Vaccimonitor

VA-MENGOC-BC^®: 25 years of massive application

Adjuvant activity of peanut, cottonseed and rice oils on cellular and humoral response

The potentiality of the usage of vegetable oils such as soybean, corn, olive, sesame, murici seed, rapeseed, linseed, rice and cashew nuts as adjuvant of the humoral and cellular immune response has been recently shown. In the present work, besides of evaluating the adjuvant action of peanut, cottonseed and rice oils on humoral and cellular immune responses against ovalbumin (OVA) we also evaluated the protective immune response induced by Leishmania antigens. The peanut oil significantly increased the synthesis of anti-ovalbumin antibodies in the primary response, but it did not favor cellular response. Concerning mice immunized with L. amazonensis antigens emulsified with peanut oil exacerbated skin lesions and lymph node parasite load what suggests stimulation of the Th2 immune response and down regulation of Th1 response. The cottonseed oil was shown to have adjuvant effect to the humoral response, stimulating a secondary response and also favored the delayed-type hypersensitivity (DTH) response to OVA. The rice oil stimulated a strong DTH reaction to OVA and enhanced the synthesis of antibodies after the third dose. Mice immunized with L. amazonensis antigens emulsified with rice oil or cotton seed oil were protected from developing skin lesions and lymph node parasite load. These results emphasize the interest and importance of the vegetable oils as tools in different procedures of immunization and their differential role in relation to the other adjuvant under usage

Recientemente se ha demostrado el uso potencial de los aceites vegetales, tales como los de soya, maíz, oliva, ajonjolí, colza, nabina, linaza, arroz y anacardo, como adyuvantes de las respuestas inmune celular y humoral. En este trabajo, además de evaluar la acción adyuvante de los aceites de maní, de la semilla de algodón y del arroz en la respuesta inmune celular y humoral contra la ovalbúmina (OVA), también se evaluó la respuesta inmune protectora inducida por los antígenos de Leishmania. El aceite de maní incrementó significativamente la síntesis de los anticuerpos anti-ovalbúmina en la respuesta primaria, pero no favoreció la respuesta celular. Con respecto a los ratones inmunizados con los antígenos de L. amazonensis emulsionados con aceite de maní, este exacerbó las lesiones de la piel y la carga parasitaria en los nódulos linfáticos, lo que sugiere la estimulación de la respuesta inmune Th2 y la baja regulación de la respuesta Th1. El aceite de semilla de algodón mostró tener efecto adyuvante para la respuesta humoral, al estimular la respuesta secundaria y favorecer también la respuesta de hipersensibilidad demorada (DTH) a OVA. El aceite de arroz estimuló una fuerte reacción DTH a OVA y amplió la síntesis de los anticuerpos luego de la tercera dosis. Los ratones inmunizados con los antígenos de L. amazonensis emulsionados con aceite de arroz o de semilla de algodón recibieron protección contra el desarrollo de lesiones de la piel y la carga parasitaria de los nódulos linfáticos. Estos resultados destacan el interés y la importancia de los aceites vegetales como herramientas en los diferentes procedimientos de inmunización y su papel diferencial en comparación con otros adyuvantes en uso.

Safety of Racotumomab in the treatment of patients with non-small cell lung cancer

En Cuba, el cáncer de pulmón es el segundo en incidencia y el primero en mortalidad. Por tanto, se necesita identificar nuevas opciones terapéuticas. Los enfoques inmunológicos son interesantes debido al potencial de actividad sin las toxicidades de la quimioterapia convencional. El Centro de Inmunología Molecular generó una vacuna denominada Racotumomab, la cual actúa sobre el carcinoma pulmonar, aumentando la apoptosis tumoral y disminuyendo la cantidad de vasos tumorales. Para evaluar su seguridad se realizó un estudio de acceso expandido, multicéntrico y abierto en 86 pacientes con cáncer de pulmón de células no pequeñas. La dosis administrada fue de 1 mg/mL por vía intradérmica. Las cinco primeras dosis se administraron cada 14 días y las restantes 10 cada 28 días, hasta completar el año de tratamiento. Las reinmunizaciones durante el seguimiento fueron cada 28 días. Se analizó la aparición de los eventos adversos y se clasificaron acorde con los criterios de la CTC v4.02. Estos se reportaron en 58 pacientes (67,4%), para un total de 215 eventos; el más frecuente fue el ardor en el sitio de la inyección, 32 (14,9%). El uso de la vacuna en los pacientes estudiados evidenció buen nivel de seguridad y tolerancia.

In Cuba, lung cancer ranks second in incidence and first in mortality. Therefore, it is necessary to identify new therapeutical options. Immunological approaches are interesting because of the potential activity without the toxicities of conventional chemotherapy. The Center of Molecular Immunology developed a vaccine called Racotumomab; it acts on the lung carcinoma inducing an increase in tumor apoptosis and a decrease in the number of tumor vessels. A expanded access, multicenter, open study was conducted in 86 patients with non-small cell lung cancer in order to assess its safety. The administered dose was 1 mg/mL intradermically. The first 5 doses were administered every 14 days and the remaining 10 every 28 days until completing the treatment. The follow-up re immunizations were every 28 days. The occurrence of adverse events (AE) was analyzed and they were classified according to CTC v4.02 criteria. Adverse events were reported by 58 patients (67.4%), making a total of 215 events. burning at the injection site was the most frequently reported event, 32 (14.9%). The use of the vaccine in the patients under study showed good safety and tolerance.

**Characterization of capsular polysaccharide immunogenic conjugates from Streptococcus pneumoniae serotype 14**

Las vacunas conjugadas que consisten en polisacáridos bacterianos unidos a través de un enlace covalente a una proteína portadora, han tenido un gran impacto en los esquemas de vacunación infantil, disminuyendo de forma dramática la incidencia de infecciones bacterianas. En el caso de Streptococcus pneumoniae, a pesar de que se han descrito más de 90 serotipos basados en la estructura de las cápsulas polisacarídicas y que al menos 23 tienen una importancia clínica demostrada, solo un número limitado de siete, o más recientemente 10 y 13, están incluidocaracterísticas estructurales por las que el polisacárido es reconocido inmunológicamente. Este trabajo implementó un procedimiento de conjugacs en las vacunas conjugadas licenciadas. Por otra parte, la necesidad creciente de estas vacunas en el mundo requiere la incorporación de nuevos productores que se enfrentan a una elevada complejidad tecnológica, pues en todo el procedimiento de conjugación no se pueden afectar las ión para el polisacárido de la cápsula de Streptococcus pneumoniae serotipo 14. El procedimiento comprendió la fragmentación, oxidación peryódica y posterior conjugación del polisacárido a anatoxina tetánica o diftérica. Cada intermedio fue caracterizado por métodos físico-químicos. En todas las reacciones se obtuvieron rendimientos superiores al 50%. Los conjugados generaron altos títulos de anticuerpos específicos de tipo IgG y memoria inmunológica. Se concluyó que el procedimiento permitió la obtención de conjugados inmunogénicos de serotipo 14.

Conjugate vaccines consisting of bacterial polysaccharides linked through a covalent bond to a carrier protein have a major impact on childhood immunization schemes which have dramatically decrease the incidence of bacterial infections. In the case of Streptococcus pneumoniae more than 90 serotypes have been reported, based on the structure of the polysaccharide capsules and at least 23 of them have demonstrated clinical importance. A limited number of 7 or more recently 10 and 13 are included in licensed conjugate vaccines. On the other hand, the increasing need for these vaccines worldwide requires the incorporation of new manufacturers who are facing highly complex technology since the entire conjugation process can not affect the structural features for which the polysaccharide is immunologically recognized. Our paper provides a conjugation procedure for the capsular polysaccharide of Streptococcus pneumoniae serotype 14. The process includes fragmentation, peryodic oxidation and subsequent conjugation to tetanus toxoid or diphtheria toxoid to the polysaccharide, each intermediate was characterized by physico-chemical methods. Yields higher than 50% were obtained in all reactions. The conjugates generated high titers of IgG specific antibodies and immunological memory. In conclusion, the procedure allows immunogenic conjugates of serotype 14.

Aspects to consider for the introduction of a new manufacturing process in a multiproduct certified plant

En este trabajo se aplicó la identificación de riesgos para la introducción de un nuevo proceso de fabricación que usa Saccharomyces cerevisiae como célula huésped en una planta multiproducto certificada, donde se fabrican productos intermedios provenientes de Escherichia coli y se proponen acciones para su control. Para ello se aplicó el análisis de riesgos de la calidad, con apoyo de herramientas y técnicas básicas de observación, trabajo en equipo, tormenta de ideas y las 6 M. Como resultado se identificaron los riesgos asociados a las diferentes operaciones del proceso, a la instalación y al procedimiento de cambio de campaña. Todas las acciones de control de riesgos se implementaron con una misma prioridad para la introducción de este nuevo proceso como parte del cumplimiento de las Buenas Prácticas de Fabricación.

In this study, a risk identification method is applied for introducing a new manufacturing process using Saccharomyces cerevisiae as host cell, in a certified multiproduct plant, where intermediate products are manufactured using Escherichia coli, in addition risk control actions are proposed. The quality risk analysis was applied, with the support of basic tools and techniques as observation, teamwork, brainstorming and 6M analysis. As a result, the risks associated to the process, to the facility and to the changeover were identified. All risk control actions were implemented with the same priority during the introduction of this new process as part of Good Manufacturing Practices compliance.

Adsorption chromatography to purify Spacer disaccharide of Active Pharmaceutical Ingredient of QuimiHib^® vaccine

En este trabajo se estudiaron las condiciones de la cromatografía de adsorción en Silicagel 60 para la purificación del disacárido espaciador (DSE), componente del ingrediente farmacéutico activo de la vacuna QuimiHib®. Para ello se realizó un desescalado a una escala analítica que representó el 1,8% del proceso industrial. Se logró reproducibilidad en términos de calidad de empaque, pureza y recobrado entre ambas escalas. Se determinó que la capacidad dinámica de carga de la resina Silicagel 60 por el DSE fuera de aproximadamente 125±0,2 mg/mL de resina empacada; 3,4 veces superior al proceso base. El perfil de elución que se obtuvo indicó la posibilidad de colectar una fracción única en el rango 195±2 y 260±2 min. Si se mantiene un correcto empaque de la resina cromatográfica, determinado por un factor de asimetría entre 0,8 y 1,2 se garantiza un recobrado de 58,9±4,5% y una pureza equivalente a la del patrón de referencia en el análisis por cromatografía de capa delgada. El ajuste de la condición de adsorción incrementa la productividad de la operación en 3,5 veces, indicando que la propuesta es económicamente factible.

In this paper we study the conditions of adsorption chromatography on Silica gel 60 for purification of Spacer disaccharide a component of Active Pharmaceutical Ingredient (API) of QuimiHib® vaccine. For that, we made a scale down on an analytical scale that represented at 1.8% of industrial process, indicating reproducibility between two procedures in terms of packing efficiency, purity and recovery. Dynamic binding capacity of the resin Silicagel 60 by the DSE was roughly 125±0.2 mg /mL, 3.4 times the base process. The elution profile obtained, showed the possibility of collecting a unique fraction at range 195±2 and 260±2 minutes, if it is maintained a proper packing of the chromatography resin determined by asymmetry factor from 0.8 to 1.2, which ensures a recovery of 58.9±4.5% and high purity analyzed by Thin Layer Chromatography. Adjusting the adsorption conditions increases the productivity of chromatographic operation up to 3.5 fold, indicating that it is feasible in economic terms

Nuclear Magnetic Resonance: new applications in the quantification and assessment of polysaccharide-based vaccine intermediates

La resonancia magnética nuclear (RMN) constituye una fuerte alternativa para estudios estructurales, evaluación de identidad y cuantificación de ingredientes farmacéuticos activos (IFA). En las dos últimas décadas la aplicación de la resonancia magnética nuclear cuantitativa (RMNc) tuvo un creciente impacto en la cuantificación de compuestos, fundamentalmente orgánicos. Varios resultados obtenidos mediante la RMNc han ido creando un lugar para la técnica en la industria biofarmacéutica. La RMNc incluye experimentos de RMN con algunos parámetros modificados, con el objetivo de obtener señales cuantificables. Basada en algunos de los reportes más relevantes, la presente revisión aborda algunas de las aplicaciones de la RMN para vacunas basadas en polisacáridos o glicoproteínas. El trabajo hace especial énfasis en detallar algunos aspectos que caracterizan la RMNc, así como sus aplicaciones.

Nuclear Magnetic Resonance has become the choice for structural studies, identity assays and simultaneous quantification of active pharmaceutical ingredient of different polysaccharide-based vaccine. In the last two decades, the application of quantitative Nuclear Magnetic Resonance had an increasing impact to support several quantification necessities. The technique involves experiments with several modified parameters in order to obtain spectra with quantifiable signals. The present review is supported by some recent relevant reports and it discusses several applications of NMR in carbohydrate-based vaccines. Moreover, it emphasizes and describes several parameters and applications of quantitative Nuclear Magnetic Resonance.

**Prediction of consensus linear B-cell epitopes in Plasmodium falciparum 3D7**

En la actualidad se estima que la mitad de la población humana puede contraer malaria y se carece de una vacuna en producción contra dicho flagelo, aunque las esperanzas están centradas en una llamada RTS,S/AS02. Es por ello que se debe continuar desarrollando metodologías computacionales que permitan el diseño racional de vacunas potencialmente efectivas. En ese sentido se propuso una nueva metodología computacional que predijera posibles epítopos consensos de células B lineales, presentes en el genoma del Plasmodium falciparum 3D7, a partir de la información disponible en la base de datos IEDB. Se descartaron aquellos que aparecían repetidos y se reagruparon en bloques, de acuerdo con los resultados obtenidos mediante los programas Redundancy y Nomad, respectivamente. Por último, se predijo su posible carácter antigénico con ayuda de los programas BepiPred, BcePred y BCPred. Por los resultados que se obtuvieron con esta metodología se destacaron tres secuencias potencialmente antigénicas de las 45 predichas, pero es imposible asegurar cuál de ellas es la más antigénica sin evidencia experimental.

Today it is estimated that half world population can be infected by malaria and there is not an available vaccine, however, there is hope with vaccine RTS,S/AS02. For this reason, we must continue to develop computer methodologies and strategies that will allow the rational design of potentially effective vaccines. We propose a new computational approach to predict linear B-cell epitopes from the whole genome sequencing of Plasmodium falciparum 3D7, obtained from IEDB database. Those that were repeated were discarded and were grouped into blocks according to the obtained results by Redundancy and Nomad programs. Subsequently, the possible antigenic character was predicted using the programs BepiPred, BcePred and BCPred. Three potentially antigenic sequences out of the 45 predicted were obtained with this methodology, but it is not possible to say which one the most antigenic without experimental evidence.

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