Revista de Salud Animal

Metodología diagnóstica para hemoparásitos dentro de la ganadería bovina con énfasis en la reacción en cadena de la polimerasa y su variante múltiple

En la detección de algunos agentes hemáticos que comprometen la salud del ganado bovino, se emplean con mayor frecuencia, métodos parasitológicos directos y serológicos, muchas veces cuestionados dadas sus bajas especificidad y sensibilidad, adicional del tiempo consumido en la realización de los mismos. Por estas razones se discute en la presente reseña, las alternativas diagnósticas PCR y su variante múltiple como sistemas de detección alternativos con alto grado de confiabilidad y ahorros adicionales de tiempo y recursos en el entendimiento de la dinámica de infecciones hemotrópicas.

In the detection of some hematological agents that compromise the health of cattle, direct parasitological and serological methods have been more frequently used, very often questioned for their low specificity and sensitivity, in addition to the time spent in their performance. For these reasons, the diagnostic alternatives PCR and its multiplex variant are discussed in this review as alternative detection systems for their high degree of reliability, in addition to the time and resource savingfor the understanding of the dynamics of haemoparasitic infections.

**Adición de sustancias antioxidantes en los medios de cultivo empleados en la producción in vitro de embriones en mamíferos**

Dentro de los factores que afectan el desarrollo embrionario in vitro se encuentra el estrés oxidativo, que ha sido atenuado con la adición de sustancias antioxidantes a los medios utilizados en la producción in vitro. Las Vitaminas A y E, adicionadas a los medios de maduración y cultivo in vitro favorecieron el desarrollo embrionario, mientras el ácido ascórbico mostró resultados contradictorios. La adición de cisteína a la maduración y fertilización in vitro, los factores de crecimiento al cultivo in vitro y la combinación insulina-transferrina-selenio a la maduración in vitro, favorecieron el desarrollo embrionario. Los microelementos también se han estudiado como antioxidantes; diferentes niveles de Zn2+ añadidos al medio de maduración in vitro incrementaron los porcentajes de división y de blastocistos. Diferentes concentraciones de Fe2+ y Cu2+añadidas al medio de maduración in vitro no afectaron la tasa de maduración, pero su adición al medio de cultivo in vitro aumentó los porcentajes de embriones a 8 células, mórulas y blastocistos. A pesar de las ventajas de la suplementación de los medios utilizados en la producción in vitro con sustancias antioxidantes, en algunas de estas aún existen aspectos por estudiar que deben constituir la ruta crítica de las investigaciones en este campo, tales como, el tiempo de exposición y las concentraciones óptimas de ácido ascórbico, las necesidades de microelementos de los ovocitos y el embrión en sus diferentes estadíos, sus niveles de inclusión adecuados y el efecto de la suplementación combinada de los mismos y su asociación con otras sustancias antioxidantes.

The oxidative stress is among the factors affecting the embryonic development in vitro. It has been attenuated by adding antioxidant substances to the media used for the in vitro embryo production. Vitamins A and E, added to the maturation and in vitro cultivation media, favored the embryo development, while the ascorbic acid showed contradictory results. The addition of cysteine to the in vitro maturation and fertilization, the use of growth factors in the in vitro cultivation, and the combination insulin-transferrin-selenium during in vitro maturation, favored the embryo development. Microelements have also been studied as antioxidants; different levels of Zn2+ added to the maturation medium in vitro increased the percentage of division and of blastocysts. Different concentrations of Fe2+ and Cu2+ added to the maturation medium in vitro did not affect the maturation rate, but their addition to the cultivation medium in vitro increased the percentage of 8 cell embryos, morulae, and blastocysts. Despite the advantages of the supplementation of the media used in the in vitro production of embryos with antioxidant substances, there are aspects to be deeply studied that should constitute the critical route of investigations in this field such as: the exposure time and optimum concentrations of ascorbic acid, the necessities of microelements by the oocyte and the embryo during the different development phases, their appropriate inclusion levels, the effect of their combined supplementation, and their association with other antioxidant substances.

Respuesta humoral a dos inmunógenos contra la peste porcina clásica en condiciones de campo

La peste porcina clásica (PPC) es una enfermedad altamente contagiosa, presente en Cuba de forma endémica, por lo que está sujeta a un programa de control que incluye la vacunación con la vacuna viva atenuada de la cepa China lapinizada (LABIOFAM, S.A.), de probada seguridad y efectividad. Por las bondades que brinda el uso de una vacuna marcadora en fases avanzadas del control, fue aplicado en condiciones de campo un candidato vacunal de subunidad, basado en la glicoproteína E2 (CVE2) del virus de la peste porcina clásica. Se comparó la respuesta serológica inducida por el nuevo candidato vacunal con la inducida por la vacuna cepa China (VCC) en un mismo escenario epidemiológico, una granja porcina con antecedentes de manifestación clínica de la enfermedad y sujeta a vacunación sistemática con la VCC. Se evaluó la respuesta inmune humoral de animales vacunados con ambos productos mediante el ensayo de neutralización ligado a la peroxidasa (NPLA). Para ello se investigaron muestras de sangre obtenidas en diferentes fases del ciclo tecnológico. Se encontró en los sueros evaluados de animales vacunados con el CVE2 que estos mantuvieron altos títulos (³ 1:100) hasta el final de la ceba, a diferencia de los vacunados con la VCC. También se comprobó que animales vacunados con la VCC tuvieron un riesgo relativo 12,2 veces mayor de tener títulos de anticuerpos <1:50 que los vacunados con el CVE2.

Classical Swine Fever is a highly contagious disease; it is endemic in Cuba and under control by a program that includes vaccination with the live attenuated vaccine of the lapinized Chinese strain (LABIOFAM, S.A.,) of proven safety and effectiveness. For the advantages provided by the use of a marker vaccine in advanced stages of the disease control, a subunit vaccine candidate based on virus E2 glycoprotein of the Classical Swine Fever was evaluated in the field. The serological response induced by the new vaccine candidate was compared with that induced by the Chinese strain in the same epidemiological scenario. The selected pig farm had a history of clinical manifestation of the disease and was subjected to a routine vaccination with the Chinese strain. The humoral immune response in animals vaccinated with both products was evaluated by the neutralization peroxidase-linked assay (NPLA). For this purpose, blood samples were examined at different phases of the technological cycle. The sera of the animals tested with the vaccine candidate showed that they remained with high titers (³ 1:100) until the end of the fattening period, differing from those animals vaccinated with the live attenuated vaccine of the Chinese strain. It was also found that the Relative Risk of having antibody titers <1:50 was 12.2 times higher in the animals vaccinated with the Chinese strains than in those vaccinated with the vaccine candidate.

**Pesquisa serológica de Leptospira en roedores silvestres, bovinos, equinos y caninos en el noreste de México**

La estrecha convivencia de las especies domésticas con los roedores silvestres en ecosistemas modificados, hace relevante estudiar la participación de estos en el mantenimiento de distintas serovariedades de Leptospira. El propósito de este trabajo fue determinar la distribución de anticuerpos antileptospira en roedores silvestres y en tres especies domésticas que comparten el mismo hábitat en un área endémica de leptospirosis bovina al NE de México. Se determinaron anticuerpos antileptospira en roedores, bovinos, equinos y caninos. Se analizaron muestras de suero de 24 roedores, 220 bovinos, 24 equinos y 6 caninos con la prueba de aglutinación microscópica empleando 12 serovariedades de Leptospira de las más comunes en México ; excepto los roedores que se evaluaron contra: siete serovariedades (importantes en este grupo de animales). Las especies valoradas reaccionaron contra una o más serovariedades con el porcentaje de seropositividad siguiente: 50% de los roedores reaccionó contra Icterohaemorrhagiae (37%), Grippotyphosa (14%), Tarassovi (12%) y Canicola (4%). El 52% de los bovinos reaccionaron contra Hardjoprajitno cepa H89 (45.5%), Hardjoprajitno (33.1%), Wolffi (28.6%) y Tarassovi (9%).Los equinos presentaron una seropositividad de 70.8% contra Tarassovi (41.6%), Hardjoprajitno (29.1%), Wolffi (12.5%) y Hardjoprajitno cepa H89 (12.5%). El 100% de los caninos resultaron seropositivos, a Icterohaemorrhagiae cepa Palo Alto, Portland-vere cepa Sinaloa y Canicola, mientras que contra Icterohaemorrhagiae sólo 66.6%. Ninguno de los perros mostró positividad a las serovariedades del serogrupo Sejroe probadas. Los análisis estadísticos de Conglomerados, Componentes Principales y Discriminante mostraron que los caninos se agrupan con los equinos y estos con los bovinos, con respecto a Hardjoprajitno, Hardjoprajitno cepa H89 y Tarassovi. Los caninos y los roedores no se relacionaron con las serovariedades asociadas a bovinos.

Close coexistence of domestic species with wild rodents in modified ecosystems makes relevant the effort to study the role that they may play in the maintenance of different Leptospira serovars. The aim of this study was to define the antileptospiral antibodies distribution in wild rodents and three domestic species that share the same habitat in an endemic area of bovine leptospirosis at the NE Mexico. Antileptospiral antibodies were determined in rodents, bovines, equines and dogs. Using the Microscopic agglutination test, antibodies were identified in the sera of 220 bovines, 24 horses, six dogs and 24 wild rodents. Sera from all the species were assayed against the 12 Leptospira serovars most frequent in Mexico, except those from the rodents which were tittered against only seven (important in these animals). All species reacted against one or more serovars, only 52% of the bovines were positives against: Hardjoprajitno strain H89 (45.5%), Hardjoprajitno (33.1%), Wolffi (28.6%) and Tarassovi (9%); 70.8% of equines were positive against: Tarassovi (41.6%), Hardjoprajitno (29.1%), Wolffi (12.5%) and Hardjoprajitno strain H89 (12.5%). All the dogs were positive against Icterohaemorrhagiae strain Palo Alto, Portland-vere strain Sinaloa and Canicola, and only 66.6% were positive against Icterohaemorrhagiae strain RGA. None of the dogs were positive to the Sejroe serogroup serovars. The seropositivity of the rodents was 50% against the following serovars: Grippotyphosa (14%), Tarassovi (12%), Icterohaemorrhagiae (37%), and Canicola (4%) but negative against Pyrogenes, Wolffi and Hardjoprajitno strain H89. Statistical Cluster, Principal Components and Discriminant Analysis grouped dogs with horses and horses with cattle, with respect to the serovars Hardjoprajitno, Hardjoprajitno H89 strain and Tarassovi. Dogs and rodents were not grouped with the valued serovars associated with cattle.

Evaluación de aflatoxina M₁ en leche orgánica producida en Tecpatán, Chiapas, México

Con la finalidad de demostrar la inocuidad de la leche orgánica producida en Tecpatán, Chiapas, México, se determinó la presencia de aflatoxina M1 por cromatografía líquido de alta resolución (HPLC). Los resultados mostraron que el 23.3 % de las muestras sobrepasó el límite máximo de residuo propuesto por la regulación mexicana de 0.5 µg kg-1, mientras el 62.7% sobrepasaba el valor de 0.05 µg kg-1 de la UE. Los valores medios de aflatoxina M1 encontrados en la leche durante las épocas de seca y lluvia fueron de 3.53± 0.55 µg kg-¹ y 0.17 ± 0.13 µg kg-1 respectivamente. Los resultados corroboran que los productos orgánicos pueden estar expuestos a la presencia de contaminantes cuando no se cumplen las buenas prácticas agrícolas, afectando su inocuidad.

In order to demonstrate the safety of organic milk produced in Tecpatan, Chiapas, Mexico, we investigated the presence of aflatoxin M1 by high performance liquid chromatography (HPLC). The results showed that 23.3% of the samples exceeded the maximum residue limit proposed by the Mexican regulation of 0.5 mg kg-1, while 62.7% exceeded the value of 0.05 mg kg-1 of the EU. The mean values of aflatoxin M1 in milk during the dry and rainy seasons were 3.53 ± 0.55 µg kg-1 and 0.17 ± 0.13 µg kg-1 respectively. The results confirmed that organic products can be exposed to residues and contaminants when not in compliance with good agricultural practices, affecting their safety.

Desarrollo y validación de un método de cromatografía líquida de alta resolución para la determinación y cuantificación de clenbuterol en hígado de bovino

Se desarrolló una metodología para la determinación de clenbuterol en hígado de bovino por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). La extracción se realizó con acetonitrilo e isopropanol. El extracto se analizó empleando una columna de fase reversa C18, un detector UV a 214 nm y una mezcla de NaH2PO4 0.05M (pH 3.0)/acetonitrilo (85:15, v/v) como fase móvil. El tiempo de retención para el clenbuterol fue 24.82 min. La recta de mejor ajuste de la curva de calibración del estándar fue y = 1340.8563x - 1539.7319, con un r²=0.9997 (p<0.05). Los límites de detección y de cuantificación mostraron valores de 0.9 y 1.8 ng/mL, respectivamente. Las medias de recuperación de clenbuterol fueron de 111.7, 82.0 y 84.8%, para tres niveles de concentración preparados (26.2, 104.9 y 209.8 ng/mL, respectivamente), los cuales se consideran adecuados para el método propuesto. La precisión del método se midió por la desviación estándar relativa, el cual fue inferior a 4.74%. Se analizaron 17 muestras de hígado comprados en mercados públicos, de los cuales 11 de ellos presentaron concentraciones de clenbuterol superiores al LMR con una mediana de 17.68ppb. Este método es exacto y confiable debido a su límite de detección, grado de separación cromatográfica, precisión, exactitud, sensibilidad y estabilidad.

A methodology for the determination of clenbuterol in bovine liver by high performance liquid chromatography was developed. Extraction was performed with acetonitrile and isopropanol. The extract was analyzed using a reverse phase column C18, a UV detection at 214 nm, and NaH2PO4 0.05M (pH 3.0)/acetonitrile (85:15, v/v) as the mobile phase. The retention time for clenbuterol was 24.82 min. The best-fit line of the standard calibration curve was y = 1340.8563x - 1539.7319, and r²=0.9997 (p<0.05). The detection and quantification limits showed values of 0.9 and 1.8 ng/mL, respectively. The mean recovery of clenbuterol were 111.7, 82.0 and 84.8%, for the concentration levels prepared (26.2, 104.9 and 209.8 ng/mL, respectively), which are considered suitable for the proposed method. The method accuracy was measured by the relative standard deviation, which was less than 4.74%. Seventeen liver samples purchased in public markets of México City were analyzed, of which 11 of them had concentrations above the MRL for clenbuterol with a median of 17.68ppb. This method is accurate and reliable due to its limit of detection, chromatographic separation efficiency, precision, accuracy, sensitivity and stability.

Efecto del metronidazol en pollos de carne con síndrome ascítico

Con el objetivo de determinar el efecto del metronidazol 0.1% sobre los niveles de ON, hemoglobina, hematocrito, índice cardíaco, peso corporal y mortalidad en pollos de carne inducidos al síndrome ascítico en altura. Fueron utilizados trescientos pollos de carne distribuidos en tres grupos: Nivel del mar (criados a nivel del mar), Altura (criados a 3.320 msnm) y Altura-Metronidazol (criados a 3.320 msnm y suplementados con metronidazol al 0,1% en agua de bebida). Los pollos fueron criados por 42 días en condiciones similares; durante este periodo fue evaluada condición corporal y mortalidad. Cada semana fueron seleccionados siete pollos de cada grupo para colectar muestras de sangre utilizada en la evaluación de niveles plasmáticos de óxido nítrico, hematocrito y hemoglobina, asimismo fueron disecados los corazones de estas aves para evaluar el índice cardíaco. Los resultados mostraron que grupo Altura-Metronidazol incrementó significativamente los niveles plasmáticos de óxido nítrico los primeros 21 días de crianza, una mejora en la ganancia de peso y una reducción significativa de la mortalidad relacionada al síndrome ascítico en comparación al grupo Altura; sin embargo, ninguno de estos grupos mostro resultados comparables a los del grupo criado a nivel del mar el cual evidenció mejores promedios en ganancia de peso y ninguna mortalidad relacionada al síndrome ascítico. Los otros parámetros evaluados no evidenciaron alteraciones significativas. Estos resultados sugieren que el metronidazol tiene un efecto benéfico en el control del síndrome ascítico en pollos de carne y podría ser considerado como donador de óxido nítrico.

The aim of this study was to determine the effect of metronidazole on levels of NO , hemoglobin, hematocrit, heart rate, body weight and mortality in broiler with ascitic syndrome induced by high altitude. Three hundred broilers chickens were used and distributed in three groups: Sea level (raised at sea level), Altitude (raised at 3320 masl) and Altitude-metronidazole (raised at 3320 masl and supplemented with 0.1% metronidazole). Broiler chickens were bred 42 days under similar conditions. During this period, the body weight and the mortality were evaluated. Each week, seven broilers from each group were used to collect blood samples for nitric oxide (NO), hematocrit, and hemoglobin determination. The hearts were dissected for cardiac rate evaluation. The Altitude-metronidazole group showed a significant increase to nitric oxide levels in the first 21 days of the experiment, an improvement in body weight and a significant reduction of mortality related to the ascitic syndrome, compared with the Altitude group. However, none of these groups showed better results compared with that of the Sea level group, which demonstrated the best averages in body weight and no mortality related to the ascitic syndrome. The other parameters evaluated showed no significant alterations. These results suggest that metronidazole has a beneficial effect in the control of the ascitic syndrome in broiler chickens and could be considered as a nitric oxide donor.

Viabilidad después de la vitrificación de embriones de cerda y oveja producidos in vitro

El presente trabajo tuvo como objetivo evaluar la viabilidad después de la vitrificación de embriones de cerda y oveja producidos in vitro. Los Complejos Ovocito-Células del Cúmulo (COCs) fueron obtenidos por punción de folículos de 3 a 6 mm de diámetro a partir de ovarios colectados en rastro. La viabilidad fue evaluada en tres grupos de embriones: sin vitrificar (grupo control), después de la vitrificación (calentamiento) y a 72 horas de cultivo después del calentamiento. La vitrificación se realizó en dos pasos; se inicio con etilén glicol (EG) 4% (v/v) y suero fetal bovino (SFB) 20%, en TCM-199 a 37 ºC por 15 minutos, posteriormente fueron transferidos a solución de vitrificación EG 35%, trehalosa 0.4 M y SFB 20% en TCM-199, finalmente fueron colocados en pajillas abiertas biseladas (BES). Las pajillas fueron sumergidas y conservadas en nitrógeno líquido por una semana. En cerdas el grupo control presentó una viabilidad total de 74,3% y los embriones de 8-16 blastómeros y mórulas tuvieron el 100% de viabilidad. La viabilidad total en los embriones calentados fue de 49,3% y la mayor viabilidad la presentaron los embriones de 8-16 blastómeros 63,7% y las mórulas 61,7%, aunque la diferencia no fue significativa (p>0.05). En ovejas el grupo control tuvo una viabilidad de 100% en todos los diferentes estadios de desarrollo embrionario. La viabilidad total en los embriones calentados fue de 63,1% y la mayor viabilidad la presentaron las mórulas 76,1% y los embriones de 8-16 blastómeros 68,1%, aunque la diferencia no fue significativa (p>0.05). La viabilidad obtenida después de 72 horas de cultivo de los embriones calentados fue de 1.5% de mórulas de cerda y 2.8% de blastocistos de oveja; en este último hubo cambio de estadio de dos mórulas a blastocisto. Se concluye que el procedimiento de vitrificación en pajilla abierta biselada usando etilén glicol y trehalosa como crioprotectores permitió la recuperación de embriones de cerda y oveja viables al momento de la desvitrificación, aunque el desarrollo posterior a este proceso disminuye su desarrollo.

This study was aimed to assess the viability after vitrification of sow and sheep embryos produced in vitro. Complexes Oocyte-cumulus cells (COCs) were obtained from ovaries collected from sows and sheeps in the slaughterhouse. The viability was evaluated in three groups of embryos: unvitrified (control group), after vitrification (warming) and at 72 hours of culture after warming. The vitrification used two steps with ethylene glycol (EG) 4% (v/v), fetal bovine serum (FBS) 20%, in TCM-199 at 37 °C for 15 minutes, then the embryos were transferred to a vitrification solution of 35% EG, 0.4 M trehalose, and 20% FBS in TCM-199 for 20 seconds and finally placed in beveled edge open straws (BES). The straws were immersed and kept in liquid nitrogen for a week. The total viability of the vitrified/warmed embryos from sows was 49.3%, and the highest viabilities were shown by the 8-16 blastomere embryos (63.7%) and the morulae (61,7%), though the differences were not statistically significant. The total viability in the control group was of 74.3%, and the 8-16 blastomere embryos and morulae had 100% of viability. The total viability of the vitrified/warmed embryos from sheeps was 63.1%, and the highest viabilities were shown by the morulae (76.1%) and the 8-16 blastomere embryos (68.1%), though the differences were not statistically significant. The total viability in the control group was 100% in all the different stages of the embryonic development. The viability obtained after culturing the vitrified/warmed embryos for 72 hours was 1.5% of sow morulae and 2.8% of sheep blastocysts; in the latter, two morulae changed to blastocysts. It is concluded that the vitrification procedure in beveled edge open straws using ethylene glycol and trehalose as cryoprotectants allowed recovering of sow and sheep embryos viable at the devitrifying moment, but their further development is reduced.

Evaluación de métodos simples de extracción de ADN para la tipificación de S. suis

Streptococcus suis is a gram-positive bacterium that causes serious diseases in pigs and in humans with occupational risk. The DNA extraction methods for amplification of gene fragments by PCR for typing S.suis may be complex, and expensive chemical reagents and time consuming. The aim of this study was to evaluate a method for the rapid release of the genomic DNA from S.suis colonies by using a physical method based on heating and freezing; in this case, temperatures of 100ºC and 95ºC were tested. The results showed that DNA extraction directly from colonies by heating at 100ºC could be useful for an easy genotyping of S.suis strains in a short time, while 95ºC was not sufficient for DNA release. The detection limit of the PCR assay using DNA obtained by chemical purification was 0.5ng; considering the size of S.suis genome, it is possible to estimate that an adequate amount of cells are in a single S.suis colony to ensure the sensitivity of the PCR assay.

Streptococcus suis es una bacteria grampositiva que causa serias enfermedades en cerdos y humanos con riesgo profesional. Los métodos de extracción de ADN para la amplificación de fragmentos de genes por PCR para la tipificación de S.suis pueden resultar complejos, consumir reactivos costosos y tiempo. El objetivo de este trabajo es la evaluación de un método físico para la extracción rápida del ADN, a partir de colonias mediante el calentamiento y la congelación, para lo cual se evaluaron dos temperaturas 100ºC y 95ºC. Los resultados mostraron que la extracción de ADN a partir de colonias a 100ºC es válida para la genotipificación rápida de S.suis fácilmente en corto tiempo, mientras la temperatura de 95ºC no fue suficiente para la liberación del ADN. El límite de detección del ensayo a partir de ADN genómico extraído por purificación química fue 0.5 ng; teniendo en cuenta el tamaño del genoma de S. suis. Es posible considerar que en una simple colonia de S.suis existe la suficiente cantidad de células para garantizar la sensibilidad del ensayo de PCR.

Evaluación del desempeño del método RIDA COUNT para la enumeración de bacterias en leche

El método de placas Rida Count es utilizado en el mundo con una confiabilidad demostrada, pero al ser introducido por primera vez en Cuba se realizó una comprobación de su funcionamiento. Se comparó con los métodos convencionales para la enumeración de bacterias totales, coliformes totales, enterobacterias, Escherichia coli, y Salmonella spp. acorde con la norma ISO/IEC 16140:2003 para el uso de métodos microbiológicos alternativos. Se contaminaron muestras de leche estéril reconstituida con inóculos de cepas de Escherichia coli (ATCC 25922), Salmonella entérica serotipo typhimurium (Laboratorio Control Microbiológico, CENSA) y Staphylococcus aureus (ATCC 6538). El coeficiente de correlación lineal de Rida Count para conteo debacterias mesófilas, coliformes totales, Escherichia coli, enterobacterias y Salmonella spp. con relación a la técnica tradicional en leche estéril contaminada fue de 0.997, 0.999, 0.998, 0.996 y 0.997; en el caso de leche cruda fue de 0.998, 0.991, 0.994, 0.991 y 0.996, respectivamente. Los resultados experimentales y prácticos demostraron que el funcionamiento del método se encuentra acorde con lo descrito y constituye una alternativa conveniente para los laboratorios lácteos del país con escasez de recursos para la cuantificación de microorganismos, ya que reduce el tiempo y los recursos de trabajo en el laboratorio, brindando resultados entre 24-48 horas y aumento del rendimiento en un 95%.

The method of Rida Count plates is used in the world with a demonstrated reliability, but as being introduced for the first time in Cuba, a verification of its operation was carried out. For that reason, the method was compared with the conventional methods used for the enumeration of total bacteria, total coliforms, enterobacteria, Escherichia coli, and Salmonella spp. in agreement with the standard ISO/IEC 16140:2003 for the use of alternative microbiological methods. Reconstituted sterile milk samples were inoculated with strains of Escherichia coli (ATCC 25922), Salmonella enterica serovar typhimurium (Laboratory of Microbiological Control, CENSA) and Staphylococcus aureus (ATCC 6538). The linear correlation coefficients of Rida Count for total count, total coliforms, enterobacteria, Escherichia coli, and Salmonella spp. in relation to the conventional contaminated sterile milk method were of 0.997, 0.999, 0.998, 0.996 and 0.997; in the case of raw milk, they were of 0.998, 0.991, 0.994, 0.991 and 0.996, respectively. The experimental and practical results demonstrated that the operation of the method was in agreement with that described in literature and it constituted a convenient alternative for the milk laboratories of the country with limited resources for the quantification of microorganisms since it reduced the time and labor in the laboratory, offering results between 24-48 hours and increasing the yield in a 95%.

**Detección de Ureaplasma spp. en pulmones de cerdos, con lesiones compatibles a la neumonía enzoótica porcina, procedentes de la región occidental y central de Cuba**

Virus de leucosis aviar subtipo A y subtipo J en diferentes bandadas con enfermedades tumorales

Seroprevalencia de Herpesvirus bovino 4 en bovinos y búfalos en Caquetá, Colombia

**Escalado piloto del ingrediente farmacéutico activo de Rhizophora mangle L. para la obtención de un gel**