Revista de Salud Animal

DIFERENCIAS Y SIMILITUDES ENTRE Anaplasma marginale y Anaplasma phagocytophilum

Anaplasma marginale and A. phagocytophilum are intracellularrickettsial pathogens causing bovine anaplasmosis and human granulocyticanaplasmosis, respectively. Effective vaccines for the control ofanaplasmosis are not available despite attempts using differentapproaches, such as attenuated strains, infected erythrocyteand tick cell-derived purified antigens. Recent reports demonstrated that A. marginale and A. phagocytophilum co-exist in geographic areas, that concurrent infections may occur in ruminants and ticks and that there are similarities and differences at molecular level between both species. The aim of this article is to make a comparison between the main characteristics of Anaplasma marginale and Anaplasma phagocytophilum.

Anaplasma marginale y A. phagocytophilum son rickettsias intracelulares que causan anaplasmosis bovina y anaplasmosis granulocítica humana, respectivamente. Aún no existe una vacuna efectiva para el control de la anaplasmosis, a pesar de haber sido utilizados con este fin cepas atenuadas, eritrocitos infectados y antígenos purificados, derivados de células de garrapatas. Reportes recientes han demostrado que A. marginale y A. phogocytophilum coexisten en áreas geográficas, que infecciones concurrentes pueden ocurrir en rumiantes y garrapatas y que existen similitudes y diferencias a nivel molecular entre estos dos microorganismos. El objetivo de este trabajo es realizar una comparación entre las principales características de A. marginale y A. phagocytophilim.

EL VALOR DE LOS PRODUCTOS NATURALES EN EL DESCUBRIMIENTO DE NUEVOS MEDICAMENTOS

Natural products are the most consistently successful source of drug leads, both historically and currently. Despite this, the use of natural products in industrial drug discovery has fallen out of favour. Natural products are likely to continue to be sources of new commercially viable drug leads because the chemical novelty associated with natural products is higher than that of any other source: this is particularly important when searching for lead molecules against newly discovered targets for which there are no known small molecule leads. Despite the commonly held assumptions, natural products can be a more economical source of chemical diversity compared with synthesis of equivalent numbers of diverse chemicals. Additionally, natural products that are found to be biologically active in assays are generally small molecules with drug-like properties. That is, they are capable of being absorbed and metabolised by the body. Hence, development costs to produce orally active medicines are likely to be much lower than with biotechnological products or with most compounds produced to date from combinatorial chemistry. Since less than 10% of the world's biodiversity is reckoned to have been tested for biological activity, many more useful lead compounds are waiting to be discovered from natural products. The challenge is how to access this natural chemical diversity. Several different strategies are emerging, as will be described in this review.

Los productos naturales son las fuentes más exitosas y consistentes de los fármacos líderes tanto históricamente como en la actualidad. A pesar de esta característica y la novedad química que poseen generalmente superior a fármacos de otros orígenes, el empleo de estos en la industria del descubrimiento de nuevos medicamentos no ha sido favorecido. La novedad química es particularmente importante cuando se investiga en la búsqueda de moléculas líderes que actúan sobre dianas recién descubiertas para las cuales no se dispone de pequeñas moléculas líderes. Contrariamente a los criterios comúnmente establecidos, los productos naturales pueden ser una fuente más económica de diversidad química si se compara con la síntesis de un número equivalente de químicos diversos. Además de lo anteriormente señalado los productos que son activos en los ensayos biológicos son generalmente pequeñas moléculas con propiedades similares a los medicamentos, capaces de ser absorbidos y metabolizados por el organismo. Como consecuencia de lo antes expresado los costos para el desarrollo y producción de medicamentos activos por vía oral son mas bajos que los obtenidos por la vía biotecnológica o productos combinados con compuestos obtenidos hasta la fecha mediante la química combinatoria. Se calcula que menos del 10% de la biodiversidad del mundo se le ha probado la actividad biológica, muchos más compuestos líderes de fuentes naturales están esperando ser descubiertos. El reto está en como acceder a toda esta diversidad química natural. Algunas nuevas estrategias diferentes están emergiendo y de ello trataremos en esta revisión.

EVOLUCIÓN DE LOS PARÁSITOS: CONSIDERACIONES GENERALES

Se realiza un análisis de la bibliografía existente sobre la evolución parasitaria desde los procariotas hasta los eucariotas y las adaptaciones ocurridas para alcanzar el estadio parasitario de los endo y ectoparásitos. Se brindan algunos ejemplos de estudios realizados por los autores.

An analysis of literature is carried out relating parasite evolution, from prokaryotes, their pass to eukaryotes and adaptations occurring in parasites in order to reach the stage of endo and ectoparasites. Some examples of studies made by the authors are provided.

ENTEROPATOGENICIDAD DE UNA CEPA DE CORONAVIRUS BOVINO

Se logró la reproducción experimental de diarreas en terneros recién nacidos privados de calostro, luego de la inoculación por vía oral con la cepa de Coronavirus bovino Guayabal. La aparición de las diarreas se produjo a las 24 horas post-inoculación. En todos los terneros inoculados se observaron lesiones anatomo e histopatológicas compatibles con el cuadro descrito para esta enfermedad. A partir de la instauración de la diarrea hubo eliminación de coronavirus bovino sin hallarse asociación de otro microorganismo patógeno; lo que demostró la enteropatogenicidad de la cepa Guayabal.

The experimental reproduction of diarrheas was achieved in newborn calves deprived from calostrum, after inoculation by oral route of a Bovine coronavirus strain, Guayabal. Diarrheas appeared at 24 hours post-inoculation. In all inoculated calves, anatomo and histopathological lesions which corresponded to the disease were observed in necropsy. Bovine coronavirus was excreted after the establishment of diarrhea and not any other pathogenic microorganism involved was found. This sustained the enteropathogenicity of the Guayabal strain.

PRESENCIA DE ANTICUERPOS AL VIRUS DE LA LEUCOSIS BOVINA EN REBAÑOS PERTENECIENTES A LAS PROVINCIAS OCCIDENTALES Y CENTRALES DE CUBA

El objetivo de este trabajo fue realizar un estudio serológico a varios rebaños bovinos adultos seleccionados por su potencialidad para el comercio. Un total de 597 muestras de suero de bovinos adultos sanos, procedentes de Pinar del Río, La Habana, Ciudad Habana y Villa Clara, fueron analizadas a través de un ELISA indirecto. El 25,9% de las muestras estudiadas resultaron positivas a anticuerpos contra el VLB. Los resultados obtenidos coinciden con reportes anteriores para la región, donde se refiere una alta prevalencia de anticuerpos a este virus. El estudio permitió obtener información sobre la presencia de anticuerpos al VLB en bovinos adultos. Estos resultados sugieren la necesidad de realizar una encuesta para determinar la seroprevalencia en rebaños representativos de todo el país, teniendo en cuenta que el mayor impacto económico de la enfermedad lo tiene en el comercio internacional.

The objective of this work was to carry out a serologic study of several adult bovine herds selected by their potentiality for trade. A total of 597 sera samples of healthy adults, coming from Pinar del Río, Habana, Ciudad Habana and Villa Clara was analyzed by an Indirect ELISA. The 25.9% of the samples studied was positive to antibodies against BLV. The results obtained coincide with previous reports for the region, where there is a high prevalence of antibodies to this virus. The study allowed to obtain information about the presence of antibodies to BLV in adults. The results suggest the necessity of carrying out a survey in order to determine seroprevalence in representative herds of the whole country, keeping in mind that the major economic impact of the disease is on the international trade.

EVALUACIÓN DE LA PRESENCIA DE RESIDUOS DE ANTIBIÓTICOS Y QUIMIOTERAPÉUTICOS EN LECHE EN JALISCO, MÉXICO

Se determinó la frecuencia de aparición de antimicrobianos en leche cruda y pasteurizada del estado de Jalisco durante un año, combinando la prueba del Yogurt como método de selección, seguido del método grupo específico Twin Sensor® para b- lactámicos y tetraciclinas, simultáneamente con la detección de sulfonamidas, nitrofuranos y cloranfenicol por HPLC de fase reversa. Se analizaron mensualmente 10 centros de acopio y el total (12 marcas) de leche pasteurizada comercializada en el estado de Jalisco. De 264 muestras analizadas mediante la prueba del yogurt, 26 resultaron positivas a la presencia de antimicrobianos, equivalente a 9.8 % de contaminación total. En leche pasteurizada se hallaron 20 muestras positivas (13.8%), mientras que en leche cruda el porcentaje fue inferior (5%). La mayor frecuencia de contaminación se presentó en el mes de agosto con 27.3%. De las 20 muestras de leche pasteurizada analizadas, seis contenían b-lactámicos y dos tetraciclinas, mientras que en leche cruda se detectaron 3 muestras positivas a b-lactámicos y 3 a tetraciclinas. El 77% de las muestras detectadas positivas contenía al menos una sulfonamida, siendo la sulfamerazina la más frecuente. Se detectaron niveles de sulfonamidas por encima del LMR en leche cruda como en pasteurizada. No se encontraron muestras positivas a nitrofuranos ni cloranfenicol. Se puede concluir que existe un problema de contaminación con antimicrobianos en la leche consumida en el estado de Jalisco, que viola la Norma vigente.

The objective of this work was to determine the frequency of detection of some of the most frequently antimicrobials in raw and pasteurized milk in Jalisco, Mexico in one year. To this aim, a combination of the yogurt inhibition test as screening method was conducted simultaneously with the confirmation of the positive samples using Twin Sensor for b-lactam and tetracycline antibiotics and High Pressure Liquid Chromatography for sulfonamides, nitrofurans and chloramphenicol. From 264 tested samples, 26 (9.8%) gave positive results to the presence of antimicrobials. The largest percentage corresponded to pasteurized milk, with 20 (13.8 %) positive samples. In raw milk, the positive rate was lower (5%). August showed the overall highest percentage of contamination (27.3 %). From the 20 pasteurized milk samples analyzed, 6 contained b- lactam antibiotics, while only 2 of them were positive to tetracycline. Three raw milk samples were positive to b-lactam and other 3 to tetracycline residues. The 77 % of the positive samples to yogurt test contained at least 1 sulfonamide, identifying sulfamerazine as the most frequent. Both raw and pasteurized milk showed samples above the MRLs for sulfonamides. There were no positive samples to nitrofurans or chloramphenicol. It can be concluded that there is a problem with antimicrobial residues in milk for human consumption in the state of Jalisco, which violates the established Regulations concerning raw milk destined to human consumption.

EFICACIA DE UNA COMBINACIÓN DE SULFADIMIDINA, RIMETROPRIM Y SULFATO DE ATROPINA (HEFROTRIM 120) CONTRA GIARDIASIS EN PERROS

El objetivo de este trabajo fue determinar la eficacia de la combinación de sulfadimidina, trimetroprim y sulfato de atropina (Hefrotrim 120) en tres dosis diferentes para el tratamiento de la infección natural por Giardia spp. en caninos. Se demostró que Hefrotrim 120 a dosis de 1.5 mL/kg de peso vivo y 3ml/kg de peso vivo reduce la expulsión de quistes de Giardia spp. en perros afectados, así como la presentación del síntoma diarrea en los animales tratados, no se encontró diferencia significativa con el metronidazol en cuanto a la eliminación de quistes y no se modificó el cuadro hematológico en perros afectados por Giardia spp. observándose además que no produjo efectos tóxicos e indeseables en los animales tratados.

The objective of this work was to determine the effectiveness of the sulphadimidine, trimetroprim and sulfate of atropine (Hefrotrim 120) combination in three different dosage levels for the treatment of the natural Giardia spp. infection in canine. It was demonstrated that Hefrotrim 120 at a dose of 1. 5 ml/kg live weight and 3ml/kg live weight reduces the elimination of Giardia spp. cysts in affected dogs, as well as the presentation of diarrheas in the treated animals. There were not significant differences with metronidazol concerning the elimination of cysts and the haematological parameter was not modified in dogs affected by Giardia spp. besides it did not produce any toxic or undesirable effects.

**SEGURIDAD DE Pochonia chlamydosporia var. catenulata EN CODORNICES**

To obtain safe quality criteria for biological control agents, many tests have been developed. The aim of these studies was to determine the potentiality of Pochonia chlamydosporia var. catenulata to produce toxicity, infectivity or other organ/tissue damage in quails. Acute and toxicity/pathogenicity studies were performed by oral route. A maximum dose level of 6x10(6) units of the microbial pest control agent per bird treated was used. Mortality or clinical signs were not observed and no effects on body weight, haematology, microbiology and gross or microscopic pathology were detected. Thus clinical, microbiological and pathological results provided evidence for the safety properties of this fungus in quails.

Para obtener los criterios de calidad y seguridad de agentes de control biológico, muchas pruebas han sido desarrolladas. El objetivo de estos estudios fue determinar el potencial de Pochonia chlamydosporia var. catenulata para producir toxicidad / infectivity u otro daño en órganos o tejidos de codornices. Se realizaron estudios agudos y de toxicidad / patogenicidad por vía oral. Se evaluaron dosis máximas de 6x10(6) unidades del agente microbiano para el control de plagas. No se observaron signos clínicos, mortalidad ni ningún efecto sobre el peso corporal, la hematología, la microbiología y la patología macroscópica o microscópica. Por lo tanto, los resultados clínicos, microbiológicos y patológicos proveen evidencias de las propiedades de seguridad de este hongo en las codornices.

EVALUACIÓN POR ULTRASONIDO DEL CRECIMIENTO DE LA VESÍCULA EMBRIONARIA Y EMBRIÓN EN YEGUAS CRIOLLAS DE MEXICO

Con el objetivo de determinar el crecimiento de la vesícula embrionaria y el embrión en los primeros 60 días de gestación en yeguas criollas de México se seleccionaron 20 yeguas de un grupo inicial de 100 . Se les realizó detección de estro por medio del recelado directo con un semental, palpación rectal y examen ultrasonografico confirmativo. Las yeguas se sometieron a monta directa cuando se identificó un folículo de 35 a 45 mm. La evolución del crecimiento de la vesícula embrionaria y del embrión se inició a los 15 días post-servicio hasta los primeros 60 días de gestación por medio de un equipo de ultrasonido Aloka 210 con un transductor lineal de 5.0 MHz. El incremento diario de la vesícula fue de 1.5 mm, entre 15 y 60 días de gestación. Con relación al promedio de la longitud del embrión en los rangos de los días 21-23, 30-32, 39-41, 48-50, 57-60 este fue de 9.5, 17.2, 23.5, 32.0 y 45.9 respectivamente, siendo el promedio de crecimiento por día de 0.93 mm. De acuerdo a los resultados obtenidos en los primeros 60 días de gestación de las yeguas criollas se puede concluir que el crecimiento de ambas estructuras está en el rango reportado para las razas puras de yeguas y ponies, lo que constituye el primer reporte sobre el comportamiento de estos indicadores en la yegua criolla de México.

Twenty mares were selected from an initial group of 100 in order to assess the growth of the embryo gall and the embryo during the first 60 days of gestation. Oestrus detection was carried out by the direct mount with a stallion, rectal palpation and confirmative ultrasonographic test. When a follicle from 35 to 45 mms long was identified, mares were submitted to direct mounting. The monitoring of the embryo gall growth started from 15 days post service up to the first 60 days of gestation by the use an Aloka ultrasound device with a linear transducer of 5.0 MHz. The gall grew with an average of 1.5mm per day, observed from the 15th to 60th days of pregnancy. The growth of the embryo's length on the 21st _ 23rd , 30th _ 32nd , 39th _ 41st , 48th _ 50th , 57th _ 60th days , was 9.5mm, 17.2mm, 23.5mm, 32.0mm, and 45.9mm respectively, resulting in an average of 0.93 mm/day. Taking into account the results obtained on the first 60 days of the Creole mares' gestation, it can be concluded that the growth of both the gall and the embryo is within the range reported on pure race mares and ponies. This is the first report on such parameters for the Mexican Creole mares.

DESARROLLO DE CONTROLES POSITIVOS PARA MÉTODOS MOLECULARES DE DETECCIÓN DE VIRUS DE INFLUENZA AVIAR

La influenza aviar (IA) constituye una gran amenaza para la salud animal y humana por lo que es una prioridad a nivel mundial el fortalecimiento de los sistemas de diagnóstico frente a probables brotes, de ahí la importancia de la detección por métodos moleculares (RT-PCR y Real time RT-PCR) por su elevada rapidez, sensibilidad y especificidad de estos que permiten tomar las medidas de control para evitar la diseminación del agente. En este trabajo se describe la obtención y evaluación de controles positivos de amplificación y cuantificación para RT-PCR y Real time RT-PCR (RRT-PCR) obtenidos a partir del clonaje de dos productos de PCR, uno correspondiente a una región del gen de la hemaglutinina del subtipo H5 y el otro al gen de la matriz (M) para Influenza tipo A. Los cebadores se seleccionaron teniendo en cuenta que los productos de PCR incluyeran las regiones correspondientes de parejas de cebadores de H5 e influenza tipo A reportados tanto por RT-PCR y RRT-PCR de laboratorios de referencia de la OIE/FAO para el diagnóstico de esta enfermedad. De un RNA extraído a partir de la cepa H5N2 (gentilmente donado por el laboratorio de referencia para Influenza aviar de la OIE) se obtuvo el cDNA que se utilizó como molde para la amplificación con los cebadores J3/J1C para H5 y M2/M+25 para Influenza tipo A, recomendados por laboratorios de referencia. Se seleccionó un clón a partir del cual se logró amplificar un fragmento de la talla esperada, que se ha utilizado como control positivo en los ensayos de detección de ácidos nucleicos para el subtipo H5 y para influenza tipo A. Además, el plásmido de H5 se evaluó por RRT-PCR y se obtuvo una curva estándar con un Ct de 15. El control de amplificación obtenido para la detección del subtipo H5 permitirá estandarizar los ensayos y evaluar posibles falsos negativos para la detección rápida de este subtipo en Cuba y en el caso del control positivo de influenza tipo A se podrá usar para cuantificación en ensayos de RRT-PCR.

Avian influenza is a great threat for animal and human health, thus strengthening diagnostic systems against probable outbreaks is a priority all over the world. That is why detection is important by the use of molecular methods (RT-PCR and Real Time RT-PCR) due to their high speed, sensitivity and specificity allowing to take control measures in order to avoid the dissemination of the agent. In this work, the obtaining and evaluation of amplification and quantification positive controls for RT-PCR and Real Time RT-PCR (RRT-PCR) have been described. They were obtained from the cloning of two PCR products, one of them corresponding to a region of the subtype H5 hemagglutinin gene and the other to the matrix gene (M) for Influenza type A. The primers were selected keeping in mind that the PCR products included the corresponding regions of H5 and influenza type A primer couples reported by RT-PCR and RRT-PCR of OIE/ FAO reference laboratories for the diagnosis of this disease. From an RNA extracted from H5N2 strain (kindly donated by the OIE reference laboratory for avian influenza), the cDNA used as a mold for the amplification with the primers J3/J1C for H5 subtype and M2 M+25 for Influenza type A, recommended by reference laboratories, was obtained. A clone from which a fragment of the size expected was amplified, was selected as a positive control in the detection assays of nucleic acids for the H5 subtype and influenza A type. Also, the H5 plasmid was evaluated for RRT-PCR and a standard curve with a Ct of 15 was obtained. The amplification control obtained for H5 subtype detection will allow to standardize assays and evaluate possible negative falses for the quick detection of this subtype in Cuba; and in the case of the positive control for influenza type A it will be used for quantification in RRT-PCR assays.

REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA PARA LA DETECCIÓN DE VIRUS DNA DE LEUCOSIS AVIAR EN VACUNAS USADAS EN LA AVICULTURA

Avian leukosis viruses (ALV) provoke a variety of trasmissible bening and malign tumoral diseases affecting birds. Chickens are affected by six subgroups of ALV designs A, B, C, D, E and J of more recent world dissemination. These viruses are potential contaminants of live vaccines used in poultry. In order to research the presence of DNA from ALVs as contaminants of viral commercial vaccines to be used in poultry, different Marek´s disease vaccines were screened by a reported polymerase chain reaction (PCR) assay designed to detect all subgroups of ALVs. DNA samples extracted from seven vaccines were submitted to PCR using primers for a conserved region of env gene of HPRS-103. ALV sequences were detected in seven samples (100%). The methodology employed proved to be useful for the detection of ALVs as contaminants of imported Marek´s disease vaccines. These data suggest a high occurrence of ALVs in commercial vaccines intended for poultry disease prevention.

Los virus de la leucosis aviar (ALV) provocan una variedad de enfermedades tumorales benignas y malignas transmisibles que afectan a las aves. Los pollos son afectados por seis subgrupos de ALV designados A, B, C, D, E y J de más reciente diseminación mundial. Estos virus son, además, potenciales contaminantes de vacunas vivas usadas en la avicultura. Para investigar la presencia de ADN de ALV como contaminante de vacunas virales comerciales usadas en la avicultura, monitoreamos diferentes vacunas de la enfermedad de Marek en un ensayo reportado por Reacción de la Cadena de la Polimerasa (PCR) diseñado para detectar todos los subgrupos del ALV. Las muestras de ADN extraídas de siete vacunas fueron evaluadas por PCR utilizando cebadores para una región conservada del gen de la envoltura (env) de HPRS-103. Las secuencias del ALV fueron detectadas en las siete muestras (100%). La metodología empleada resultó útil para la detección de ALV como contaminante de vacunas de Marek importadas. Nuestros datos sugieren una elevada presencia de ALV en vacunas comerciales destinadas a la prevención de enfermedad en la avicultura.

LA INVESTIGACIÓN Y LA OBTENCIÓN DE PRODUCTOS TANGIBLES AL SERVICIO DE LA SALUD ANIMAL, VEGETAL Y HUMANA EN EL CENTRO NACIONAL DE SANIDAD AGROPECUARIA (CENSA)

El trabajo ofrece una panorámica del desarrollo y el registro sanitario de los productos más importantes obtenidos por el Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA) en la última década, entre los que se destacan el Stabilak, el Surfacén, los diagnosticadores de uso veterinario y vegetal y otros medicamentos, así como los resultados positivos obtenidos en su aplicación en todo el país en beneficio de la salud humana, animal y vegetal.

The results from a decade of the National Centre for Animal and Plant Health (CENSA), regarding the development and sanitary registers of the most important products, are summarized in this paper. Stabilak, Surfacen, veterinary and plant diagnostics and other drugs, as well as the positive results obtained in their application all over the country for the benefit of the animal, plant and human health, are highlighted.

LA EVOLUCIÓN DEL TRABAJO DE PROPIEDAD INTELECTUAL EN EL CENTRO NACIONAL DE SANIDAD AGROPECUARIA

En este artículo se ofrece un recuento de la trayectoria que ha tenido el trabajo de Propiedad Intelectual en el decursar de los 40 años de existencia del Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria. La Propiedad Intelectual ha ido ganando un lugar cada vez más importante en el apoyo al trabajo científico-investigativo y de innovación tecnológica del CENSA hasta la actualidad, donde se inserta armónicamente, como un sistema de procesos integrados a todo el accionar de la labor institucional.

In this paper, an overview regarding the work of Intellectual Property applied at the National Center of Animal and Plant Health for 40 years is offered. Intellectual Property has played an important role in supporting the scientific research work and the technological innovation up to date, where it is opportunely inserted as a system of integrated processes in all the activities of the institutional environment.

DIAGNÓSTICO DE LA GASTROENTERITIS TRANSMISIBLE DEL CERDO EN CUBA

PROPIEDADES ANTIOXIDANTES DEL EXTRACTO ACUOSO DE Rhizophora mangle L. Y DE SU FRACCIÓN POLIFENÓLICA MAYORITARIA EVALUADAS EN SISTEMAS in vitro e in vivo