Vaccimonitor

Intrathecal synthesis of C3c and immunoglobulins in children with bacterial meningoencephalitis

Las meningoencefalitis bacterianas constituyen una fuente importante de morbilidad, mortalidad y discapacidad en diferentes regiones del mundo. El objetivo del presente trabajo es conocer si el sistema de complemento puede estar involucrado en la lisis de las bacterias productoras de meningoencefalitis a través de la liberación de C3c al líquido cefalorraquídeo. Se estudiaron siete pacientes con edad promedio de 3 años, que ingresaron en el Hospital Pediátrico de San Miguel del Padrón, a los que se les realizó una punción lumbar diagnóstica y se les aislaron los gérmenes siguientes: Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae y Haemophilus influenzae. La cuantificación de los niveles de C3c, albúmina e inmunoglobulinas mayores en suero y líquido cefalorraquídeo se realizó en placas de inmunodifusión radial. Los resultados obtenidos fueron recogidos en un reibergrama. El total de los pacientes estudiados mostraron síntesis intratecal del componente C3c del sistema de complemento. Este hecho evidenció la activación de este sistema en alguna de sus vías y que una vez cumplidas sus funciones biológicas, ha sufrido un proceso de degradación y liberación al LCR en forma de C3c.

Bacterial meningoencephalitis is an important source of morbidity, mortality and disabilities in different regions of the world. The objective of this paper is to know if the complement system can be involved in producing-meningoencephalitis bacterial lysis through C3c release into cerebrospinal fluid. Seven patients with an average age of 3 years-old, who attended the Pediatric Hospital of San Miguel del Padrón, were studied by lumbar puncture diagnosis. Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae and Haemophilus influenzae were isolated from the samples taken. The quantification of C3c, albumin and main immunoglobulins in serum and in cerebrospinal fluid were carried out by radial immunodifusion. Results were analyzed using a Reibergram. All patients showed C3c intrathecal synthesis. This fact demonstrates that the activation of this system has occurred in some of their three pathways and once its biological functions are fulfilled, it suffered a degradation and release process into cerebrospinal fluid as C3c.

Limitations of specific toxicity assay for whole-cell pertussis component

Las vacunas que contienen células inactivadas de Bordetella pertussis se han utilizado con efectividad en los Programas Nacionales de Inmunización de todo el mundo. Pese a su reconocida eficacia, ellas se caracterizan por su elevada reactogenicidad, atribuible a la presencia de componentes como toxina pertussis y endotoxinas. Para monitorear la seguridad de estas vacunas existe el ensayo de ganancia en peso en ratones, el cual ha sido criticado por su inespecificidad, poca sensibilidad y alta variabilidad. Basado en lo anterior, el Laboratorio Nacional de Biológicos del Centro Estatal para el Control de de la Calidad de los Medicamentos en Cuba, decidió evaluar la relevancia de esta prueba para la liberación de los lotes de la vacuna DPT. Para ello se estimó la sensibilidad del método para detectar diferentes concentraciones de endotoxinas y toxina pertussis, así como la variabilidad entre ensayos. Los resultados de este trabajo mostraron que sólo altas concentraciones de endotoxinas y toxina pertussis, muy superiores a las habituales en las vacunas DPT, provocan una disminución de la ganancia en peso promedio y un fallo en la especificación de la prueba. Este elemento y la inherente variabilidad de este método resultaron claves en la decisión de no utilizarlo para la liberación nacional de lotes de la vacuna DPT.

Vaccines containing whole-cell Pertussis component have been used with a high effectiveness in National Immunisation Programs worldwide. Despite of their efficacy, concerns remained in regard to reactogenicity due to the presence of components like Pertussis toxin and endotoxins. During decades the specific toxicity of Pertussis component has been monitored by the Mouse Weight Gain Test, but the test has been criticised in terms of lack of specificity and sensitivity and great variability. That is why the National Control Laboratory decided to evaluate its relevance for the release of DPT vaccine lots. We evaluated different concentrations of endotoxins and pertussis toxin as well as the variability among assays. The results showed that only very high concentrations of endotoxin and pertussis toxin were able to produce a reduction of the weight gain in mice and a specification failure of the assay. This aspect and the great variability found were determinant to decide not to use this test for the release of DPT vaccine lots and to remain looking for new alternatives.

Selection of shigella sonnei strains to develop an effective shigellosis vaccine

En el Instituto Finlay se desarrolló una metodología de trabajo que contribuyó a la selección de cepas de Shigella sonnei como posibles candidatos vacunales contra la shigellosis. Las cepas investigadas, donadas por el Centro Provincial de Higiene y Epidemiología de Ciudad de La Habana, se caracterizaron según los métodos convencionales. La identificación del serogrupo y serotipo se realizó por aglutinación en láminas portaobjetos con antisueros comerciales; mientras que para el estudio de la susceptibilidad antimicrobiana se utilizó el DIRAMIC 10, un equipo semiautomatizado que proporcionó los resultados 4 horas después de su realización. Se investigó también la presencia de plásmidos de virulencia, por el crecimiento de Shigella spp. en medio de agar Triptona Soya con Rojo Congo al 0,025%, así como la expresión de las proteínas de la membrana externa en SDS-PAGE; para las pruebas de virulencia y potencia se emplearon los modelos animales (modelo ratón-pulmón y Test de Sereny). Los resultados obtenidos con la metodología utilizada permitieron la selección de la cepa de S. sonnei A-04 como la más adecuada para la obtención del posible candidato vacunal.

A work methodology was developed at Finlay Institute that contributed to the selection of Shigella sonnei strains as possible vaccinal candidates against shigellosis. Strains under study , were donated by the provincial Centre of Hygiene and Epidemiology in the City of Havana and were characterized using traditional methods. The identification and of the serogroup and serotype was performed by agglutination in slides with commercial antisera. Whereas DIRAMIC 10, a semi automated equipment was used to study antimicrobial susceptibility. Results were obtained four hours after. The presence of virulence plasmid for the growth of Shigella spp. In Agar Soy Triptone with Congo Red at 0.025%, as well as outer membrane protein expression in of SDS-PAGE. In addition, animal models mice-lung and the test of Sereny were used for virulence and potency tests. Results obtained allowed the selection of the strain S. sonnei A-04 as the most adequate for the obtainment of a possible vaccinal candidate.

Proposal of an algorithm to assess causality of adverse events in vaccine clinical trials

En el transcurso de los ensayos clínicos usualmente se designa a una comisión, la cual se encarga de evaluar la causalidad de los eventos adversos que se reportan y transcriben en los cuadernos de recogida de datos. Para llegar a contestar la pregunta de: ¿si una vacuna que se está estudiando ha causado un evento adverso?, los decisores pueden tomar diferentes caminos, por lo que obviamente la conclusión final podría variar mucho y la evaluación deficiente puede generar conclusiones erróneas, lo que confirma la necesidad de disponer de un procedimiento para definir las categorías que se utilizarán para analizar y clasificar la relación de causalidad. Una forma de contestar a la pregunta es mediante la construcción de un algoritmo. En relación con los ensayos clínicos no encontramos en la literatura un algoritmo que sea el "patrón clave" para establecer o descartar la causalidad, sin embargo es factible diseñarlo partiendo de la metodología internacional utilizada poscomercialización, lo cual fue el propósito de este trabajo. Se diseñó una primera propuesta que fue analizada individual y colectivamente por el grupo multidisciplinario de la Gerencia Médica del Instituto Finlay. Finalmente se aprobó por consenso el algoritmo que puede ser útil para aplicar en los ensayos clínicos dentro y fuera de la institución.

During clinical trials it is common to appoint a commission which is in charged of assessing the causality of adverse events which are reported and transcribed to the collection data logbooks. To be able to answer the question: "Does the vaccine under study cause an adverse event.?" different pathways could be taken by decision makers, so it is obvious that the final conclusion could vary too much and a poorly assessment can generate mistaken conclusions. That confirms the need of having a procedure to define which categories must be used to analyze and to classify the relation of causality. To create an algorithm is one answer to the question. We reviewed the literature and did not find any algorithm which could be considered a "master key" to set or to reject causality, so this paper aims at designing an algorithm beginning with the international methodology used in post commercialization. A first proposal was designed which was individually and collectively analyzed by the multi-disciplinary group of the Medical Management from Finlay Institute. Finally, the proposed algorithm was approved by consensus, which could be useful to apply in clinical trials inside and outside of the institution.