Vaccimonitor

Report of bibliometric variables of VacciMonitor journal in 2013

Structural Characterization of Granulocyte Colony Stimulating Factor, Hebervital

El factor estimulador de colonias de granulocitos (G-CSF) es un medicamento que pertenece a un grupo de proteínas hematopoyéticas. Se obtiene por vía recombinante en el Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología, de Cuba, desde el año 2000 y es comercializado como Hebervital. Se indica a pacientes con neoplasias afectados de neutropenia febril, con tratamiento mielosupresor, seguido de trasplante de la médula ósea, entre otros. Induce alteraciones en la actividad biológica de los neutrófilos maduros que pudieran aumentar la defensa del huésped en respuesta a patógenos, como bacterias y hongos. En este trabajo se realizó un análisis específico del G-CSF para determinar su pureza y caracterización; además, se demostró su posible comparabilidad con productos de otras firmas comerciales. El patrón de bandas de las muestras en la electroforesis, así como el porcentaje del área y los perfiles cromatográficos bajo la curva en la cromatografía líquida de alta resolución, fueron similares entre los diferentes productos. La digestión enzimática y la separación proteolítica de los péptidos generaron mapas peptídicos reproducibles y de elevada similitud con el Neupogen.

Granulocyte Colony Stimulating Factor (G-CSF) is member of haemopoietic proteins group used in medication. It is obtained by recombination technique since 2000 at the Center for Genetic Engineering and Biotechnology of Cuba, and it is commercialized as Hebervital. It is recommended for patients with malignant tumors, affected by febrile neutropenia, bone marrow suppressor treatment followed by bone marrow transplant, among others. It induces disorders in the biological activity of the mature neutrophils that could increase host defense in response to pathogens like bacterial and fungal infections. The objective of this project was to perform a specific analysis to determine G-CSF purity and characterization and to demonstrate its comparability with other commercial products. The sample bands pattern in SDS-PAGE, the area percentage and the chromatographic profiles under the curves, in reverse phase high performance liquid chromatographic were similar. The enzymatic digestion and separation by proteolysis of peptides generated reproduces peptide's maps of great similarity with Neupogen.

Validation of an ELISA for the quantification of protein impurities from host strain on the active principle of the Cuban recombinant vaccine against hepatitis B

Se validó un inmunoensayo tipo sandwich de doble anticuerpo para cuantificar las impurezas proteicas de la cepa hospedera que pueden estar presentes en el principio activo de la vacuna cubana contra la hepatitis B. Se prepararon los reactivos biológicos empleados en el ELISA. Las proteínas de la cepa hospedera se obtuvieron bajo las mismas condiciones que el proceso de producción de la proteína recombinante hasta un paso de semipurificación o purificación primaria. Los antisueros dirigidos contra las proteínas de la cepa hospedera se generaron en conejos por un proceso de inmunización en cascada. Para la validación se analizaron los siguientes parámetros: linealidad, límite de detección y cuantificación, exactitud, rango y precisión. El ensayo establecido resultó específico, con una exactitud entre 89% y 109% para todos los tampones estudiados; se demostró un ajuste parabólico y un rango de trabajo entre 0,63 y 1,25 ng/mL, la repetibilidad y la precisión intermedia mostraron coeficientes de variación inferiores al 10 y 20% respectivamente.

A double sandwich immunoassay was validated to quantify antibody protein impurities from host strain that can be present in the active pharmaceutical ingredient of Cuban vaccine against hepatitis B. All biological reagents used in the ELISA were prepared and characterized. The proteins from the host strain were obtained under the same conditions as the production process of the recombinant protein until a purification or primary semipurification step. The antisera addressed against those proteins were generated in rabbits by an immunization process in cascade. For validation the parameters analyzed were: linearity, limit of detection and quantification, accuracy, range and precision. The established assay was specific, and the calculated accuracy was from 89% to 109% for all studied buffers. A parabolic fit and a working range from 0.63 to 1.25 ng/mL were demonstrated. The repeatability and intermediate precision showed variation coefficients below 10% and 20% respectively.

Detection of Mycoplasma genitalium by Polymerase Chain Reaction in urogenital samples from sexually-active Cuban individuals

El diagnóstico de las infecciones por Mycoplasma genitalium mediante métodos bacteriológicos tradicionales resulta laborioso y poco práctico. Es por ello que los métodos moleculares basados en la amplificación del ADN se utilizan con fines diagnósticos de las infecciones causadas por este microorganismo. En Cuba se han realizado pocos estudios sobre la presencia de M. genitalium en el tracto urogenital. El objetivo de la presente investigación fue detectar M. genitalium en individuos cubanos sexualmente activos mediante la implementación de métodos de PCR simple. Se implementaron dos PCR simples para la detección de fragmentos de 427 pb del gen ARN ribosomal 16S y 281 pb del gen de la adhesina celular MgPa de M. genitalium, que se evaluaron en muestras de exudado endocervical provenientes de 300 mujeres con sintomatología urogenital y muestras de orina de 49 hombres asintomáticos sexualmente activos. Se logró un límite de detección de la PCR del ARNr 16S de aproximadamente 5 copias de genoma por reacción, mientras que para la PCR MgPa se logró la amplificación de solo 50 copias de genoma por reacción. El 3% (10/300) de los exudados endocervicales y el 24,5% (12/49) de las muestras de orina de hombres asintomáticos resultaron positivas mediante ambas PCR. El mayor porcentaje de muestras positivas correspondió a las muestras de orina provenientes de hombres asintomáticos, que resultó superior a lo esperado. El presente trabajo permitirá realizar estudios futuros de caracterización genética y antigénica de las cepas de Mycoplasma genitalium circulantes en Cuba, útiles para conformar un inmunógeno vacunal.

The diagnosis of Mycoplasma genitalium infections by bacteriological culture is not feasible due to slow growth and that is time-consuming. Consequently, molecular tools using DNA amplification are widely used in the infection diagnosis. There are few reports in Cuba on infections caused by this pathogen. The aim of this study was to detect M. genitalium in clinical samples from sexually active individuals, by two PCR assays. PCR-methods were implemented and evaluated on clinical samples for the detection of M. genitalium using fragments of the 16S rRNA (427 pb) and mgpB adhesion genes (281 pb) as targets. The PCR assays were used on 300 endocervical swabs from female patients with urogenital symptoms and on 49 first-void-urine samples from asymptomatic males. The limit of detection of 16S PCR and MgPa PCR-assays were of 5 and 50 geq/µL, respectively. For the analyzed clinical samples, 3% (10/300) of female swabs and 24.5% (12/49) of urine samples from asymptomatic men were positive for M. genitalium by the two PCR assays. In contrast to the anticipated results, male urine samples had the highest positive rate. Two PCR assays for the detection of M. genitalium were implemented and successfully used on clinical samples, with the unexpected finding of a high positive rate in specimens from asymptomatic men. The current work will allow performing future studies of genetic and antigenic characterization of the circulating Mycoplasma genitalium-strains in Cuba, useful as vaccine immunogen.

Immunepotentiators for the Aquaculture

La acuicultura es una de las actividades económicas de mayor crecimiento para la producción de alimentos. Uno de sus principales retos es la obtención de grandes volúmenes de producción con la mayor calidad posible. Esto conlleva a una reducción de la aplicación de antibióticos y productos quimioterapéuticos. Una de las estrategias más prometedoras es la aplicación de inmunopotenciadores, principalmente en los cultivos intensivos. El objetivo de este trabajo fue revisar los principales inmunopotenciadores, así como las tendencias y retos de su uso mundial. Se resumen las particularidades moleculares y funcionales de los mismos y se hace énfasis en los más estudiados: levamisol, ß-glucanos, lipopolisacárido, vitamina C, extractos de plantas y hormonas. Todos estos compuestos de naturaleza heterogénea inciden mayoritariamente en los componentes de la inmunidad innata de los peces, fortaleciendo y potenciando la resistencia a enfermedades; adicionalmente algunos de ellos tienen funciones antiestrés y favorecen su crecimiento. Se concluye que los inmunopotenciadores constituyen una estrategia viable para reducir las pérdidas por problemas sanitarios en el sector de la acuicultura; pero aún quedan por solucionar aspectos como la vía de administración y la etapa de inmunización adecuada para cada especie y tipo de cultivo.

Aquaculture represents one of the fastestgrowing animal foodproducing sectors worldwide. One of the main challenges is to obtain highvolume production with the highest possible quality, this leads to reduce the use of antibiotics and chemotherapeutics. A promising solution to these problems is the application of immunepotentiatiors mainly in intensive farming. This article aims to review the main immunepotentiators, as well as the trends and challenges of global use of them. It summarizes the main molecular and functional characteristics with emphasis on those most studied such as levamisole, ß-glucans, lipopolysaccharide, vitamin C, plant extracts and hormones. All these heterogeneous compounds, mostly affect the innate immunity of fish, strengthening and enhancing disease resistance and some of them additionally have antistress effect and promote fish growth. We conclude that immunepotentiators are a viable strategy to reduce losses for health problems in aquaculture field, however, aspects such as administration route and appropriate immunization phase for each species remains to be solved.

Recommendations for the prevention and treatment of incomplete data in clinical assays

Múltiples investigaciones en estadística aplicada evidencian un amplio desarrollo teórico y diversidad de perspectivas para abordar el problema de los datos incompletos en los ensayos clínicos y se han establecido pautas a seguir para mitigar los potenciales sesgos que provocan cuando se analizan los datos. En este artículo se presentan de forma resumida algunas recomendaciones para abordar la prevención y el tratamiento de datos incompletos en los ensayos clínicos; se tomó como referencia fundamental un informe emitido en el 2010 por expertos internacionales y las disposiciones de las entidades regulatorias. Existe consenso en que la estrategia principal es la prevención desde el diseño y conducción del estudio. También se establecen recomendaciones para el tratamiento en el momento del análisis, donde se enfatiza en la necesidad de utilizar toda información disponible de todos los sujetos aleatorizados y aplicar métodos estadísticos más robustos a las ausencias e incluir siempre la evaluación de la sensibilidad de los resultados. En el 2011 se publicó una primera guía metodológica para datos incompletos adoptada por la Agencia Europea de Medicamentos (EMA), donde se dispone de la información necesaria, desde la perspectiva regulatoria, para avalar la calidad de los resultados en ensayos clínicos confirmatorios. El problema de tener datos incompletos es a veces inevitable y no debe ser obviado, por lo que es necesario aplicar estrategias desde el diseño para su prevención y análisis más adecuado. La calidad en la presentación de los resultados es indispensable para evitar conclusiones e interpretaciones sesgadas del estudio.

Several researches in applied statistics show a broad theoretical development and diversity of perspectives to address the problem of incomplete data in clinical trials. Recent publications show consensus and establish guidelines to mitigate potential biases that causes this problem when data are analyzed. This article will summarize some of the key recommendations to better address the prevention and treatment of incomplete data in clinical trials presented in a report by international experts in 2010 and also referred to the provisions of the regulatory bodies with emphasis on the most recent (2011). There is consensus that the main strategy is to prevent possible incomplete data from the design and conduct of the study. Recommendations are also set to the time of analysis, which basically emphasizes the need of using any available information of all randomized subjects, and implement more sensitive strategies for the inference, that always includes assessing the sensitivity of the results. In 2011 was published a methodological guide -adopted by the European Medicines Agency (EMA)- which provides necessary information from the regulatory perspective to ensure the quality of the results in confirmatory clinical trials. The problem of incomplete data is sometimes unavoidable and should not be ignored, it is necessary to apply appropriate design and analysis strategies. The quality in the presenting results is essential, to avoid biased conclusions and interpretations of the study.