Vaccimonitor

**Portadores de Neisseria meningitidis y Neisseria lactamica en tres grupos de edades diferentes**

Se determinó la prevalencia de N. meningitidis y N. lactamica, así como su relación con las variables edad y sexo en individuos de tres grupos de riesgo diferentes (círculo infantil, escuela primaria y escuela universitaria), a los que se les realizó exudado de la nasofaringe posterior. Se identificaron los marcadores epidemiológicos de las cepas de N. meningitidis aisladas y se analizó la presencia de otros microorganismos de la familia Neisseriaceae. La identificación de las cepas obtenidas se realizó por el sistema APINH (bioMérieux), el seroagrupamiento de N. meningitidis se determinó por aglutinación en lámina portaobjetos con antisueros específicos y los sero/subtipos e inmunotipos se identificaron por un ensayo inmunoenzimático de células enteras con anticuerpos monoclonales. El 10,9% de los sujetos investigados fue portador de N. meningitidis, cifra que aumentó con la edad. La prevalencia de portadores tuvo el siguiente comportamiento: Grupo 1: niños de 0-6 años (4,3%); Grupo 2: niños de 5-12 años (6,9%) y Grupo 3: adultos jóvenes de 17-22 años (25,1%). No hubo diferencias significativas respecto al sexo (p > 0,05). En el Grupo 1 predominó el fenotipo NA:NT:P1.6:L3,7,9 (71,5%), mientras que, en los Grupos 2 y 3, prevaleció la asociación NA:NT:P1.NST:L3,7,9 (36,4 y 25%, respectivamente). El predominio de cepas no epidemiogénicas avalan el impacto de la inmunización en Cuba con VA-MENGOC-BCÒ. El aislamiento de cepas de N. lactamica disminuyó a medida que aumentó la edad: Grupo 1 (47,5%), Grupo 2 (29,8%) y Grupo 3 (3%).

Prevalence of N. meningitidis and N. lactamica, as well as their relationship to age and sex variables in individuals of three different risk groups (day care centers, primary school and universities) was determined by performing an exudate of upper naso-pharynx. Epidemiological markers of the isolated N. meningitidis strains were identified and the presence of other microorganisms of Neisseriaceae family was identified. Identification of the strains obtained was carried out by API NH (bioMérieux) system; sero-grouping of N. meningitidis was determined by agglutination in slides with specific antisera and sero/subtypes and immunotypes were identified by an immuno-enzymatic assay of whole cells with monoclonal antibodies. The 10.9% of investigated subjects was carrier of N. meningitidis, which increased with age. Prevalence of carriers had the following behavior: Group 1: children from 0-6 years old (4.3%); Group 2: children from 5-12 years old (6.9%) and Group 3: young adults from 17-22 years old (25.1%). No significant differences were observed with respect ot sex (p > 0.05). In Group 1, phenotype NA:NT:P1.6:L3.7.9 (71.5%) predominated while in Groups 2 and 3, the association NA:NT:P1.NST:L3.7.9 (36.4 and 25%, respectively) prevailed. Predominance of non-epidemiogenic strains support the impact of immunization in Cuba with VA-MENGOC-BCÒ. Isolation of strains of N. lactamica decreased with the increase of age: Group 1 (47.5%), Group 2 (29.8%) and Group 3 (3%).

Inmunoprotección de componentes de membrana externa de Leptospira pomona serovar mozdok

Los componentes de membrana externa (CME) de Leptospira son candidatos potenciales para la producción de vacunas contra la leptospirosis. En este trabajo se inmunizaron hámsters y conejos con variantes de vacunas de CME solubilizados en SDS y adsorbidas en gel de hidróxido de aluminio. Se emplearon dos dosis por vía intramuscular, con un intervalo 6 semanas. Las dosis empleadas fueron de 25, 5 y 2,5 µg para hámsters y 25 µg para conejos. La respuesta humoral se evaluó mediante microaglutinación (MAT) y el ensayo inmunoabsorbente de unión a la enzima (ELISA). Se evaluó además el carácter protector de la respuesta inducida por estas preparaciones mediante el reto de los hámsters inmunizados, contra 20 000 dosis letal 50% (DL50) de la cepa homóloga altamente virulenta y mediante inmunización pasiva. Para ello se utilizó el suero de los conejos obtenidos en la semana 8 frente a 10 000 DL50. La MAT y el ELISA evidenciaron el poder inmunogénico de las preparaciones evaluadas. Las preparaciones vacunales empleadas no solo fueron capaces de proteger al 100% de los hámsters contra el reto de la cepa homóloga, sino que también, en el caso de los hámsters inmunizados pasivamente, fueron capaces de prevenir la infección renal y el establecimiento de leptospiras en órganos, evitando así el estado de portador, a diferencia de los controles no inmunizados, donde se obtuvo un 100% de mortalidad y se observaron serias lesiones a nivel de los órganos estudiados.

The outer membrane components (OMC) might be useful as potential vaccine candidates. In this study rabbits and hamsters were immunized with OMC preparations obtained by SDS solubilization and adsorbed onto Aluminium hydroxyde gel. A two- doses schedule was used with an interval between doses of six weeks The animals were inoculated by intramuscular route .Doses of 25, 5 and 2,5 µg were used for hamsters and 25 µg for rabbits. The humoral response was evaluated by microagglutination (MAT) test and enzyme-linked immunoabsorbent assay (ELISA). In addition, the protective effect of the immune response induced was evaluated by challenge of the inoculated hamsters against 20 000 DL50 of homologous high virulent strain and by passive immunization using rabbits sera obtained on week 8th against 10 000 DL50. Results showed immunogenic capacity of evaluated preparations which were able to protect all animals against challenge of homologous strain as well as to prevent renal infection and the establishment of leptospira in organs to avoid in this way carrier state in the case of hamsters passively immunized. The unvaccinated controls showed 100% of mortality and serious injuries in organs were observed.

Evaluación de anticuerpos contra enfermedades prevenibles por vacunas en el binomio madre-recién nacido en hospitales de Ciudad de La Habana

El sistema inmune es inmaduro en los recién nacidos, lo que los hace susceptibles a las enfermedades infecciosas, sin embargo, pueden ser parcialmente protegidos por los anticuerpos adquiridos a través de la placenta. Por ello, nos propusimos evaluar la transferencia transplacentaria de anticuerpos contra algunas enfermedades prevenibles por vacunas. Se realizó un ensayo prospectivo, aleatorio, en el binomio madre-recién nacido. Para ello se analizó un total de 96 pares de muestras de suero, tomadas en el salón de preparto y al nacimiento en hospitales de Ciudad de La Habana, durante el año 2004. Se emplearon técnicas inmunoenzimáticas para determinar los niveles de antitoxina tetánica (ATT), antitoxina diftérica (ATD) y anticuerpos contra proteínas de membrana externa del meningococo B (PME), contra el polisacárido capsular del meningococo C (PSC) y contra el polisacárido Vi de Salmonella Typhi. Se detectó un nivel apropiado de ATT, tanto en las madres como en los recién nacidos, predominando los valores correspondientes a la protección de larga duración (>1 UI/mL), con 88,54% y 92,71%, respectivamente. Se observó niveles de ATD inferiores a 0,1 UI/mL, límite para una protección confiable, en el 54,17% y 45,83% de las madres y los recién nacidos. El 90,63% de las madres y el 96,88% de los recién nacidos presentaron concentraciones de anticuerpos contra PME superiores a 2 µg/mL, así como el 38,54% y el 41,67% para anticuerpos contra PSC. La seroprotección contra la Salmonella Typhi (>1 µg/mL) fue de 5,21% y 8,33%, respectivamente. La mayoría de los recién nacidos presentaron títulos superiores de anticuerpos al de sus madres, lo cual demuestra que la transferencia transplacentaria de anticuerpos es un mecanismo eficiente.

At birth, the immune system is still immature, that is why newborns are susceptible to infectious diseases. Nonetheless, newborns are partially protected by maternal antibodies. For that reason, transplacental transference of antibodies against some vaccine-preventable diseases. A prospective, randomized study was carried out in 96 mothers and their newborns. Serum samples were taken from the pregnant women before delivery in Havana City hospitals during 2004 and from the newborns in the delivery room. Immunoenzimatic assays were used for the quantitative determination of tetanus and diphtheria antitoxin, antibodies to meningococcus B outer membrane proteins (OMP), antibodies to meningococus C capsular polysaccharide (CSP), and antibodies to Vi polysaccharide of Salmonella Typhi. Suitable levels of tetanus antitoxin were found in mothers and newborns. The long-term protection levels (>1 IU/mL) were shown in 92.71% of newborns, and 88.54% of their mothers. Non-reliable levels of diphtheria antitoxin (<0.1 IU/mL) were found in 54.17% and 45.83% of mothers and newborns, respectively. Antibodies to OMP above 2 µg/mL were detected in 90.63% and 96.88% of mothers and newborns, and the 38.54% and 41.67% had proper antibodies against CSP. Seroprotection rates (>1 µg/mL) against Salmonella Typhi were 5.21% and 8.33%, respectively. Most of newborns showed higher antibody levels than that of their mothers, therefore the transplacental passage of antibodies is an efficient mechanism.

Expresión heteróloga de un péptido multiepitópico de células B de M. tuberculosis en Saccharomyces cerevisiae

Saccharomyces cerevisiae ha sido ampliamente utilizada como sistema de expresión de proteínas heterólogas. El presente trabajo se encaminó hacia la expresión en Saccharomyces cerevisiae de un péptido de epitopes múltiples de M. tuberculosis. Con dicho propósito el péptido quimérico denominado B2 fue clonado en dos vectores de expresión de esta levadura con promotores regulables por galactosa y sulfato cúprico, respectivamente. Luego de los experimentos de inducción, la expresión del péptido B2 fue analizada mediante SDS/PAGE y Western blot. El análisis por Western blot confirmó la expresión del péptido B2, al hacerse la inducción con 100 mM de CuSO4 durante toda la noche. No ocurrió así en los experimentos donde se utilizó la galactosa como inductor con todas las condiciones ensayadas. Estos resultados muestran que la levadura Saccharomyces cerevisiae pudiera ser un buen hospedero alternativo para la expresión de péptidos multiepitópicos de M. tuberculosis.

Saccharomyces cerevisiae has been widely used as expression system of heterologous proteins. The aim of the present work was the expression in Saccharomyces cerevisiae of a class B multiepitopic peptide from M. tuberculosis. For this purpose, the chimerical peptide named B2 was cloned in two yeast expression vectors containing galactose and cupric sulphate regulated promoters, respectively. After induction experiments, B2 expression was analyzed by SDS/PAGE and Western Blot. By Western Blot analysis B2 expression was confirmed when induction took place overnight with 100 mM of CuSO4. No expression signal took place when galactose was used as inductor. These results show that Sacchromyces cervisiae could be a good alternative host for the expression of multiepitopic peptides from M. tuberculosis.

Consideraciones sobre el empleo de antisueros somáticos en la clasificación por serotipos de cepas de Pseudomonas aeruginosa

El lipopolisacárido (LPS) de bacterias gramnegativas se emplea en el desarrollo de candidatos vacunales, como antígeno expuesto en la preparación o formando parte de esta para aumentar su poder inmunogénico. Sin embargo, esta estructura química de la membrana externa puede ser también utilizada para clasificar bacterias. Según el LPS, presente en la membrana externa bacteriana, Pseudomonas aeruginosa se puede clasificar en 20 tipos somáticos diferentes, clasificación muy útil para estudios epidemiológicos. P. aeruginosa expone sus LPS en la membrana de forma estable, pero ocurren cambios en el fenotipo del LPS bacteriano durante la infección, sucesos que dificultan su clasificación. En estos momentos, los estudios que se desarrollan en el Instituto Finlay necesitan del empleo de tecnologías modernas de clasificación y del diagnóstico molecular para poder establecer patrones más precisos de expresión de los LPS por métodos que junto a los ya existentes permitan diferenciar cepas bacterianas de la misma especie en cualquier tipo de infección.

Lipopolysaccharides (LPS) of gramnegative bacteria are used for developing vaccine candidates as a complete exposed antigen in the preparation or as essential part of vaccines to improve its immunogenic power. Nevertheless, this outer membrane structure can also be used in bacterial classification according to the LPS chemical structure in outer membrane structure. Twenty different LPS have been reported as somatic antigens useful in P. aeruginosa strains classification in epidemiological studies. Current studies of Finlay Institute need the introduction of up-dated classification technologies and molecular diagnosis tools to establish more accurate epidemiological standards to improve the reports about the presence of new strains at the infection site.