Vaccimonitor

Meningococcal Disease. A case control study in the City of Havana , November 2003- July 2005

Cuba ejecuta un programa de inmunización antimeningocócica desde 1991. El propósito de este estudio fue identificar posibles factores asociados a la ocurrencia de casos en grupos de vacunados. Un total de nueve casos con enfermedad meningocócica (EM) en Ciudad Habana se registraron en el período noviembre de 2003- julio 2005 en menores de 20 años, pero se estudiaron solo 7, por encontrarse uno fuera del país y otro fallecido. Se seleccionaron aleatoriamente 34 controles comunitarios para comparar con los casos e identificar algunos factores de riesgo asociados y evaluar los anticuerpos bactericidas y ELISA existentes contra la proteína de membrana externa del serogrupo B. El 100% de los casos estudiados presentó la forma meníngea, con una estadía hospitalaria promedio de 9,8 días y una letalidad de 14,3% (1/7). En el análisis bivariado se encontró la no lactancia materna asociada (OR 3,17 IC95%= 0,44-27,85) a la ocurrencia de la enfermedad, sin significación estadística (p>0,05) por el pequeño universo de estudio. Finalmente, la regresión logística multivariada indicó asociación con la no lactancia materna (OR 3,22 IC95%= 0,52-19,52) con la ocurrencia de la enfermedad, pero igualmente esta no fue significativa. La prueba de Mann Whitney para la comparación de los títulos de anticuerpos para el antígeno B en casos y controles mostró una diferencia muy significativa (p< 0,01) a favor de los enfermos, por la respuesta de la memoria inmune a la infección natural. La vacuna cubana es protectora para la enfermedad meningocócica serogrupo BC. En el 57% de los casos de EM los síntomas comenzaron como promedio cuatro años después de la aplicación de la segunda dosis de la vacuna.

Cuba has carried out a meningococcal immunization program since 1991. Current article aims at knowing the factors associated to meningococcal disease (MD) in vaccinated persons. The universe were the nine cases under 20 years old registered as MD from November 2003 to July 2005 in the City of Havana and 34 community controls to compare to the cases and to identify associated risk factors and to evaluate existing bactericide and ELISA antibodies against the outer membrane protein from serogroup B. Only seven cases were studied because one was out of the country and the other was a dead case. The 100% of studied cases showed the meningitis form, with an average hospital stay of 9.8 days and a lethality of 14.3% (1/7). Bivariate analysis showed no maternal nursing (OR 3.17 IC 95% = 0.44-27.85) associated to the occurrence of the disease. But it was not significant (p>0.05) due to the study universe. Multivariate analysis found out association with no maternal nursing (OR 3.22 IC95%= 0.52-19.52) but it also was not significant. Mann Whitney test to compare antibody titers against B antigen in both groups, showed a very significant difference (p<0.01) for the immune memory response to natural infection. The Cuban vaccine protects from MD caused by serogroup BC. The onset symptoms of the illness occurred with an average of four years after the second dose of the vaccine in 57 % of the cases.

Neuroimmunological response in children with meningoencephalitis by Neisseria meningitidis

La enfermedad meningocócica es una entidad clínica que constituye aún un problema de salud mundial. Esta afecta, sobre todo, a la población infantil ocasionando un cuadro clínico grave, de evolución severa, así como un elevado número de muertes y secuelas. Su agente etiológico, Neisseria meningitidis, habita de forma natural en las membranas mucosas de la nasofaringe humana. Con el objetivo de determinar las características de la respuesta neuroinmunológica en niños con meningoencefalitis por N. meningitidis, se estudiaron 20 niños diagnosticados con esta afección clínica, entre los años 1988- 2009. A estos se les realizó una punción lumbar en el momento del ingreso y se cuantificó la IgA, IgM e IgG, la albúmina y el C3c en el suero y en el líquido cefalorraquídeo. Se confeccionó un reibergrama de acuerdo con los datos obtenidos en la cuantificación. La disfunción de la barrera hematoencefálica se presentó en seis pacientes y hubo síntesis intratecal de las inmunoglobulinas mayores y C3c en 65% y 95%, respectivamente. Se comprobó la ocurrencia de síntesis intratecal de al menos dos inmunoglobulinas mayores asociadas con el componente C3c del complemento, participando estos en los mecanismos involucrados en la respuesta inmune de esta enfermedad.

Meningococcal disease is a clinical entity that remains as health world problem. It mostly affects children population producing gravity, a severe evolution, and a high quantity of deaths and sequels. Neisseria meningitidis is the etiological agent. The mucosa membranes of human nasopharynx are its natural habitat. This paper aims at establishing and determining the characteristics of the neuroimmunological response in children suffering from meningoencephalitis caused by Neiseria meningitidis. Twenty children with this diagnosis from 1998 and 2009 were studied. Cerebrospinal fluid lumbar puncture and blood extraction were performed. Samples were collected at the time of admission of the children to the hospital. IgA, IgG, IgM, C3c and albumin were quantified. A reibergram was done according to the data obtained in the quantification. Blood-cerebrospinal fluid barrier dysfunction was present in 6 of studied patients and there was intrathecal synthesis of major immunoglobulins and C3c in 65 and 95% respectively. The occurrence of intrathecal synthesis of at least 2 types of major immunoglobulins associated to C3c was demonstrated, which participate in the mechanisms involved in the immune response in this disease.

Immunomodulator effect of the CM-95 Solution treated magnetically in Balb/c mouse with 5- fluorouracil inoculated

El 5-fluorouracilo es un antineoplásico usado en la terapia del cáncer y posee acción inmunosupresora al inhibir la proliferación de células del tejido hematopoyético. En este trabajo se evaluó el efecto inmunomodulador de la solución CM-95 tratada magnéticamente en ratones Balb/c inoculados con 5-fluorouracilo a través de su acción protectora rehabilitadora sobre parámetros celulares y tisulares del tejido hematopoyético. A los ratones, entre 20-22 g de peso y 6 semanas de nacidos, se les administró esta solución CM-95 tratada magnéticamente por vía intraperitoneal en un esquema de dos inoculaciones; luego se administró por la misma vía el 5_fluorouracilo a una dosis de 150 mg/m² de superficie corporal de cada ratón. Se evaluó el conteo total y diferencial de leucocitos antes de inocular el 5-fluorouracilo, y a los tres y siete días de aplicado este. La celularidad de médula ósea y bazo y la observación microscópica del corte histológico de hígado y bazo por la técnica de inclusión en parafina y tinción con eosina hematoxilina al 10% se evaluaron a los siete días de haber aplicado el 5- fluorouracilo. La solución CM-95, tratada magnéticamente, logró modular los efectos del 5-fluorouracilo con una actividad protectora rehabiltadora, para los parámetros evaluados en médula ósea, sangre periférica, bazo e hígado. Estos resultados abren nuevas perspectivas para la aplicación del sistema acuoso tratado magnéticamente como inmunomodulador.

5-Fluorouracil is an antineoplastic drug used in cancer chemotherapy. It has immunosuppressant effects by inhibiting cell proliferation from the haematopoietic tissue. In this paper, the immunomodulating effect of the magnetically treated CM-95 solution in Balb/c mice inoculated with 5- fluorouracil by its rehabilitating protecting action on cell parameters of the haematopoietic tissue. Six-week old mice weighing 20-22 g were inoculated twice with magnetically treated CM-95 solution by intraperitoneal route. Then, they received 5-fluoracile in a dose of 150 mg/m² of body surface by the same route. Haematopoietic parameters such as total and differential leukocyte count were evaluated before applying the antineoplastic drug and at the third and seventh days after the application. Bone marrow and spleen cellularity as well as the microscopic observation of the histological cut of the liver and of spleen, by the technique of inclusion in paraffin dyes with 10% eosin haematoxylin, were evaluated at seven days after the application of 5 fluorouracil. The magnetically treated CM-95 solution could modulate the effects of 5-fluorouracil with protecting and rehabilitating activity for the parameters evaluated in the bone marrow, peripheral blood, spleen and liver. These results open new perspectives for the application of the magnetically treated aqueous system as immunomodulator.

Evaluation of the mucosal irritation of AFCo1 adjuvant by HET-CAM method

Los adyuvantes pueden producir irritación local en la mucosa y esto pudiera ser una limitación para su uso clínico. Para evaluar si el adyuvante vacunal AFCo1, un cocleato obtenido a partir del proteoliposoma de Neisseria meningitidis, produce irritación directa en la mucosa nasal, se estudió el efecto de su aplicación en la membrana corioalantoidea del embrión de pollo (MCA), por la técnica de HET-CAM (hen's egg test on chorioallantoic membrane), según el Protocolo 47 de INVITTOX, método alternativo que sustituye la clásica prueba de Draize en conejos. En este ensayo se utilizaron por cada producto a evaluar (AFCo1 o amortiguador fosfato salino como diluente) tres huevos de gallinas White Leghorn de 10 días de embrionados; para los controles positivos de irritación (NaOH a 0,1 N y SDS al 1%) se utilizaron dos huevos para cada uno. Los productos fueron aplicados en la MCA para evaluar las lesiones de lisis, hemorragia y coagulación, a los 5 min. Las sustancias se clasificaron según una escala establecida para productos no transparentes. Adicionalmente se realizó una evaluación microscópica de las MCA tratadas para confirmar las observaciones realizadas. Al determinar el grado de severidad de las tres reacciones, después de la aplicación de AFCo1 y del diluente, ambos clasifican como no irritantes, lo que evidencia que este cocleato no produce lesión epitelial directa. Este resultado, además, confirma la utilidad del HET-CAM para la determinación de irritabilidad nasal de adyuvantes vacunales.

Adjuvants can cause local irritation of the mucosa and this might be a limitation for their clinical use. In order to evaluate if AFCo1, a novel intranasal adjuvant based on a proteoliposome-derived cochleate structure from Neisseria meningitidis B, produces mucosal irritation, the direct effect after its application on the chorioallantoic membrane (CAM) of hen's eggs was studied using HET-CAM (hen's egg test on chorioallantoic membrane), according to protocol 47 of INVITTOX, an in vitro validated method that substitutes the classic Draize´s test in rabbits. Three 10-days-old eggs were used for each evaluated product (AFCo1 or PBS as vehicle) and two eggs for each positive control of irritation (NaOH a 0.1 N y SDS at 1%). The products were applied on the CAM to evaluate the grade of lyses, haemorrhage and coagulation, at five minutes. The products were classified according to an established scale for non transparent substances. Additionally, a microscopic evaluation was carried out to confirm previous results. When determining the severity degree of the three reactions after the application of AFCO1 and the diluent, they show to be non irritant, what demonstrates that this cochleate does not produce direct epithelial damage. Our results also reveal the utility of HET-CAM as tool for the evaluation of mucosal irritation of vaccine adjuvants.

Biomodels for micronucleis induction on bone marrow cells by cyclophosphamide and bleomycin

En este trabajo se evaluó la línea de ratones Balb/c, de ambos sexos, como biomodelo en la inducción de micronúcleos en células de la médula ósea por ciclofosfamida y bleomicina. Se formaron cinco grupos experimentales/sexo: al primero se le administró NaCl al 0,9%, al segundo y al tercero ciclofosfamida y al cuarto y quinto bleomicina. Todos los medicamentos fueron suministrados por vía intraperitoneal, con diseños de tratamientos diferentes y dosis de 50 mg/kg en los tres primeros grupos y de 20 mg/kg en los dos últimos. Se obtuvo como resultado una mayor inducción de micronúcleos en eritrocitos policromáticos y un mayor índice de citotoxicidad por el uso de la ciclofosfamida, administrada en dos ocasiones antes del sacrificio, con intervalos de 24 horas entre ambas administraciones. Esto constituyó, bajo nuestras condiciones experimentales, el mejor diseño para inducir un número considerable de micronúcleos en células de la médula ósea de ratones, siendo estos resultados útiles para evaluar drogas con efecto antigenotóxico y pudiera servir también como control positivo en estudios de mutagénesis o genotoxicidad.

Balb/c mice of both sexes were evaluated as biomodel in the induction of micronucleis in bone marrow cells by cyclophosphamide and bleomycin. They were divided into five experimental groups per sex. The first one was administered with NaCl 0.9% by intraperitoneal (i.p) route, the second and third groups were administered with cyclophosphamide by i.p route, with designs of different treatments at doses of 50 mg/kg. The fourth and fifth groups were administered with bleomycin by i.p route, equally in two designs of different treatments at 20 mg/kg doses. This resulted in a higher micronucleis induction of polychromatic erythrocytes and in a higher citotoxicity index with the use of cyclophosphamide administered twice before the sacrifice, with a 24-hours interval between administrations. According to our experimental conditions, this is the best design to induce a considerable number of micronucleis in bone marrow cells of mice, being useful in experimental designs to evaluate drugs with antigenotoxic effect. In addition, it implies its use according to the best found experimental design as positive control in mutagenesis and genotoxicity studies.

Mycobacterium tuberculosis: virulence factors

Mycobacterium tuberculosis es el agente causal de la tuberculosis, una de las enfermedades infecciosas más letales en el mundo. La única vacuna disponible para su control es el BCG, sin embargo, falla en la protección contra la tuberculosis pulmonar, siendo esta la forma más frecuente y responsable de la diseminación. La identificación de factores de virulencia del microorganismo causal pudiera ayudar en el desarrollo de un nuevo candidato vacunal que sea capaz de neutralizar la acción de esos determinantes patogénicos. El empleo de diferentes modelos animales ha permitido reproducir las etapas de la enfermedad, así como medir o cuantificar la virulencia de las distintas cepas circulantes de Mycobacterium tuberculosis. Las mutaciones génicas y otras técnicas de biología molecular han posibilitado dilucidar los genes específicos involucrados en la virulencia de este microorganismo que codifican para múltiples y complejos factores de diferente naturaleza.

Mycobacterium tuberculosis is the causative agent of tuberculosis, one of the most lethal diseases worldwide. BCG is the only available vaccine for tuberculosis control, but at the same time it fails in the protection from pulmonary tuberculosis, which is the most common and responsible form of dissemination. The identification of virulence factors of the causative organism could help in developing a new vaccine candidate capable of neutralizing the action of these pathogenic determinants. The use of different animal models has allowed to reproduce the stages of the disease and to measure or to quantify the virulence of different circulating strains of M. tuberculosis. Gene mutations and other molecular biology techniques have made possible to elucidate the specific genes involved in virulence of this organism, that encodes many complex and different factors.