Revista de Protección Vegetal

**Sampling methods for monitoring of Pseudophilothrips sp. (Tubulifera: Phlaeothripidae) and its natural enemies:: II. Binomial sequential sampling of Eurotas brasilianus Carvalho and Wallerstein (Miridae: Orthotylinae) and Macrotracheliella sp. (Anthocoridae: Anthocorinae)**

El presente artículo es el segundo de dos publicaciones que abordan la determinación de métodos de muestreo secuencial: 1) enumerativo y 2) binomial, para el monitoreo de Pseudophilothrips sp. y sus enemigos naturales en el sistema agroecológico de Plukenetia volubilis L. en San Martín, Perú. En el periodo 2007-2009 se realizaron 202 registros de población en una parcela agroecológica de P. volubilis. Se tomaron 10 hojas por tercio, 10 inflorescencias y 10 frutos. Sobre la base de los valores significativos de los coeficientes a (intercepto) y b (agregación) de la Ley del Poder de Taylor, se elaboró una cartilla que relaciona el tamaño de muestra con las frecuencias de plantas p y la media m, cuya relación se ajustó por comparación de tres funciones: (a) la forma empírica de Kono y Sugino, (b) la función de Wilson y Room y (c) la distribución de Poisson. Se consideró un valor de corte T=0 y se estimó el tamaño de muestra. Los parámetros referenciales de la cartilla de muestreo se ajustaron por n + 0,5 y se redondearon a números enteros. Se realizaron simulaciones que se compararon con los registros para n=25. Las frecuencias de plantas con presencia de enemigos naturales (p) se ajustaron a la distribución binomial negativa (BN) (k=1,62; R²=94%). La función de p y m quedó mejor ajustada a la forma de Wilson y Room (R²= 93,20%). Con la cartilla elaborada para un máximo de 30 plantas, se estimó exitosamente la media (margen de error E50%), para valores situados entre 0,20 y 0,92 individuos/ planta, en el 92% de las simulaciones. El muestreo requirió 13 ± 8 plantas (48 ± 32% versus 40 ± 24% del muestreo enumerativo). En el 22,7% de los casos, la simulación agotó el número de plantas sin alcanzar el valor requerido para p pero brindaron estimaciones acertadas de la media.

The present paper is the second of two approaching the determination of sequential sampling methods: (1) enumerative and (2) binomial, for monitoring of Pseudophilothrips sp. and its natural enemies in the agroecological system of Plukenetia volubilis L. in San Martin, Peru. During 2007-2009, a total of 202 population samplings were carried out in an agroecological plot of P.volubilis. Ten leaves per each of the three plant thirds, ten inflorescences and ten fruits were taken. Based on the significant values of the coefficients a (intercept) and b (aggregation) of Taylor`s Power Law, a card was made relating the sampling size with the plant frequencies p and the mean m, whose relation was adjusted by comparing three functions: Kono and Sugino`s empirical manner, (b) Wilson and Room`s function, and (c) Poisson`s distribution. A cutting value T=0 was considered, and the sampling size was estimated. The referential parameters of the sampling card were adjusted by n + 0.5 and rounded to whole numbers. Simulations compared with the records for n=25 were carried out. The frequencies of plants with natural enemies (p) fitted the negative binomial distribution (BN) (k=1.62; R²=94%). The function of p and m was better adjusted to Wilson and Room's manner (R²= 93.20). With the card made for a maximum of 30 plants, the mean was successfully estimated for the error margin E50%, for values between 0.20 and 0.92 individuals/plant, in 92% of the simulations. Sampling required 13 ± 8 plants (48 ± 32% vs. 40 ± 24% of the enumerative sampling). In 22.7% of cases, the simulation exhausted the number of plants without reaching the required value for p, but it offered. appropriate mean estimations.

Incidence of fungal diseases in cocoa plantations of cuban western provinces

Durante una encuesta fitopatológica, se visitaron 20 fincas cacaoteras en la región oriental de Cuba, cuatro en la provincia Granma y 16 en Baracoa, donde se muestrearon mazorcas y hojas enfermas, chancros del tronco, agallas y otras manifestaciones de enfermedad. Las muestras se desinfectaron (NaOCl, 3%), se lavaron con agua destilada estéril, montadas en cámaras húmedas y/o sembradas en agar agua + vancomicina (200 ug/ml) o medio selectivo para Phytophthora spp. Los hongos que con mayor frecuencia se encontraron fueron Lasiodiplodia theobromae Griffiths & Maubl. (90%), Phytophthora palmivora (E.J. Butler) (85%) y Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Sacc. (70%). No se hallaron aislamientos típicos de P. tropicalis. Las enfermedades de mayor incidencia fueron las pudriciones de la mazorca por P. palmivora (65%), por L. theobromae (55%) y antracnosis por C. gloeosporioides (55%). Se detectaron, además, mancha foliar por Cercospora sp. (20%) y por Phomopsis sp. (10%), chancros del tallo por P. palmivora (15%), muerte regresiva por L. theobromae (10%) y agallas causadas por Fusarium decemcellulare (10%). Este último hongo se asoció, en Baracoa, a agallas tipo abanico similares a pequeñas escobas de bruja. Se descartó la presencia de Moniliophthora perniciosa en Cuba asociada a esta sintomatología.

During a phytopathological survey in twenty cacao farms in the western region of Cuba, four farms in Granma and sixteen in Guantanamo provinces were visited and samples of symptomatic pods, leaves, stem cankers, galls and other diseases symptoms. were taken. The samples were disinfected (NaOCl, 3%), rinsed with sterile distilled water and placed in humid chambers or cultured in plates with water agar + vancomicin (200 ug/ml) and on PDA supplemented with benomyl (50 ppm) and streptomycin (100 ppm). The most frequent species detected were Lasiodiplodia theobromae Griffiths & Maubl. (90%), Phytophthora palmivora (E.J. Butler) (85%), and Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Sacc. (70%). Typical isolations of P. tropicalis were not found. P. palmivora black pod disease (65%), Lasiodiplodia pod rot caused by L. theobromae (55%), and anthracnose by C. gloeosporioides (55%) were the diseases with higher incidence. Cercospora sp. (20%) and Phomopsis sp.(10%) leaf spots, Phytophthora stem canker (15%), dieback by L. theobromae (10%) and cushion gall (green-point gall, flowered cushion gall and fan gall) (10%) by F. decemcellulare were also detected. This latter fungus was associated with fan gall with offshoots growth resembling tiny witches' brooms in Baracoa province. The presence in Cuba of Moniliophthora perniciosa associated with this symptomatology was discarded.

**Detection and identification of new isolates of Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli on common bean (Phaseolus vulgaris L.) cultivars in Mayabeque province, Cuba**

Este estudio se realizó con el objetivo de detectar e identificar el agente causal de la enfermedad denominada Bacteriosis común o Tizón común en frijol, Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli. Se colectaron un total de 30 muestras de hojas y vainas de plantas infectadas de forma natural en diferentes localidades de la provincia Mayabeque. Las muestras se procesaron para el aislamiento del agente causal y se identificaron por las siguientes técnicas: aislamiento en medios de cultivo semiselectivos (YDCA y XCP1), prueba de patogenicidad en un cultivar susceptible (Bat 304), así como la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) con los cebadores específicos (p7X4c yp7X4e). De 30 aislados obtenidos, 29 provocaron síntomas en el cultivar utilizado en la prueba de patogenicidad. Los aislados manifestaron diferentes sintomatologías de la enfermedad en las plantas inoculadas artificialmente. La PCR rindió, como producto amplificado, un fragmento de ADN cuya talla corresponde con la informada en la literatura para los aislados pertenecientes a este patógeno. Estos resultados mostraron que la presencia de X. axonopodis pv. phaseoli afecta las regiones productoras de frijol en esta provincia, lo que representa un problema frecuente en dichas áreas.

ABSTRACT: With the aim of detecting and identifying Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli, the causal agent of the disease known as common bacterial blight (CBB) on common bean, 30 leaf and pod samples were taken from naturally infected plants in different localities of Mayabeque province. The samples were examined and the causal agent isolated and identified by using the following techniques: isolation on semi-selective media (YDCA y XCP1), pathogenicity test in a susceptible cultivar (BAT 304), and the PCR technique with specific primers (p7X4c yp7X4e). Of the 30 isolates obtained, 29 caused symptoms on the cultivar used in the pathogenicity test. Different symptomatologies of the disease were shown by the artificially inoculated plants. The amplification product of the PCR was a DNA fragment with 800 bp, the size reported for the isolates of this pathogen. These results showed the presence of X. axonopodis pv. phaseoli affecting the bean growing areas of the province, a frequent problem in these areas.

**Adoption practice to agroecological pest management in watermelon (Citrullus lanatus) in Azuero, Panamá**

El objetivo del estudio fue determinar el nivel de adopción de prácticas de manejo de plagas en sandía (Citrullus lanatus Thunb.), en la región de Azuero, Panamá, que permitan caracterizar el conocimiento existente acerca del manejo de plagas y potencialidades de su aplicación con un enfoque agroecológico (MAP). Se realizaron observaciones directas en las fincas y aplicación de encuestas, sobre la base de una muestra probabilística estimada de agricultores. Se establecieron cuatro niveles tecnológicos (alto, medio, bajo y muy bajo), según frecuencia de uso de prácticas MAP. Se realizaron comparaciones estadísticas, empleando tablas de contingencia, gráficos de frecuencia, medidas de tendencia central y de dispersión, así como un análisis de componentes principales sobre tasas de adopción de prácticas MAP. Se determinó que predomina un nivel bajo (80%) y muy bajo de adopción de prácticas MAP. La rotación de cultivo, eliminación de residuos de cosecha, cultivos alternos y el uso de insecticidas selectivos mostraron las mayores tasas de adopción. Se determinó que el género y años de experiencia son determinantes en el proceso de adopción, donde los hombres mostraron mayor disposición a adoptar una tecnología. Se requiere modificar los métodos de capacitación para facilitar la inducción de cambios integrales en los agricultores, familias y entorno social.

The objective was to determine the level of adoption that will characterize existing knowledge and potentials to application towards agroecological pest management (APM) in Azuero Region (Panama). Direct observation on farms and implementation of surveys based on a probability sample, estimated from the population of existing agricultural exporters farmers. Four technological levels (high, medium, low and very low) was established by frequency of use of agroecological practices. Statistical comparisons were performed using contingency tables, graphs frequency, measures of central tendency and dispersion and principal component analysis on adoption rates of agroecological practices. It was determined that predominates low and very low adoption (80%) of agroecological practices. The crop rotation, crop residue removal and use of selective insecticides showed the highest rates of adoption. It was determined that gender and years of experience are crucial in the process of adoption, more willing to adopt a technology being men. It requires changes in training methods that allow the induction of comprehensive changes of farmers, families and social environment.

**Effect of the pulp of Coffea arabica L. on the microflora of three units of soils**

La pulpa de Coffea arabica L. (café) constituye el principal agente contaminante de los ecosistemas cafetaleros de Cuba. En los últimos años se ha empleado por algunos agricultores como alternativa orgánica para mejorar determinadas condiciones edáficas, pero sin conocer las implicaciones biológicas directas que ejerce en el suelo; por lo que el objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de la aplicación de pulpa de Coffea arabica L. en proporción 3:1 (75 % suelo: 25% pulpa de café) sobre la microflora de un Acrisol Alúmico Crómico (AAC), un Cambisol Éutrico Húmico (CEH) y un Cambisol Éutrico (CE). Para alcanzar el objetivo se determinaron las variaciones de la actividad de los microorganismos utilizando como indicadores la respiración basal edáfica (RB), el conteo de los principales grupos funcionales (UFC) y la tasa de mineralización (TM). Como resultado, se incrementó significativamente las UFC de hongos y actinomicetos que estabilizaron las pérdidas de carbono respiratorio en valores similares a los del control. La tasa de mineralización se redujo de forma significativa, debido a la relación carbono nitrógeno (16:1) y los precursores de las sustancias húmicas de la pulpa (celulosa y lignina), que aseguraron la permanencia de los compuestos orgánicos en el medio. Los indicadores RB, UFC y TM mostraron mejores resultados en las unidades de suelos mejores estructuradas (CEH>CE>AAC), lo que sugiere que la intensidad de respuesta de la microflora ante la aplicación de pulpa de café estará influenciada por las características físicas y pedogénicas de los perfiles edáficos.

The pulp of Coffea arabica L. (coffee) is the main polluting agent of the Cuban mountain ecosystems. In the last years, it has been used by some farmers as an organic alternative to improve certain soil conditions but with no knowledge of its direct biological implications on the soil. Therefore, the objective of this investigation was to evaluate the effect of coffee pulp application in a 3:1 ratio (75% soil: 25% coffee pulp) on the microorganisms of the soils Alumic Chromic Acrisol (AAC), Humic Eutric Cambisol (CEH) , and Eutric Cambisol (CE). The soil basal respiration (BR), the main functional groups (CFU), and the mineralization rate (MR) were determined as indicators of variations of the microorganism activity. The results showed significantly increases of the CFUs of fungi and actinomycetes stabilizing the losses of respiratory carbon in values similar to the control. The mineralization rate decreased significantly due to the carbon nitrogen ratio (16:1) and the humic substance precursors of the pulp (cellulose and lignin), which assured the permanence of the organic compounds in the soil. The indicators BR, FCU and MR showed better results in the best structured soil units (CEH>CE>AAC) suggesting that the intensity of response of the microorganisms to coffee pulp applications will be influenced by the physical and pedogenic characteristics of the edafic profile.

Use of shoot-tip grafting in vitro to eliminate ´Candidatus liberibacter asiaticus´ in citrus cultivars in Cuba

El objetivo del estudio fue optimizar la técnica de microinjerto in vitro de ápices caulinares (MIV) para eliminar Candidatus Liberibacter asiaticus (CLas) en cultivares de cítricos infectados. Como fuentes de brotes se emplearon plantas de cinco cultivares con síntomas de huanglongbing (HLB): mandarinos Satsuma Tropical y Parson's Special, los híbridos de mandarinos Sunburst IVIA 200-C-1 y tangelo Nova IVIA 74-7 y limero Persa SRA-58. Para estandarizar el tamaño de ápice, suficiente para la eliminación de CLas, se ensayaron tres dimensiones compuestas por el meristemo apical con 2, 3 y 4 primordios foliares (pf) (0,1 - 0,4 mm). La presencia de CLas se constató mediante PCR dúplex en las plantas sintomáticas y PCR anidada en las plantas obtenidas por MIV. Se alcanzó un prendimiento general de 71,79%, de ellos el 46,15% para ápices de 2 pf y superior al 80% para 3 y 4 pf. De los microinjertos logrados, más del 60% creció y este parámetro estuvo por encima del 40% para ápices de 2 y 3 pf; mientras que el 80,61% correspondió a ápices de 4 pf. El 100% de las plantas obtenidas, a partir de los microinjertos, se mantuvieron libres de CLas por cuatro años, independientemente del tamaño del ápice utilizado. Los resultados confirmaron la efectividad de la técnica de microinjerto in vitro para sanear cultivares de cítricos infectados por CLas.

The aim of this research was to optimize the in vitro shoot-tip grafting (STG) technique to eliminate Candidatus Liberibacter asiaticus (CLas) from Citrus infected cultivars. Five citrus cultivars (Satsuma Tropical and Parson's Special mandarins, Sunburst IVIA 200-C-1 and Nova IVIA 74-7 hybrids of mandarins and Persian SRA-58 lime) showing symptoms of huanglongbing (HLB) were used as bud source:. Three different apex sizes, composed of the apical meristem with two, three and four leaf primordia (lp) (0.1 - 0.4 mm), were tested to standardize the apex size required to eliminate CLas. The presence of the pathogen was verified by the conventional PCR in the symptomatic plants and the nested PCR in the asymptomatic ones. The final success percentage of the shoot-tip grafting was 71.79%; 46.15% for the apex with 2 lp and over 80% for apexes with 3 and 4 lp. Sixty per cent of all the shoot-tip grafting grew normally, and this parameter was over 40% when apexes with 2 and 3 lpwere used, whereas it reached 80.61% when the apex with 4 lp was used. The 100% of the shoot-tip grafted plants were diagnosed as CLas free and this status was kept for four years regardless the shoot-tip size used. The results confirmed the reliability of the STG for removing CLas from citrus infected cultivars.

**Effect of an ecuadorian strain of Trichoderma harzianum Rifai as an antagonist of Mycosphaerella fijiensis Morelet under greenhouse conditions**

Se determinó el efecto de una cepa nativa del Ecuador de Trichoderma harzianum Rifai sobre el desarrollo de la Sigatoka negra (Mycosphaerella fijiensis Morelet) en plantas de banano cv. `Williams' (Musa AAA) inoculadas artificialmente con el patógeno y desarrolladas en casa de cultivo. Se comprobó que la aplicación foliar de la cepa provocó cambios en la evolución de los síntomas y en las variables epifitiológicas evaluadas. El periodo de incubación se alargó, se incrementó el tiempo de evolución de los síntomas y se redujeron el tiempo de desarrollo de la enfermedad, el índice de infección y el estado de síntomas promedio. La eficacia, a los 64 días posteriores a la inoculación, fue del 68,8%. Los resultados indicaron la capacidad de la cepa nativa T. harzianum CCECH-p1 como antagonista de M. fijiensis en casa de cultivo.

The effect of a native strain of Trichoderma harzianum Rifai on the development of black Sigatoka (Mycosphaerella fijiensis Morelet) artificially inoculated in banana plants cv. `Williams' (Musa AAA) was determined in a greenhouse. It was shown that the foliar application of this native Ecuadorian strain of T. harzianum caused changes in the evolution of symptoms and in the variables evaluated. The incubation period and the symptom evolution time and disease development time became longer. The infection index and the state of symptom average decreased. Effectiveness after sixty- four days of the inoculation was 68.8%. The results showed the capability of the native Ecuadorian strain of T. harzianum CCECH-p1 as an antagonist of M. fijiensis under greenhouse conditions.

**Effect of Trichoderma asperellum Samuels, Lieckfeldt and Nirenberg strains on the development of tomato and Meloidogyne incognita (Kofoid and White) Chitwood population**

El objetivo de este trabajo fue determinar el potencial de cepas de Trichoderma asperellum Samuels, Lieckfeldt y Nirenberg como agente de control biológico de Meloidogyne incognita (Kofoid y White) Chitwood. Se utilizaron las cepas Ta.1, Ta.13, Ta.25, Ta.78, Ta.79 y Ta.90, seleccionadas previamente por su alta capacidad antagónica, producción de metabolitos y adaptación a diversas condiciones ambientales y sustratos. En los ensayos in vitro, se evaluó el efecto de las cepas sobre juveniles de M. incognita y se utilizaron las diluciones de 1/10; 1/25; 1/50 y filtrado puro de cada una de las cepas y un tratamiento control (agua estéril). Para el estudio en condiciones semicontroladas, las plantas de tomate (Solanum lycopersicum L.) se inocularon con 2,5 juveniles de segundo estadio (J2) por gramo de suelo y a las 72 horas se adicionó inóculo de la cepa Ta.90; se aplicó 10(7)UCF por maceta. Los tratamientos fueron: plantas sanas (control absoluto), plantas + Ta.90; plantas +Ta.90 + nematodos, plantas + nematodo y nematodos + Ta.90 (sin plantas). A los 35 días se evaluaron los parámetros: Índice de Agallamiento (IA), número de huevos del nematodo por sistema radical, altura de planta, diámetro del tallo, longitud de la raíz, número de hojas y masa fresca de raíz. Los filtrados de las cepas de T. asperellum causaron altos niveles de mortalidad y sobresalió la cepa Ta.90 con 90% de mortalidad a las 24 horas. En macetas, dicha cepa provocó una disminución en el número de huevos por hembras, lo que difiere significativamente del testigo sin aplicar y atenuó el efecto del nematodo sobre los parámetros: altura, diámetro del tallo, número de hojas y masa fresca aérea.

The objective of this study was to determine the potential of strains of Trichoderma asperellum, Lieckfeldt & Nirenberg to control M. incognita, (Kofoid and White) Chitwood. Under laboratory conditions (in vitro), six native strains of T. asperellum (Ta.25, Ta.1, Ta.90, Ta.78, Ta.79, and T.13) were selected for their high antagonistic capability, production of various metabolites, and adaptation to different environmental conditions and substrates. For the in vitro trial, 1/10, 1/25, 1/50 dilutions and the pure filtrate of each strain were tested, including a control treatment with sterile water. For the study under semi-controlled conditions, tomato (Solanum lycopersicum L.) plants were inoculated with 2.5 second instar juveniles (J) per gram of soil and, after 72 hours, 10(7)CFU of the strain Ta.90 were added per pot The treatments were: healthy plants (absolute control), plants + Ta.90, plants +Ta.90 + nematodes, plants + nematodes, and nematodes + Ta.90 (without plants). The parameters evaluated after 35 days were galling index (IA), number of eggs per root system, plant height, stem diameter, root length, number of leaves, and weight of fresh root. High mortality levels were shown by all the T. asperellum strain filtrates; the strain Ta.90 stood out with 90% mortality at 24 hours. In the pot trial, this latter strain significantly reduced the number of eggs per female compared with the unapplied control, and attenuated the effect of the nematode on parameters such as plant height, stem diameter, number of leaves, and root fresh weight.

First report of Typhlocybinae as potential vectors of phytoplasmas in Cnidoscolus chayamansa (chaya) in Cuba

El objetivo del trabajo fue identificar los saltahojas presentes en plantas de chaya (Cnidoscolus chayamansa (Miller) I.M. Johnst.) e indicar la presencia de fitoplasmas en los insectos y las hojas con síntomas. Se recolectaron 40 saltahojas adultos y 50 hojas de tres plantas con síntomas asociados a fitoplasmas en el municipio 10 de Octubre, provincia La Habana, Cuba, durante el periodo de febrero a abril de 2015. Para la identificación de los saltahojas se utilizaron claves dicotómicas, luego de realizar montajes de estos insectos en portaobjetos planos, bajo un microscopio estereoscópico Stemi DV4 y analizarlos en Microscopio AxioLab. A1 con monitor y cámara fotográfica acoplada. Los fitoplasmas se detectaron mediante la extracción del ácido desoxirribonucleico (ADN) por el método de CTAB 2%, con cebadores universales para la amplificación genérica de la región ADNr 16S (R16mF2/R16mR1, R16F2n\R16R2). Para la primera amplificación se empleó la combinación de los iniciadores universales R16mF2 y R16mR1 y para la reacción anidada R16F2n/ R16R2. Para confirmar los resultados alcanzados, los productos de la digestión se analizaron en una cámara de electroforesis en un gel de agarosa (1%) y se compararon con los controles positivos de fitoplasmas, obtenidos de plantas de Catharanthus roseus (L.) G. Don. Los saltahojas identificados fueron Empoasca canavalia DeLong y Empoasca papayae Oman. Se encontró la presencia de fitoplasmas en hojas sintomáticas y en los insectos. La determinación de las dos especies de saltahojas y de fitoplasma en chaya y en insectos constituyen los primeros informes en Cuba.

With the aim of identifying the presence of phytoplasmas in insects and leaves, forty leafhopper adults and 50 leaves of three plants with symptoms associated with phytoplasmas, were collected at the municipality of10 de Octubre, Havana, from February to April 2015. For leafhopper taxonomical identification by using dichotomic keys, they were mounted on flat slides under a Stemi DV4 stereo microscope and observed under an AxioLab. A1 microscope with a monitor and camera attached. Phytoplasmas were detected by extracting the DNA by the 2% CTAB method and using universal primers for the generic amplification of the region ADNr 16S (R16mF2/R16mR1, R16F2n\R16R2). For the first amplification, the combination R16mF2 and R16mR1 was used, and R16F2n/ R16R2 for the nested reaction. The products of amplification were analyzed by electrophoresis on agarose gel (1%). The profiles obtained were compared with phytoplasma positive controls from Catharanthus roseus (L.) G. Don. plants. The leafhoppers identified were Empoasca canavalia DeLong and Empoasca papayae Oman, and the presence of phytoplasma was found in leaves with symptoms as well as in the insects. The presence of these two leafhopper species and phytoplasmas in chaya and insects are the first reports in Cuba.

Life cyle of Acanthoscelides obtectus (Say.) on black beans (Phaseolus vulgaris L.) under laboratory conditions

En condiciones de laboratorio, con 26,20 ± 2,03°C de temperatura y 87,37± 9,03% de humedad relativa, se estudiaron algunos de los parámetros de la biología de Acanthoscelides obtectus (Say.) sobre frijol negro (Phaseolus vulgaris L.) variedad BAT-304. Para ello, se utilizaron 10 frascos de cristal, cada uno con 10 granos de frijol, y se colocó dentro una pareja de insectos durante 24 h, momento en que se trasladaron a nuevos frascos; esta acción se repitió durante cuatro días. Los huevos depositados en cada frasco se revisaron diariamente hasta la emergencia de las larvas y los adultos obtenidos se extrajeron y se observaron hasta su muerte. Bajo las condiciones de este estudio, el ciclo de duración de A. obtectus fue de 33,23 ± 1,78 días (el estado de huevo 5,60 ± 0,49 días y los de larva-pupa 27,63 ± 1,60 días) y el tiempo para completar su ciclo fue de 47,79 ± 4,42 días.

Some parameters of the biology of Acanthoscelides obtectus (Say.) were studied on black bean (Phaseolus vulgaris L.) var. BAT-304 under laboratory conditions at 26.20 ± 2.03°C of temperature and 87,37± 9,03% of relative humidity. For this, a couple of insects were placed into each of ten glass flasks with ten beans for 24 h. Then the insects were transferred to new flasks, an action that was repeated daily during four days. The eggs laid in each flask were examined daily until larva emergence and the adults obtained removed and observed until their death. Under the conditions of this study, A. obtectus development cycle was of 33.23 ± 1.78 days (the egg stage 5.60 ± 0.49 days and the larva-pupa stages 27.63 ± 1.60 days), and the time to complete its life cycle was 47.79 ± 4.42 days.

Pyramiding TYLCV and TSWV resistance genes in tomato genotypes

The Cuban tomato line LD3 , in which the Ty-1 gene from Solanum chilense LA 1969 was detected, was crossed with an F1 hybrid carrying the genes Ty-3 from S. chilense LA 2779 and Sw-5 from S. peruvianum. A hundred F2 plants were transplanted to a ferralitic soil in the field and the F2 plants individually evaluated in the field with high natural TYLCV-IL (Cu) incidence by using a scale from 0 (no symptom) to 4 (severe stunting). The total DNA extracted from the F2 plants were analyzed per individual plant by using PCR markers linked to the genes Ty-3 (resistance to TYLCV) and Sw-5 (resistance to TSWV) so that both genes could be detected in a same genotype. Eighty two F2 plants showed no symptoms under natural TYLCV incidence (0 symptoms) with a productivity ranging from 1.6 to 9.7 kilograms per plant. The Principal Component Analysis (PCA) permitted grouping the different genotypes. Six F2 plants showed the Ty-3 gene in homozygosis and 12 in heterozygosis; 33 F2 plants showed the Sw-5 gene according to their DNA analysis. Three F2 plants (number 65, 68 and 78) showed the Ty-3 and Sw-5 genes in homozygosis besides the Ty-1 gene (resistance to TYLCV) from their female parent. Their productivity ranged from 6.0 to 6.8 kilograms per plant. These are the first Cuban results in which resistance genes for two important diseases in the tomato crop are obtained in a same genotype by the early and simultaneous molecular screening for resistance and the productivity evaluation under field conditions, Both tools, when simultaneously used, are efficient in reducing selection time and space.

En este estudio, los cruzamientos se realizaron entre la línea cubana LD3, con gen de resistencia Ty-1, procedente de Solanum chilense LA 1969, y el híbrido F1 portador de los genes Ty-3 de S. chilense LA 2779 y Sw-5 de S. peruvianum. Se obtuvieron 100 plantas F2 que fueron trasplantadas a campo, en suelo ferralítico rojo. Las plantas F2 fueron evaluadas en condiciones naturales de campo en áreas con alta presión de TYLCV-IL (Cu). Las plantas individuales fueron evaluadas con escala de síntomas desde 0 (sin síntomas) a 4 (enanismo severo). Los ADN totales extraídos fueron analizados en plantas individuales de la población F2 en estudio, utilizando marcadores PCR ligados a los genes Ty-3 (resistencia a TYLCV) y Sw-5 (resistencia a TSWV) con el objetivo de detectar estos genes en un mismo genotipo. Un total de 82 plantas F2 no mostraron síntomas bajo condiciones naturales de incidencia de TYLCV-IL (Cu) (grado 0) con un rango de productividad de 1.6 a 9.7 kilogramos por plantas. El Análisis de Componentes Principales permitió agrupar los genotipos. En seis plantas se detectó la presencia de gen Ty-3 en homocigosis y en 12 plantas en heterocigosis; 33 plantas F2 demostraron el gen Sw-5 a partir de los análisis de ADN realizado. En tres plantas F2 (números 65, 68 y 78) se encontraron en homocigosis los genes Ty-3 y Sw-5 en adición del gen Ty-1 (resistencia a TYLCV) procedente del parental femenino. El rango de productividad obtenido fue de 6.0 a 6.8 kilogramos por plantas. Estos son los primeros resultados en Cuba donde se obtienen genes de resistencia en un mismo genotipo para dos importantes enfermedades del cultivo del tomate con una evaluación simultánea y temprana de la resistencia y la productividad en condiciones de campo, mediante el uso temprano de marcadores moleculares en la reducción del tiempo y el espacio en el proceso de selección de genotipos promisorios.