Vaccimonitor

Two decades of Helicobacter pylori

Las enfermedades bacterianas son generalmente consideradas como problemas sanitarios serios, sin embargo, pueden a menudo solucionarse mediante una simple terapia antibiótica. Mucho más complicada es la curación de enfermedades fúngicas y virales. Muchos cánceres se pueden curar si el diagnóstico es temprano, pero la mayoría tienen un remedio casi tan perjudicial como la misma enfermedad. Otras enfermedades como las autoinmunes o las que afectan el corazón, simplemente son controladas, tratando de paliar los síntomas con medicamentos normalmente muy costosos. Por tanto, tenemos que comprender la sorpresa de la comunidad médica, cuando una enfermedad por mucho tiempo pensada incurable aunque controlable, se vio que estaba causada por una bacteria. Más aún, cuando desde siempre se había pensado que el microambiente del estómago era demasiado extremo como para albergar vida microbiana. Helicobacter pylori es la principal responsable de la formación de úlceras en la población mundial. Su capacidad de colonización y adaptación a ambientes hostiles le ha permitido sobrevivir y crecer en las condiciones adversas que ofrece el estómago. En esta revisión se resumen brevemente aspectos importantes de la historia del descubrimiento de tan relevante microorganismo, así como algunas características moleculares y clínicas de la patología que causa.

Bacterial diseases are generally considered as serious sanitary problems. However, they can often be eradicated by using an antibiotic therapy. The healing of fungal and viral diseases is much more complicated. Many cancers can be cured if there is an early diagnosis, but the treatment of most of them is almost as harmful as the disease itself. Other diseases, such as the autoimmune and heart diseases are simply controlled by trying to palliate the symptoms with very expensive medicine. That’s why we must understand the astonishment of the medical community when a disease, long time considered incurable, although controllable, was found to be caused by a bacterium. This was even more so, because the stomach’s environment was considered too extreme to harbor any microbial life. Helicobacter pylori is the main agent of ulcer formation in the world population. Its colonization capacity and adaptability to hostile environments have allowed it to survive and grow in the harsh conditions of the stomach. In this review we briefly examine important aspects of the history of the discovery of such a relevant microorganism, as well as some molecular and clinical features of the pathology it produces.

Validation of an ELISA assay to determine antibodies against LPS of Vibrio Cholerae

Para evaluar la respuesta inmunológica de cualquier candidato vacunal es necesario contar en el laboratorio con técnicas estandarizadas y validadas. Es por ello que en este trabajo se realizaron los ensayos para la estandarización del ELISA indirecto, usado para la determinación de anticuerpos séricos anti-LPS Ogawa contra cólera en suero de humanos inoculados por vía oral, así como la evaluación de los parámetros de validación típicos de este ensayo. Para la selección de las condiciones óptimas se evaluaron la concentración de recubrimiento, condiciones de bloqueo y dilución de conjugado, con el objetivo de seleccionar las mejores respuestas para el control positivo, el control negativo y el blanco en cada caso.Una concentración de 25 μg/mL de LPS Ogawa en PBS, como recubrimiento, durante toda la noche; leche descremada al 0,5% en PBS, 30 min a temperatura ambiente como bloqueo y el conjugado anti-IgA-HRP diluido 1:5000, resultaron las variables óptimas para el ensayo. En cuanto a la validación de la técnica los parámetros evaluados fueron precisión, exactitud, límite de detección, especificidad y robustez. Para ello se siguió un protocolo de validación que permitiera evaluarlos, y en todos los casos el ensayo se consideró adecuado, siempre y cuando el coeficiente de variación resultara ser menor del 20%. En todos los parámetros evaluados se cumplió con este requisito, considerando así los resultados confiables y reproducibles.

In order to evaluate the immunological response to any vaccine candidate, it is necessary to have standardized and validated laboratory techniques. For this reason the standardization of an indirect ELISA, used for determining serum antibodies against Ogawa LPS to cholera in sera of humans inoculated orally, was carried out; as well as the evaluation of the typical validation parameters for this assay. The optimal conditions for the coating concentration, blocking conditions and conjugate dilution were evaluated to select the best results for the positive control, the negative control and the blank. A 25 μg/mL concentration of Ogawa LPS in PBS left overnight for coating, 0,5% skimmed milk in PBS during 30 min at room temperature for blocking and anti-IgA-HRP diluted 1:5000 as conjugate were found to be the optimal variants for the assay. With respect to the technique validation, the parameters evaluated were precision, exactness, detection limit, specificity and robustness. A validation protocol allowing their evaluation was carried out. In all cases the assay was considered adequate, if the variation coefficient was less than 20%. For all the parameters evaluated this requisite was fulfilled, so that the results were considered to be reliable and reproducible.

Preparation and Characterization of an Acetyl-Choline Working Reference Material for the Determination of O-Acetyl groups in Vaccine Polysaccharides

El control de la calidad de los polisacáridos vacunales exige la evaluación del contenido de grupos O-acetilo, que conjuntamente con otros índices, proporciona criterios de la integridad molecular importantes para su inmunogenicidad, como en el caso del polisacárido Vi de Salmonella typhi. El método comúnmente empleado es colorimétrico y requiere de un material de referencia de cloruro de acetil colina para preparar la curva de calibración contra la que se comparan las muestras en estudio. Generalmente, se adquiere el reactivo comercial (sólido) y de éste se prepara la solución de referencia. Esto genera imprecisiones por errores de pesada, características higroscópicas del reactivo, temperatura y tiempo de conservación, entre otras, que influyen en la estimación del contenido de O-acetilo de las muestras. En este trabajo se describe la preparación y caracterización de un Material de Referencia de Trabajo (MRT) de Acetil Colina, liofilizado, para ser empleado en los laboratorios del Instituto Finlay involucrados en el control de la calidad de los polisacáridos purificados de Neisseria meningitidis serogrupo C y Salmonella typhi. Para su caracterización se empleó como referencia el producto de SIGMA. Los parámetros evaluados fueron: linealidad (r2 ≥ 0,99), precisión intermedia (CV=2,63%), reproducibilidad (CV=2,73%), exactitud (recuperación: 96%) y estabilidad (10 meses hasta el momento actual). Los resultados obtenidos en la evaluación de este MRT demostraron que es adecuado para el ensayo. Esto ha sido corroborado durante más de 10 meses de uso en la rutina del laboratorio.

The quality control of polysaccharides, used as vaccine antigens, requires the quantification of the O-acetyl group content. Together with other parameters, that determination provides criteria about the molecular integrity, which is very important for the immunogenicity, as in the case of Salmonella typhi Vi polysaccharide. The colorimetric method is the one most commonly performed. It requires an acetyl-choline chloride standard, for determining the standard curve used for the evaluation of test samples. The present paper describes the preparation and characterization of a lyophilized Acetyl-Choline Working Reference Standard (WRS), for use at the Finlay Institute laboratories involved in the quality control of purified polysaccharides from serogroup C Neisseria meningitidis and Salmonella typhi. The equivalent product from SIGMA was used as a reference for the characterization. The evaluated parameters were: linearity (r2 ≥ 0.99), in-lab precision (CV = 2.63%), reproducibility (CV = 2.73%), accuracy (96% recovery) and stability (from 10 months to the present). The results obtained during the characterization process of the WRS demonstrated that it is appropriate for use as a standard in the assay. That has been confirmed during more than 10-months use in the routine tests carried out in the laboratory.

Validation of Colorimetric Vibriocidal Assay to Determine Serum Antibodies against Vaccine Candidate Strains of Vibrio Cholerae

El Instituto Finlay posee un grupo de cepas atenuadas candidatas a vacuna oral contra el cólera, las cuales fueron evaluadas desde el punto de vista de su capacidad inmunogénica mediante la determinación de anticuerpos por el método ELISA y principalmente por el ensayo Vibriocida. Este ensayo mide la funcionalidad de los anticuerpos estimulados por la cepa vacunal, por lo que se considera la herramienta más eficaz para medir el estado de la inmunidad en individuos vacunados contra el cólera y constituye el soporte analítico para el desarrollo de la vacuna anticolérica cubana. En este trabajo se evaluaron la precisión, la especificidad y la robustez del ensayo y los resultados obtenidos estuvieron dentro del criterio de aceptación de esta técnica (>50% de coincidencia). Se demostró que las variaciones entre las muestras negativas y positivas se debían precisamente al crecimiento de V. cholerae y que se pueden incorporar pequeños cambios al ensayo sin que esto traiga consigo variaciones en el título de la muestra ni falsos resultados. De acuerdo con los resultados obtenidos, el mismo se considera apto para la evaluación de la respuesta inmune estimulada por un candidato vacunal contra el cólera.

Finlay Institute possesses a group of attenuated strain candidates for an oral vaccine against cholera. Immunogenicity has been evaluated in volunteers by ELISA antibody determination and mainly by vibriocidal assay. Vibriocidal assay measures the functionality of antibodies elicited by a vaccine strain, that is why it is considered the most efficient tool for determining immunity levels against cholera in vaccines, for which reason, the validation of this test is very important. Precision, specificity and robustness were evaluated in this paper. The results were within the acceptance criteria for this technique (>50% coincidence). It was demonstrated that the differences between positive and negative samples were due precisely to Vibrio cholerae growth and that small changes may be introduced in the test without producing variations in sample titer or false results. According to these results, this test is considered appropriate to evaluate the immune response elicited by vaccine candidates against cholera.