Vaccimonitor

VacciMonitor: 20th Anniversary

Induced protection by nanocochleates derived from proteoliposomes from Leptospira interrogans serovar canicola

Desde los años 20 del pasado siglo, hasta el presente, en el mundo se han desarrollado y empleado vacunas de células enteras contra la leptospirosis que confieren una corta inmunidad; la mayoría no adyuvadas y dirigidas, fundamentalmente, contra los diferentes serogrupos de la especie Leptospira interrogans, contenidos en las preparaciones. Numerosos han sido los intentos realizados para lograr una formulación vacunal más pura, efectiva, de amplio espectro y duración de la protección que las bacterinas de células enteras inactivadas. Sin embargo, hasta el momento no se ha registrado ninguna vacuna con tales características. En el presente trabajo se obtuvieron antígenos de membrana externa a partir de una cepa cubana autóctona (Cepa 87, L. interrogans serovar Canicola), mediante una modificación de la tecnología para la producción de vesículas de membrana, patentada por investigadores del Instituto Finlay. Estos antígenos con estructura nanoproteoliposómica fueron formulados/adyuvados mediante diferentes estrategias, logrando cinco preparaciones con estructura coclear, que constituyen nanopartículas de aproximadamente 100 a 150 nm de largo y entre 15 a 30 nm de diámetro. Los inmunógenos se inocularon en el biomodelo Mesocrisetus aureatus, con dos dosis e intervalo de seis semanas. El reto fue realizado con 100.000 DL 50 . Los resultados demuestran que las nuevas formulaciones vacunales confieren protección frente al reto homólogo y fueron capaces de eliminar el estado de portador, lo que unido a la robustez del método de preparación, el mayor nivel de pureza, en comparación con las bacterinas, y la no necesidad del hidróxido de aluminio, las convierten en una alternativa de interés para continuar su desarrollo

Whole cell Leptospirosis vaccines have been developed and used from the 20`s of last century up today , most of them are not adjuvated and do not confer a long-lasting immunity. These vaccines are mainly against different serogroups of Leptospira interrogans contained in the preparation. Though several attempts to obtain a vaccinal formulation more effective, purer, with wider spectrum and longer protection than the bacterines of inactivated whole cells have been made no vaccine with these characteristics have been registered yet. This paper deals with the obtainment of outer membrane antigens from a Cuban autochthonous strain (Strain 87, L. interrogans serovar Canicola), by a modification of the technology for the production of outer membrane vesicles, patented by researchers from Finlay institute These antigens with nanoproteoliposomic structure were formulated/adjuvated by different strategies, obtaining five preparations with cochlear structures which are nanoparticles of approximately 100 to 150 nm of lenght and from 15 to 30 nm of diameter. Two doses of the immunogens are inoculated in the biomodel Mesocrisetus aureatus, with an interval of six weeks. The challenge was carried out with 100.000 DL 50 . Results showed that the new vaccinal formulations confer protection against the homologous challenge and were able to eliminate the carrier status. This, together with the robutness of the preparation method, the higher level of purity, compared to the bacterines, and the no need of aluminium hydroxide make the formulations an alternative of interest for continuing their development

Assessment of a preservation strategy for Brevundimonas diminuta

Brevundimonas diminuta se reconoce internacionalmente como el microorganismo estándar para las pruebas de reto bacteriano. El Laboratorio de Control de la Calidad de los Laboratorios Liorad dispone de una colección de cepas de referencia donde se encuentra depositada esta cepa, conservada por el método de congelación a -70oC, replicada en el medio de cultivo Caldo Lactosa Salina (CLS). Esta metodología no resultó la más conveniente, por lo que se evaluó otra estrategia de conservación para este microorganismo, donde se empleó el Caldo Triptona Soya como medio de crecimiento, la leche descremada al 20% como sustancia lioprotectora y la liofilización como método de conservación. Para verificar el sustento del cultivo se realizó un adecuado control de la calidad que incluyó la comprobación de pureza y la viabilidad y estabilidad de las propiedades de interés. Los resultados obtenidos durante los 24 meses en que se llevó a cabo el estudio de estabilidad en tiempo real confirmaron que el método elegido brindaría una alternativa y solución al problema relacionado con la conservación de esta cepa.

Brevundimonas diminuta is internationally recognized as the standard micro-organism for bacterial challenge tests. The Quality Control Laboratory of Liorad Laboratories has a collection of reference strains, among them Brevundimonas diminuta are kept by the freezing method at -70oC, replicated in Lactose Broth Saline (CLS) culture medium. This methodology was not the most convenient, that is why another strategy was assessed. Triptone Soy Broth was used as growth method, skim milk 20% as protective substance and lyophilization as preservation method. An adequate quality control, which included purity verification, viability and stability of the properties, was carried out. Results obtained during the 24 months of the stability study in real time, suggest that the chosen method would provide an alternative and solution to the problem of this strain preservation.

Biodistribution of the secretory IgA purified from human colostrum in biological fluids of Balb/c mice

La IgA secretora humana (IgAsh) es estructural y funcionalmente liberada por el ambiente mucosal, con la capacidad de neutralizar antígenos, participa en la aglutinación y exclusión de estos y previene la adherencia de patógenos a las superficies del epitelio mucosal. En este estudio se evaluó la biodistribución de la IgAsh purificada de calostro, después de su administración por vía intranasal, en el modelo de ratón Balb/c y se determinaron los niveles de esta inmunoglobulina en diferentes fluidos biológicos mediante ELISA. Los resultados mostraron la presencia del anticuerpo en saliva de los animales del grupo que recibió la IgAsh en todos los intervalos de tiempo estudiados. En las muestras de lavado tráqueo-bronquial se obtuvo solo la presencia del anticuerpo a las 2 y 3 h posteriores a la inoculación. A partir de los resultados obtenidos consideramos interesante en el futuro utilizar este modelo experimental para evaluar el papel protector de esta inmunoglobulina como candidato terapéutico frente a la infección por Mycobacterium tuberculosis.

The human secretory IgA (IgAsh) is structural and functionally released by the mucosal environment, with the ability to neutralize antigens and participating in promoting the binding and exclusion of them and preventing the adhesion of pathogens to mucosal epithelial surfaces. In this study, the biodistribution of hsIgA purified from colostrum was evaluated, after being administered intranasally to BALB/c mice model and the levels of this immunoglobulin in several biological fluids were determined by ELISA. Results showed the presence of antibody in saliva samples from animals that received the IgAsh, which was significantly higher than levels found in samples from non-treated animals, at all time intervals. In samples of tracheobronchial lavage, high antibody levels were only obtained two and three hours after the inoculation of the animals of the group that received the IgAsh, compared to the non-treated group. According to the results obtained, we consider interesting to evaluate the protective role of this immunoglobulin as a therapeutic candidate against the infection by M. tuberculosis in a near future.

Automated system for quality assessment in the diagnosis laboratories with SUMA technology

El Centro de Inmunoensayo (CIE) es una institución dedicada a investigación-producción orientada al desarrollo y producción de reactivos e instrumentos para el diagnóstico médico, basados en técnicas inmunoenzimáticas que aprovechan la gran especificidad de la interacción antígeno-anticuerpo y las ventajas de las reacciones catalizadas por enzimas. Su línea principal es el Sistema Ultra Micro Analítico (SUMA), que consiste en una tecnología integrada por equipos y reactivos para la realización de los análisis inmunoenzimáticos a un bajo costo de ejecución, lo cual lo hace particularmente adecuado para los programas de prevención de la salud, en los que se requiere el procesamiento de un gran número de muestras. Con el objetivo de lograr la garantía de la calidad se han desarrollado durante más de una década diferentes sistemas de software que se han utilizado en el proceso de evaluación de la calidad en el trabajo de los laboratorios. Con el nombre de SAC 2.0, el CIE desarrolló un sistema para el control de la calidad que puede realizar el proceso evaluativo de forma totalmente automatizada, que ofrece prestaciones similares a los sistemas más avanzados que existen actualmente. En este trabajo se describen elementos considerados en su concepción, así como las ventajas obtenidas con la automatización, las cuales demuestran cómo la herramienta desarrollada constituye un componente de vital importancia para el adecuado funcionamiento de los laboratorios de la tecnología SUMA, ubicados en Cuba y en el exterior.

The Center of Immunoassay (CIE) is a research-production complex aiming at the development and production of reagents and instrumentation for medical diagnosis based on immunoenzymatic techniques using the great specificity of the antigen-antibody interactions and the advantages of the reactions catalyzed by enzymes. Its main line is the Ultra Micro Analytical System (SUMA), consists of a technology of equipments and reagents to perform immunoenzymatic analyses at a low cost, which makes it particularly adequate for prevention health programs that require the processing of a big number of samples. In order to achieve a desirable quality warrant, different software systems have been developed for more than a decade, that have been used in the quality assessment process in the laboratories. Under the name of SAC 2.0, the CIE has developed a version of a system for quality control that is able to perform the assessment process totally automated. This paper describes the elements considered in its conception as well as the advantages obtained from automation, which show how important the developed tools are for the proper functioning of the SUMA laboratories allocated not only in Cuba but in other countries as well.

Comparison of the potency of allergenic mite extracts in asthma and allergic rinitis patients

Las pruebas cutáneas para el diagnóstico específico en alergia requieren de extractos alergénicos de óptima calidad, que pueden ser comprobadas determinando la potencia alergénica con el empleo de distintas concentraciones de extractos de un fabricante o confrontando los de diferentes laboratorios. Con el objetivo de comparar extractos de ácaros: Dermatophagoides pteronyssinus, D. farinae, D. siboney y Blomia tropicalis , producidos en los laboratorios de DIATER, Argentina, ALK-Abelló, España y BIOCEN, Cuba, se realizó la prueba a 56 pacientes entre 2 y 15 años, con asma y rinitis, mediante la respuesta cutánea al Prick Test, en el Policlínico Previsora, de la ciudad de Camagüey. El 84,6% de los pacientes asociaron los síntomas alérgicos a cambios de tiempo y exposición a polvo casero. El diámetro de los habones fue aparentemente mayor para ALK-Abelló, pero sin diferencia significativa. Se apreció gráficamente una tendencia lineal entre el diámetro promedio del habón y el logaritmo de la concentración de alergeno cuando se emplearon diferentes concentraciones, en el rango de 4.000 a 100.000 UB/mL. Los Prick Test, con diámetro ? 3 mm, mostraron una aparente mayor proporción para ALK-Abelló con D. pteronyssinus y D. farinae , en comparación con BIOCEN y DIATER, aunque tampoco de forma significativa. Los extractos de ácaros, producidos y estandarizados en DIATER, BIOCEN y ALK-Abelló, son similares en cuanto a sus potencias alergénicas.

Skin tests require extracts with high quality, which can be measured by determining their allergenic potency using different concentrations of extracts from a manufacturer or comparing extracts from different manufacturers. To compare dust mite extracts produced by manufacturers from Spain, Argentina, and Cuba by using the skin response to the Prick Test. The Prick Test was performed on 26 patients aged 2 to 15 years with asthma and rhinitis at the city of Camagüey, Cuba, with extracts of Dermatophagoides pteronyssinus, D. farinae, D. siboney and Blomia tropicalis produced by DIATER (Argentina), ALK- Abelló (Spain) y BIOCEN (Cuba). Among the patients 84.6% attributed the symptoms to changes in weather and house dust. The diameter of the wheal was apparently greater for ALK-Abelló, but no statistical significance was found. The relationship between wheal diameter and log of allergen concentration with BIOCEN products showed a linear dependence in the concentration in the range of 4000 to 100000 UB/mL. Prick tests with diameters ??3 mm suggested a greater proportion for ALK than for DIATER and BIOCEN, particularly with D. pteronyssinus and D. farinae, although no statistical significance was found again. Dust mite extracts produced and standardized by DIATER, ALK-Abelló and BIOCEN are similar with respect to allergenic potency.

Standardization of a real-time based polymerase chain reaction system for the quantification of human papilomavirus of high oncogenic risk

El objetivo de este trabajo fue normalizar e implementar un sistema de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real, para determinar la carga viral de 7 genotipos de papilomavirus humano (PVH) de alto riesgo oncogénico. Se evaluó la especificidad del sistema y se construyeron las curvas estándar para PVH 16 y 18, que se emplearon para la cuantificación de ADN viral en diferentes muestras de pacientes identificados como positivos a PVH, mediante reacción en cadena de la polimerasa (RCP) cualitativa y secuenciación nucleotídica. Se obtuvieron dos curvas estándar para PVH 16 y 18, a partir del ADN genómico de las líneas celulares SiHa y HeLa, las que mostraron una buena correlación lineal ( r = -0,99) y valores bajos de error. El límite inferior de detección a partir del ADN de las líneas celulares fue de hasta 10 copias para ambos genotipos. No se obtuvo reacción cruzada entre los diferentes tipos de PVH ni con otros virus ADN. La reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RCP-TR) normalizada probó ser un sistema simple, rápido, específico y altamente sensible. Además, permitirá desarrollar investigaciones sobre la prevalencia de infección por PVH en Cuba, con vistas a la aplicación de las vacunas que se encuentran disponibles en el mercado internacional, así como la evaluación de otros candidatos vacunales diseñados en el futuro.

The objective of the present study is to standardize a real-time based polymerase chain reaction system in order to detect and quantify 7 high risk human papillomavirus in different clinical samples from patients suspected of this type of infection. The validation of a 5´ exonuclease fluorescent probe real-time PCR assay (TaqMan format) for the detection and quantification of the 7 most frequent HR-HPV types (16, 18, 31, 33, 45, and 58) which account for over 87% of cervical carcinomas world-wide was carried out. Simultaneous PCR reactions are required to detect the designated HPV types. Specificity tests for each HPV type and other DNA viruses were performed. Standard external curve constructions were achieved, which allow determining the number of target DNA copies in the previously HPV tested samples. HPV 16 and 18 standard curves were obtained from purified genomic DNA of SiHa and HeLa cell lines, respectively. The pattern curves were constructed on the basis of each of the resulting standard DNA, which showed good linear correlation (r = -0, 99) and low error values. The lower detection limit was 10 copies for both HPV 16 and 18. No cross reactions between HPV types and other DNA viruses were observed. Real-Time Polymerase Chain Reaction system, standardized for 7 HPV types, proved to be a rapid, specific and highly sensitive system for better diagnosis and follow-up of patients with high grade intraepithelial lesions. In addition, this assay will allow the development of coming researches in relation with the prevalence and pathogenesis of human papillomavirus infections in different samples from Cuban patients.

Immunotherapeotical alternatives for the atherosclerosis treatment

La aterosclerosis representa la primera causa de muerte en el mundo occidental. Aunque existen varias hipótesis que explican su patogénesis, una de las de mayor reconocimiento es la hipótesis autoinmune. La activación del sistema inmunológico frente a diferentes estímulos aterogénicos provoca en el organismo una reacción que puede dañar el endotelio vascular y con ello inducir el desarrollo de una lesión aterogénica. El diseño de nuevas estrategias terapéuticas, entre ellas las vacunas, representan una herramienta con resultados promisorios en el tratamiento de la aterosclerosis. Teniendo en cuenta estos antecedentes, en el presente trabajo se examinó el estado del arte en el campo de la inmunomodulación de esta enfermedad crónica.

Atherosclerosis represents the first cause of death in the western world. Although there are several hypothesis which explain its pathogenesis, one of the most recognized is the autoimmune hypothesis. The activation of the immunological system against different atherogenic stimulus induces a reaction which may affect the vascular endothelium with the consequent atherogenic lesion development. The design of new therapeutic strategies, among them vaccines, represents a tool with promissory result in atherosclerosis treatment. Taking into account these antecedents, in the present work it was examined the state of the art on the immunomodulation of this chronic disease.