Revista Cubana de Medicina Tropical

Epidemiology of leptospirosis

Adaptación de Leptospira interrogans (sensu stricto) al agua dulce

Se describió un estudio acerca de la adaptación de Leptospira interrogans a medios acuosos carentes de nutrientes. Para este propósito se incubaron leptospiras por período de tiempo indeterminado en agua destilada y en solución salina tamponada. Las leptospiras se mantuvieron viables en agua por 98 d, mientras que, las incubadas en solución salina tamponada sobrevivieron únicamente 3 semanas. Los componentes proteicos celulares y de membrana externa fueron analizados mediante electroforesis en geles de acrilamida (SDS-PAGE). Cuando se compararon los perfiles de proteínas de OM de leptospiras mantenidas en agua, con aquellos perfiles de OM de células cultivadas en medio EMJH, se observaron algunas diferencias. Una proteína de 56 kDa estuvo presente en leptospiras que fueron mantenidas en agua por una semana. Mediante análisis de western blot se identificó a esta proteína como GroEL.

The contact with polluted waters is one of the main risk factors to catch leptospirosis. A study is presented about the adaptation of Leptospira interrograns to nutrient-lacking water media. For this end, leptospires were incubated in distilled water and tampon saline solution for an undetermined period of time. Leptospires kept viable in water for 98 days whereas the incubated ones in tampon saline solution survived 3 weeks only. Protein cellular and external membrane components were analyzed with electrophoresis in acrylamide gel (SDS-PAGE). When OM protein profiles of leptospires kept in water were compared to those OM profiles of cells cultured in ENJA medium, some differences were observed. A 56 kDa protein was present in leptospires kept in water for a week. This protein was identified as GroEL through Western Blot test.

Comportamiento clínico-epidemiológico de la leptospirosis humana en el municipio Los Palacios, provincia Pinar del Río, Cuba

Se realizó un estudio descriptivo-retrospectivo para conocer algunos aspectos epidemiológicos de la leptospirosis en el municipio Los Palacios, durante el período de enero de 1996 a diciembre de 1998. La información se obtuvo por la encuesta epidemiológica para casos de leptospirosis que se aplica en el Centro Municipal de Higiene y Epidemiología. El resultado fue que 94 % de los casos correspondían al sexo masculino. El grupo etáreo de 14 a 19 años resultó el más afectado (21,8 %). Los hallazgos clínicos más comunes fueron fiebre (100 %), mialgia (84 %) y artralgia (62 %). Las labores relacionadas con el manejo del arroz (87,5 %) se asociaron de manera significativa a la aparición de la enfermedad.

A descriptive-retrospective study was performed to find out some epidemiological aspects of leptospirosis in Los Palacios municipality in the period January 1996 to December 1998. Data were obtained from an epidemiological survey of leptospirosis cases, which was made y the Municipal Hygiene and Epidemiological Center. The results were 94% of cases were males; the most affected aged group was 14-19y (21,8%). Fever (100%), myalgia(84%) and arthralgia (62%) were the most common clinical findings. Rice harvesting work (87,5%) was significantly associated to the onset of disease.

La rata y el perro, importantes vectores de la leptospirosis en explotaciones pecuarias de Cd. Guzmán, Jalisco

Se realizó este estudio para conocer la importancia que las ratas y el perro tienen en la diseminación de la leptospirosis en granjas y establos establecidos en Cd. Guzmán, Jalisco. Se utilizaron 13 serovariedades de Leptospira interrogans en la prueba de microaglutinación de serogrupos en placa (MAT). Se estudiaron 354 ratas (Rattus rattus y Rattus norvergicus) atrapadas en explotaciones pecuarias del lugar, 22 (6,2 %) fueron positivas y 34 (9,6 %) sospechosas; asimismo se estudiaron 419 perros de la región, 22,6 % (95 perros) fueron positivos y 5,7 % (24) sospechosos a L. interrogans. Con estos resultados se observó que ambas especies son importantes en la diseminación de la enfermedad.

A study was conducted to determine how important rats and dogs are in the dissemination of leptospirosis in farms and stales located in Ciudad Guzmán, Jalisco. Thirteen of Leptospira interrograns serovarieties were used in microagglutination test of serogroups (MAT). Three hundred and fifty four rats (Rattus rattus and Rattus norvergicus) trapped in agricultural areas of the place were studied; 22 were positive (6,2%) and 34 suspected of leptospirosis (9,6%). Also four hundred and nineteen dogs from the region were tested; 22,6 % (95 dogs) were positive and 5,7%(24) suspected of L. Interrogans. These results showed that both species are important in the dissemination of the disease.

Estudio serológico de leptospirosis bovina en México

Se analizaron resultados de 4 043 sueros de bovinos de distintas regiones de México, que fueron remitidos a un laboratorio de diagnóstico. Se empleó la técnica de aglutinación microscópica y se consideró la dilución 1:100 o mayor como positiva. El análisis indicó 31,1 % de seroprevalencia y las serovariedades más frecuentes fueron hardjo (cepa H 89 aislada en México), wolffi y tarassovi. Existe semejanza con datos previos de México sobre una prevalencia de 34 % encontrada en un estudio similar de 1994 y comparándola con la literatura científica de otros países, existe coincidencia. En el estudio previo también se indicó que tarassovi y wolffi eran las leptospiras más comunes, por lo que existe coincidencia con las cifras de la literatura revisada. Se concluyó que no existe variación importante en la prevalencia entre el estudio de 1994 y este, por lo tanto se sugiere la difusión de este análisis para incrementar la vacunación en bovinos y lograr una reducción de la leptospirosis en México.

The results of 4 043 bovine sera samples from various Mexican regions, which were sent to a diagnosis lab, were analyzed. The method was the agglutination technique, taking the dilution rate 1:1000 or higher as positive. The analysis revealed 31,1% of seroprevalence and the most frequent serovarietes were hardjo (strain H 89 isolated in Mexico), wolffi and tarassovi. There is coincidence with early data obtained in Mexico on a 34% of prevalence found in a similar study performed in 1994, and with the scientific literature from other countries. . The former study also indicated that tarassovi and wolffi were the most common leptospira, so there is coincidence with the figures in the reviewed literature. It was concluded that there was no significant variation in the prevalence rate between the 1994 study and the present one; therefore, it is recommended that this study be promoted so as to increase the bovine vaccination and achieve a reduction in leptospirosis in Mexico.

Serología diagnóstica de leptospirosis porcina en México 1995-2000

Se analizaron los resultados de 1 970 cerdos provenientes de diferentes granjas en México y que fueron recibidos en el laboratorio de leptospira de la Universidad Autónoma Metropolitana Xochimilco durante 1995 al 2000. Se consideraron como positivos los sueros con títulos iguales o mayores que 1:100, resultó 39,8 % de animales seropositivos (784/1970) y las serovariedades más frecuentes fueron: bratislava 22,5 %, icterohaemorrhagiae cepa Palo Alto 14,5 %, portland vere cepa Sinaloa ACR 13,8 %, icterohaemorrhagiae 11,1 %, grippotyphosa 8,9 %, hardjo cepa H 89 7,2 %, tarassovi 7,1 %, panama 5,8 %, pomona y hardjo 5,1%, wolffi 3 %, shermani 2,4 %, pyrogenes 1,2 %, canicola 0,8 %, hebdomadis 0,5 %. La serovariedad bratislava ha sido reportada como causa de falla reproductiva en varios países del mundo y en estudios serológicos ocupa los primeros lugares, por lo que el presente trabajo provee de información para señalar que esta serovariedad es una de las más importantes en México.

Results obtained from sample testing of 1 970 swines from a number of Mexican farms were analyzed. Such samples had been received in the Leptospira Lab of Universidad Autonoma Metropolitana de Xochimilco from 1995 to 2000. Sera with titers equal to or higher than 1:1000 were considered positive; 39,8% of the animals were seropositive (784) and the most frequent serovarieties were bratislava, 22,5%; icterohaemorrhagiae strain Palo Alto, 14,5%; portland vere strain Sinaloa ACR, 13,8%; icterohaemorrhagiae, 11,1%; grippotyphosa, 8,9%; hardjo strain H89,7,2%; tarassovi,7,1%; panama, 5,8%, pomona and hardjo, 5,1%; wolffi, 3%; shermani, 2,4%; pyrogenes, 1,2%; canicola, 0,8%; hebdomadis, 0,5%. The bratislava serovariety has been reported as the cause of reproductive failure in several countries and it holds the first place in serological studies. Therefore, the present paper provides information for stating that this is one of the most significant serovarieties in Mexico.

Crecimiento, virulencia y antigenicidad de Leptospira interrogans serovar mozdok en medio EMJH modificado

Se evaluó la influencia de concentraciones crecientes de Tween 80 en el medio sintético EMJH sobre el crecimiento, la virulencia y antigenicidad de Leptospira interrogans serovar mozdok, para incrementar los rendimientos y aprovechar al máximo la capacidad destoxificante de la albúmina sérica bovina. El crecimiento fue evaluado espectrofotométricamente mediante el análisis de la cinética del crecimiento bacteriano, los rendimientos de biomasa obtenidos y el consumo de la fuente de carbono. La virulencia fue estimada en el modelo hámster sirio y la antigenicidad fue determinada mediante la técnica de microaglutinación frente a un antisuero policlonal de conejo. Bajo condiciones de cultivo controladas, el incremento de la concentración de Tween 80 hasta 3, 25 mg/mL determinó una aceleración del metabolismo bacteriano, que logró duplicar los rendimientos celulares con un consumo total de la fuente de carbono, sin afectación de la virulencia y antigenicidad durante numerosos subcultivos sucesivos.

The effect of higher Tween 80 concentrations in EMJH synthetic medium on the growth, virulence and antigenecity of Leptospira interrogans serovar mozdok was evaluated for increasing the performances and making a full use of the detoxifying capacity of bovine serum albumin. The growth was spectrophotographically evaluated by the analysis of the bacterial growth kinetics; the obtained biomass performance and the consumption of the carbon source. The virulence was estimated in Syrian Hamster model whereas antigenecity was determined through the microagglutination technique in rabbits polyclonal antiserum. Under controlled culture conditions, the increase of Tween 80 concentration up to 3,25 mg/ml brought about an acceleration in bacterial metabolism that managed to double cell performances with a full consumption of the carbon source, without affecting virulence and antigenecity for a number of successive subcultures.

Reactogenicidad e inmunogenicidad de la vacuna cubana inactivada trivalente contra la leptospirosis humana según diferentes esquemas

Se realizó un ensayo clínico controlado y aleatorizado, con el objetivo de evaluar la reactogenicidad e inmunogenicidad de la vacuna cubana trivalente contra la leptospirosis humana (vax-SPIRAL) en grupos de voluntarios sanos con la utilización de diferentes esquemas de vacunación. Se empleó como control una vacuna de procedencia rusa. Las reacciones adversas evaluadas fueron síntomas y signos locales (dolor, rubor, infiltración local, prurito, necrosis y absceso) y generales (fiebre, febrícula, cefalea, lipotimia, náuseas, vómitos, rash y malestar general). Los resultados obtenidos demostraron la inocuidad de la vacuna, al no presentarse reacciones adversas graves. La febrícula y el dolor local ligero fueron los signos y síntomas que aparecieron en magnitudes aceptables. La fiebre apareció en un número reducido de voluntarios. Las reacciones adversas reportadas en los grupos vacunados con diferentes esquemas de la vacuna cubana y los inmunizados con la vacuna rusa fueron similares. La mayoría de los síntomas y signos desaparecieron a las 72 h. La seroconversión obtenida resultó similar a otras bacterinas contra la leptospirosis. Los resultados obtenidos permiten concluir que la vacuna es segura y poco reactogénica para adultos humanos.

A controlled, randomized assay was performed to evaluate the reactogenecity and immunogenecity of Cuban trivalent vaccine against human leptospirosis (vax-SPIRAL) in healthy volunteers, using different vaccination schemes. A Russian-made vaccine was used as control. Adverse effects were local symptoms and signs (pain, rush, local infiltration, itching, necrosis and abscess) and general symptoms and signs(fever, low-grade fever, headache, lipotimia, nausea, vomiting, rash and general malaise). The results showed that the vaccine is innocuous since no serious adverse effects were observed. Low-grade fever and slight local pain were the symptoms and signs that occurred at acceptable levels. Fever was present in a small number of volunteers. Similar adverse reactions were reported in the groups immunized with Cuban vaccine under different vaccination schemes and in those immunized with the Russian-made vaccine. Most of the symptoms and signs disappeared after 72 hours. Seroconversion was similar to other bacterines against leptospirosis. The achieved results allowed concluding that the Cuban vaccine is safe and low reactogenic for human adults.

Lepto dipstick: resultados de su aplicación al diagnóstico rápido de la leptospirosis humana

Se estudiaron 41 sueros provenientes de pacientes en estado grave con sospechas de leptospirosis humana, mediante la prueba comercial Lepto dipstick y haciendo uso paralelamente de la microaglutinación de serogrupos con antígenos vivos (MAT). Se obtuvieron diferentes niveles de reactividad por el dipstick en 26 de las muestras investigadas. Este ensayo y la MAT coincidieron en 85,4 % de los resultados. Se comprobó que el Lepto dipstick reconoce anticuerpos contra diferentes serovares de leptospiras, y que el grado de intensidad de la tinción de las bandas se corresponde con el nivel de anticuerpos detectados por la MAT. La aplicación del Lepto dipstick al diagnóstico de la leptospirosis humana, permitió ofrecer una respuesta rápida al personal médico de asistencia de los casos estudiados. Esto demostró que se trata de un método rápido de realizar y de fácil lectura e interpretación.

Forty one serum specimens from critical patients who were suspected of having human leptospirosis were studied by using simultaneously convencional test Lepto-dipstick and serogroup microagglutination test (MAT) with live antigens. Different reactivity levels were reached in 26 tested samples by Lepto-dipstick. This assay and MAT coincided in 85,4% of results. It was confirmed that Lepto-dipstick detects antibodies to various leptospiral serovars and that the degree of intensity of the band staining corresponded with the level of detected antibodies by MAT. The implementation of Lepto-dipstick in the diagnosis of human leptospirosis allows providing a rapid response to the medical staff in charge of the studied cases. This proved that Lepto-dipstick is a rapid method that is easy-to-read and interpret.

Identificación de aislamientos de Leptospira por métodos serológicos y genéticos

Se estudiaron 18 cepas de Leptospira, aisladas de pacientes con leptospirosis humana de 3 provincias de Cuba, empleando métodos serológicos y genéticos. Las cepas fueron agrupadas por aglutinación microscópica (MAT), con 8 antisueros policlonales. Se utilizaron 9 anticuerpos monoclonales (AcMs) para determinar el serovar de las cepas. Alternativamente se realizó la extracción del ADN de estas cepas y fue amplificado por un sistema de reacción en cadena de la polimerasa descrito para leptospiras patógenas. El ADN amplificado fue digerido con las enzimas de restricción Alu I y Hae III. Por MAT las cepas fueron agrupadas entre los serogrupos Ballum, Pomoma, Canicola e Icterohaemorrhagiae. Se determinó el serovar de 7 de las cepas estudiadas con el uso de los AcMs. Para la totalidad de las cepas se obtuvo por reacción en cadena de la polimerasa un fragmento amplificado de 631 pb. El análisis con enzimas de restricción del producto amplificado, originó iguales patrones de restricción en todas las cepas estudiadas. Los métodos utilizados permitieron la identificación a diferentes niveles de todas las cepas estudiadas, se señala que el uso de los AcMs hizo posible tipificar hasta serovar a 7 de las cepas.

Serological and genetic methods were used to study 18 leptospiral strains isolated from patients with leptospirosis in 3 Cuban provinces. The strains were grouped by microscopic agglutination with 8 polyclonal antisera. Nine monoclonal antibodies served to determine the strain serovars. Alternatively, DNA was extracted from these strains and applied by a polymerase chain reaction system described for pathogenic leptospiras. Amplified DNA was digested by restriction enzymes Alu I and Hae III. MAT grouped the strains among serogroups Ballum, Ponoma, Canicula and Icterohaemorrhagiae. Monoclonal antibodies determined the serovars of seven of the studied strains. For all the strains, an amplified fragment of 631 pb was obtained by polymerase chain reaction. The analysis of the amplified product with restriction enzymes revealed similar patterns of restriction in all the strains. The used methods made it possible to identify all the strains at different levels. It is also pointed out that the use of monoclonal antibodies allowed to typify seven strains up to the serovar level.