Vaccimonitor

Detection and identification by PCR of microorganisms causing bacterial meningocephalitis

Reportamos el empleo de cebadores para la detección e identificación de microorganismos causantes de meningoencefalitis bacteriana (MEB) en 24 muestras de líquido cefalorraquídeo (LCR) y a partir de ADN genómico de cepas de referencia previamente purificado. Se emplearon cebadores generales y específicos derivados del gen 16S ARNr (ARN ribosómico). Los cebadores generales amplificaron en todas las especies bacterianas analizadas: Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae tipo b, Streptococcus sp y Staphylococcus aureus, en una misma banda de 825 pb. Los cebadores específicos solamente amplificaron en el microorganismo del que se derivan, obteniendo bandas de 667, 478 y 253 pb para N. meningitidis, H. influenzae y Streptococcus sp, respectivamente. También se diferenció Streptococcus agalactiae mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR), donde se obtuvo una banda de 478 pb. Al evaluar estos cebadores en muestras clínicas de LCR se constató que hubo una sensibilidad del 100% de las MEB por PCR; la especificidad fue del 100%. Los productos de PCR se analizaron por digestión Hae III, encontrando correspondencia en los patrones de restricción de las muestras clínicas y las cepas de referencia.

Our work reports the use of genomic DNA primers previously purified from reference strains to detect and identify the microorganisms that cause bacterial meningocephalitis (BME) in 24 samples of cerebrospinal fluid (CSF). General and specific primers derived from the 16S rRNA (ribosomal RNA) gene were used. The general primers were amplified in all the bacterial species analyzed:Neisseria meningitidis, type b Haemophylus influenzae and Streptococcus sp. in the same 825 pb band, but the specific ones only amplified in the microorganism from which they were derived. Bands of 667, 478 and 253 pb were respectively obtained for N. meningitidis,H. influenzae and Streptococcus sp. Streptococcus agalactiae was also detected by PCR in which a 478 pb band was obtained. Upon evaluating the primers in clinical CSF samples, 100% detection of the BME causing microorganisms was observed. The specificity was 100%. The PCR products were analyzed by Hae III digestion, and correspondence found for the restriction patterns of the clinical samples and the reference strains.

Preparation and evaluation of Salmonella typhi Vi polysaccharide-tetanus toxoid conjugates

El polisacárido Vi de Salmonella typhi es un antígeno T-independiente y ha demostrado ser protector en adultos jóvenes. En ensayos clínicos controlados, realizados en áreas con alta incidencia de fiebre tifoidea, su eficacia protectora ha sido aproximadamente del 70%. Sin embargo, para aumentar la respuesta de anticuerpos y conferir propiedades T- dependientes al polisacárido en poblaciones de alto riesgo, se han utilizado diferentes métodos para la síntesis de conjugados de polisacárido Vi-proteína. En este estudio fue evaluada la inmunogenicidad generada en ratones por un conjugado polisacárido Viproteína obtenido en nuestro laboratorio. El polisacárido Vi purificado fue unido al toxoide tetánico (TT) como proteína portadora por medio de la reacción con carbodiímida. El conjugado resultante fue más inmunogénico que el polisacárido Vi solo. En contraste con las propiedades T-independiente del polisacárido Vi, el conjugado indujo respuesta secundaria y un incremento en la duración de los anticuerpos IgG anti Vi en los ratones. El suero de los animales inoculados con el conjugado mostró altos títulos de anticuerpos IgG anti-TT, similar al TT nativo.

Salmonella typhi Vi polysaccharide is a T-independent antigen that has proven to be protective in young adults. In controlled clinical trials in areas with high rates of typhoid fever, the protective efficacy of the Vi was approximately 70%. However, in high-risk populations, different methods have been used, to synthesize Vi polysaccharide-protein conjugates in order to enhance the antibody response and to confer T-dependent properties to the polysaccharide. In this study a conjugate, Vi polysaccharide -protein, was obtained and its immunogenicity was evaluated in mice. Purified Vi polysaccharide was linked to a carrier protein (tetanus toxoid (TT), via a carbodiimide-mediated reaction. The resultant conjugate was more immunogenic in mice than Vi alone. In contrast to the T-independent properties of Vi, the conjugates of this polysaccharide with TT induced secondary responses and an increase in the duration of IgG anti Vi antibodies, in mice. Serum of animals inoculated with the conjugate showed high IgG anti-TT antibody titers, similar to native TT.

Clinical, virological and serologic study of an acute viral hepatitis outbreak in the City of Havana

Se realizó el estudio de un brote de hepatitis A ocurrido en un círculo infantil de Ciudad de La Habana en 1996. Con el objetivo de comparar su utilidad para el dignóstico etiológico de dicho brote, se estableció la relación entre los siguientes indicadores: comportamiento clínico, valor de la enzima ALT, presencia del virus en las heces fecales y detección de la IgM anti VHA en el suero de los individuos estudiados. La información sobre el comportamiento clínico y las cifras de ALT la facilitó por el médico de la institución. La detección del Ag VHA en las heces fecales y de la IgM anti VHA en el suero se realizó mediante la técnica de ELISA. El 87,5% de los infectados permaneció asintomático y en más de la mitad de los casos la cifra de ALT sérica se mantuvo entre los límites normales. Sólo 3 de 84 muestras de heces fecales resultaron positivas para el Ag VHA. La detección de la IgM anti VHA, en cambio, mostró el mayor porcentaje de positividad (12,4%), en comparación con el resto de los indicadores, lo que confirma que constituye el método de elección para el diagnóstico de los brotes de hepatitis A.

A study of an acute viral hepatitis A outbreak that occurred in a day care center in the City of Havana during 1996 is described. With the purpose of comparing their usefulness for diagnosis: clinical behavior, the level of the ALT enzyme, detection of viral antigen in feces and the presence of anti HAV IgM were considered. The relationship between these indicators was established. The doctor of the institution provided the information on the clinical behavior and the ALT values of the individuals. The detection of viral antigen in feces and the anti HAV IgM in serum were performed by ELISA. An 87.5% of the infected individuals remained asymptomatic and in more than half of the cases serum ALT was considered within the normal range. Only 3 of 84 fecal samples were positive to the viral antigen. The detection of anti HAV IgM showed the highest percentage (12,4%) of positive samples when compared to the other indicators. This correlates with the known fact that this is the choice method to establish the diagnosis of hepatitis A outbreaks.