Revista de Salud Animal

LA LEPTOSPIROSIS CANINA Y SU PROBLEMÁTICA EN MÉXICO

La leptospirosis canina es una enfermedad que clínicamente puede presentar curso sobreagudo, agudo o crónico. Es de difícil diagnóstico por la gran variedad de manifestaciones clínicas, ya que no involucra necesariamente ictericia, se manifiesta principalmente en forma subclínica, por lo que son más frecuentes los hallazgos serológicos, que la manifestación de la enfermedad. En casos crónicos, puede ocasionar la muerte por insuficiencia renal y hepática. Los animales recuperados quedan en estado de portador en el que diseminan a la bacteria a través de la orina, representando un factor de riesgo y un importante eslabón en la cadena epidemiológica de la leptospirosis humana. La situación de la leptospirosis canina en México es poco conocida y es conveniente hacer una revisión de esta.

Leptospirosis in dogs is a disease that can have subclinical, acute or chronic presentation. Its diagnosis is difficult due to the multiple clinical aspects and not always jaundice is present. Its symptoms can be sub-clinical; therefore, the serological findings are more frequent than the symptoms of the disease. When the disease shows signs, it can cause death due to hepatic disorders and nephritis. The dogs that survive are carriers of the bacteria through their urine which makes them very risky and an important link in the epidemic chain of leptospirosis in man. The current situation of canine leptospirosis in Mexico is not well known so it is convenient to make a literature review of it.

PROGRAMAS DE ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD EN LA PRODUCCION DE ANIMALES DE LABORATORIO

Para reducir al mínimo los riesgos de contaminación en la producción de animales de laboratorio, es necesario el empleo de instalaciones adecuadas, procedimientos de trabajo estandarizados, procesos de producción validados, programas de monitoreo de salud y de calidad; así como sistemas de documentación que aseguren un proceso basado en las guías de Buenas Prácticas de Producción y de Laboratorio. En este trabajo se describen los Programas de Aseguramiento de la Calidad para la certificación y aceptación de los animales de laboratorio en el CENPALAB (Centro Nacional para la Producción de Animales de Laboratorio), dentro de los cuales tenemos: el Programa de Limpieza y Desinfección, el Programa de Monitoreo Ambiental, el Programa de Monitoreo al Personal y el Programa de Monitoreo Microbiológico y Genético a los animales y Microbiológico y Bromatológico a los alimentos concentrados. El establecimiento de estos programas, nos permite contar con un documento útil en nuestro sistema de Aseguramiento de la Calidad para las producciones de animales de laboratorios, los cuales son ampliamente utilizados en la Biomedicina y la Industria Médico-Farmacéutica, garantizándose además la veracidad, confiabilidad y reproducibilidad de los datos en los experimentos donde se emplean estos biomodelos experimentales.

In order to reduce consistently the risks of contamination in the production of laboratory animals, the use of adequate facilities, standardized work procedures, validated production processes, quality assurance programs and documentation systems assuring a process based on the Good Manufacturing and Laboratory Practices guidelines is necessary. In this work, the Quality Assurance Programs for the certification and acceptance of laboratory animals at CENPALAB (National Center for the Breeding of Laboratory Animals): Cleaning and Desinfection Program, Environmental Monitoring Program, Staff Monitoring Program and Microbiological and Genetic Monitoring to the animals and Microbiological and Bromatological to the concentrated foods are described. The establishment of these programs allows to have useful document for the Quality Assurance System in the center.

ESTABLECIMIENTO Y DESARROLLO DE LA COLECCIÓN DE CULTIVOS DEL CENSA

El uso de los microorganismos ha sido clave en el enfrentamiento y solución de los graves problemas de la humanidad. Para su estudio es necesario que sean viables, y si se demuestra su importancia deberán ser mantenidos y conservados en una colección de cultivos microbianos para garantizar su disponibilidad. Para el establecimiento y operación de la colección del Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA) se utilizaron los requisitos de la World Federation Collection Culture (WFCC, 1999), de la ISO 9001:2000 y de las Regulaciones de Buenas Prácticas de Fabricación y Laboratorios, así como las disposiciones estatales para el manejo del material biológico. Su establecimiento permitió el desarrollo de aspectos como son: Documentación, Identificación, Autenticidad, Pureza, Viabilidad y Estabilidad de las cepas, Mantenimiento de los equipos, Procedimientos para el suministro e intercambio de cepas, Seguridad a largo plazo, Control de las condiciones ambientales, Auditorías, Cumplimiento de las legislaciones, Personal, Entrenamiento y Bioseguridad. Se brindan recomendaciones prácticas para los responsables o curadores de colecciones de microorganismos y para el establecimiento de un Sistema de Calidad que asegure el manejo del material biológico que participa en los procesos de investigación, producción y servicios que brindan las instituciones científicas o productoras del país.

The use of the microorganisms has been a key when facing and solving serious problems in humanity. This study involves the use of living cultures, and if their importance is proved, they should be maintained and preserved in a collection. For the establishment and operation of such collection at the National Center for Animal and Plant Health (CENSA), the requirements of the World Federation Culture Collection (WFCC, 1999) ISO 9001:2000, the Regulations of the Good Manufacture and Laboratory Practices, as well as the government dispositions for the management of biological agents were used. Such establishment allowed the development of aspects like: documentation, identification, authenticity, purity, viability and stability of strains; maintenance of equipment; procedures supplying and exchanging strains; long term security; control of the environmental conditions; audits; fulfilment of the legislations; staff; training and biosafety. Practical recommendations have been offered for the people in charge of collections of microorganisms and for the establishment of a Quality System that assures the management of biological agents which participate in the research, production and service processes offered by the scientific institution of the country.

ESTABILIDAD EN CONDICIONES DRÁSTICAS DEL CIKRON-H

Se evaluó el producto CIKRON-H y su componente activo mayoritario en condiciones drásticas, a través del perfil cromatográfico e indicadores de taninos y compuestos fenólicos polimerizados. Se empleó un cromatógrafo líquido de alta resolución (CLAR) con una columna de fase reversa C18 y metanol al 60% como fase móvil. Los indicadores que mejor reflejaron la degradación del componente activo mayoritario en el producto CIKRON-H fueron los taninos totales, el porcentaje de compuestos fenólicos polimerizados (CFP) y su perfil cromatográfico (área de CFP). El compuesto mayoritario parcialmente purificado mostró un mayor efecto a la oxidación que el producto en su totalidad, incrementando su coloración. El peróxido de hidrógeno constituyó el mejor modelo para simular una oxidación en el producto en condiciones drásticas.

CIKRON-H and its major component were evaluated under stress conditions through the chromatographic profile, tannin indicators and polymerized polyphenolic compounds. Liquid chromatography with a reverse phase colum (C18) and methanol at 60% as mobile phase was used. The indicators that better reflect the degradation of the major component in CIKRON-H were total tannins, percentage of polymerized polyphenolic compounds (PPC) and chromatographic profile. The major compound partially purified showed a higher effect to oxidation than the product, increasing its coloration. Hydrogen peroxide constituted the best model to simulate an oxidation in the product under stress conditions.

ESTABILIDAD EN VIDA DE ESTANTE DEL CIKRON-H

Se evaluó la estabilidad del producto CIKRON-H a tiempo real durante 12 meses en dos presentaciones (frascos de polietileno de alta densidad con capacidad para 30 y 500 mL). Los indicadores de pH, tanino totales (TT), porcentaje de compuesto fenólicos polimerizados (CFP), perfil cromatográfico del CFP y halo de inhibición del producto no mostraron diferencias significativas (p<0.05) entre dichas presentaciones a tiempo cero. Los indicadores de porcentaje de CFP, perfil cromatográfico del CFP y halo de inhibición del producto fueron lo que más variaron en el tiempo, mostrando coeficiente de regresión significativos (P<0.00001) a partir del análisis de regresión múltiple. El estudio in vivo para la evaluación de la actividad antimicrobiana y el efecto acelerador en el proceso de curación de heridas de los lotes de CIKRON-H en su presentación de 30 mL a los 12 meses presentaron un comportamiento similar con un lote de CIKRON-H fresco (dos meses de producidos). El período de validez del producto CIKRON-H se estableció en 12 meses.

The stability of the product CIKRON-H was evaluated in two presentations at real time during 12 months (flasks of polyethylene of high density with capacity for 30 and 500 mL). The indicators: pH, total tannins (TT), percentage of polymerized polyphenolic compounds (PPC), chromatographic profile of PPC and inhibition halo of the product did not show significant differences (p<0.05) between these presentations at zero time. The indicators that most varied in the time were: percentage and chromatographic profile of PPC and inhibition halo of the product, showing a significant regression coefficient (p<0.00001) from multiple regression analysis. The in vivo study for the evaluation of the antimicrobial activity and the accelerating effect in the cure process of skin wounds of the CIKRON-H lots at 12 months presented a similar behavior with a lot of new CIKRON-H (two months old). The validity period of the product CIKRON-H was established in 12 months.

PASO DE LA MOLÉCULA DE ERITROPOYETINA HUMANA RECOMBINANTE CON BAJO CONTENIDO DE ÁCIDO SIÁLICO AL SISTEMA NERVIOSO CENTRAL POR LA VÍA INTRANASAL EN LOS MODELOS DEL Meriones unguiculatus Y EL PRIMATE NO HUMANO Macaca fascicularis

El objetivo de este estudio fue demostrar la llegada al cerebro de la molécula de eritropoyetina recombinante humana, con bajo contenido en ácidos siálicos, administrada por vía nasal en el gerbo de Mongolia y el primate Macaca fascicularis, así como la seguridad de aplicación nasal en ambas especies. Se emplearon 18 gerbos de Mongolia a los cuales se les administró eritropoyetina marcada con I125. La radioactividad asociada al bulbo olfatorio y al cerebelo fue determinada mediante un contador gamma. En un segundo experimento se administró eritropoyetina por vía nasal en 10 monos. El contenido de eritropoyetina en suero y líquido cefalorraquídeo obtenido por punción lumbar fue determinado por un ELISA que cuantifica la cantidad de molécula presente por mL. Se detectó un 0,8% de la radioactividad aplicada por la vía nasal, en el bulbo olfatorio, 5 min después de la aplicación en el gerbil de Mongolia. En el M. fascicularis se determinó un 0,15% de la dosis aplicada por vía nasal en el líquido cefalorraquídeo lumbar a los 15 min. No se observaron cambios en los parámetros sanguíneos en estas especies. Los resultados sugieren que la vía nasal constituye una alternativa de acceso no invasivo y seguro de la molécula de eritropoyetina humana recombinante al SNC, que puede tener uso como neuroprotector en accidentes cerebrovasculares, que constituyen en la actualidad un problema de salud humana.

Our propose was to demonstrate the brain access of the recombinant human erythropoietin, with low sialic acid content, in the Mongolian gerbil and Macaca fascicularis, as well as the safety of nasal administration in both species. Eighteen Mongolian gerbils received intranasally I125 labelled erythropoietin. Olfactory bulb and cerebellum-associated radioactivity were measured by a gamma counter. In a second experiment, erythropoietin was intranasally administered to 10 monkeys. Erythropoietin content in serum and cerebrospinal fluid obtained by lumbar puncture was determined by an ELISA method. From the intranasal administered radioactivity, a 0,8% was detected in the olfactory bulb at 5 min. In M. fascicularis, a 0,15% of the dose was determined in the cerebrospinal fluid 15 min after the intranasal administration. Treatment related-changes in blood parameters in both species were not observed. Results suggest that nasal route may be an alternative, non invasive and sure mode of access to the brain for the erythropoietin, which can be used as neuroprotector in stroke, a current health problem nowadays.

SEPARACION DE ESPERMATOZOIDES "Y" DE EYACULADO DE CONEJO POR MEDIO DE GRADIENTES DE DENSIDAD DE ALBÚMINA SÉRICA HUMANA

Se obtuvieron 33 eyaculados de conejos Nueva Zelanda blancos para realizar la separación de espermatozoides "Y" por medio de diferentes gradientes de densidad (10, 15 y 20%) de Albúmina Sérica Humana (HSA). Las características evaluadas en fresco fueron: volumen, porcentaje de motilidad progresiva, espermatozoides vivos, morfología normal y concentración, siendo los valores de: 1.19 mL, 82.72%, 90.90%, 89.96% y 773.63X10(6), respectivamente. El semen fue diluido 1:1 en un medio de citrato de sodio y glucosa, para posteriormente colocarlo en tubos que contenían gradientes de concentraciones de albúmina al 20%, 15% y 10%, colocándose a una temperatura de 37.5°C. Una vez realizado lo anterior se retiró cada una de las fracciones con intervalo de 10 minutos, determinando en cada fracción el porcentaje de motilidad, espermatozoides vivos y concentración espermática. Se observó una disminución importante de la motilidad del semen fresco (82.72%) en comparación a la motilidad progresiva de la capa de HSA al 20% que fue de 35.45%. Conforme los espermatozoides alcanzan las capas de mayor densidad el porcentaje de vivos disminuye siendo de 88.39, 86.21 y 83.06% para el 10, 15 y 20% de HSA respectivamente, observándose lo mismo con relación a la concentración espermática (504.24, 376.06 y 211.81X10(6)/ml). De un total de 30 partos después de la inseminación artificial con espermatozoides obtenidos de la capa con 20% de HSA, nacieron 187 gazapos siendo el 72.72% machos y 27.27% hembras. Los resultados indican que mediante gradientes de densidad de HSA es posible realizar la selección de espermatozoides "Y" en semen de conejo y consecuentemente producir más machos.

Thirty-three ejaculations of white New Zealand rabbits were obtained to perform the separation of "Y" spermatozoa by different density gradients (10, 15 and 20%) of Human Serum Albumin (HSA). The characteristics evaluated in fresh semen were: volume, progressive motility percentage, live spermatozoa, normal morphology and concentration, being these values: 1.19 ml, 82.72%, 90.90%, 89.96% and 773.63X10(8) respectively. Semen was diluted 1:1 in a medium of sodium citrate and glucose; then, 1ml of diluted semen was added in tubes containing gradients of albumin at 20%, 15% and 10%, at a temperature of 37.5ºC. Latter, each of the factions was retired within intervals of 10 minutes each, determining motility percentage, live spermatozoa and spermatic concentration in each fraction. An important decrease of fresh semen motility was observed (82.72%) compared to the progressive motility in the HSA layer at 20%, which was 35.45%. As spermatozoa reach the layers of higher density, the percentage of the live ones decreases being 88.39, 86.21 and 83.06 for the 10, 15 and 20% of HAS respectively, observing the same related to spermatic concentration (504.24, 376.06 and 211.81X10(6)/ml). From 30 births after artificial insemination with spermatozoa obtained from the layer with 20% of HSA, 187 rabbits were born being the 72.72% males and 27.27 females. The results indicate that it is possible to perform the selection of "Y" spermatozoa in rabbit semen and consequently produce more males, by the use of density gradients of HSA.

EVALUACIÓN DE DOS ADSORBENTES (MANANO OLIGOSACÁRIDOS Y CLINOPTILOLITA) EN DIETAS DE POLLOS DE ENGORDE CONTAMINADAS CON FUMONISINA B₁

Las fumonisinas son micotoxinas producidas principalmente por Fusarium verticillioides, que contaminan el maíz y el sorgo y, por lo tanto, representan un riesgo para la salud animal. Con el propósito de evaluar la eficiencia de dos adsorbentes de micotoxinas en dietas de pollos de engorde contaminadas experimentalmente con fumonisina B1 (FB1), se seleccionaron 162 pollos de engorde Ross machos de 1 día de edad, de 44 ± 1.2 g de peso promedio, distribuidos aleatoriamente en 9 tratamientos que incluyeron dos adsorbentes (clinoptilolita al 2.5% y manano oligosacáridos al 2.0 %) y dos niveles de FB1 (75 y 100 ppm). Se evaluaron los parámetros productivos y se determinó la actividad enzimática de aspartato aminotransferasa (AST), alanino aminotransferasa (ALT), proteínas totales, esfinganina (SA) y esfingosina (SO) en suero; proteínas totales y glutatión reducido (GSH) en tejido hepático y renal, además del estudio histopatológico. Los datos fueron evaluados por un análisis de varianza (ANOVA) y Tukey. Se observó aumento significativo de la actividad enzimática de AST y en la relación SA/SO en los grupos expuestos a FB1(P<0.05). El estudio histopatológico mostró daño tisular moderado. Se puede concluir que los niveles evaluados de fumonisinas inician el daño a nivel celular, detectado por la alteración de la relación SA/SO, sin que se aprecien efectos toxicológicos severos en órganos, por lo que se reafirma que la relación es un biomarcador sensible de exposición a FB1 en pollos de engorde, mientras que los dos adsorbentes bajo las condiciones experimentales utilizadas, mostraron un leve efecto protector similar sobre los pollos de engorde.

Fumonisins are micotoxins mainly produced by Fusarium verticillioides, which usually contaminate corn and sorghum grains representing a serious animal health risk. Two fumonisin adsorbents were assayed in broiler diets experimentally contaminated with fumonisin B1 (FB1). To this aim, 162 Ross male chicken average weight 44 ± 1.2 g were randomly distributed into 9 groups including two adsorbents (mannan- oligossacharides and clinoptilolite) and two FB1 levels (75 and 100 ppm). The productive parameters, as well as the enzymatic activities of aspartate amine transferase (AST) and alanine amine transferase (ALT), total proteins, sphinganine (SA) and sphingosine (SO) and their ratio (SA/SO) in serum and reduced glutathione (GSH) were tested in hepatic and renal tissues. A parallel histopathologic study was conducted. Statistical analysis was conducted by variance analysis (ANOVA) and Tukey´s test. There was a significant increase of AST enzymatic activity, as well as in SA/SO relationship in the groups exposed to FB1 (p<0.05). The histopathological study showed a moderate tissue damage. It can be concluded that the fumonisin levels evaluated begin the damage at cellular level and detected by the alteration of the ratio SA/SO, without the observation of severe toxicological effects in organs, so it can be confirmed that the ratio is a sensitive biomarker of exhibition to FB1 in chickens, while the two adsorbents under the experimental conditions used, showed a slight similar protective effect on the chickens.

EFICACIA DEL CLOSANTIL 5%® CONTRA ESTRONGÍLIDOS GASTROINTESTINALES DE OVINOS

Con el objetivo de evaluar la eficacia del Closantil 5%® contra estrongílidos gastrointestinales de ovinos, en condiciones de producción, se emplearon 60 reproductoras ovinas Pelibuey con edad promedio de 3,5 años y un peso vivo promedio de 32 kg. que pastaban en un sistema silvopastoril 7 horas diarias y tenían acceso a agua y sales minerales a voluntad. Se empleó un diseño completamente aleatorizado con tres tratamientos (Control n=10, Levamisol 10% n=18 y Closantil 5% n=20). Para la introducción de los animales a cada grupo se tuvo como premisa que el conteo fecal de huevo (CFH) de cada animal fuera superior a los 150 huevos por gramo de heces (HPG). Las muestras de heces se extrajeron directamente del recto de los animales y se introdujeron en bolsas de nailon previamente etiquetadas. Se realizó el conteo fecal de huevos a cada muestra individual a través de la técnica de McMaster modificada. Se realizó una mezcla de heces según los grupos formados y se hicieron cultivos fecales, para determinar los géneros presentes. Se calcularon los intervalos de confianza, así como la media geométrica de los datos. Se consideró un medicamento eficaz cuando la reducción del conteo fecal de huevos (RCFH) fuese superior a 95% y el intervalo de confianza superior a 90. Se obtuvo la reducción del conteo fecal de huevos en los dos grupos tratados, lo que indica que poseen una alta eficacia. En el grupo del Levamisol se observó que Haemonchus spp no fue totalmente removido (0.01% del total del CFH) pudiendo existir determinado nivel de tolerancia a este producto como resultado del uso continuado por muchos años.

In order to evaluate the effectiveness of Closantil 5%® against gastrointestinal strongyles of sheep under production conditions, 60 Pelibuey sheeps with six months of age and body weight average of 24 kg infested by gastrointestinal strongyles were used. A design was used totally randomized with three treatments (Control n=10, Levamisol 10% n=18 and Closantil 5% n=20). For the introduction of the animals to each group, it was taken into account that the egg faecal count (EFC) of each animal was 150 eggs or more per gram of faeces (EPG). The samples of faeces were extracted directly from the rectum of the animals and they were introduced in bags of previously labeled nylon. The faecal count of eggs to each individual sample was determined according the McMaster´s technique modified. A mixture of faeces was carried out according to the groups formed, and faecal cultivations were made to determine the genera present. Confidence intervals as well as the geometric mean of the data were calculated. This was considered an effective medication when the reduction of the faecal count of eggs (RFCE) was higher than 95% and the confidence interval higher than 90 %. There was a reduction of the faecal count of eggs in the groups medicated indicating a high effectiveness. In the group using Levamisol, it was observed that Haemonchus spp was not completely removed (0.01% of the total of the EFC) being able to have certain tolerance level to this product as a result of being used continuously for many years.

Giardia **spp. (DIPLOMONADIDAE) EN PERICOS AUSTRALIANOS (Melopsittacus undulatus ) EN CUBA**

Con el objetivo de investigar la presencia de Giardia spp. en pericos australianos (Melopsittacus undulatus) que presentaban cuadros diarreicos se realizó una pesquisa a 60 aves procedentes de dos aviarios de criadores, a través de análisis seriados de heces, cuyos frotis fueron teñidas con Gram. Los resultados evidenciaron la presencia del agente, en el 8,33 % de las aves, que presentaban síntomas clínicos.

In order to research the presence of Giardia spp. in Australian parakeets (Melopsittacus undulatus) presenting or not diarrheic pictures, a survey was carried out in sixty birds coming from two aviaries of breeders by analysis of feaces samples with Gram tint. The results evidenced the presence of the agent in the 8,33 % of the birds presenting clinical symptoms.

ENCUESTA SEROLÓGICA DE AGENTES INFECCIOSOS, RELACIONADOS CON ABORTOS EN VACAS LECHERAS

Con el objetivo de realizar una pesquisa serológica de agentes infecciosos causantes de abortos en vacas lecheras Holstein en etapa de producción pertenecientes a la Cuenca Lechera de Tizayuca, Hgo., México, se tomaron 261 muestras para análisis por ELISA indirecto para la determinación de anticuerpos contra Neospora caninum, los virus IBR, PI3, RVSB y la prueba de tarjeta para Brucella abortus. Los resultados obtenidos evidencian la circulación de anticuerpos contra Neospora caninum (48.65%), PI3 (44.44%), RVSB (35. 43%), IBR (35.18%) y Brucella abortus (32.18%), que indican la necesidad de establecer programas de prevención y control, así como realizar el diagnóstico diferencial en productos del aborto.

In this study, a serologic research was performed to estimate seropositivity of infectious agents related to abortus in dairy Holstein cows from Tizayuca, Hgo., Mexico. Two hundred sixty one blood samples were obtained from coccygeal vein and centrifuged at 2500 rpm for 5 min. Sera was removed and stored at -20° C until its analysis by ELISA method for antibodies to Neospora caninum, IBR, PI3, RVSB virus, and by card test for Brucella abortus. The results obtained show the high percentage of all five agents, Neospora caninum (48,65%), PI3 (44,44%), RVSB (35. 43%), IBR (35,18%) and Brucella abortus (32,18%) which indicates that an appropiate control programme as much as differential diagnosis in aborted foetuses or placenta should be considered.