Vaccimonitor

**Development of a PCR assay to detect cholera toxin genes (ctxAB) in preparations of attenuated live vaccine candidate against cholera CV638**

El candidato vacunal vivo oral atenuado CV638 se produce siguiendo los criterios de las guías de Buenas Prácticas de Producción específicas para vacunas. El ingrediente activo de este candidato vacunal es la cepa atenuada genéticamente Vibrio cholerae 638; desarrollada por investigadores del Centro Nacional de Investigaciones Científicas de Cuba (CNIC), a partir de la cepa toxigénica de V. cholerae serogrupo O1, biotipo El Tor C7258, (Perú, 1991), mediante la remoción de los genes que codifican la producción de la toxina del cólera (ctxAB). Dado que la cepa 638 carece de estos genes en su genoma, la presencia de ctxAB en las preparaciones vacunales estaría dada por una contaminación con una cepa toxigénica de V. cholerae. El presente estudio tuvo como objetivo desarrollar un PCR específico para detectar los genes ctxAB a partir de ADN aislado de preparaciones del candidato vacunal CV638 contaminado artificialmente con V. cholerae toxigénico. La sensibilidad del ensayo de PCR empleando como molde ADN de la cepa toxigénica fue de 1 picogramo (pg) de ADN genómico por reacción, correspondiente a ~200 copias del genoma de la bacteria. La sensibilidad del método de PCR para detectar cepas toxigénicas en preparaciones vacunales de la cepa 638, contaminadas con una cepa toxigénica fue de ~7 x 10³ unidades formadoras de colonia (UFC) de la cepa toxigénica por dosis del candidato vacunal CV638. Este método, una vez validado, pudiera emplearse en el control de la calidad de la producción del candidato vacunal vivo CV638.

The live oral vaccine candidate against cholera CV638 is produced under Good Manufacturing Practices. The active ingredient of this vaccine candidate is the genetically modified strain Vibrio cholerae 638; developed by researchers at the National Center of Scientific Research, from the strain V. cholerae serogroup O1 biotype El Tor C7258 (Peru, 1991), by removing cholera toxin genes (ctxAB). Since the strain 638 lacks these genes in its genome, the presence of ctxAB in vaccine preparations would be given by a contamination with a toxigenic V. cholerae strain. The present study aimed at designing a specific PCR to detect ctxAB genes in DNA isolated from preparations of the vaccine candidate CV638, artificially contaminated with toxigenic V. cholerae strain. Sensitivity of the optimized PCR assay was 1 pg of genomic DNA from toxigenic strain of V. cholerae C7258, corresponding to ~200 genomic copies. The sensitivity of the PCR method for detecting toxigenic strains in CV638 vaccine preparations contaminated with a toxigenic strain was ~7 x 10³ colony forming units of the toxigenic strain per dose of CV638. Once validated, this method could be used in the quality control of the production of the live vaccine candidate CV638.

Detection by real time RT-PCR of the vaccine virus in pigs immunized with the Cuban vaccine against classical swine fever

La peste porcina clásica (PPC) es una enfermedad viral infectocontagiosa, producida por un virus ARN del género Pestivirus, familia Flaviviridae. En la actualidad es una de las causas de pérdidas económicas en la industria porcina a nivel mundial. En su prevención se han utilizado vacunas vivas atenuadas, empleando la cepa China lapinizada. La Reacción en Cadena de la Polimerasa Reverso Transcriptasa (RT-PCR) ha sido uno de los métodos más sensibles aplicado en Medicina Veterinaria para la detección de virus ARN. En el caso del virus de la PPC es muy útil porque el ácido nucleico se puede detectar desde muy temprano en la infección y en periodos más largos en aquellos animales que se recuperan. El objetivo de este estudio fue aplicar la técnica de RT-PCR en tiempo real para la detección de la cepa China lapinizada de la vacuna cubana contra la PPC. Las tonsilas de los cerdos vacunados fueron el órgano más positivo en la detección del ARN del virus vacunal. Los resultados obtenidos evidenciaron una interferencia del virus vacunal en el diagnóstico, siendo el día 12 posvacunación en el que se obtiene una emisión umbral de fluorescencia más bajo.

Classical swine fever (CSF) is a highly contagious viral disease caused by a RNA virus that belongs to the genus Pestivirus within the family Flaviviridae. CSF represents one of the leading worldwide threats to the pig industry. Life attenuated vaccines using lapinized Chinese strain have been used to prevent the disease. The reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) is one of the more sensitive methods that have been used in veterinary medicine for RNA virus detection. In the case of CSF virus is very useful, because the nucleic acid could be detected in early stages of the infection and during a long period in recovered animals. The aim of this study was to apply real time RT-PCR assay for the detection of lapinized Chinese strain from the Cuban vaccine strain against CSF. Tonsils of vaccinated pigs were the most positive organ in the detection of RNA vaccinal virus. Interference of the vaccinal virus in diagnosis was proved. The lower threshold cycle values were seen at 12 postvaccination day.

Effectiveness of VA-MENGOC-BC^® vaccine against heterologous strains of meningococcus B

La efectividad de las vacunas de vesículas de membrana externa de Neisseria meningitidis serogrupo B ha sido cuestionada por algunos investigadores, limitándola a la cepa vacunal. VA-MENGOC-BC® es una vacuna antimeningocócica basada en dicha tecnología. Presentamos un metaanálisis de estudios realizados en diferentes contextos epidemiológicos, evaluando su efectividad contra cepas heterólogas de meningococo B en varios grupos de edades. Se demuestra que la vacuna es efectiva contra cepas homólogas, heterólogas y de diferentes complejos clonales.

Vaccines based on outer membrane vesicles of Neisseria meningitidis serogroup B strains have been questioned by some researchers, who limit its effectiveness to the vaccine strain. VA-MENGOC-BC® is a meningococcal vaccine based on this technology. A meta-analysis of independent studies in different epidemiological contexts is used to assess the clinical effectiveness of the vaccine against heterologous serogroup B strains in several age groups. In this paper we provide evidence supporting its effectiveness against homologous and heterologous strains from different clonal complexes.

Prevalence of sensitization to airborne allergens in patients with allergic rhinitis in southern Bolivia

La rinitis alérgica es la enfermedad crónica más común, de elevado impacto sanitario y de importancia creciente en la mayor parte del mundo, los aeroalérgenos de ácaros, hongos y pólenes constituyen los desencadenantes más frecuentes de alergia respiratoria, por lo que se realizó un estudio de prevalencia para comprobar la sensibilización cutánea a los mismos, utilizando la prueba de Prick en pacientes con rinitis alérgica en el sur de Bolivia. El estudio fue descriptivo en el universo de pacientes derivados al servicio de Alergia en la ciudad de Tarija. Se incluyeron 350 pacientes con diagnóstico de rinitis alérgica entre 11 y 60 años y se realizaron 18 pruebas cutáneas a cada uno, asignados por orden consecutivo entre junio de 2013 y julio de 2015. Como instrumentos de recogida de información se utilizaron la historia clínica, registro de pacientes atendidos y una encuesta confeccionada y validada en nuestra institución. Las variables de estudio fueron edad, sexo y sensibilización cutánea hacia Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae, Blomia tropicalis, Alternaria alternata, Aspergillus fumigatus, Cladosporium herbarum, Penicillium notatum, Acer negundo, Betula verrucosa, Cupressus arizonica, Eucalyptus globulus, Salix fragilis, Cynodon dactylon, Lolium perenne, Poa pratensis, Amaranthus retroflexus, Ambrosia trifida y Chenopodium album. La prueba de Prick se consideró positiva cuando los habones fueron ≥3 mm. Se realizaron 6300 pruebas cutáneas, la mayor prevalencia de sensibilización fue para los ácaros Dermatophagoides pteronyssinus (90%) y Dermatophagoides farinae (66%), seguido del hongo Alternaria alternata (23%) y pólenes Chenopodium álbum (20%), Amaranthus retroflexus (19%) y Salix fragilis (21%). Se concluye que los ácaros Dermatophagoides pteronyssinus y Dermatophagoides farinae constituyeron la causa de mayor sensibilización cutánea en pacientes con rinitis alérgica.

Allergic rhinitis is the most common chronic disease, high health impact and increasing importance in most of the world, the airborne allergens of mites, molds and pollens are the most common triggers of respiratory allergy, so a prevalence study was performed to check skin sensitization using Prick test in patients with allergic rhinitis in southern Bolivia. The study was descriptive in the universe of patients referred to the allergy service in the city of Tarija. 350 patients with a diagnosis of allergic rhinitis between 11-60 years olds were studied, and 18 skin tests each assigned in consecutive order between June 2013 and July 2015 were conducted. As tools for collecting medical history information, registration of patients and a survey compiled and validated in our institution were used. The study variables were: age, sex and skin sensitization to Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae, Blomia tropicalis, Alternaria alternata, Aspergillus fumigatus, Cladosporium herbarum, Penicillium notatum, Acer negundo, Betula verrucosa, Cupressus arizonica, Eucalyptus globulus, Salix fragilis, Cynodon dactylon, Lolium perenne, Poa pratensis, Amaranthus retroflexus, Ambrosia trifida y Chenopodium album. Prick test was considered positive when the hives were ≥3 mm. 6300 Skin tests were performed, with the highest prevalence of sensitization to mites Dermatophagoides pteronyssinus (90%) and Dermatophagoides farinae (66%), followed by the fungus Alternaria alternata (23%) and Chenopodium album pollen (20%), Amaranthus retroflexus (19%) and Salix fragilis (21%). It is concluded that the mites Dermatophagoides pteronyssinus and Dermatophagoides farinae were the cause of most skin sensitization in patients with allergic rhinitis.

Immune adjuvant activity of the olive, soybean and corn oils

In the last half of the century, a large amount of substances has been used as immune adjuvant. The immune adjuvant effect of olive, soybean and corn oils in Swiss mice immunized with ovalbumin (OVA) plus aluminum hydroxide or emulsified in Marcol, soybean, olive or corn oils was evaluated through the OVA-specific antibodies determined by ELISA and Passive Cutaneous Anaphylaxis. In this work the comparison of the intensity of the immune response was established by the Bayesian analysis. The adjuvant effect of the vegetable oils was shown to be more effective than aluminium hydroxide. Regarding to OVA-specific IgE synthesis, olive oil had the slowest adjuvant effect of the three vegetable oils. Accordingly, olive oil was the most convenient among the vegetable oils to be used as immune adjuvant, since it stimulated a higher production of OVA-specific Ig and lower levels of anti-OVA IgE.

En la última mitad del siglo; una gran cantidad de sustancias han sido utilizadas como inmunoadyuvantes. El efecto inmunoadyuvante de los aceites de oliva, de soja y maíz en ratones suizos inmunizados con ovoalbúmina (OVA), además de hidróxido de aluminio o emulsionados en Marcol se evaluó a través del método de Elisa utilizando anticuerpos-OVA específicos y mediante la prueba de anafilaxis pasiva cutánea. En el presente trabajo, se estableció la intensidad de la respuesta inmune de los distintos tratamientos mediante análisis Bayesiano. El efecto adyuvante de los aceites vegetales ha demostrado ser más eficaz que el hidróxido de aluminio. El aceite de oliva tuvo el efecto adyuvante más lento de los tres aceites vegetales en cuanto a la síntesis de IgE OVA-específicos. Por consiguiente, el aceite de oliva fue el más conveniente entre los aceites vegetales para ser utilizado como inmunoadyuvante, ya que estimuló una mayor producción de IgG OVA-específicos y niveles más bajos de IgE anti-OVA.