Revista de Salud Animal

Reacción en cadena de la polimerasa con control interno de amplificación para detectar micoplasmas en cultivos celulares y materias primas

ABSTRACT The presence of polymerase chain reaction (PCR) inhibitory substances in cell cultures and raw materials used in the manufacture of monoclonal antibodies could limit the usefulness of this method to detect mycoplasma contamination. The objective of this research was to determine the sensitivity and specificity of a PCR method to detect mycoplasma deoxyribonucleic acid (DNA) in MDCK and HeLa cell lines, hybridoma cells, ascitic fluid and cell supernatant containing monoclonal antibodies. The effect of a thermal shock-based mycoplasma DNA extraction method on PCR sensitivity, as well as the performance of two mycoplasma DNA purification methods: silica/guanidinium thiocyanate and a commercial DNA purification kit, were evaluated. In addition, an internal amplification control (IAC) was optimized to detect inhibitory samples from these matrices after thermal shock treatment. PCR-IAC was specific for the amplification of mycoplasma DNA. The inclusion of IAC plasmid at the concentration selected did not decrease the sensitivity of PCR in mycoplasma-spiked matrices. Seventy-eight samples were analyzed; all represented the matrices under study. As a result, all matrices showed PCR inhibition after thermal shock. The inhibitory effect decreased when silica/guanidinium thiocyanate or commercial DNA purification kit was used. PCR-IAC detected 65 % of inhibitory samples and revealed differential susceptibility to inhibitors among different samples of the same matrix.

RESUMEN La presencia de sustancias inhibitorias de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en cultivos celulares y materias primas usadas en la fabricación de anticuerpos monoclonales podría limitar la utilidad de esta técnica para detectar la contaminación por micoplasmas. El objetivo de esta investigación fue determinar la sensibilidad y la especificidad de un método de PCR para detectar ácido desorribunucleico (ADN) de micoplasma en las líneas celulares MDCK y HELA, en células de hibridoma, en líquido ascítico y en sobrenadante celular que contenía un anticuerpo monoclonal. Se evaluaron el efecto de un método de extracción de ADN micoplásmico, basado en choque térmico sobre la sensibilidad de la PCR, así como el desempeño de dos métodos de purificación de ADN micoplásmico: sílice / tiocianato de guanidinio y un kit comercial de purificación de ADN. Además, se optimizó un control de amplificación interno (CAI) para detectar muestras inhibitorias de estas matrices después del tratamiento de choque térmico. La PCR-CAI fue específica para la amplificación del ADN de micoplasma; la inclusión del plásmido CAI a la concentración seleccionada no disminuyó la sensibilidad de la PCR en las matrices experimentalmente contaminadas con micoplasma. Se analizaron 78 muestras; todas representaron las matrices en estudio. Como resultado, todas las matrices mostraron inhibición de la PCR después del choque térmico. El efecto inhibitorio disminuyó cuando se utilizó sílice / tiocianato de guanidinio o el kit comercial de purificación de ADN. La PCR-CAI detectó 65 % de muestras inhibitorias y puso en evidencia una susceptibilidad diferencial a los inhibidores entre diferentes muestras de una misma matriz.

Efecto probiótico de microorganismos eficientes (ME-AgroAmbiental) sobre indicadores bioproductivos en cerdos Yorkland de preceba

RESUMEN El objetivo de esta investigación fue determinar el efecto de la incorporación de microorganismos eficientes (ME-AgroAmbiental) a la dieta de cerdos (Yorkshire x Landrace) de preceba en los indicadores bioproductivos. Se utilizaron 270 animales con 33 días de edad promedio, divididos en tres grupos de 45 cada uno. Cada grupo contó con dos réplicas. El grupo 1 se utilizó como control negativo, mientras que la dieta a los grupos 2 y 3 se suplementó con ME-AgroAmbiental seis veces al día durante siete semanas, en concentraciones del 5 y 10 %, respectivamente. Se calcularon los indicadores epidemiológicos de morbilidad, mortalidad y tasa de recuperación, relativos a trastornos gastroentéricos durante la etapa. Además, se registró el incremento en peso con frecuencia semanal y se realizó un balance económico entre los gastos de los microorganismos eficientes y el precio de venta de los cerdos. No se detectaron diferencias respecto a los indicadores epidemiológicos entre los grupos. Con la suplementación a 10 % se registró un peso final promedio de 27,73±0,945 kg y una ganancia media diaria de 418,83 g/día, 15 % más que en los otros grupos (con diferencias estadísticas significativas). Adicionalmente, se obtuvo una ganancia de 55424,04 pesos. Se concluye que la inclusión de un 10 % de ME-AgroAmbiental en la dieta de cerdos Yorkland para preceba no previene la aparición de trastornos gastroentéricos, pero influye de forma positiva en los indicadores de ganancia en peso, de manera rentable.

ABSTRACT This research aimed to determine the effect of incorporating efficient microorganisms (ME-AgroAmbiental) to the diet of pre-fattening (Yorkshire x Landrace) pigs on bioproductive indicators. Two hundred and seventy animals with an average age of 33 days were used. They were divided into three groups of 45 animals each. Each group had two replicates.Group 1 was used as a negative control, whereas groups 2 and 3 were supplemented with ME-AgroAmbiental six times a day for seven weeks, at concentrations of 5 and 10 %, respectively. Epidemiological indicators such as morbidity, mortality and recovery rate were calculated for gastrointestinal disorders during this stage. Furthermore, weight gain was recorded on a weekly basis and an economic balance was made between the cost of efficient microorganisms and the market price of the pigs. No differences were detected with respect to epidemiological indicators among the groups. By supplementing at 10 %, an average final weight of 27.73±0.945 kg and an average daily gain of 418.83 g/day were recorded, 15 % more than in the other groups (with significant statistical differences). Additionally, a profit of 55424.04 Cuban pesos was obtained. It is concluded that the inclusion of 10 % ME-AgroAmbiental in the diet of pre-fattening Yorkshire pigs does not prevent the occurrence of gastrointestinal disorders, but positively influences weight gaining indicators in a cost-effective manner.

Obtención de un candidato a probiótico de Lactobacillus plantarum 22 LMC a partir de un medio de cultivo natural con materias primas agroindustriales

RESUMEN El presente trabajo tuvo como objetivo obtener un candidato a probiótico de L. plantarum 22 LMC a nivel de laboratorio en un medio de cultivo con residuos agroindustriales. Se empleó un medio natural a partir de melaza (20 %), suero de leche (33,0 %) y levadura hidrolizada (10,36 %) (MLS) para el crecimiento de L. plantarum; como control se empleó el medio de referencia Man Rogosa Sharpe (MRS). Se evaluaron la cinética de crecimiento, la determinación del pH y la producción de ácido láctico. En ambos medios se obtuvieron valores de crecimiento superiores a 12 Log UFC mL-1 a las 48 h; se observó una disminución del pH de 3,11 ± 0,01 en el medio MLS, 4,01 ± 0,05 en MRS y de ácido láctico 3,28 ± 0,12 g.L-1 y 2,69 ± 0,12 g.L-1, respectivamente. Luego se obtuvo el biopreparado a nivel de laboratorio y se establecieron, como controles de proceso, la pureza del cultivo y la viabilidad de la cepa en dicho medio. Se evaluó la estabilidad en anaquel a la temperatura de 5 ± 3°C, a dos concentraciones del probiótico (1x109 y 1x1010 UFC/mL) durante 60 días, y se observó la estabilidad en la viabilidad bacteriana y en el pH, por lo que el medio resultó idóneo para este fin.

ABSTRACT The present work was aimed at obtaining a probiotic candidate of L. plantarum 22 LMC at laboratory level in a culture medium with agroindustrial residues. A natural medium based on molasses (20 %), milk serum (33.0 %) and hydrolyzed yeast (10.36 %) (MLS) was used for the growth of L. plantarum. Man Rogosa Sharpe (MRS) reference medium was used as a control. Growth kinetics, pH determination and lactic acid production were evaluated. Growth values higher than 12 Log CFU mL-1 were obtained in both media at 48 h. A decrease in pH of 3.11 ± 0.01 in MLS medium, 4.01 ± 0.05 in MRS and lactic acid 3.28 ± 0.12 g.L-1 and 2.69 ± 0.12 g.L-1, was respectively observed. Biopreparation was then obtained at laboratory level. Culture purity and strain viability in such medium were established as process controls. Shelf stability was evaluated at a temperature of 5 ± 3°C, at two concentrations of the probiotic (1x109 and 1x1010 CFU/mL) for 60 days, observing stability in bacterial viability and pH, thus making the medium suitable for this purpose.

Frecuencia de presentación de tumores de cabeza y cuello en caninos de La Habana en los años 2017 y 2018

RESUMEN El presente estudio se realizó en la consulta de Oncología del Laboratorio de Patología y Cirugía Experimental del Instituto Nacional de Oncología y Radiobiología, con el objetivo de determinar la frecuencia de presentación de tumores de cabeza y cuello en perros de La Habana. Durante el periodo analizado (2017-2018), se muestrearon 120 perros, de ellos 84 (70 %) fueron diagnosticados como positivos a células neoplásicas (PCN) y 36 (30 %) como negativo a células neoplásicas (NCN). La técnica de diagnóstico empleada para la toma de muestra citológica fue la biopsia por aspiración con aguja fina (BAAF) y se procesaron mediante la coloración rápida de Diff Quick. Se conformó una base de datos a partir de los registros de los casos PCN utilizando el programa Microsoft Excel (2016). Se realizó una comparación de proporciones con las siguientes variables: presencia de tumores en cabeza y cuello, localización anatómica, edad, sexo y raza; para ello se utilizó el paquete estadístico CompaProWin 2.0.1. En el caso específico de la edad, se aplicó la estadística descriptiva y se agruparon los casos en tres grupos etarios: ≤ 4 años, entre 5 y 8 años y > 8 años. Se concluyó que los diagnósticos PCN más frecuentes en cabeza y cuello fueron el carcinoma de células escamosas, el sarcoma, el linfoma y el melanoma. La localización más frecuente fue la cavidad oral, en el rango etario de mayores de 8 años, con un promedio de 9,34 años, en perros machos y sin raza definida.

ABSTRACT The aim of this study was to determine the frequency of appearance of head and neck tumors in dogs from Havana, Cuba, treated in the veterinary consultation of Pathology and Experimental Surgery of the National Institute of Oncology and Radiobiology. During the period analyzed (2017-2018), 120 dogs were sampled, of which 84 (70 %) resulted positive (PCN) and 36 (30 %) resulted negative (NCN) to neoplastic cells. The diagnostic technique used for cytology sampling was fine-needle aspiration biopsy (FNAB), and samples were processed by Diff-Quik Staining. A database was created from the PCN case records using Microsoft Excel (2016) software. A comparison of proportions was carried out with the following variables: presence of head and neck tumors, anatomical location, age, sex, and breed. The statistical package CompaProWin 2.0.1 program was used for this purpose. In the specific case of age, descriptive statistics were applied and cases were grouped into three age groups: ≤ 4 years, between 5 and 8 years and > 8 years. It was concluded that the most frequent PCN diagnoses in head and neck were squamous cell carcinoma, sarcoma, lymphoma, and melanoma. The most frequent location was the oral cavity, in the age range over 8 years, with an average of 9.34 years, in male dogs and without defined breed.

Bases teóricas metodológicas del sistema HACCP en la obtención de agua de calidad de una lechería bubalina

RESUMEN Para garantizar alimentos de calidad, y sin riesgos para la salud pública, deben cumplirse sistemas de producción de alimentos seguros, desde el productor hasta el consumidor. Disponer de un alimento inocuo y seguro es una exigencia de los consumidores y una necesidad social. En Cuba, no existen aspectos legislados para la aplicación del sistema HACCP (del inglés, Hazard Analysis and Critical Control Point) para la gestión de los riesgos sanitarios del agua de consumo animal de las especies productivas. El presente trabajo se realizó con el objetivo de establecer las bases teóricas-metodológicas para la aplicación del HACCP en la obtención de agua de calidad en una lechería bufalina de la provincia Artemisa. Para esto se llevaron a cabo las actividades siguientes: confección de un diagrama de flujo del proceso de obtención y suministro de agua, identificación de los Puntos Críticos de Control (PCC) del mismo, establecimiento de los límites críticos correspondientes a cada uno de los PCC identificados, y propuestas de acciones correctivas para las posibles desviaciones en los límites críticos de estos PCC. Se concluye que se establecieron las bases teóricas-metodológicas para la aplicación del HACCP en la obtención de agua de calidad de una lechería bufalina de la provincia Artemisa, así como la identificación de los procesos asociados como puntos críticos de control; por lo que se infiere que la leche producida constituye un riesgo para la salud de los consumidores, debido a que la calidad del agua empleada está comprometida.

ABSTRACT In order to guarantee quality food without hazards to public health, safety food production systems must be complied, from the producer to the consumer. The availability of safety food is a consumer demand and a social necessity. In Cuba, there are no regulated aspects for the application of the HACCP (Hazard Analysis and Critical Control Points) system for the management of sanitary hazards of water for animal consumption of productive species. This work was aimed at establishing the theoretical-methodological bases for the application of the HACCP system to obtain quality water in a buffalo dairy farm in Artemisa province. To this end, the following activities were carried out: establishment of a flow diagram of the water obtaining and supply process, identification of its Critical Control Points (CCPs), setting of the critical limits corresponding to each of the identified CCPs, and proposals of corrective actions for possible deviations in the critical limits of those CCPs. As results, the theoretical-methodological bases were established for the application of HACCP in obtaining quality water from a buffalo dairy farm Artemisa province, as well as the identification of the associated processes as Critical Control Points. Therefore, it is inferred that the milk produced represented a hazard to the health of consumers, due to the fact that the water used did not have the quality required.

Factores de riesgo asociados a la seroprevalencia de brucelosis en hatos bovinos de Xochimilco, Ciudad de México

RESUMEN Con el objetivo de identificar los factores asociados a la infección por brucelosis, se realizó un estudio transversal y descriptivo en hatos bovinos lecheros de Xochimilco, Ciudad de México, México. Se muestrearon 270 vacas raza Holstein Freisan mayores de seis meses. Se detectó la presencia de anticuerpos contra Brucella abortus mediante la prueba de aglutinación en tarjeta (rosa de Bengala) y la prueba de rivanol. Para la evaluación de los factores asociados a la infección por brucelosis, se aplicaron encuestas epidemiológicas a los ganaderos y/o propietarios. Los resultados mostraron una prevalencia a B. abortus de 31,8 %, con un promedio de 5,733b positivos a brucela. En el 80 % de los hatos no existía un área de cuarentena y control de procedencia de las nuevas incorporaciones. Se advirtió la falta de retiro de excretas (80 %), de placenta y otros desechos del parto (13,33 %). Solo el 13,34 % de los productores tenían las instalaciones y el material específico para el manejo de los bovinos. El 46,66 % de los hatos tenían gatos que convivían con las vacas, además de compartir caminos de desplazamiento con otros hatos (46,66 %). Se concluye que existía correlación baja (r=0,4), estimada entre la seroprevalencia de brucelosis y los factores evaluados: el productor trabajaba en un solo hato, el ganado tenía contacto con perros, las mascotas tenían acceso a fuente de alimentación y agua, así como en la presencia de abortos. Por ello, es recomendable implementar un programa de divulgación basado en la normatividad para la prevención y control de la enfermedad.

ABSTRACT In order to identify the factors associated with brucellosis infection, a cross-sectional and descriptive study was carried out in dairy cattle herds from Xochimilco, Mexico City, Mexico. Two hundred and seventy Holstein Freisan cows, older than 6 months, were sampled. The presence of antibodies against Brucella abortus was detected by the card agglutination test (Rose Bengal) and the rivanol test. Epidemiological surveys were applied to farmers and/or owners to evaluate the factors associated with brucellosis infection. The results obtained showed a B. abortus prevalence of 31.8 %, with an average of 5,733b positive for brucella. In 80 % of the herds, there was no quarantine and provenance control area for new additions. The lack of removal of excreta (80 %), placenta and other wastes from childbirth (13.33 %) was noted. Only 13.34 % of the producers had the facilities and specific material for the management of cattle, 46.66 % of the herds had cats living with cows, besides sharing travel paths with other herds (46.66 %). It is concluded that there was a low correlation (r=0.4) estimated between the brucellosis seroprevalence and the factors evaluated: the producer worked in a single herd, cattle had contact with dogs, pets having access to food and water sources, as well as the presence of abortions. Therefore, it is advisable to implement a dissemination program based on regulations for the prevention and control of the disease.

Efectividad del antiparasitario Labiomec (Ivermectina 1 %) para el control de oestrosis en ovinos

RESUMEN La oestrosis es la miasis cavitaria que afecta comúnmente a los ovinos, es endémica de la provincia Guantánamo, Cuba. Al cierre del año 2019, de 10 municipios que existen en la provincia, hubo reportes en nueve de ellos. El objetivo de este trabajo fue demostrar la efectividad del antiparasitario Labiomec (Ivermectina 1 %) en el control de la oestrosis en ovinos Pelibuey. Se escogieron 40 animales adultos, 20 hembras y 20 machos pertenecientes a un mismo rebaño, afectados por oestrosis, los cuales no recibieron previamente tratamientos antiparasitarios en los últimos tres meses. Se formaron dos grupos de 20 animales, al grupo 1 se aplicó Labiomec (Ivermectina 1 %) a razón 0,2 mg/kg de peso corporal al día cero y 21 días; al grupo 2 control se aplicó solución salina al 0,9 % en dosis de 1 mL /50 kg de peso corporal, en igual frecuencia que el grupo desde los 14 días de tratamientos. La investigación se basó en la presencia de signos clínicos compatibles con la infestación, se sacrificaron seis ejemplares por cada grupo: dos el día cero, dos a los 14 días y dos a los 28 días. Los cráneos fueron procesados realizando un corte sagital y dos transversales para la búsqueda de larvas del parásito; se realizó el conteo, la identificación y la recuperación de las mismas. En el grupo 1 se observó disminución de larvas vivas y muertas; a los 28 días no existía presencia de larvas y quedaron las lesiones causadas por la oestrosis; mientras que, en el grupo 2 control, se mantenían las larvas vivas.

ABSTRACT Oestrosis is the cavitary myiasis that commonly affects sheep and it is endemic in Guantanamo province, Cuba. At the end of 2019, there were reports in nine of the 10 municipalities in the province. The objective of this study was to demonstrate the effectiveness of the antiparasitic Labiomec (Ivermectin 1 %) for the control of oestrosis in Pelibuey sheep. Forty adult animals, 20 females and 20 males belonging to the same flock, affected by oestrosis and which had not previously received antiparasitic treatments in the last three months, were selected. Two groups of 20 animals were formed. Labiomec (Ivermectin 1 %) was applied to group 1 at a rate of 0.2 mg/kg body weight on day zero and 21 days; 0.9 % saline solution was applied to group 2 (control group) at a dose of 1 mL /50 kg body weight, at the same frequency as the group from 14 days of treatments. The research was based on the presence of clinical signs compatible with infestation. Six specimens were slaughtered for each group: two on day zero, two at 14 days and two at 28 days. Skulls were processed by making a sagittal and two transversal cuts to search for parasite larvae which were counted, identified and recovered. In group 1, a decrease in live and dead larvae was observed. At 28 days, there were no larvae present and the lesions caused by oestrosis remained. Regarding group 2, the control group, larvae were still alive.

Disentería de invierno asociada con el coronavirus bovino en vacas de la provincia Mayabeque, Cuba

RESUMEN La disentería de invierno (DI) es una enfermedad altamente contagiosa, caracterizada por desórdenes gastrointestinales en el ganado bovino. El coronavirus bovino (BCoV) se ha reconocido como el agente etiológico de este síndrome. En Cuba, se presentó por primera vez en el ganado adulto en el año 2004, y más tarde entre enero de 2008 y febrero de 2009. En 2020, se presentaron brotes diarreicos con características clínicas y epidemiológicas similares a la DI, en unidades de la provincia Mayabeque. De ocho muestras de heces colectadas, se confirmó en siete de ellas la presencia del BCoV mediante ensayos de reverso transcripción acoplado a reacción en cadena de la polimerasa en punto final (RT-PCR), lo que confirmó 87,5 % de positividad. El virus se aisló en cultivos celulares y se observó el efecto citopático característico de este al quinto día posterior a la inoculación. Los resultados del presente estudio confirmaron que el BCoV es el agente causal de los cuadros diarreicos de los bovinos estudiados y reafirmaron el modo epizoótico de presentación de esta enfermedad en el rebaño.

ABSTRACT Winter dysentery (WD) is a highly contagious disease characterized by gastrointestinal disorders in cattle. Bovine coronavirus (BCoV) has been recognized as the etiological agent of this syndrome. In Cuba, it appeared for the first time in adult cattle in 2004, and later between January 2008 and February 2009. In 2020, diarrheal outbreaks with clinical and epidemiological characteristics similar to WD occurred in units from Mayabeque province. Of eight stool samples collected, the presence of BCoV was confirmed in seven of them by reverse transcription assays coupled to end-point polymerase chain reaction (RT-PCR), which confirmed 87.5 % positivity. Virus was isolated in cell cultures and its characteristic cytopathic effect was observed on the fifth day after inoculation. The results of the present study confirmed that BCoV is the causative agent of diarrheas in the bovine herds studied, and confirmed the epizootic mode of presentation of this disease in them.