Vaccimonitor

Detection of fibronectin and collagen binding-proteins from Leptospira interrogans serovar Canicola

Como parte de los estudios encaminados a la obtención de una formulación vacunal por subunidades contra la leptospirosis humana, se describe la purificación y caracterización de las proteínas de unión a fibronectina y a colágeno en Leptospira interrogans. Las proteínas de la membrana externa fueron extraídas mediante la solubilización con Tritón X-114 y se aplicaron en una columna de afinidad de IgG AntiBSA-Sepharose 2B CL, para eliminar la BSA, contaminante principal del medio de cultivo en que crece el microorganismo. La muestra libre de BSA (no fijado) se aplicó a una columna de afinidad de fibronectina Sepharose 4B-CNBr, que permitió la separación y detección de una fracción que contenía una proteína de unión a fibronectina presente en la cepa 87 de Leptospira interrogans serovar Canicola, cuyo peso molecular fue estimado en 40 kDa. La proteína aislada demostró ser antigénica y conservada en los serovares Canicola, Copenhageni y Mozdok, en el ensayo de inmunodetección utilizado en este estudio (Dot blot). Para ello se utilizaron sueros específicos obtenidos en ratas infectadas experimentalmente con cada serovar y una mezcla de sueros de humanos convalecientes de leptospirosis. Las proteínas de membrana externa solubilizadas con Tritón X-114, libres de BSA, fueron aplicadas también a una columna de afinidad colágeno-Sepharosa 4B-CNBr, que permitió la purificación de una proteína de unión a colágeno con un peso molecular de aproximadamente 25 kDa, la cual resultó ser antigénica frente a sueros de humanos convalecientes de la enfermedad. Ambas proteínas seleccionadas (40 kD y 25 kD) podrían ser evaluadas como posibles inmunógenos en futuros estudios encaminados a la obtención de nuevos antígenos vacunales.

ABSTRACT As part of the studies conducted to obtain a vaccine formulation by subunits against human leptospirosis, purification and characterization of fibronectin and collagen binding-proteins in Leptospira interrogans was developed. Outer membrane proteins from Leptospira were solubilized with Triton X-114 and were applied in a first step into an IgG AntiBSA- Sepharose 2B CL affinity chromatographic column to eliminate BSA as main contaminant of culture media for this microorganism. The BSA free fraction was applied into a Fibronectin-Sepharose 4B CNBr affinity column. A fibronectin binding protein from Leptospira interrogans serovar Canicola strain 87, with a molecular weight of 40 kDa was obtained. For this, specific sera obtained from experimentally infected rats with each serovar and mixes of human sera of convalescent patients were used. This protein showed to be antigenic and conserved in Canicola, Copenhageni and Mozdok serovars. Solubilized outer membrane protein by Triton X114 was applied into another affinity column of Collagen-Sepharose 4B CNBr to isolate collagen binding proteins from Leptospira interrogans serovar Canicola strain 87. A collagen binding protein with a molecular weight of 25 kDa which showed to be antigenic when evaluated by Dot-Blot against human sera of convalescent patients was found.

Clinical and neuroimmunological aspects of meningoencephalitis by Streptococcus pneumoniae

Después de exitosas campañas de vacunación contra Neisseria meningitidis y Haemophilus influenzae hubo un aumento de casos de meningoencefalitis por Streptococcus pneumoniae. Con el objetivo de describir las características clínicas, los hallazgos de laboratorio y las complicaciones encontradas a un grupo de pacientes que sufrieron de esta enfermedad entre 1993 y 2006, evaluar el estado de la barrera sangre-líquido cefalorraquídeo (LCR) y el patrón de respuesta de síntesis intratecal de inmunoglobulinas a través del reibergrama, se estudiaron 12 niños con meningoencefalitis por Streptococcus pneumoniae que ingresaron en el Hospital Pediátrico de San Miguel del Padrón, Ciudad de La Habana, en ese periodo. Se dosificaron albúmina, IgA, IgM e IgG y sus subclases por inmunodifusión radial en suero y líquido cefalorraquídeo. La edad más frecuente resultó la menor de un año. Las mayores complicaciones fueron: shock séptico y edema cerebral. Hubo tres pacientes fallecidos. Los patrones de las tres clases mayores de inmunoglobulinas aparecieron en el 33% del total. Los dos patrones de subclases de IgG más IgM tuvieron en común la disfunción de la barrera sangre-líquido cefalorraquídeo. La respuesta inmune intratecal en los pacientes con meningoencefalitis por Streptococcus pneumoniae tiene características distintivas que lo diferencian de otras meningoencefalitis de origen bacteriano por lo que en su conjunto podrían ser elementos a ser tomados en cuenta para auxiliar al médico en su diagnóstico diferencial y en la táctica para una vacuna cubana

After successful vaccination campaigns against Neisseria meningitidis and Haemophilus influenzae, there was an increase of cases of meningoencephalitis by Streptococcus pneumoniae. With the aim to describe the clinical characteristics, laboratory findings and complications found in a group of patients suffering from this disease between 1993 and 2006, to evaluate the state of the barrier blood-cephalo rachideous liquid (LCR) and the response pattern of intratecal synthesis of immunogobulins through reibergram, 12 children with meningo-encephalitis by Streptococcus pneumoniae who were hospitalized in the Pediatric Hospital of San Miguel del Padrón, Havana City, were studied. Albumin, IgA, IgM and IgG and their subclasses were dossified by radial immuno-diffusion in serum and cephalo-rachideous liquid. The most frequent age was that lower than one year. The greater complications were: septic and brain edema. There were three deceased patients. Patterns of the three greater classes of immunoglobulins appeared in 33% from the total. The two patterns of subclasses of IgG more IgM had in common the dysfunction of the barrier blood-cephalorachideous liquid. The intratecal immune response in patients with meningo-encephalitis by Streptococcus pneumoniae has distinctive characteristics differentiating it from other meningoencephalitis of bacterial origin; so as a whole they could be elements to be taken into account to help the doctor in its differential diagnosing and in the tactic to develop a Cuban vaccine.

Study of a leptospirosis outbreak in Honduras after Mitch hurricane and prophylactic potentiality of vax-SPIRAL®

En Honduras, uno de los países de Centroamérica más afectados por el huracán Mitch, debido a las fuertes lluvias e inundaciones, se crearon las condiciones idóneas para el desarrollo de un brote de leptospirosis. Un grupo de especialistas cubanos realizamos un estudio a 68 pacientes con un cuadro clínico epidemiológico sospechoso de leptospirosis entre los pobladores del Departamento de Puerto Cortés, una las regiones más comprometidas. A todos los pacientes se les tomó una muestra de sangre para hemocultivo y obtención de suero. Se empleó la técnica de aglutinación microscópica (MAT) para la identificación de las cepas de leptospira y para evaluar la protección conferida por vax-SPIRAL® (vacuna antileptospirósica cubana) frente al reto con la cepa aislada y se verificó la prevalencia de leptospiras en los riñones e hígado. Se observó un predominio de pacientes del sexo masculino, en un grupo entre 15-49 años. Los municipios de este Departamento con un mayor número de casos fueron San Pedro Sula, La Lima y Chamelecón. Los síntomas más frecuentes fueron: fiebre, cefalea, mialgias, malestar general, entre otros. Más del 80% de los individuos manifestaron la presencia de roedores en sus viviendas y que tuvieron contacto con aguas estancadas y animales domésticos. La cepa aislada del hemocultivo positivo fue del serogrupo Icterohaemorrhagiae, muy virulento en el modelo animal empleado. Se evidenció el 100% de protección de los hámsteres inmunizados con vax-SPIRAL® y retados con la cepa de Honduras. El análisis macroscópico de los órganos de los animales inmunizados que sobrevivieron al reto al 100%, reveló la ausencia de signos característicos de la infección.

Hurricane Mitch affected Central America with vast flooding caused by rainfall resulting in leptospirosis outbreaks. Honduras was one of the most affected countries, where a group of researchers worked in the isolation and confirmation of this outbreak. 68 patients from different locations of Puerto Cortes Department with suspicious symptoms of Leptospirosis were studied. All of them were taken a blood samples for hemoculture and serum obtaining. Microscopic agglutination technique (MAT) was used to identify leptospira strains and to evaluate the protection conferred by vax-SPIRAL® (Cuban leptospiral vaccine) against challenge with the isolated strain and verify the prevalence of leptospira in kidneys and liver. A predominance of male patients was observed in a group between 15-49 years. Municipalities of this department with greater number of cases were San Pedro Sula, La Lima and Chamelecón. The most frequent symptoms were: fever, headache, myalgias, general discomfort among others. More than 80% of individuals manifested presence of rodents in their housing and had contact with accumulated water and domestic animals. The isolated strain of the positive hemoculture was from serogrupo Icterohaemorrhagiae, very virulent in the animal model used. 100% protection of hamsters immunized with vax-SPIRAL® and challenged with the Honduras strain was evidenced while microscopic analysis of immunized animal organs which survived to the challenge at 100% revealed absence of signs characteristic of infection.

Evaluation of toxicity by single dose of the tetanus vaccine vax-TET in Sprague Dawley rats

La vacuna vax-TET® está indicada en la prevención del tétanos y es efectiva si se logra un completo y apropiado esquema de inmunización. Para investigar el potencial tóxico de este producto se realizó una prueba toxicológica con una dosis única, por vía intramuscular, en un volumen de 0,2 mL en ratas Sprague Dawley. La composición de la vacuna de ensayo probada fue la misma de la vacuna comercial. Los animales fueron observados diariamente en busca de síntomas locales y sistémicos de toxicidad. Se realizaron mediciones del consumo de agua y alimento, así como del peso corporal. Dos semanas después de la inoculación las ratas fueron sacrificadas por métodos de eutanasia sin dolor y sometidas a necropsia. No se observaron muertes ni síntomas de toxicidad en los animales estudiados. Tampoco se encontraron diferencias de interés toxicológico entre los grupos experimentales en cuanto a las variables medidas. El estudio anatomopatológico reveló la presencia de formaciones granulomatosas de tipo macrofágico asociadas, fundamentalmente, al hidróxido de aluminio. Estos resultados permitieron concluir que, bajo las condiciones del estudio y según los criterios establecidos, esta vacuna no produce efectos adversos en el modelo animal usado, por lo que se considera potencialmente no tóxica para humanos.

The tetanus vaccine vax-TET® is indicated for the prevention of tetanus and it is effective if a complete and adequate immunization scheme is achieved. In order to investigate the toxic potential of this product, a toxicological test at single dose (0,2 ml), by intramuscular route was developed in Sprague Dawley rats using the same substance concentrations suggested by the manufacturer. The animals were daily observed looking for local and systemic symptoms of toxicity. Water and food consumption and body weight were also monitored during the experiment. Two weeks after inoculation, rats were slaughtered and submitted to necropsy studies. No deaths or toxicity symptoms were observed in the animals studied. No differences of toxicological interest were found among experimental groups regarding the variables measured. The anatomic-pathological study showed the presence of granulomatous formations mainly associated to aluminium hydroxide in the formulation. It was concluded that under the study conditions and following the established criteria, this vaccine does not produce any adverse reactions in the animal model used, suggesting a low potential toxicity in humans.

Flooring systems in controlled areas of biological production

El recubrimiento de los pisos, utilizando las resinas sintéticas autonivelantes en la construcción de las áreas controladas, empleadas en las instalaciones de producción de biológicos, en las dedicadas a los procesos de manipulación de microorganismos (contención), así como en las instalaciones para los animales de laboratorio y procesos asépticos de formulación farmacéutica, contribuyen a la seguridad biológica y farmacéutica, según sea el caso, por su continuidad integral y garantía de la calidad microbiológica del aire, así como al ahorro energético, pues disminuyen la ganancia de calor latente atribuido a la humedad incorporada al aire por otros recubrimientos permeables. Las condiciones climáticas de Cuba y la dureza del agua empleada en las mezclas cementosas son un alto potencial para la formación de "burbujas", tema abordado en este trabajo. El conocimiento de los aspectos que provocan la formación de estas ampollas y las vías para evitarlo, son útiles y de un valor apreciable. En este artículo se presentan las experiencias obtenidas con la aplicación de los recubrimientos epoxídicos en las áreas controladas del Instituto Finlay, instalaciones que no han presentado deformaciones apreciables después de 15 años de explotación.

Self-levelling epoxy resin flooring system applied in design and erection of clean rooms dedicated to both biopharmaceutical and contention laboratories and also in animal care facilities are of paramount importance in order to guarantee biological safety and pharmaceutical strength of production and research activities, microbiological air quality of facility environment and energy saving. Hot and humid climates of Cuba as well as hardness of row water employed mixing concrete are prone to appear blisters on epoxy flooring layers. Knowledge and management of sources and facts that generate such flooring surface defects are helpful and necessary to keep away from its observable fact. Epoxy flooring systems application at Finlay Institute according to clean rooms regulations are showing.