Vaccimonitor

Evaluación de la eficacia y de la respuesta inmune celular y humoral inducida por dos vacunas contra micoplasma, en pollos libres de patógenos específicos

ABSTRACT To investigate cell mediated and humoral immune response following vaccination with live mycoplasma vaccines, 100 specific pathogenic free chickens were inoculated with two different live mycoplasma vaccines: Mycoplasma gallisepticum (ts-11) and Mycoplasma synoviae (H); another 50 chickens were kept as controls (non vaccinated chickens). To evaluate the cell mediated immune response, peripheral blood leucocytes were obtained from vaccinated and control chicken groups and the lymphocyte proliferative response and nitric oxide level were determined. The immunomodulatory cytokines expression profiles elicited by the vaccines were evaluated; the mRNA expression level of interleukin-6 and gamma interferon were determined in spleen of vaccinated specific pathogenic free chickens. In parallel, sera collected from vaccinated and control chickens were examined using an enzyme-linked immunosorbent assay antibody kit to assess the humoral immune response. A challenge test was applied at 4th week post vaccination to all vaccinated chickens and controls against virulent strains of Mycoplasma gallisepticum and Mycoplasma synoviae. The results confirm the presence of consistent lymphoproliferation with production of interferon and nitric oxide in vitro in the two vaccinated chicken groups compared to the negative control. Moreover, the tested vaccines induced high seroconversion level with satisfactory protection (%) at 4th week post vaccination. It was concluded that the two live mycoplasma vaccines can protect the vaccinated chickens against Mycoplasma gallisepticum and Mycoplasma synoviae infections suggesting a significant role for cell-mediated immunity.

RESUMEN Se estudió la respuesta inmune mediada por células y la humoral después de la vacunación con vacunas vivas contra micoplasma. Para ello se inocularon 100 pollos libres de patógenos específicos con dos diferentes vacunas vivas de micoplasma: Mycoplasma gallisepticum (ts-11) y Mycoplasma synoviae (H); otros 50 pollos se mantuvieron como control (pollos no vacunados). Para evaluar la respuesta inmune mediada por células, se obtuvieron leucocitos de sangre periférica de los grupos de pollos vacunados y controles y se determinó la respuesta proliferativa de los linfocitos y el nivel de óxido nítrico. Se evaluaron los perfiles de expresión de las citocinas inmunomoduladoras provocadas por la vacuna y se determinó el nivel de expresión del ARNm de la interleucina 6 y el interferón gamma en el bazo de los pollos libres de patógenos específicos vacunados. Paralelamente, los sueros recogidos de los pollos vacunados y controles se evaluaron mediante un ensayo inmunoenzimático para determinar la respuesta inmune humoral. En la 4ª semana posvacunación se aplicó a todos los pollos vacunados y controles una prueba de provocación contra cepas virulentas de Mycoplasma gallisepticum y Mycoplasma synoviae. Los resultados confirman la presencia de linfoproliferación con producción de interferón y óxido nítrico in vitro en los dos grupos de pollos vacunados en comparación con el control negativo. Además, las vacunas ensayadas indujeron un alto nivel de seroconversión con una protección satisfactoria (%) a la 4ª semana posvacunación. Se concluyó que las dos vacunas vivas contra micoplasma pueden proteger a los pollos vacunados contra las infecciones por Mycoplasma gallisepticum y Mycoplasma synoviae, sugiriendo un papel significativo para la inmunidad celular.

Vacunas para la prevención de los arbovirus: una actualización

RESUMEN Los arbovirus representan una creciente amenaza para la salud pública mundial, observándose un aumento notable en su propagación, relacionado con factores como: viajes internacionales, comercialización mundial, calentamiento global, urbanización no planificada, deforestación. La vacunación contra los arbovirus es la medida de salud pública que permitirá lograr el control y posible eliminación de las enfermedades que provocan. Se han evaluado diferentes plataformas para el diseño de vacunas, entre ellas, virus inactivados, virus vivos atenuados, vacunas basadas en péptidos y proteínas, vectores virales y partículas similares a virus. Esta revisión proporciona un resumen actual de los avances en las vacunas establecidas o en las vacunas candidatas contra algunas enfermedades arbovirales.

ABSTRACT Arboviruses represent an emergent problem to global public health, with a marked increase in their propagation, related to factors such as: international travel, global trade, global warming, unplanned urbanization, and deforestation. Vaccination against arboviruses is the public health measure that will allow control and possibly eliminate diseases caused by these viruses. Different platforms have been evaluated for the design of vaccines, including inactivated virus, live attenuated virus, peptide and protein-based vaccines, viral vectors, and virus-like particles. This review provides a current summary of advancements in the established vaccines or vaccine candidates against some arboviral diseases.

Validación de un ELISA para la cuantificación de antitoxina tetánica y diftérica en suero de curiel

RESUMEN Se validó un ensayo serológico inmunoenzimático en fase sólida de tipo indirecto para la cuantificación de antitoxina tetánica y diftérica en suero de curiel, para lo cual se empleó un suero estándar previamente calibrado. La curva de calibración presentó un buen ajuste lineal y paralelismo con las muestras, presentando R2 ≥ 0,98 y CV ≤ 10 %. Los coeficientes de variación en los ensayos de precisión intra e interensayo estuvieron en los intervalos establecidos para cada uno (≤10 y ≤20 %, respectivamente). El ensayo demostró ser específico. La exactitud del método se demostró a través de la correlación entre el ensayo serológico y el ensayo de seroneutralización in vivo dosis L+/10/50 para determinar potencia de tétano y dosis Lr/100 para determinar potencia de difteria. Los resultados obtenidos avalan el empleo de este método analítico basado en el principio de las 3Rs (Reducción, Refinamiento y Reemplazo) para la evaluación de la actividad inmunogénica de vacunas antidiftéricas y antitetánicas.

ABSTRACT It was validated an indirect solid phase immunoenzymatic serological assay for the quantification of tetanus and diphtheria antitoxin in guinea pig serum; a previously calibrated standard serum was used. The calibration curve presented a good linear fit and parallelism with the samples, showing R2 ≥ 0.98 and CV ≤10 %. The coefficients of variation in the intra- and inter-assay precision tests were within the intervals established for each one (≤10 and ≤ 20 %, respectively). The assay proved to be specific. The accuracy of the method was demonstrated through the correlation between the serological assay and the in vivo seroneutralization assay dose L+/10/50 to determine potency of tetanus and dose Lr/100 to determine potency of diphtheria. The results obtained support the use of this analytical method based on the 3Rs principle (Reduction, Refinement and Replacement) for the evaluation of the immunological activity of vaccines containing tetanus and diphtheria toxoids.

Establecimiento de la zona de operación para el cultivo a gran escala de células de ovario de hámster chino en la obtención de una vacuna viral

RESUMEN El cultivo de células de mamífero en perfusión se caracteriza por alcanzar mayores densidades celulares y la más alta productividad. En el Centro de Inmunología Molecular, con más de 15 años de experiencia en el empleo de esta tecnología a nivel industrial, se desarrolló el cultivo en perfusión de células de ovario de hámster chino productoras de la proteína recombinante rC21 (materia prima biológica empleada en la formulación de una vacuna viral) en un biorreactor tipo tanque agitado de 2.000 L de volumen efectivo. La presente investigación se enfocó en establecer la zona de operación en el cultivo a gran escala a partir de la caracterización de la ingeniería de procesos, en función de parámetros hidrodinámicos. Se estableció una velocidad tangencial de 1,41 m/s que implicó operar una potencia por unidad de volumen alejada de los valores que provocan daño celular. El tamaño de los remolinos que genera esta condición de agitación es superior al diámetro de las células de mamíferos, condición que no tiene impacto en el daño celular a partir del criterio de la microescala de turbulencia de Kolmogorov. La zona de operación posibilitó alcanzar una alta viabilidad celular y parámetros cinéticos típicos de las células de mamíferos.

ABSTRACT Mammalian cell culture in perfusion is characterized by higher cell densities and higher productivity. At Center of Molecular Immunology, with more than 15 years of experience in the use of this technology at the industrial level, perfusion culture of Chinese hamster ovary cells line to produce the recombinant protein rC21 (a biological raw material used in the formulation of a viral vaccine) was developed in a stirred tank bioreactor of 2,000 L effective volume. The present investigation focused on establishing the operating zone in the large-scale culture based on characterization of the process engineering, as a function of hydrodynamic parameters. A tangential velocity of 1.41 m/s was established, which implied operating a power per unit volume far from the values that cause cell damage. The size of the eddies generated by this agitation condition is larger than the diameter of mammalian cells, a condition that has no impact on cell damage according to the Kolmogorov turbulence microscale criteria. The operating zone made it possible to achieve high cell viability and kinetic parameters typical of mammalian cells.

Evaluación preliminar de la respuesta inmune humoral a la vacuna antirrábica empleando la prueba inmunocromatográfica de flujo lateral

ABSTRACT In this study, a nanogold lateral flow immunochromatographic test was developed for the detection of rabies antibodies using a panel of well-characterized clinical and experimental serum samples. The lateral flow immunochromatographic rabies virus antibody test underwent a comprehensive evaluation, including an assessment of its limit of detection, cross-reactivity, interference from potential substances, and overall performance. Sensitivity evaluation revealed a limit of detection of 0.5 IU/mL, indicating a positive result. When compared with ELISA using different sera samples, the lateral flow immunochromatographic rabies virus antibody test exhibited robust performance with a sensitivity of 91.1 %, specificity of 92 %, and an overall accuracy of 91.5 %. These results suggest that the lateral flow immunochromatographic rabies virus antibody test could be a suitable tool for evaluating antibody levels in vaccinated animals. Moreover, it provides an alternative approach for assessing the efficacy of inactivated rabies virus vaccines.

RESUMEN En este estudio se desarrolló una prueba inmunocromatográfica de flujo lateral basada en nanopartículas de oro para la detección de anticuerpos contra la rabia, utilizando un panel de muestras clínicas y experimentales de suero bien caracterizadas. Este ensayo se sometió a una evaluación exhaustiva, que incluyó una valoración de su límite de detección, reactividad cruzada, interferencia potencial de sustancias y rendimiento general. La evaluación de la sensibilidad reveló un límite de detección de 0,5 UI/mL para esta prueba inmunocromatográfica de flujo lateral desarrollada, lo que indica un resultado positivo. Cuando se comparó con el ensayo de ELISA, utilizando diferentes muestras de suero, la prueba inmunocromatográfica de flujo lateral para anticuerpos del virus de la rabia mostró un sólido rendimiento con una sensibilidad del 91,1 %, una especificidad del 92 % y una precisión global del 91,5 %. Estos resultados sugieren que la prueba inmunocromatográfica de flujo lateral para anticuerpos contra el virus de la rabia podría ser una herramienta adecuada para evaluar los niveles de anticuerpos en animales vacunados. Además, constituye un método alternativo para evaluar la eficacia de las vacunas inactivadas contra el virus de la rabia.

Activación de células T CD8⁺ tras la vacunación con esquema heterólogo SOBERANA^®02/SOBERANA^®Plus en niños de 5-11 años

RESUMEN En los niños, la COVID-19 se manifiesta habitualmente en formas leves, sin embargo, se han descrito secuelas derivadas de la enfermedad y un impacto importante de las poblaciones pediátricas en la trasmisión de la enfermedad. En este escenario, la vacunación sigue siendo la alternativa más prometedora y la respuesta vacunal debe ser caracterizada, no solo por la generación de anticuerpos neutralizantes, sino también por la capacidad de generar respuesta T citotóxica. Este trabajo tuvo como objetivo evaluar la polarización y activación de linfocitos T CD8+ tras la vacunación con el esquema heterólogo SOBERANA®02/SOBERANA®Plus en comparación con la respuesta natural en niños. Para ello se seleccionó un subgrupo de niños de 5-11 años (n = 15) vacunados y un grupo de niños recuperados de enfermedad COVID-19 leve o moderada (n = 10) como control. Muestras de sangre fueron tomadas 14 días después de la dosis con SOBERANA®Plus. Se evaluaron las subpoblaciones celulares Tc1, Tc2 y Tc17 mediante citometría de flujo multiparamétrica. Adicionalmente, se determinó la capacidad de activación de estas células y la frecuencia de células secretoras mediante ensayo de secreción de IFN-γ tras estimulación in vitro. Como resultado se observaron mayores valores en la frecuencia de células Tc1 (CCR4+ CCRX3+ CCR6-) en vacunados, en comparación con los niños recuperados (p < 0,0001). Las células Tc2 (CCR4+ CCRX3- CCR6-) y Tc17 (CCR4+ CCRX3- CCR6+) muestran los mayores valores en los sujetos controles recuperados en comparación con los vacunados (p = 0,0318) y (p = 0,0017), respectivamente. Tras el estímulo in vitro con péptidos de la proteína S1 no se observaron diferencias entre el grupo vacunado con respecto al control recuperado de COVID-19 en frecuencia de linfocitos T CD8+CD69+ activados (p = 0,0563). Con respecto al control, los niños vacunados mostraron mayores valores de células CD8+ IFN-γ+ (p = 0,0096). En conclusión, la vacunación con el esquema heterólogo SOBERANA®02/SOBERANA®Plus activa los linfocitos T CD8+ con polarización a células Tc1.

ABSTRACT In children, COVID-19 usually manifests in mild forms, but sequelae of the disease and a significant impact of pediatric populations on disease transmission have been described. In this scenario, vaccination remains the most promising alternative and the vaccine response should be characterized not only by the generation of neutralizing antibodies, but also by the ability to induce a cytotoxic T response. The aim of this study was to determine the activation of CD8+ T cells after vaccination with the heterologous schedule of two doses of SOBERANA®02 and one dose of SOBERANA®Plus in children. For this purpose, a subgroup of vaccinated children aged 5-11 years (n = 15) and a group of children recovering from moderate COVID-19 disease (n = 10) were selected as controls. Blood samples were taken 14 days after administration of SOBERANA®Plus. Tc1, Tc2 and Tc17 subpopulations were assessed by multiparametric flow cytometry. In addition, the activation capacity of these cells and the frequency of secreting cells were determined by IFN-γ secretion assay after in vitro stimulation. As a result, higher values for the frequency of Tc1 cells (CCR4+ CCRX3+ CCR6-) were observed in vaccinated compared to recovered children (p < 0.0001). Tc2 (CCR4+CCRX3-CCR6-) and Tc17 (CCR4+ CCRX3- CCR6+) cells show the highest values in recovered controls compared to vaccinated (p = 0.0318) and (p = 0.0017), respectively. After in vitro stimulation with S1 protein peptides, no differences in the frequency of activated CD8+CD69+ T lymphocytes were observed between the vaccinated group and the COVID-19 recovered control (p = 0.0563). Compared to the control group, vaccinated children showed higher levels of CD8+ IFN-γ+ cells (p=0.0096). In conclusion, vaccination with the heterologous SOBERANA®02/SOBERANA®Plus regimen activates CD8+ T lymphocytes with polarization to Tc1 cells.