Revista Cubana de Medicina Tropical

**Patogenicidad de Blastocystis sp. Evidencias y mecanismos**

Introducción: durante las últimas dos décadas se acumularon evidencias que favorecen la aceptación del carácter patógeno de Blastocystis sp. Sin embargo, esos argumentos no son aún del conocimiento de la inmensa mayoría de los profesionales relacionados con el diagnóstico, tratamiento y control de las parasitosis intestinales, en general, y de la blastocistosis, en particular. Objetivos: revisar lo publicado sobre las evidencias en favor de la patogenicidad de Blastocystis sp. y, hasta dónde la información acumulada permite, exponer los mecanismos por los cuales este parásito puede causar daños en el hospedero humano. Métodos: con el auxilio de diferentes buscadores electrónicos, se realiza una revisión de los artículos sobre patogenicidad de Blastocystis sp. publicados durante el período 1994-2014. Puntualmente, también fueron consultados, algunas monografías y artículos originales fechados con anterioridad al intervalo mencionado. Resultados: se expone y analiza, con un enfoque académico y asistencial, la información actualizada sobre los temas seleccionados. Conclusiones: evidencias clínicas, fenotípicas y genotípicas acumuladas durante los últimos tres lustros favorecen la aceptación del carácter patógeno de Blastocystis sp. y éstas, una vez difundidas ente los profesionales correspondientes, deberán ser tenidas en cuenta para la realización de un mejor diagnóstico, tratamiento y control de esta parasitosis.

Introduction: during the last two decades, evidence supporting the pathogenic character of Blastocystis sp. accumulated. Nevertheless, those arguments are still unknown by the great majority of professionals related with diagnosis, treatment and control of the intestinal infectious in general, and of the blastocystosis in particular. Objectives: to review published materials about pieces of evidence that support the acceptance of the pathogenicity of Blastocystis sp., and to what extent the information accumulated allows revealing the mechanisms by which this parasite causes damage to the human host. Methods: through different search engines, papers about pathogenicity of Blastocystis sp. published during 1994-2014 period were reviewed. Additionally, some monograph and papers dated previously to the mentioned interval were also consulted. Results: updated information about the selected topics, with academic and practical approach, were presented and analyzed. Conclusions: clinical, phenotypic and genetic pieces of evidence accumulated during the last fifteen years support the pathogenic character of Blastocystis sp. Once they are adequately integrated into the practice of the corresponding professionals the diagnosis, treatment and control of blastocystosis could be improved.

Aeromicología y salud humana

Introducción: la aeromicología estudia la variación temporal y espacial del contenido fúngico de la atmósfera, así como la influencia de los factores meteorológicos sobre dichas variaciones. En países tropicales como Cuba, la elevada temperatura y la humedad relativa favorecen el crecimiento de los hongos, así como la formación y liberación de sus esporas, las cuales pueden afectar la salud humana. Objetivo: destacar el impacto de los estudios aeromicológicos para la salud humana. Métodos: se realizó una revisión de la literatura científica sobre aspectos generales de la aeromicología, las principales especies fúngicas presentes en ambientes exteriores e interiores, su impacto en la salud humana y las medidas para disminuir el riesgo de afectación a la salud por dichos hongos. Resultados: se expone información actualizada y valiosa sobre la aeromicología, útil para la prevención de enfermedades ocasionadas por hongos presentes en el aire. Además se destacan los estudios realizados en Cuba hasta la actualidad. Conclusiones: la determinación ambiental de propágulos fúngicos así como sus variaciones estacionales es un parámetro relevante a evaluar dentro de la salud preventiva.

Introduction: aeromycology studies the time and space variation of the air fungal content, as well as the influence of weather factors on these variations. In tropical countries like Cuba, high temperatures and relative humidity favor fungal growth and the formation and release of its spores, which can have an impact on human health. Objective: to highlight the impact of Aeromycology in the human health. Methods: Scientific literature addressing the general aspects of aeromycology, the main indoor and outdoor fungal species, their impact on human health and the actions aimed at decreasing the risk for human health was reviewed. Results: updated and valuable information on aeromycology was presented which can be used to prevent diseases caused by airborne fungi. Additionally, this review highlighted the studies conducted in Cuba up to the present. Conclusions: the environmental determination of fungal propagules and their seasonal variations is a relevant parameter to be evaluated in preventive health care systems.

Eficacia in vitro de tres endectocidas frente a Triatoma infestans

Introducción: distintos estudios han demostrado el papel preponderante que el peridomicilio cumple en la reinfestación de las viviendas por Triatoma infestans (vinchucas). Con el objetivo de eliminar focos residuales de T. infestans que habitan alrededor de los hogares se han desarrollado distintas estrategias. La administración de diferentes compuestos que tengan actividad contra T. infestans a los animales que habitan zonas cercanas a los domicilios y sirvan como fuente de alimentación a estos insectos, podría ser una buena manera de disminuir el riesgo de reinfestación domiciliaria. Objetivo: evaluar la eficacia in vitro de tres agentes antiparasitarios, doramectina (DRM), ivermectina (IVM) y eprinomectina (EPR) frente a ninfas de quinto estadio de Triatoma infestans. Métodos: se diseñaron alimentadores artificiales en donde se colocó sangre heparinizada y fortificada con distintas concentraciones de los tres endectocidas (100-0,4 ng/mL). Se utilizaron 600 ninfas de quinto estadio de T. infestans durante el experimento. Un grupo de vinchucas fue alimentada con sangre sin tratar (control). Luego de realizada la alimentación se observó el estado de los insectos cada 24 hs. durante el transcurso de una semana. Resultados: los tres endectocidas demostraron actividad frente a ninfas de quinto estadio de T. infestans. Comparando la actividad de las tres moléculas, DRM fue la que exhibió una mayor potencia contra los insectos, inclusive mantuvo su actividad frente T. infestans a 0,4 ng/mL (menor concentración evaluada). En el caso de IVM y EPR comenzaron a perder eficacia a concentraciones por debajo de los 6,25 y 3,15 ng/mL respectivamente, siendo totalmente inactivas a 0,4 ng/mL. Conclusiones: en base a estos resultados podemos aseverar que bajo nuestras condiciones experimentales, tanto IVM, EPR como DRM poseen una alta eficacia in vitro contra T. infestans, siendo la última la más efectiva de las tres evaluadas.

Introduction: various studies have demonstrated the role that areas around the houses play in domiciliary re-infestation by Triatomainfestans (kissing bugs). With the aim of removing residual foci of T. infestans that inhabit in neighboring areas of houses, different strategies have been developed. The administration of different anti-T. infestans compounds to animals living in areas around the houses might be a good way to reduce the risk of domiciliary re-infestation. Objective: to evaluate the in vitro efficacy of three antiparasitic agents, doramectin (DRM), ivermectin (IVM) and eprinomectin (EPR) against fifth instar nymphs of Triatomainfestans. Methods: artificial feeders were designed , which contained heparinized and fortified blood with various concentrations of the three endectocides (100-0.4 ng/mL). We used 600 fifth instar nymphs of T. infestans during the experiment. A group of insects were fed with untreated blood (control). After feeding they were under observation to check their condition every 24 hours for a week. Results: the three molecules showed activity against T. infestans. In comparing the activity of the three molecules, DRM exhibited greater potency against insects, it even kept its activity against T. infestans at 0.4 ng/mL (lowest concentration tested). In the case of EPR and IVM, their efficacy began to lower at concentrations below 6.25 and 3.15 ng/mL respectively, being totally inactive at 0.4 ng/mL concentration. Conclusions: Based on these results, we can assert that under our experimental conditions, IVM, EPR and DRM show in vitro high efficacy against T. infestans, being the latter more effective than the other two molecules.

**Perfil de resistencia a insecticidas en una cepa de Aedes aegypti (Linnaeus) de la región Caribe de Costa Rica**

Introducción: el dengue constituye la principal enfermedad de transmisión vectorial en Costa Rica. El control del vector Aedes aegypti consiste en la aplicación de piretrinas y temefós, por lo cual es importante monitorear la aparición de resistencia a estos insecticidas. Materiales y métodos: se efectuaron bioensayos con larvas de Ae. aegypti procedentes del cantón de Guácimo en la Región Caribe de Costa Rica. Grupos de 20 larvas fueron expuestos por 24 horas a concentraciones de insecticidas que provocaran una mortalidad entre el 2 y el 100 %. Las pruebas fueron efectuadas por quintuplicado y se calculó la concentración letal 50 % (CL50). Como control susceptible se empleó la cepa Rockefeller. Un radio de resistencia 50 % (RR50) fue calculado para cada insecticida. En caso de resistencia se repitieron los ensayos exponiendo las larvas a butóxido de piperonilo (PB) y S, S, S, tributilfosforotritioato (DEF) para perfilar el mecanismo enzimático vinculado con dicha resistencia. Resultados: no se observó resistencia a temefós y deltametrina, pero sí se encontró resistencia incipiente a la cipermetrina (CL50 = 0,00845 mg/L, rango: 0,00664-0,01038, RR50 = 6,07). El análisis con sinergistas determinó un radio de singergismo (RS) de 19,2 para el PB y de 0,9 para DEF. Discusión: los resultados demuestran que existe un proceso de desarrollo de resistencia a la cipermetrina en los mosquitos Ae. aegypti en esta localidad, el cual está relacionada con la actividad citocromo P450 monooxigenasa. Esto alerta a las autoridades para sustituir dicho insecticida y así asegurar el adecuado control del vector sin la generación de resistencia.

Introduction: dengue is the main vector-borne disease in Costa Rica. The control of the vector Aedes aegypti covers the application of pyrethrins and temephos. For this reason, it is important to monitor the development of resistance to these insecticides. Material and Methods: bioassays were performed using Ae .aegypti larvae from the county of Guacimo in the Caribbean region of Costa Rica. Twenty-larvae groups were exposed to insecticidadl concentrations for 24 hours, which would generate 2 to 100 % mortality. The tests were performed five times, and a 50 % lethal concentration (LC50) was calculated. The Rockefeller strain was used as susceptibility control. A 50 % resistance ratio (RR50) was calculated for each insecticide. When resistance occurred, tests were repeated by exposing the larvae to piperonyl butoxide (PB) and S, S, S, tributylphosphorotrithioate (DEF) in order to determine the enzymatic mechanism associated with this resistance. Results: no resistance to temephos or deltamethrin was observed, but emerging resistance to cypermethrin was detected (LC50 = 0.00845 mg/L, range from 0.00664 to 0.01038, RR50 = 6.07). The synergistic analysis determined a synergism ratio (SR) of 19.2 for PB and 0.9 for DEF. Conclusions: these results show that there is a process of developing resistance to cypermethrin in Ae. aegypti mosquitoes of this county, which is associated with cytochrome P450 monooxygenase activity. This alerts authorities to the need of replacing this insecticide and ensure the appropriate vector control without generating resistance.

**Evaluación de la resistencia a insecticidas en Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) de Argentina**

Introducción: a pesar de los enormes esfuerzos que realiza el Ministerio de Salud de Argentina para el control de Aedes aegypti, persisten en algunas regiones del país determinados índices de infestación que favorecen el desarrollo de epidemias o brotes de dengue. En este negativo indicador se destaca las provincias de Misiones y Buenos Aires, donde desempeña un papel importante el uso de insecticidas. Objetivos: determinar el nivel de resistencia a insecticidas químicos en cepas de Ae. aegypti de Misiones y Buenos Aires, Argentina. Métodos: se determinó en larvas el nivel de resistencia a insecticidas organofosforados (temefos y fenitrotion) y a piretroides (deltametrina y cipermetrina) a través de los bioensayos de la Organización Mundial de la Salud. En el estado adulto se evaluó los piretroides (deltametrina, lambdacialotrina y cipermetrina) y el organofosforado clorpirifos. Resultados: tanto las larvas como los adultos resultaron susceptibles a todos los insecticidas evaluados. Conclusiones: el control químico de Ae. aegypti de las localidades estudiadas, de las provincias de Misiones y Buenos Aires, puede realizarse de forma efectiva, utilizando los insecticidas en uso para el control vectorial, como son, temefos como larvicida y como adulticidas e insecticidas, piretroides y el organofosforado clorpirifos.

Introduction: despite the great efforts of the Ministry of Health in Argentina for the control of Aedes Aegypti, certain significant infestation indexes persist in some regions and lead to the occurrence of dengue epidemics or outbreaks. This negative indicator is remarkable in Misiones y Buenos Aires provinces where the use of pesticides is important. Objective: to determine the levels of resistance of Aedes aegypti strains to chemical insecticidal effects in Misiones and Buenos Aires provinces in Argentina. Methods: World Health Organization bioassays determined the level of resistance in mosquito larvae to organophosphate insecticides (temephos and fenitrotion) and to pyrethroids (deltametrin and cypermetrin). In adult mosquitoes, the action of pyrethroids (deltametrin, lambdacyalotrin and cypermetrin) as well as that of organophosphate ones called chlorpiriphos was evaluated. Results: both the larvae and the adult insects were susceptible to all the insecticides. Conclusions: The chemical control of Ae aegypti in the studied areas from Misiones and Buenos Aires provinces can be effectively exerted by using the insecticides for the vector control such as temephos as larvicide and pyrethroids and the organophosphate called chlorpiriphos as adulticides.

**Actividad in vitro contra Leishmania y permeación en piel humana de liposomas ultradeformables de miltefosina**

Introducción: los liposomas ultradeformables de miltefosina (LUD-MIL) constituyen una opción para el tratamiento tópico en leishmaniasis cutánea penetrando los estratos de la piel hasta la dermis, sitio donde habita el parásito. Objetivo: diseñar LUD-MIL y determinar su actividad contra L. (Viannia) panamensis y L. (V.) braziliensis y la permeación en piel humana. Métodos: los LUD-MIL, liposomas convencionales de fosfatidilcolina (LConv) y LUD-MIL-fluorescente (LUD-MIL-Fluo) fueron preparados por el método de rehidratación de película lipídica. Se caracterizaron fisicoquímicamente y se determinaron: la liberación en membrana semisintéticas, la retención en las capas de la piel y la permeación en piel humana. La citotoxicidad en THP-1 fue determinada por el ensayo colorimétrico de MTT y la actividad en promastigotes y amastigotes intracelulares por recuento microscópico. Resultados: el tamaño, índice de polidispersión, potencial Z y concentración de fosfolípidos de los LUD-MIL fue de 100,7 nm, 0,147, -12,0 mV y 53,24 mM respectivamente. El flujo de MIL a través de la membrana fue mayor con LUD-MIL que con MIL-libre. El tratamiento con LUD-MIL indujo menor acumulación de la MIL en el estrato corneo y mayor permeación que el tratamiento con MIL libre. Los LUD-MIL y los LConv-MIL mantuvieron la actividad de la MIL en los parásitos y células. Los LUD-MIL fueron más tóxicos para las células que los LConv y la MIL y más activos en amastigotes intracelulares de L. (V.) braziliensis. Conclusión: los LUD-MIL preparados conservaron la actividad anti-Leishmania de la MIL y permitieron la liberación del compuesto en membranas y piel humana. Ensayos en modelos experimentales de leishmaniasis cutánea para evaluar la actividad de estas formulaciones son urgentes de realizar.

Introduction: miltefosine ultradeformable liposomes (MIL-LUD) are an option for the topical treatment of cutaneous leishmaniasis penetrating the skin layers to the dermis where the parasite inhabits. Objective: to design MIL-LUD and determine their in vitro activity against L. (Viannia) panamensis and L. (V.) braziliensis and to determine human skin permeation. Methods: MIL-LUD, phosphatidylcholine liposomes (MIL-LConv) and fluorescent MIL-LUD (MIL-LUD-Fluo) were prepared by lipid film rehydration method. They were physicochemically characterized to determine drug release in semisynthetic membrane, retention in skin layers and permeation on human skin membranes. Cytotoxicity in THP-1 was determined by the MTT colorimetric test and activity in promastigotes and intracellular amastigotes by microscopic counting. Results: the size, the polydispersion index, the Zeta potential and phospholipid content were 100.7 nm, 0.147, -12.0mV and 53.24mM, respectively for MIL-LUD. MIL flow through the semisynthetic membrane was greater with MIL-LUD than MIL-free treatment. MIL-LUD treatment induced lower MIL accumulation in the stratum corneum and increased permeation than MIL free treatment. The MIL-LUD and MIL-Conv maintained MIL activity in parasites and cells. The MIL-LUD was more toxic to cells than MIL-Conv and more active against intracellular amastigotes of L. (V.) braziliensis. Conclusion: prepared LUD -MIL retained the anti-leishmanial activity of the MIL and allowed the compound release in human skin and membranes. Testing of experimental cutaneous leishmaniasis models to evaluate the activity of these formulations are urgently needed

**Resistencia antimicrobiana en aislamientos clínicos de Klebsiella spp. y producción de B-lactamasas de espectro extendido en hospitales de Cuba**

Introducción: el género Klebsiella causa brotes hospitalarios, por cepas multidrogorresistentes en diferentes continentes y conlleva a un aumento en la morbimortalidad. Objetivos: identificar las especies de Klebsiella causantes de infecciones en hospitales cubanos, determinar la procedencia de los aislamientos según el servicio, y la susceptibilidad antimicrobiana, conocer la prevalencia de aislamientos productores de ß-lactamasas de espectro extendido (BLEE), y tipos, así como la susceptibilidad de los mismos a diferentes antimicrobianos de interés terapéutico. Métodos: se realizó un estudio descriptivo en 448 aislamientos de Klebsiella spp. recibidos en el Laboratorio Nacional de Referencia de Microbiología del IPK (LRNM/IPK) procedentes de 40 hospitales de 12 provincias del país durante el período de 2010 a 2012. La identificación de las especies se realizó mediante pruebas bioquímicas convencionales y por la técnica de Espectrometría de masas MS MALDI-TOF. Se determinó la susceptibilidad a 15 antimicrobianos mediante el método E-test y la producción de BLEE mediante el método de discos combinados según las recomendaciones del Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio. Los genes blaESBL se determinaron mediante la reacción en cadena de la polimerasa según protocolo descrito previamente. Resultados: la especie prevalente fue Klebsiella pneumoniae (95,1 %), seguida por K. oxytoca (4,5 %) y K. ozaenae (0,4 %). Los aislamientos procedieron, principalmente, de los servicios de Unidades de Cuidados Intensivos (26,3 %), cirugía (22 %) y neonatología (13 %). La mayor resistencia se observó para las cefalosporinas (48-52 %), trimetoprim-sulfametoxazol (49 %), gentamicina (43 %), ácido nalidíxico (38 %) y tetraciclina (34 %). El 52 % de los aislamientos fueron productores de BLEE y prevaleció la enzima CTX-M (82 %) y la TEM (70 %). Conclusiones: se evidencia la repercusión clínica de Klebsiella spp. en hospitales cubanos con elevada resistencia a diferentes antimicrobianos. La producción de BLEE es un mecanismo de resistencia importante en esta bacteria en las que los carbapenémicos, la piperacilina-tazobactam, la colistina, y la tigeciclina juegan un rol terapéutico importante.

Introduction: the Klebsiella genus gives rise to many hospital outbreaks due to multi-drug-resistant strains on different continents and leads to increased morbidity and mortality. Objectives: to identify the Klebsiella species causing infections in Cuban hospitals, to determine the origin of isolates per service, their antimicrobial susceptibility and, to determine the production and type of extended-spectrum ß-lactamases (ESBLs) and the susceptibility of these isolations to several antimicrobials of therapeutic interest. Methods: a descriptive study was conducted on 448 Klebsiella spp. Isolates that were received in the national reference microbiology laboratory of "Pedro Kouri" Institute of Tropical Medicine from 40 hospitals located in 12 Cuban provinces during the 2010-2012 period. Species identification was based on conventional biochemical tests and mass spectrometry technique called MS MALDI-TOF. The susceptibility to 15 antimicrobials and the extended spectrum ß-lactamase production were determined by the E-test method and by the combined disks method, respectively, according to recommendations of the Institute of Clinical and Laboratory Standards. The polymerase chain reaction made it possible the detection of BlaESBL genes as indicated in the previously described protocol. Results: Klebsiella pneumoniae (95.4 %) was the prevalent species, followed by K. oxytoca (4.1%), and K. ozaenae (0.5 %). The isolates were mainly from the intensive care units (26.3 %), surgery (22 %), and neonatology (13%) services. The highest resistance rate was observed for cephalosporins (48-52 %), trimethoprim-sulfamethoxazole (49 %), gentamicin (43 %), nalidixic acid (38 %), and tetracycline (34 %). Fifty-two percent of the isolates were extended spectrum ß-lactamase producers, with CTX-M (82 %) and TEM (70 %) enzymes prevailing. Conclusions: This study shows the clinical impact of Klebsiella spp in Cuban hospitals, which is highly resistant to different antimicrobials. The production of extended spectrum ß-lactamases provides a significant resistance mechanism in Klebsiella in which carbapenems, piperacillin-tazobactam, cholistin and tigecycline play an important therapeutic role.

Infecciones por los géneros Klebsiella **y Acinetobacter en hospitales pediátricos cubanos y resistencia antibiótica**

Introducción: Klebsiella pneumoniae y el complejo Acinetobacter baumannii-calcoaceticus constituyen importantes patógenos nosocomiales a nivel mundial siendo más susceptibles los pacientes ingresados en neonatología y unidades de cuidados intensivos. Objetivos: caracterizar, desde el punto de vista clínico-microbiológico los aislamientos de los géneros Klebsiella y Acinetobacter causantes de infecciones en hospitales pediátricos cubanos. Métodos: se realizó un estudio descriptivo-longitudinal durante el período de Junio 2011-Septiembre 2012 que incluyó 152 aislamientos clínicos (102 de Klebsiella spp. y 50 de Acinetobacter spp) causantes de infecciones nosocomiales en niños y que fueron remitidos al Laboratorio Nacional de Referencia de Microbiología del Instituto ‘‘Pedro Kourí". La identificación de esta especie se realizó mediante pruebas bioquímicas. Se determinó la susceptibilidad a 18 antimicrobianos, la producción de β-lactamasas de espectro extendido (BLEE) y la de metalo-β-lactamasas (MBLs) según las normas del Instituto de Estandarización de Laboratorio Clínico (CLSI, por sus siglas en inglés). Resultados: las muestras más frecuentes de recuperación de Acinetobacter y Klebsiella fueron sangre, secreción endotraqueal y lesiones de piel. Klebsiella pneumoniae (96 %) y el complejo Acinetobacter baumannii-calcoaceticus (90 %) fueron las especies más prevalentes y se aislaron con mayor frecuencia en servicios de terapias, neonatología y quemado. Ambos patógenos mostraron elevada resistencia a las cefalosporinas con 57 % de producción de BLEE para el género Klebsiella spp. La resistencia a carbapenémicos solo se detectó en Acinetobacter spp (61 %) mediada por la producción de metalo-β-lactamasas en un 2 % de los aislamientos. La mayor susceptibilidad de este género se encontró para las tetraciclinas, mientras que el género Klebsiella spp. fue más susceptible a la ciprofloxacina. En ambos se observó resistencia elevada para los aminoglucósidos (66 %-75 %) y el trimetoprim-sulfametoxazol (45 %-60 %). Conclusiones: Klebsiella pneumoniae y el Complejo Acinetobacter baumannii-calcoaceticus constituyen un peligro potencial en servicios pediátricos con escasas opciones terapéuticas quedando como únicas alternativas los carbapenémicos para las infecciones por Klebsiella spp multidrogorresistentes y la colistina para las infecciones por Acinetobacter spp con extremadrogorresistencia.

Introduction: Klebsiella pneumoniae and the Acinetobacter baumannii-calcoaceticus complex represent important nosocomial pathogens worldwide. The patients admitted to the neonatology and the intensive care unit services suffer infections very frequently. Objectives: to characterize clinically and microbiologically Klebsiella and Acinetobacter isolates causing infections in Cuban pediatric hospitals. Methods: a descriptive longitudinal study of 152 clinical isolates (102 Klebsiella spp and 50 Acinetobacter spp), which caused nosocomial infections in children and were sent to the national reference laboratory of microbiology in "Pedro Kouri" Institute. The study was conducted from June 2011 to September 2012. The species were identified by biochemical tests. The susceptibility to 18 antimicrobials, the production of extended spectrum ?-lactamase (ESBL) and metallo-?-lactamases were determined according to the Clinical and Laboratory Standards Institute. Results: the most frequent infections in infants and children by Acinetobacter and Klebsiella were found in blood, endotracheal secretion and skin lesions.. Klebsiella pneumoniae (96 %) and Acinetobacter baumannii-calcoaceticus complexes (90%) were the most prevalent species and were frequently isolated in intensive care, neonatology and burned patient wards. Both pathogens showed high resistance to cephalosporins with 57 % of extended-spectrum betalactamase production in Klebsiella spp. Resistance to carbapenems was only detected in Acinetobacter (61 %) with 2 % of metallobetalactamse production. Acinetobacter spp. was more susceptible to tetracyclines and cholistin where Klebsiella spp was more susceptible to ciprofloxacin. In both pathogens, a high resistance to aminoglycosides (66% -75 %) and trimethoprim-sulfamethoxazole (45 %-60 %) was observed. Conclusions: Klebsiella pneumoniae and Acinetobacter baumannii-calcoaceticus complex represent a potential threat in pediatric services with few therapeutic options. The carbapenems remain the only alternative to severe infections caused by multidrug resistant Klebsiella spp and cholistin is the only choice to treat extreme multidrug resistant Acinetobacter spp infections.

**Colonización vaginal/rectal por Streptococcus agalactiae en gestantes de Melena del Sur, Cuba**

Introducción: en Cuba se desconoce el peso de la colonización vaginal o rectal por Streptococcus agalactiae o estreptococo ß-hemolítico grupo B (SGB) como factor de riesgo para el desarrollo de sepsis neonatal precoz. Objetivo: determinar la prevalencia de colonización vaginal/rectal por SGB entre la población de gestantes del municipio Melena del Sur, Mayabeque. Métodos: se realizó un estudio observacional de corte transversal entre febrero-agosto 2011, en el que se incluyeron 120 gestantes (35-37 semanas). Se obtuvieron muestras vaginales y rectales que se cultivaron en caldo Todd Hewitt y medio Granada y se calculó la sensibilidad y especificidad de ambos medios de cultivo para la recuperación de SGB. Se hizo seguimiento de las embarazadas hasta el momento del parto para conocer acerca de la aparición de factores de riesgo para el desarrollo de sepsis neonatal, sobre la imposición de profilaxis antibiótica intraparto y si se produjeron casos de sepsis neonatal (tipo y evolución). Resultados: la especificidad lograda con el medio Granada para el aislamiento de SGB fue superior (94,57 %) pero la sensibilidad fue de solo 60,71 %; la combinación de su empleo y el caldo Todd Hewitt permitió la demostración de colonización por SGB en el 27,5 % de las gestantes. Se constató la administración de tratamiento profiláctico a las embarazas colonizadas en las que se presentaron factores de riesgo en el momento del parto y se produjeron solo cuatro casos de sepsis neonatales, lo que realza el valor de esta estrategia en la intercepción de la transmisión vertical.

Introduction: the impact of vaginal or rectal colonization by Streptococcus agalactiae or group B hemolytic streptococcus as risk factor for the development of early neonatal sepsis is still unknown in Cuba. Objective: to determine the prevalence of group B hemolytic streptococcus colonization of the vagina and the rectum among the pregnant women of the Melena del Sur municipality in Mayabeque province, Cuba. Methods: observational and cross-sectional study conducted from February to August 2011, which covered 120 pregnant women (35 to 37 weeks of gestation). Vaginal and rectal samples were taken to be cultured in ToodHewitt broth and grenade medium and the sensitivity and specificity of both culturing media were then calculated for recovery of Group B hemolytic streptococcus. The pregnant women were followed-up up to the delivery time so as to learn about the occurrence of risk factors for developing neonatal sepsis, the application of antibiotic prophylaxis intrapartum and the occurrence of cases of neonatal sepsis (type and progress). Results: the specificity of the grenade medium for Group B streptococcus was higher (94.57 %), but sensitivity was just 60.71 %. The combination of grenade medium plus Todd Hewitt broth allowed showing the Group B hemolytic streptococcus colonization in 27.5 % of pregnant women. It was then confirmed that prophylactic treatment was given to colonized pregnant women who presented with risk factors at the time of delivery and that there were just four neonatal sepsis cases, which stressed the value of this strategy in halting the vertical transmission.

Obtención de la sublínea celular CLA-HT. Estudio de su sensibilidad para el aislamiento y multiplicación de los virus del dengue

Introducción: en el diagnóstico de dengue es importante la determinación del serotipo viral. A pesar de existir otros métodos, el aislamiento viral en cultivos de células y la identificación por la técnica de inmunofluorescencia siguen siendo muy utilizados. Por lo tanto, la búsqueda de sistemas celulares más sensibles ha sido un tema reiterado durante muchos años para el virus dengue y otros agentes. Objetivo: obtener una sublínea celular a partir del clon CLA-1 (Aedes pseudoscutellaris) que crece a 28 ºC, capaz de multiplicarse a 33ºC (CLA-HT) y evaluar su utilidad para el aislamiento y la identificación de los virus del dengue. Métodos: a partir del clono CLA-1 de la línea celular AP-61(Aedes pseudoscutellaris) se obtuvo por selección una cepa o sublínea celular CLA-HT capaz de crecer a 33 °C. Se estudió su sensibilidad para la multiplicación de los 4 serotipos del virus del dengue y su eficiencia para el aislamiento directo de sueros de pacientes en fase aguda de la enfermedad, ambos comparativamente con la línea C6/36HT (A. albopictus). Resultados: la sublínea CLA-HT permitió el crecimiento de los 4 serotipos del virus dengue aunque para algunos requirió más tiempo que la C6/36 HT. Para el aislamiento a partir de muestras de sueros colectadas de individuos en fase aguda, la sublínea CLA-HT detectó el virus en el 40 % de las muestras, mientras que C6/36 detectó el virus en el 50 %. Discusión: CLA-HT es capaz de detectar todos los serotipos del virus dengue a partir de las 96 horas pos inoculación, por lo que es útil para la investigación como sistema alternativo y su eficiencia de aislamiento directo es buena para aplicar en grandes brotes. Además, la principal ventaja es que es posible utilizarla para proporcionar una respuesta rápida a situaciones emergentes en laboratorios de escasos recursos, ya que no precisa de condiciones de incubación con CO2. Conclusiones: se obtuvo una sublínea CLA-HT a partir de la línea CLA-1 capaz de crecer a 33ºC, la cual detecta los 4 serotipos del virus dengue. Su eficiencia de aislamiento es ligeramente menor que la sublínea C6/36 HT, pero se puede utilizar como sistema alternativo para el aislamiento de los virus dengue sobre todo en laboratorios con bajos recursos que no cuenten con condiciones óptimas de incubación.

Introduction: the identification of viral serotypes is an important issue for dengue diagnosis. Despite the existence of other identification methods, the viral isolation in cell cultures and determination by immunofluorescent technique remain as the most used. Therefore the search for more sensitive cellular systems has been a repeated topic during many years for dengue virus and other agents. Objective: to obtain a cell subline from CLA-1 clone (Aedes pseudoscutellaris), that grows at 28 °C, capable of multiplying at 33 °C (CLA-HT)and to evaluate its usefulness for Dengue virus isolation and identification. Methods: by using a CLA-1 clone of the AP-61(Aedes pseudoscutellaris) cell line, it was possible to obtain a strain or cell subline CLA-HT capable of growing at 33 oC (CLA-HT) through a temperature selection method. Its sensitivity for the multiplication of the 4 dengue virus serotypes and its efficiency for direct virus isolation from acutely ill patients' sera were studied in comparison to C6/36 HT cell line (A. albopictus). Results: four dengue virus serotypes grew in CLA-HT cell subline but some serotypes were detected later in CLA-HT than in C6/36 HT. For dengue isolation from serum samples taken in acutely ill patients, the CLA-HT subline detected 40 % positive samples whereas C6/36 HT did 50 %. Discussion: CLA-HT is able to detect all dengue virus serotypes from 96 hours on post inoculation. It makes the new cell line useful for research as an alternative system and the direct isolation efficiency is good to be applied in large outbreaks. The most important advantage of CLA-HT is the possibility of giving rapid answer in emergency situations in low resource laboratories since it does not require special incubation conditions with CO2. Conclusions: a CLA-HT subline was obtained from CLA-1 line and it grows at 33 oC and capable of detecting 4 dengue virus serotypes. Its isolation efficiency is slightly lower than that of C6/36 HT subline, but it may be used as an alternative system for dengue virus isolation, mainly in resource-poor laboratories that do not have the optimal conditions for incubation.

Normalización de un método inmunoquímico para detectar Papilomavirus humano tipo 16 en lesiones cérvico-uterinas

Introducción: la infección por Papilomavirus Humano (PVH) es la condición necesaria para la aparición y desarrollo del cáncer cérvico-uterino. Los genotipos de alto riesgo oncogénico son los causantes de este tipo de neoplasia y dentro de ellos el más frecuente es el PVH 16, que se encuentra aproximadamente en el 60 % de los casos. Los métodos de diagnóstico comerciales resultan costosos para países con escasos recursos económicos, lo que sugiere la búsqueda de alternativas empleando protocolos sencillos y baratos. Objetivos: normalizar un método inmunoquímico para la detección del antígeno L1 de PVH tipo 16 en muestras cérvico-uterinas de pacientes con lesiones intraepiteliales escamosas y determinar la coincidencia entre el método normalizado y la Reacción en Cadena de la Polimerasa en Tiempo Real (RCP-TR), como técnica de referencia, para estimar la utilidad de dicho método en el diagnóstico de la infección por este genotipo viral. Métodos: se compararon tres procedimientos de inmunotinción (Indirecto de inmunoperoxidasa en dos pasos, Estreptavidina-Biotina y Amplificación por polímero) respecto a sensibilidad analítica, tinción inespecífica de fondo y tiempo de terminación, para la detección de la proteína L1 de PVH 16 en líneas celulares derivadas de carcinomas cervicales humanos y en muestras cérvico-uterinas utilizadas como controles. El protocolo normalizado se aplicó a muestras cérvico-uterinas de mujeres entre 30 y 59 años, 82 con lesiones intraepiteliales cervicales y 10 sin antecedentes de alteraciones citológicas, a las que además se les determinó PVH 16 mediante RCP-TR. Resultados: el procedimiento de Estreptavidina-Biotina resultó el más sensible y específico. La coincidencia entre el método inmunoquímico y la RCP-TR fue de un 98,6 %, la sensibilidad fue de un 98,57 % y la especificidad de un 91,67 %, con valores predictivos negativo y positivo por encima del 90 %. Conclusiones: se demostró la validez del método inmunoquímico como prueba confirmatoria de la infección por PVH 16. Dicho método probó ser sensible, sencillo y no requiere de una compleja infraestructura para detectar PVH 16 en muestras cervicales. Además, esta técnica permite obtener información rápidamente y evita el uso de métodos invasivos.

Introduction: Human Papillomavirus (HPV) infection is the necessary condition for the occurernce and development of cervical cancer. The high oncogenic risk genotypes are the responsible for this type of neoplasia and the most frequent is HPV 16 that affects roughly 60 % of cases. Commercial kits for HPV detection are expensive for resource-poor countries, which suggests the search for alternative throguh non-expensive simple protocoles. Objectives: to standardize an immunochemical method for the detection of HPV 16 L1 antigen in cervical samples of patients with squamous intraepithelial lesions and to determine the diagnostic coincidence between the immunochemical method and the real-time polymerase chain reaction to estimate the usefulness of this method for the detection of cervical infection with this viral genotype. Methods: three immunostaining methods (Two-Step Indirect Immunoperoxidase, Labelled Streptavidin-Biotin and Enhanced Polymer) were compared in terms of analytical sensitivity, nonspecific background staining and time of completion, for the detection of protein L1 of HPV-16 in a cell line derived from human cervical carcinoma and clinical samples from uterine cervix. The optimized protocol was applied to 82 cervical samples from women aged 30-59 years with squamous intraepithelial lesions and to 10 samples of sexually active women without previous signals of positive cytology. The presence of type 16 HPV was also detected with the aid of RT-PCR. Results: the Streptavidin-Biotin system was the most sensitive and specific. The diagnostic agreement between the immunochemical method and the real-time polymerase chain reaction reached 98.6 %, sensitivity was 98.57 % and specificity was 91.67 %, with positive and negative predictive values above 90 %. Conclusions: the validity of the immunochemical method as a confirmatory test for infection by HPV-16 has been demonstrated. The normalized immunochemical method proved to be a sensitive, simple, relatively fast method to detect HPV from clinical samples of cervical cells. Furthermore, this method provides information quickly, avoiding the use of invasive methods in patients.

Evaluación de una PCR para la confirmación molecular de leptospirosis en fallecidos a partir de tejidos frescos

Introducción: la leptospirosis humana es una enfermedad infecciosa aguda que sin diagnóstico y tratamiento temprano puede conllevar a la muerte del paciente. En Cuba son escasos los estudios relacionados con la detección molecular de Leptospira en muestras de fallecidos. Objetivo: evaluar una metodología de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) para la detección de ADN de leptospiras patógenas en muestras frescas de tejidos de fallecidos con sospecha de leptospirosis. Métodos: se evaluó y aplicó una PCR para la detección de ADN de Leptospira spp. patógenas en el período 2012-2013. Esta PCR se estimó utilizando cultivos de leptospiras y en tejidos humanos infectados artificialmente con leptospiras patógenas. Además la PCR se aplicó a muestras de órganos frescos de fallecidos con sospecha de leptospirosis, comparando los resultados con otra PCR reportada y usada para muestras frescas post-mortem. Resultados: la PCR evaluada resultó más sensible que la PCR empleada como referencia, y permitió confirmar la infección por leptospiras patógenas en el 34,2 % (42/123) de las muestras clínicas de órganos frescos, mientras la de referencia en el 17,9 % (22/123), lo que demuestra la utilidad de esta nueva herramienta. Conclusión: la PCR evaluada constituye una herramienta sensible y útil para la confirmación de leptospirosis en fallecidos.

Introduction: human leptospirosis is an acute infectious disease which can lead to death if the patient is not early diagnosed and treated. In Cuba the research studies on the molecular detection of Leptospira in samples from fatal cases are uncommon. Objective: to evaluate a Polymerase Chain Reaction (PCR) methodology for detection of pathogenic Leptospira DNA in fresh tissue samples from deceased persons with suspected leptospirosis. Methods: this study evaluated and applied a polymerase chain reaction (PCR) method for detection of pathogenic Leptospira spp. DNA in the period 2012-2013. The PCR was evaluated using leptospire cultures and in human tissues artificially infected with pathogenic leptospires. Besides, PCR was applied to fresh organ samples from dead people with suspected leptospirosis. The final results were compared with those of other reported PCR that had been used for fresh post-mortem samples. Results: the evaluated PCR was more sensitive than PCR used as reference. It allows confirming pathogenic leptospiral infection in 34.2 % (42/123) of clinical samples from fresh organs whereas the reference one reached 17.9 % (22/123). The aforementioned showed the usefulness of this new tool. Conclusions: the evaluated polymerase chain reaction represents a useful and sensitive tool in leptospirosis confirmation in dead people.

**Susceptibilidad de larvas de Aedes albopictus (Diptera: Culicidae) a Strelkovimermis spiculatus (Nematoda: Mermithidae) en condiciones de laboratorio**

Introducción: los nematodos parásitos de larvas de mosquitos han sido evaluados con éxito en condiciones de campo contra diversos géneros en Cuba. Strelkovimermis spiculatus ha sido probado sobre larvas de Culex quinquefasciatus y Aedes aegypti en condiciones de laboratorio, pero no frente a Aedes albopictus, vector de varias arbovirosis. Objetivo: debido a la importancia de Ae. albopictus y la necesidad de su control en el país, nos propusimos evaluar el efecto de tres dosis del nematodo S. spiculatus contra larvas de este mosquito en condiciones de laboratorio. Métodos: se escogieron tres dosis de nematodos por larva (5:1, 7:1 y 10:1), cada una fue evaluada sobre 200 larvas de Ae. albopictus de segundo estadío. Después de 72 h de la post-infección, se tomaron al azar 30 larvas por dosis y fueron disectadas para determinar la intensidad de la infección y la frecuencia de parasitismo. Cada tratamiento se realizó por triplicado, el análisis estadístico de los resultados se realizó mediante EPIINFO, versión 6.04. Resultados: S. spiculatus fue efectivo sobre larvas de Ae. albopictus, se observaron diferencias significativas entre las medianas de infección. El parasitismo más elevado, 92,2 % y 98,8 %, correspondió con las dosis 7 y 10 nematodos/larva respectivamente. Conclusiones: por primera vez en Cuba se demostró la capacidad de infección de S. spiculatus sobre larvas de Ae. albopictus en laboratorio, se recomiendan estudios posteriores antes de su uso en condiciones naturales.

Introduction: the parasite nematodes of mosquito larvae have been successfully evaluated in situ conditions against different mosquito species in Cuba. Strelkovimermis spiculatus has been tested on larvae of Culex quinquefasciatus and Aedes aegypti under laboratory conditions, but not against Aedes albopictus, a vector of several arboviruses. Objective: due to the importance of Ae albopictus, and the need of its control in the country, we intended to evaluate the effects of three doses of nematode S. spiculatus against this mosquito larva under laboratory conditions. Methods: three doses of nematodes per larva (5:1, 7:1 y 10:1) were evaluated on 200 Ae. albopictus second stage larvae. After 72h post-infection,30 larvae per dose were randomly taken and were dissected to determine infection intensity and frequency of parasitism. Each treatment was triplicated and statistical analysis of the results was performed using EPINFO, version 6.04. Results: S.spiculatus was effective on Ae. Albopictus larvae; significant differences between the medians of infection were observed. The highest parasitism rates were 92.2 % and 98.8 % for corresponding doses of 7 and 10 nematodes per larva, respectively. Conclusions: for the first time in Cuba, the infective capacity of S.spiculatus on Ae. albopictus was demonstrated under laboratory conditions. Further studies are recommended before use under natural conditions.

**Miocarditis aguda y meningoencefalitis por Trypanosoma cruzi en un paciente seropositivo al VIH**

La enfermedad de Chagas, endémica en Argentina, transcurre en dos fases: aguda y crónica. En los pacientes seropositivos al VIH, el Trypanosoma cruzi afecta a aquellos con inmunodeficiencia severa, se localiza principalmente en el sistema nervioso central y menos frecuentemente en el miocardio. La distinción entre miocarditis aguda y reactivación de la infección crónica, no es sencilla. El bajo recuento de linfocitos T CD4+ es un factor predictivo positivo de reactivación. En los enfermos con inmunodeficiencia avanzada, los resultados negativos de las pruebas serológicas no excluyen el diagnóstico de enfermedad de Chagas, que se confirma por la aplicación de métodos directos en sangre o líquido cefalorraquídeo. Se presenta el caso de un paciente infectado por el VIH, adquirido por transmisión vertical, con inmunodeficiencia severa, miocarditis aguda y compromiso del SNC. La parasitemia y parasitorraquia positivas para T. cruzi, establecieron la asociación de estos síntomas con la enfermedad de Chagas.

Chagas disease, endemic in Argentina, goes through two stages: acute and chronic. In VIH seropositive patients, Trypanosomacruzi affects those with severe immunodeficiency; it is mainly located in the central nervous system and less frequently in the myocardium. Distinction between acute myocarditis and chronic infection reactivation is not simple. Low T CD4+ lymphocyte count is a positive predictive factor of reactivation. In patients with advanced immunodeficiency, negative results of serological tests do not exclude diagnosis of Chagas disease which may bre confirmed through the application of direct methods in blood and cerebrospinal fluid. The case of a VIH infected patient who got the disease through vertical transmission with severe immunodeficiency, acute myocarditis and central nervous system damage. Positive parasitemia and parasitorrachya for T. cruzi established the association between these symptoms and Chagas disease.

**Vigilancia de meningitis por Streptococcus pneumoniae en Villa Clara, Cuba, 2012-2013**

Incidencia de candidiasis oral en niños saharauis acogidos

Revista Cubana de Medicina Tropical

Patogenicidad de Blastocystis sp. Evidencias y mecanismos

Aeromicología y salud humana

Eficacia in vitro de tres endectocidas frente a Triatoma infestans

Perfil de resistencia a insecticidas en una cepa de Aedes aegypti (Linnaeus) de la región Caribe de Costa Rica

Evaluación de la resistencia a insecticidas en Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) de Argentina

Actividad in vitro contra Leishmania y permeación en piel humana de liposomas ultradeformables de miltefosina

Resistencia antimicrobiana en aislamientos clínicos de Klebsiella spp. y producción de B-lactamasas de espectro extendido en hospitales de Cuba

Infecciones por los géneros Klebsiella y Acinetobacter en hospitales pediátricos cubanos y resistencia antibiótica

Colonización vaginal/rectal por Streptococcus agalactiae en gestantes de Melena del Sur, Cuba