las abejas constituye uno de los mayores problemas de la apicultura tanto en Cuba como a nivel mundial. Actualmente, se realiza la búsqueda de nuevos métodos que permitan el control del ácaro Varroa destructor, agente causal de esta enfermedad, y minimicen el potencial para la aparición de resistencia y la contaminación de los productos de la colmena y el medio ambiente en general. En este contexto el CENSA ha venido investigando un grupo de plantas cubanas como fuente de plaguicidas y el objetivo de este trabajo fue establecer las potencialidades del aceite esencial de Piper aduncum subsp. ossanum como candidato para el desarrollo de un nuevo producto para el control de la varroosis. Se evaluó su efecto acaricida por exposición completa y a los vapores. La composición química de este aceite se determinó por CG/EM. El mismo se fraccionó utilizando una columna seca en fase normal, para la identificación de los componentes asociados al efecto biológico. El aceite esencial de P. aduncum subsp. ossanum demostró que posee un efecto acaricida promisorio y selectivo frente a V. destructor. Los componentes mayoritarios del aceite son el canfeno, alcanfor, piperitona y viridiflorol. Al efecto acaricida de los vapores de P. aduncum subsp. ossanum contribuyen varios de sus componentes volátiles y el efecto por exposición completa está asociado a los terpenoides oxigenados, entre los que son mayoritarios el alcanfor y la piperitona. El aceite esencial de P. aduncum subsp. ossanum es un candidato promisorio para el desarrollo de un acaricida botánico y podría ser utilizado en un futuro en el contexto de un manejo integrado de la varroosis.

Varroosis is one of the main problems of apiculture in Cuba and worldwide. Nowadays, new methods are searched to control Varroa destructor, causal agent of this disease, minimising the risk of resistance occurrence and the contamination of beehive products and the environment. In this context CENSA has studied a group of Cuban plants as source of pesticides and the aim of this work was to establish the potential of the essential oil from Piper aduncum subsp. ossanum as a candidate for developing a new product for varroa control. The acaricidal effect was evaluated by vapour and complete exposure. The chemical composition of this oil was determined by GC/MS. The components associated to biological effect were identified fractionating the oil using normal phase dry column chromatography. The essential oil from Piper aduncum subsp. ossanum showed a selective and promissory effect against varroa. The main components of this oil were camphene, camphor, piperitone and viridiflorol. Several volatile components contributed to the acaricidal activity and the effect by complete exposure was related to oxygenated terpenoids, mainly camphor and piperitone. The essential oil from Piper aduncum subsp. ossanum is a promissory candidate for developing a botanical acaricide and it can be use in the future as part of varroa integrated management.

**CHALCID PARASITOIDS (HYMENOPTERA, CHALCIDOIDEA) ASSOCIATED WITH COCCOIDEA (HEMIPTERA) IN COCONUT (Cocos nucifera L.) (ARECACEAE)**

Se estudió el complejo de cálcidos parasitoides asociados a especies de cóccidos en cocotero (Cocos nucifera L.), con el objetivo de ampliar las posibilidades de uso y conservación de enemigos naturales en áreas de cultivo de frutales en agroecosistemas urbanos. Se realizaron muestreos en áreas seleccionadas de las provincias La Habana y Mayabeque entre febrero y mayo del año 2009. Se efectuaron 8 muestreos, se seleccionaron 6 plantas por muestreo y se extrajeron cinco foliolos por planta. Las muestras se trasladaron al Laboratorio de Entomología del Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), donde se revisaron y los cóccidos parasitados se aislaron en placas Petri hasta la emergencia de los parasitoides adultos, los cuales fueron montados en láminas portaobjetos en Medio Hoyer y clasificados mediante la utilización de las claves taxonómicas correspondientes. Las especies plaga detectadas fueron Aspidiotus destructor Signoret (Hemiptera: Diaspididae), Eucalymnatus tessellatus (Signoret) (Hemiptera: Coccidae) y Tetraleurodes sp. El complejo de parasitoides estuvo conformado por avispas cálcidas (Hymenoptera :Chalcidoidea) como Pseudhomalopoda prima Girault (Encyrtidae), Aphytis chrysomphali Mercet, (Aphelinidae), tres especies de Encarsia (Aphelinidae), Metaphycus stanleyi (Compere) (Encyrtidae) y los géneros Signiphora Ashmead (Hymenoptera: Chalcidoidea) y Marietta Motschulski (Chalcidoidea: Aphelinidae), ambos hiperparasitoides a través de otras especies que parasitan cócidos y diaspídidos. El conocimiento más profundo de la asociación entre las especies de cóccidos, sus parasitoides y las plantas hospedantes nos permitirá ampliar las posibilidades del uso del control biológico en frutales, mediante el desarrollo de programas de manejo amigables con el cultivo y el medio ambiente.

The complex of chalcid parasitoid associated with scale insect species present in coconut (Cocos nucifera L.) was studied with the aim of expanding the possibilities of use and conservation of natural enemies in fruit growing areas in urban agroecosystems. Periodic surveys were conducted in selected areas of the provinces of Havana and Mayabeque, from February to May 2009. Five leaflets were taken from each of the six plants per sampling selected from the eigth samplings conducted. Samples were transported to the Entomology Laboratory of the National Center for Agricultural Health (CENSA), where they examined were and the parasitized scale insects isolated in Petri dishes until emergence of adult parasitoids. These were mounted on microscope slides in Hoyer's medium and classified by using appropriate taxonomic keys. The main pest species detected were Aspidiotus destructor Signoret (Hemiptera: Diaspididae), Eucalymnatus tessellatus (Signoret) (Hemiptera: Coccidae) and Tetraleurodes sp. The parasitoid complex was comprised of chalcids species (Hymenoptera: Chalcidoidea) such as Pseudhomalopoda prima Girault (Encyrtidae) Aphytis chrysomphali Mercet (Aphelinidae), three species of Encarsia (Aphelinidae), Metaphycus stanleyi (Compere) (Encyrtidae) and the genera Signiphora Ashmead (Hymenoptera: Chalcidoidea) and Marietta Motschulski (Chalcidoidea: Aphelinidae), both recognized hyperparasitoids through other species that primarily parasitize diaspidids scales. A better understanding of the association between species of scale insects, their parasites and host plants allow us to expand the possibilities of using biological control in orchards, with the development of environmentally-friendly crop management programs.

**PURE POPULATION BANK OF Meloidogyne spp. OF THE NATIONAL CENTER FOR PLANT AND ANIMAL SCIENCE (CENSA)**

**RECYCLING OF ENTOMOPATHOGENIC NEMATODES IN COFFEE CROP (Coffea spp.) GROWING SOILS IN BUEY ARRIBA**

BIODESINFECCIÓN DE SUELOS EN RELACIÓN CON LA DIVERSIDAD EN HORTALIZAS Y PLATANERA