Revista Cubana de Medicina Tropical

Tercer Taller y Tercera Reunión Científica Internacional ¨Leptospirosis Habana 2006

Diagnóstico de leptospirosis crónica, comparación entre la aglutinación microscópica y 3 técnicas diagnósticas confirmatorias

Se valoró que a pesar de ser la serología y particularmente la técnica de aglutinación microscópica, los métodos más recomendados para realizar el diagnóstico de leptospirosis, con frecuencia fracasa en el diagnóstico de casos individuales y brotes, en los cuales este termina realizándose postmortem, mediante impregnación argéntica e inmunohistoquímica, además de ser incapaz de diagnosticar leptospirosis crónica, porque en esta, los títulos de anticuerpos son muy bajos (≤1:80). Por ello y por la necesidad de un diagnóstico de laboratorio veraz y oportuno, se realizó un estudio comparativo de la videograbación en campo oscuro, apuntalada por la impregnación argéntica y la inmunohistoquímica en sangre y orina, contra la serología por la técnica de aglutinación microscópica, en 60 pacientes con leptospirosis crónica. La videograbación en campo oscuro, la impregnación argéntica y la inmunohistoquímica resultaron mucho más sensibles que la técnica de aglutinación microscópica, además de ser comparables entre sí, por lo que la videograbación es recomendable para realizar un diagnóstico rápido, temprano y económico, en particular si se asocia a la inmunohistoquímica o la impregnación argéntica. Asimismo, al cultivar estas muestras se obtuvieron 2 cepas de 82 % de primocultivos positivos, y se obtuvo una microfotografía electrónica en la sangre periférica de uno de los casos estudiados, lo que asegura el estudio y avala la existencia de la leptospirosis crónica.

Adaptación de un protocolo de inmunohistoquímica para la detección de Leptospira spp. en muestras de tejido fijado en formaldehído

Se evaluó la técnica de inmunohistoquímica en muestras de tejido fijado en solución salina de formaldehído 10 % e incluidas en parafina, para utilizarla como método de laboratorio que permitiera identificar leptospiras en los tejidos. Se utilizaron muestras obtenidas a partir de la inoculación experimental de 8 cobayos con L. interrogans pomona aislada de un caso clínico. Se reprodujo la enfermedad en el modelo de laboratorio. Las secciones histológicas de los riñones de los animales inoculados se sometieron a estudios histopatológicos, inmunofluorescencia, tinción de Warthin-Starry y técnica de inmunohistoquímica con muestras fijadas en formaldehído. La técnica de inmunohistoquímica implementada resultó ser una herramienta eficaz para el diagnóstico de la leptospirosis.

Confirmación microbiológica de 2 brotes emergentes de leptospirosis humana en Cuba

Clinical samples from 293 patients with suspicion of leptospirosis were studied for the microbiologic confirmation of these events, in October-December 2005, when there were 2 outbreaks in humans, in Cuba. Sera samples of patients in acute phase and during convalescence, as well as hemocultures performed before the beginning of the antibiotic therapy, were analyzed. Conventional techniques (passive hemagglutination test and serogroups hemagglutination), and advanced or fast diagnosis techniques (Lepto tek Dri-Dot, Lepto-Cuba, Latex-India, Lepto tek Lateral Flow) were used for serologic diagnosis. In outbreak I, 26 % of the studied cases were confirmed by serological tests (22/84), and 25 % (5/20) through hemocultures; whereas in outbreak II, 48 of the 162 studied cases (30 %) were serologically confirmed, and it was possible to obtain isolation of leptospires in 6 of the 27 processed cases (22 %). The main serovariants found by serology were canicola, ballum, icterohaemorrhagiae, and pomona. The rapid diagnosis methods were useful screening tools in the most severe cases or at pediatric ages. The two epidemiologic events were caused by pathogenic leptospires infection, which contributed to the adoption of hygienic-sanitary measures in both provinces.

Brote de leptospirosis humana en la provincia Guantánamo

Se realizó una caracterización de la epidemia ocurrida en la provincia Guantánamo durante los meses de octubre y noviembre de 2005, así como de las actividades desarrolladas para su control. Se comprobó que existían factores propicios para su desarrollo, esto trajo consigo que a partir de la semana estadística 42 se notificara un alza en el número de atenciones médicas con cuadros clínicos y elementos epidemiológicos. Se notificaron un total de 885 casos sospechosos, 61 fueron confirmados microbiológicamente para una positividad de 6,9 %. Los municipios con mayor riesgo fueron Niceto Pérez, la ciudad de Guantánamo y Manuel Tames. Se llevaron a cabo de forma inmediata una serie de actividades con el apoyo multisectorial e interdisciplinario de distintas organizaciones, que permitieron controlar la situación en un lapso menor de un mes. El estudio de este brote demostró que la leptospirosis continúa siendo un problema de salud en Cuba y que para su control se necesitan unificar esfuerzos y recursos.

Riesgo de enfermar de tuberculosis de los convivientes adultos de enfermos bacilíferos

Se presentó un estudio observacional, retrospectivo, analítico, cuyo objetivo fue identificar los factores de riesgo asociados al desarrollo de la enfermedad tuberculosa en los contactos adultos intradomiciliarios del enfermo bacilífero. Fueron estudiados 124 convivientes de los enfermos diagnosticados de tuberculosis pulmonar desde el 1ro. de enero de 1997 hasta el 31 de diciembre de 2000 en el municipio Habana Vieja. De los convivientes con enfermos de tuberculosis con baciloscopia positiva 8 % enfermaron. La permanencia en contacto íntimo con el caso índice por un período entre 7 y 59 meses fue un factor de riesgo para enfermar. Otros factores de riesgo identificados fueron el hacinamiento, la insuficiente luz natural y la inadecuada ventilación, los cuales estaban presentes en 70 % de los convivientes que enfermaron.

Infección natural de Lutzomyia cayennensis cayennensis con parásitos tripanosomatídeos (Kinetoplastida: Trypanosomatidae) en Los Montes de María, Colombia

Se determinó la presencia de flebotomíneos naturalmente infectados con parásitos tripanosomatídeos en Los Montes de María, Colombia, región endémica de leishmaniosis visceral y cutánea. Los especímenes se colectaron usando trampas de luz tipo CDC y trampas de papel impregnado con aceite de ricino instaladas en el intradomicilio y peridomicilio. Se identificaron 6 especies de Lutzomyia entre los 159 flebotomíneos recolectados: Lu. evansi, Lu. cayennensis cayennensis, Lu. trinidadensis, Lu. atroclavata, Lu. gomezi y Lu. dubitans. En un grupo de 9 hembras de Lu. cayennensis cayennensis se amplificó un segmento de ADN de 800 pb del gen que codifica para el ARN de la subunidad pequeña ribosomal (ssrRNA) de la familia Trypanosomatidae . Este hallazgo constituyó la primera evidencia de infección natural de Lu. cayennensis cayennensis con parásitos tripanosomatídeos en Los Montes de María.

The presence of sand flies naturally infected with trypanosomatid parasites was determined in Los Montes de María, Colombia, a region considered endemic for visceral and cutaneous leishmaniasis. Phlebotomines were collected using CDC light-traps, and sticky traps soaked with castor oil placed in the peri and intradomestic habitats. Six species of Lutzomyia were morphologically identified among the 159 sand flies captured: Lu. evansi, Lu. cayennensis cayennensis, Lu. trinidadensis, Lu. atroclavata, Lu. gomezi and Lu. dubitans. A DNA band of 800 pb corresponding to the small-subunit ribosomal RNA gene (ssrRNA) of the family Trypanosomatidae was amplified in one pool of nine females of Lu. cayennensis cayennensis. This finding constitutes the first evidence of natural infection of this sand fly species with trypanosomatid parasites in Los Montes de María.

Niveles de susceptibilidad de una cepa de Aedes aegypti procedente de Santiago de Cuba ante los insecticidas lambdacialotrina, cipermetrina y clorpirifos

Se determinó el nivel de susceptibilidad y/o resistencia en larvas y adultos de una cepa de Aedes aegypti (L) colectada en el municipio Santiago de Cuba, ante los insecticidas lambdacialotrina, clorpirifos y cipermetrina. Los resultados demostraron que en el estadio larval la cepa en estudio mostró ser susceptible ante los insecticidas lambdacialotrina (FR90= 2,1) clorpirifos (FR90= 1,3) y cipermetrina (FR90= 3,3), mientras que en el estadio adulto mostró ser moderadamente resistente para los insecticidas lambdacialotrina (FR90= 8,6) y cipermetrina (FR90= 7,2) y ante el insecticida clorpirifos se comportó susceptible (FR90= 4,47).

The level of susceptibility and/or resistance in larvae and adults of an Aedes aegypti strain (L.) collected in Santiago de Cuba to lambda-cyhalothrin, chlorpyrifos, and cypermethrin. was determined. The results showed that in the larval stage the strain under study was susceptible to lambda-cyhalothrin (RR90 = 2.1) chlorpyirifos (RR90 = 1.3), and cypermethrin ( RR90 = 3.3), whereas in the adult stage, it was moderately resistant to lambda-cyhalothrin (RR90 = 8.6) and cypermethrin (RR90 = 7.2), and susceptible to chlorpyrifos (RR90 = 4.47).

Factores de riesgo de infestación pupal con Aedes aegypti dependientes de la comunidad en un municipio de Ciudad de La Habana

Se identificaron los factores de riesgo de infestación pupal de Aedes aegypti dependientes de la comunidad en 4 áreas de salud del municipio Playa, ubicado en la zona urbana de Ciudad de La Habana. Los depósitos de mayor positividad al vector del dengue correspondieron a los depósitos artificiales y tanques bajos. Se comprobó que 99,03 % de los locales visitados contenían al menos un depósito con agua, y que las 4 áreas presentaron un comportamiento muy similar en la proporción de tanques por locales, porque en todas la frecuencia de agua fue en días alternos, por lo que la diferencia en la positividad se debió a otros factores no ligados al abasto de este líquido. De los depósitos positivos, 87,17 % se ubicó en los patios de los locales y 91,3 % de los tanques bajos positivos se halló sin tapas o parcialmente tapados. Se encontró que en la positividad de los depósitos al vector del dengue solo 8,7 % no depende de la población, por lo que de existir una participación activa de la comunidad dirigida al tapado de los tanques, el recambio de agua en los bebederos de animales y un buen saneamiento de los patios, se hubiera reducido drásticamente la infestación pupal por Ae. aegypti en las áreas estudiadas.

The risk factors of pupal infestation with community-based Aedes aegypti were identified in four areas of Playa municipality, located in the urban zone of Havana City. The deposits with the highest positivity to the vector were the artificial ones and the low tanks. It was confirmed that 99.03 % of the sites visited contained at least one deposit with water, and that 4 areas presented a very similar behaviour in ratio of tanks per site, since in all of them the water was supplied every other day. That is why the difference in the positivity was not due to factors related to the water supply. Of the positive deposits, 87.17 % were located in backyards, and 91.3 % of the positive low tanks had no cover, or were partially covered. It was found that in the positivity of the deposits to the dengue vector, only 8.7 % were non-community dependent. If there had had an active participation of the community directed to cover the tanks, to change the water in the water troughs, and to clean the backyards, the pupal infestation due to Aedes aegypti would have drastically increased in the studied areas.

Identificación fenotípica y molecular de b-lactamasas de espectro extendido TEM y SHV producidas por Escherichia coli y Klebsiella spp. aislados clínicos de hospitales

Se evaluó la prevalencia de b-lactamasas de espectro extendido (BLEE) tipo TEM y SHV producidas por Escherichia coli y Klebsiella spp. y se determinó la susceptibilidad a otras familias de antimicrobianos. Un total de 326 cepas fueron colectadas entre 2002-2004, procedentes de hospitales en Ciudad de La Habana; los ensayos de susceptibilidad se realizaron de acuerdo con las guías NCCLS y fueron confirmados como productores de BLEE, por el método de doble difusión con discos. La caracterización molecular se realizó mediante la reacción en cadena de la polimerasa, utilizando oligonucleótidos específicos para detectar los genes blaTEM y blaSHV. El fenotipo BLEE fue detectado en 31 de los aislados de Escherichia coli (10 %); de estos 19 (61 %) fueron portadores del gen blaTEM, 5 (16 %) del gen blaSHV; 4 (12 %) portaban ambos genes y 11 (35 %) no portaban ninguno de los genes evaluados. En las cepas de Klebsiella spp. el fenotipo BLEE fue detectado en 10 aislados (36 %) y solo una cepa presentó genotipo blaTEM 1 (10 %). Los antimicrobianos más activos frente Escherichia coli fueron ciprofloxacina (64,5 %) y gentamicina (58,07 %). Los mismos antimicrobianos fueron los más activos para Klebsiella spp., con igual sensibilidad (70 %). Los carbapenémicos aún permanecen activos en las cepas productoras de BLEE, no obstante su uso debe vigilarse cuidadosamente.

Nosocomial infections caused by gram-negative bacilli which produce extended spectrum β-lactamase (ESBL) are associated with the increase of morbidity and mortality in hospitals. The objective of this study was to evaluate the frequency of ESBL, specifically the TEM and SHV type, produced by Escherichia coli and Klebsiella spp. strains, and also to determine the antimicrobial susceptibility of these isolates in comparison with other antibiotic families. A total of 326 strains were collected between 2002-2004 from hospitals in Havana City. The susceptibility tests were carried out according to the NCCLS guides and they were confirmed as . ESBL producers by the double disk diffusion method. The molecular characterization of these enzymes was determined by polymerase chain reaction (PCR), using two sets of oligonucleotides to amplify genes encoding TEM and SHV type b-lactamase. The ESBL phenotype was detected in 31 (10 %) Escherichia coli isolates, 19 of these strains (61 %) carried the blaTEM genes, 5 (16 %) blaSHV genes, 4 (12 %) strains carried both genes and 11 strains (35 %) carried the non-ESBL blaTEM and blaSHV genes. In Klebsiella spp the ESBL phenotype was detected in 10 (36 %) isolates, only one strain carried the blaTEM gene. The most active antimicrobials against Escherichia coli were ciprofloxacin (64.5 %) and gentamicin (58.07 %); in the case of Klebsiella spp. the same antimicrobials were the most active with similar susceptibility (70 %) for both. The carbapenems still remain the most active antibiotics against Escherichia coli and Klebsiella spp. strains, which are ESBL producers. However, their use should be closely controlled.

Encuesta acerca de Leptospira interrogans mediante RCP en roedores salvajes procedentes de diferentes áreas urbanas de Palermo, Italia

DNA extracted from the kidneys of rodents captured in different urban areas of Palermo, Italy, had been analysed for the presence of pathogenic L. interrogans sensu latu DNA. PCR analysis had shown that in rodents captured close to green areas and small river up to 40% animals give positive PCR results. Not many cases of human leptospirosis are reported in Sicilian island in which hot season is usually dry. But considering climate change toward subtropical aspect in Sicily, with hot humid summer and sudden thunderstorm, screening for L.interrogans sensu latu prevalence can be useful for leptospirosis risk analysis on human population.

Evidencia de leptospirosis canina en las perreras de Sicilia según el método de RCP

Stray dogs in kennels in western Sicily were monitored for zoonotic diseases presence; considering life conditions before their capture they are particularly exposed to the environment and so they can give good epidemiological information on disease prevalence. Leptospira pathogen specific PCR had been used to identify potential reservoirs of pathogenic serovars and provide a preliminary picture of the prevalence of the disease among stray dogs.

Avances de laboratorio en el diagnóstico serológico y la investigación de la leptospirosis humana en Cuba

Se evaluaron por vez primera en Cuba las tecnologías serológicas rápidas para realizar la pesquisa y confirmación de la leptospirosis humana, que mundialmente están disponibles. Su reconocimiento clínico resulta difícil, el diagnóstico etiológico rápido es de vital importancia Se obtuvieron valores de sensibilidad y especificidad superiores a 90 % en los sistemas confirmatorios y de 85 % en el de pesquisa. De los pacientes graves estudiados por estas tecnologías 50 % fue positivo, además se confirmaron 203 casos pertenecientes a 4 brotes epidémicos, así como 12 enfermos vacunados con vaxSPIRAL®, demostrándose la eficacia de la vacuna (78,1 %). Se desarrolló y aplicó un sistema látex para pesquisa rápida de leptospirosis (LeptoCuba), con excelente sensibilidad, especificidad, reproducibilidad y estabilidad. La aplicación de nuevas tecnologías a la pesquisa y confirmación rápida de la enfermedad, permitió incrementar la positividad y calidad del diagnóstico en el período 2002-2006, fortaleciéndose la vigilancia microbiológica en el país.

For the first time in Cuba the rapid serologic technologies available worldwide were evaluated for the screening and confirmation of human leptospirosis. As its clinical recognition is difficult, the fast etiological diagnosis is of vital importance. Sensitivity and specificity values higher than 90 % were obtained in the confirmatory systems, and of 85 % in the screening systems. Of the severe patients studied by these technologies 50 % were positive. 203 cases corresponding to 4 epidemic outbreaks were confirmed, as well as 12 sick persons vaccinated with vaxSPIRAL®, which demonstrates the vaccine effectiveness (78.1 %). We developed and applied a latex system for a rapid screening of leptospirosis (LeptoCuba), with an excellent sensitivity, specificity, reproducibility, and stability. The application of new technologies for the screening and fast confirmation of the disease allowed to increase the positivity and quality of the diagnosis from 2000 to 2006, strengthening the microbiological surveillance in the country.

Clasificación de leptospiras aisladas en Cuba con la utilización de anticuerpos monoclonales

By using the monoclonal antibodies methodology we have classified Cuban serovars of leptospires isolated from blood culture of confirmed leptospirosis patients. The serogroups Pomona and Canicola were the most predominant found in our study. Pomona, Mozdok and Canicola serovars were the most prevalent types in these serogroups. Our study has essentially presented a validation of a monoclonal antibody method for the serotyping of Cuban leptospire isolates.

Se clasificaron, mediante la metodología de los anticuerpos monoclonales, los serovares cubanos de Leptospira aislados en hemocultivos de pacientes con leptospirosis confirmada. Los serogrupos Pomona y Canicola fueron los predominantes. Los serovares Pomona, Mozdok y Canicola resultaron los más frecuentes dentro de esos serogrupos. Se presentó la validación del método de anticuerpos monoclonales para la tipificación serológica de las leptopiras aisladas en Cuba.

Método de la reacción en cadena de la polimerasa en la detección temprana de Leptospira spp. en hemocultivos de pacientes con sospecha de leptospirosis

Se aplicó un método de la reacción en cadena de la polimerasa para la detección temprana de Leptospiras spp. en hemocultivos procedentes de pacientes con sospecha de leptospirosis humana. Los métodos moleculares, y en particular la amplificación del ADN por la reacción en cadena de la polimerasa y sus variantes, constituyen herramientas muy útiles y específicas, utilizadas en la actualidad con esta finalidad. Se lograron identificar por la reacción en cadena de la polimerasa Leptospiras spp. en 41,3 % (33/80) de los hemocultivos a los 7 d de incubación, los que también se clasificaron como positivos por los métodos convencionales. Sin embargo, hubo 20 % (16/80) en los que también por este método se lograron identificar Leptospiras spp., pero por los métodos convencionales resultaron ser negativos. De los hemocultivos 38,7 % (31/80) resultó negativo tanto por la reacción en cadena de la polimerasa como por los métodos convencionales. El uso del método de la reacción en cadena de la polimerasa a partir de hemocultivos, es una alternativa valiosa para la detección temprana y el diagnóstico rápido de Leptospiras spp.

The PCR method for the early detection of Leptospiras spp. in hemocultures from patients suspected of human leptospiros was applied. Molecular methods and, particularly, the amplification of DNA by PCR, and its variants, are very useful and specific tools used nowdays to this end. Leptospiras spp. were identied by means of PCR in 41.3 % (33/80) of the hemocultures at 7 days of incubation.They were also classified as positive by the conventional methods. However, it was also possible to identify Leptospiras spp. in 20 % (16/80) by this method, but they proved to be negative by the conventional methods. Of the hemocultures, 38.7 % (31/80) yielded negative by PCR and by the conventional methods. The use of PCR starting from hemocultures is a valuable alternative for the early detection and rapid diagnosis of Leptospiras spp.

Conducta de oviposición de Aedes aegypti (L.) en presencia de Macrocyclops albidus (J.) y Bacillus thuringiensis var. israelensis en condiciones de laboratorio

Se evaluó la conducta de oviposición de hembras grávidas de Aedes aegypti en presencia de los agentes biológicos: Macrocyclops albidus (Copepoda: Cyclopoidea) o Bacillus thuringiensis var. israelensis (Bti) en condiciones de laboratorio. Se colocaron recipientes con 225 mL de agua declorada para la puesta de huevos con 3 variantes: agua con copépodos, agua con Bti y agua. El promedio de huevos depositados en los recipientes con copépodos y Bti fueron de 1 227,9 y 1 200,8 respectivamente, superiores al de 887,4 huevos del recipiente que contenía solo agua, aunque las diferencias observadas no fueron estadísticamente significativas (p> 0,05). Los Indices de la Actividad de Oviposición (IAO) calculados mostraron valores mayores que 0 para copépodos y para Bti, indicando que las hembras no evitaron ovipositar en estos recipientes. Los resultados sugieren que en la naturaleza los recipientes que contienen estos controladores biológicos pudieran constituir sitios para la oviposición de hembras grávidas de Aedes aegypti, lo que tendría implicaciones positivas en su eficacia para controlar este vector.

The behaviour of the oviposition of pregnant females of Aedes aegypti in the presence of biological agents: Macrocyclops albidus (Copepoda: Cyclopoidea) or Bacillus thuringiensis var. israelensis (Bti) was evaluated under lab conditions. Recipients containing 225 mL of dechlorinated water were placed for oviposition with three variants: water with copepods, water with Bti, and water. The average of eggs layed in the recipients with copepods and Bti were 1 227.9 and 1 200.8, respectively, a figure higher than the 887.4 eggs of the recipient containing only water, although the differences observed were not statistically significant (p >0.05). The Oviposotion Activity Index (OAI) estimated showed values over 0 for copepods and for Bti, which indicated that females did not avoid to deposit their eggs in these recipients. The results suggested that in nature, these recipients with biological controllers may be oviposition sites for pregnant females of Aedes aegypti, which may have positive implications on its effectiveness to control this vector.