Vaccimonitor

Assessment of repeat dose toxicity of Cochleate derived from Neisseria meningitidis proteoliposome in Sprague Dawley rats

The AFCo1 cochleate is a potential novel adjuvant derived from Neisseria meningitidis B proteoliposome. The aim of this study was to assess the safety of AFCo1 by repeated doses in Sprague Dawley rats. Rats were grouped for treatment with AFCo1, placebo formulation or control. Four similar doses of the test substance were instilled every five days. Intranasal dose of 100 µL was used, and the body weight, water and food intakes were monitored as well as the clinical symptoms. Rats were sacrificed at 3, 14 and 28 days after the last inoculation and anatomopathological studies were conducted. Clinical observations were carried out for the study and a number of rats from each group were sacrificed 3 and 14 days after the last dose in order to conduct hematological, hemochemical and anatomopathological studies. Clinical symptoms, food and water intakes, and body weight did not show differences of toxicological relevance. The histological changes found were mild and similar in the three groups. AFCo1 is potentially safe by nasal route for human use as evidenced by the absence of local and systemic signs of toxicity in Sprague Dawley rats.

El cocleato AFCo1, derivado de un proteoliposoma de Neisseria meningitidis B, es un nuevo y potente adyuvante vacunal. En el presente trabajo se evaluó la seguridad del AFCo1 mediante un estudio de dosis repetida en ratas Sprague Dawley. Los animales se agruparon en: tratados con AFCo1, placebo y control. Se les administraron cuatro dosis de 100 µL durante 5 días por vía intranasal. Se monitoreo el peso corporal, consumo de agua y alimento y los síntomas clínicos; así como estudios hematológicos y bioquímicos. Las ratas se sacrificaron a los 3, 14 y 28 días después de la última inoculación y se les realizó, además, pruebas anatomopatológicas. Los síntomas clínicos, el consumo de agua y alimento y el peso corporal no mostraron diferencias de relevancia toxicológica. Los cambios histológicos encontrados fueron leves y con frecuencias similares en los tres grupos. Por lo que se concluyó que el adyuvante AFCo1 nasal es potencialmente no tóxico para uso en humanos, por la ausencia de signos locales y sistémicos de toxicidad en las ratas Sprague Dawley.

Phenotypic and molecular characterization of Leptospira clinical isolations from the Republic of Nicaragua

En este trabajo se caracterizaron ocho cepas de Leptospira, aisladas de casos clínicos en Nicaragua mediante métodos fenotípicos y moleculares, las cuales no mostraron crecimiento a 13 °C ni en medio suplementado con 8-azaguanina (2,25 mg/mL). Se observó la conversión a formas esféricas a los 60 min de estar expuestas en un medio suplementado con NaCl 1M. Para la caracterización molecular de los aislamientos se realizó la reacción en cadena de la polimerasa (RCP) de genes conservados con cepas patógenas, cuyos productos génicos confieren virulencia al microorganismo ( ompL1 y lipL32 ). Los resultados de este ensayo demostraron la presencia de bandas de amplificación de los genes ompL1 y lipL32 para los ocho aislamientos, lo que permite afirmar que los microorganismos analizados constituyen cepas de Leptospira patógenas, según los métodos fenotípicos y moleculares recomendados.

This paper present the phenotypic and molecular characterization of eight strains of Leptospira isolated from Nicaragua clinical cases. The phenotypic characterization results showed absence of cell growth on culture media incubated at 13 °C or 8-azaguanina (2.25 mg/mL) supplemented medium. Besides a conversion to spherical shapes at 60 min to exposure NaCl 1M supplemented medium was observed. The molecular characterization was carried out by polymerase chain reaction (PCR) of ompL1 and lipL32 genes stored with pathogen strains. The results demonstrated the presence of amplified bands for both genes on eight strains, which allow to affirm that the analyzed microorganisms are Leptospira pathogens strains.

Prescription and surveillance of the sublingual immunotherapy with standardized domestic mite vaccines in allergology service

Las vacunas terapéuticas para la alergia, también llamadas inmunoterapia alergeno específica, consisten en la administración de dosis progresivamente crecientes del alergeno al cual el individuo está sensibilizado, con el objetivo de alcanzar tolerancia al mismo y disminuir la sintomatología clínica. Se realizó un estudio descriptivo, de corte transversal para determinar la seguridad de las vacunas de ácaros domésticos (VALERGEN), administradas mediante gotas por vía sublingual. Se verificaron sus eventos adversos en pacientes alérgicos, atendidos en el Departamento de Alergología del hospital universitario "Calixto García", que asistieron a cambios de vacunas en el mes de septiembre de 2010, así como la frecuencia de prescripción de vacunas alergénicas en el período enero-septiembre del mismo año. Se incluyeron 130 pacientes con tratamiento de inmunoterapia sublingual con VALERGEN, con una edad media de 19,6 años (rango 1-75); el 40,7% tenía 17 años o menos. El tipo de vacuna más empleada resultó ser la multialergénica (63,8%). El ácaro más empleado fue el Dermatophagoides pteronyssinus, seguido de Blomia tropicalis . El 71,55% de los casos se encontraban en fase de mantenimiento. Se reportaron cuatro eventos adversos (3,1%) locales leves, que no requirieron tratamiento ni cambio de pauta de vacunación. Se comprobó que las vacunas sublinguales VALERGEN son seguras y bien toleradas en los pacientes alérgicos.

Allergen-specific immunotherapy consists of administering gradually increasing doses of the allergen, to which the patient is sensitized, aiming at achieving tolerance to it and decreasing clinical symptoms. The sublingual immunotherapy (SLIT) was introduced as an alternative to subcutaneous route. The objective was to assess the safety of sublingual standardized vaccines of three domestic mite species (VALERGEN, Cuba) and its adverse events in allergic patients from the Calixto García University Hospital in Havana, as well as the frequency of the vaccine prescription. A descriptive and cross sectional study design included 130 patients with treatment of SLIT with VALERGEN (BIOCEN, Cuba), who attended the Allergy Service in the period from January to September 2010. Age distribution: mean 19.6 years (range 1-75), 40.7% was younger than 18 years. The multiallergen vaccine was the most used (63.8%). The most common allergen was D. pteronyssinus followed by B. tropicalis . 71.55% of administered allergens vaccines were in maintenance phase. We found 4 adverse events (3.1% of patients), all local, mild, and not requiring treatment or change of dosing schedule. The VALERGEN vaccines by sublingual route were shown to be safe and well tolerated in Cuban allergic patients.

gD2 coadministered with AFCo1 by intranasal route induces protective immunity against Virus Herpes Simplex type 2 in mice

La infección por virus herpes simple tipo 2 (VHS-2) continúa siendo un problema de salud mundial. Esta infección es transmitida sexualmente y es la principal causa de úlceras genitales. La prevención de esta enfermedad requiere de la utilización de vacunas mucosales, pues las vacunas parenterales no han sido exitosas. Por otra parte, no existen adyuvantes mucosales, por lo que el desarrollo de estos es esencial para la estrategia de estas vacunas. La administración intranasal (IN) de la glicoproteína D del VHS-2 (gD2), coadministrada con el cocleato (AFCo1+gD2) sería igualmente efectiva con la gD2 incluida (AFCo1-gD2). Se inocularon ratones hembras C57BL/6 por la vía IN con gD2, contenida dentro del cocleato, coadministrada con el cocleato o gD2 sola. Se determinaron los niveles de IgG anti gD2 en suero y lavado vaginal, así como las subclases de IgG anti gD2 por ELISA. Se determinó la respuesta linfoproliferativa en células de bazo, el perfil de citoquinas Th1/Th2, los signos de la enfermedad y la protección frente al reto viral. Se observaron altos títulos de IgG e IgG2c anti gD2 en el suero de los animales inoculados con la gD2 y el AFCo1 como adyuvante. No se observaron diferencias significativas (p>0,05) entre los grupos que recibieron AFCo1+gD2 y los que recibieron AFCo1-gD2. Se observó un perfil de citoquinas tipo Th1 y un 100% de sobrevida en los grupos que recibieron el AFCo1 como adyuvante de la gD2, mientras que en el grupo que recibió la gD2 sola no se observó protección. Estos resultados indican que la gD2 puede ser utilizada coadministrada con AFCo1 por vía IN como un potencial candidato vacunal contra VHS-2.

Sexually transmitted infections by Herpes Simplex Virus type 2 (HSV-2) are the leading cause of genital ulcers and a major public health problem worldwide. This requires the use of mucosal vaccines, because parenteral vaccines have not been successful. Presently, there are not mucosal adjuvants, for this reason the development of adjuvants is essential for mucosal vaccine strategies. The intranasal (IN) immunizations using HSV-2 glycoprotein D (gD2), coadministered with cochleate (AFCo1+gD2), would be an efficient candidate for future vaccines against HSV2, similar to the gD2 incorporated into AFCo1(AFCo1-gD2). Female C57Bl/6 mice were inoculated with AFCo1-gD2, AFCo1+gD2 or gD2 alone by IN route. The anti gD2 IgG in sera and vaginal fluids and IgG subclasses were measured by ELISA. The lymphoproliferative response in spleen cells, the Th1/Th2 cytokine profile, the protection and the signs of disease against viral challenge were measured. High titers of IgG and IgG2c subclasses were observed in sera of mice that received the gD2 and AFCo1 as adjuvant. No significant differences (p>0.005) were observed in the animals that received AFCo1+gD2 or AFCo1-gD2. a preferential Th1 cytokine profile and 100% of survival after challenge were observed in both groups that received the gD2 and AFCo1, while no survival was observed in the group that only received the gD2. These results showed that the gD2 can be used coadministered with AFCo1 by IN route as a potential vaccine candidate against HSV-2.

Haemophilus influenzae : Characterization of the isolates recovered from invasive diseases in Cuba from 2008-2011

Con el objetivo de caracterizar los aislamientos de Haemophilus influenzae, responsables de enfermedades invasivas en Cuba, en la etapa posterior a la vacunación se estudió el total de los recuperados durante el período 2008-2011, remitidos al Instituto "Pedro Kourí" desde diferentes provincias del país. La confirmación de especie y determinación de serotipos se realizó atendiendo al requerimiento de los factores V y X y empleando el método de aglutinación en lámina, respectivamente. Se definieron los biotipos a través de las pruebas de indol, urea y ornitina; se determinó la concentración mínima inhibitoria (CMI) mediante la prueba del elipsómetro para la ampicilina, la ceftriaxona, el cloranfenicol y la rifampicina. Para 23 aislamientos se corroboró la identificación como H. influenzae : 21 fueron serotipables y 2 no tipables (HNT). El 90,4% de los serotipables fueron serotipo b y se detectaron dos serotipos a. Nueve aislamientos de H. influenzae b pertenecieron al biotipo I y los aislamientos, serotipo a y HNT, al biotipo II. En una cepa se demostró producción de la enzima ß-lactamasa y resistencia para la ampicilina y el cloranfenicol, con valores de CMI= 8 y 12 µg/mL, respectivamente. Se puso en evidencia que a pesar de la disminución de la incidencia de la enfermedad invasiva por Hib, este serotipo aún constituye el más frecuente y se alerta sobre la necesidad de una vigilancia sostenida que permita detectar fallos vacunales. La susceptibilidad antimicrobiana demostrada para este período pudiera considerarse como un beneficio adicional de la introducción de la vacunación en Cuba.

In order to characterize Haemophilus influenzae isolates responsible for invasive disease (ID) in Cuba during the post-vaccination period, we studied the total isolates recovered from 2008 to 2011 and submitted to the Institute «Pedro Kouri» from different provinces. Specie confirmation and serotype determination were performed by considering the factors V and X requirements and using the agglutination plate method, respectively. Biotypes were defined by testing indol, urea and ornithine. The minimum inhibitory concentration (MIC) was assessed by ellipsometer test for ampicillin, ceftriaxone, chloramphenicol and rifampicin. Twenty three isolates were identified as H. influenzae; of them, 21 were serotyped and two non-typable (HNT). Near ninety percent of the serotyped isolates were classified as serotype b and only 2 as serotype a. Nine isolates of H. influenzae b belonged to biotype I while serotype a and HNT isolates corresponded to biotype II. In one strain it was demonstrated production of ß -lactamase enzyme as well as resistance to ampicillin (MIC=8 µg/mL) and chloramphenicol (MIC=12 µg/mL). It was evident that despite the decline in the incidence of Hib ID, this serotype is still the most common in Cuba, and highlights the need for ongoing monitoring to detect vaccine failures. The antimicrobial susceptibility observed during this period might be considered as an additional benefit of vaccination.

Validation of the LAL method for the determination of bacterial endotoxins in injectable sodium heparin

Dentro del control de la calidad de los productos farmacéuticos, la United State Pharmacopeia establece la cuantificación de endotoxinas bacterianas por el método de lisado de amebocito de Limulus , como monitor de pirógenos para más del 90% de los parenterales que regula. Este método se aplicó de forma específica a vacunas bacterianas y virales, agentes antineoplásicos, radiofármacos y parenterales que se producen en la industria médico farmacéutica. En el presente trabajo se mostró la metodología a seguir para realizar la validación de la técnica de determinación de endotoxinas bacterianas por el método de gelificación. Para ello se confirmó la sensibilidad del reactivo utilizado (0,03125 UE/mL) y la validez de los analistas para poder obtener resultados confiables. Las pruebas preliminares para el producto ensayado, heparina sódica 5000 UI/mL, demostraron que este producto no potencia ni inhibe la reacción del reactivo. Se escogió la dilución de trabajo (1/128) para la validación del método. De esta manera quedaron estandarizadas las condiciones para la validación del test de lisado de amebocito de Limulus por gelificación en este producto parenteral, método que se hace extensivo a la determinación de endotoxinas bacterianas en vacunas y en otros medicamentos por vía de administración intravenosa.

The United States Pharmacopoeia, in the quality control of pharmaceutical products, establishes the quantification of bacterial endotoxins by the Limulus amebocyte lysate method as pyrogen monitor for more than 90% of the parenteral Solutions it regulates. This method was specifically applied to bacterial and viral vaccines, antineoplastic agents, radiopharmaceutical and parenteral drugs produced in the pharmaceutical medical industry. This paper shows the methodology followed to perform the validation of the technique for the determination of bacterial endotoxins by the method of gelation. For that reason, the sensitivity of the reagent used (0.03125 EU / mL) and the validity of the analysts to obtain reliable results were confirmed. Preliminary tests for the assay product sodium Heparin 5000 IU/mL showed that this product does not enhance or inhibit the reaction of the reagent. A working dilution (1/128) was chosen to validate the method. Thus, the conditions for the validation of test Limulus amebocyte lysate gelation were standardized in this parenteral product. Therefore, the method is extended to the determination of bacterial endotoxins in vaccines and other medicines which administration route is intravenous.

Bactericide serum assay to assess the immune response induced by meningococcal and cholera vaccines

La susceptibilidad al sistema bactericida del suero es una característica de las bacterias gramnegativas. Existen muchos ejemplos en las enterobacterias, de hecho cualquier procariote que presente una membrana lipídica pudiera ser potencialmente susceptible a la lisis mediada por anticuerpos dependiente del complemento, aunque existen cepas que muestran resistencia al sistema bacteriolítico. Estas son frecuentemente aisladas como agente causal de infecciones que involucran daño tisular, lo que indica que la resistencia a la actividad lítica del suero es determinante de la virulencia en algunas infecciones debido a bacterias gramnegativas. Para algunas enfermedades causadas por estas bacterias la vacunación constituye la medida de prevención más efectiva, como es el caso del cólera y la enfermedad meningocócica. La inducción de anticuerpos con capacidad lítica, producto de la vacunación, se considera en muchos casos el mejor correlato con la protección y se estima que individuos que desarrollan anticuerpos bactericidas, ya sea por una infección clínica o por la vacunación, están protegidos contra la infección o la enfermedad. De ahí que el ensayo bactericida del suero sea la prueba de oro para evaluar la eficacia de muchas vacunas. Ensayos clínicos llevados a cabo con vacunas contra los serogrupos A, B, C, Y y W 135 de N. meningitidis y con vacunas de cólera, ya sean vivas atenuadas o inactivadas, han demostrado la inducción de anticuerpos con actividad lítica que luego han correlacionado con la protección en ensayos de eficacia o frente a un reto experimental. Por lo que resulta imprescindible la estandarización y validación de estos ensayos para su empleo como criterio de inmunogenicidad en el desarrollo de estas vacunas.

The susceptibility to the serum bactericidal system is a characteristic of gram-negative bacteria. There are many well-documented instances of enterobacterial susceptibility to complement. In fact, any prokaryote that presents a lipid bilayer membrane would appear to be potentially susceptible to complement killing, although there are gram-negative bacteria that appear refractory to the serum bactericidal and bacteriolytic systems; these resistant strains are frequently isolated as causative agents of infections involving tissue damage. It has therefore been suggested that serum resistance is an important determinant of virulence in at least some infections due to gram-negative bacteria. In some diseases caused for these bacteria, vaccination constitutes the more effective way, such as cholera and meningococci meningitis. Antibodies with lytic capacity induced for vaccination protect against infection and/or disease, that is why serum bactericidal assay is the gold test for evaluating the efficacy of many vaccines. Clinical trials conducted with N. meningitidis A, B, C, Y and W135 vaccines and with live attenuated or inactivated cholera vaccines have shown the induction of antibodies with lytic activity which have correlated with protection in efficacy trials or in a experimental challenge, for that reason is important the standardization and validation of these assays for its application as immunogenicity rule in the vaccines development.