**Obtención de un anticuerpo monoclonal murino que reconoce al polisacárido capsular Vi de Salmonella Typhi**

La tecnología clásica del hibridoma permitió el desarrollo de anticuerpos monoclonales (AcM) contra una inmensa variedad de antígenos, los cuales tienen diversas aplicaciones en el campo de la investigación básica, diagnóstico, inmunoterapia y en los procesos industriales de vacunas. En este trabajo se generaron hibridomas productores de AcM específicos contra el polisacárido capsular Vi de Salmonella Typhi, para lo cual se realizó la inmunización intraperitoneal de ratones BALB/c con 10 µg de polisacárido capsular Vi conjugado a Toxoide Diftérico y la subsiguiente fusión entre los linfocitos aislados del bazo y células de mieloma SP2/O. Se seleccionó y caracterizó un AcM que se denominó 4G3E11. El isotipo del AcM resultó IgG1. Se demostró que AcM 4G3E11 reconoce diferentes valores de concentración del polisacárido en muestras de vacunas vax-TyVi®, mediante un ELISA tipo sándwich. El AcM obtenido como parte de este estudio permitirá la identificación y cuantificación del polisacárido Vi en vacunas anti-tifoídicas.

The conventional hybridoma technology has enabled the development of monoclonal antibodies (Mabs) against many antigens. Mabs have several applications in the field of basic research, diagnosis, immunotherapy and vaccine manufacturing processes. Mabs-producing hybridomas against the capsular polysaccharide from

**Evaluación de los Anticuerpos Monoclonales anti-polisacárido capsular de Neisseria meningitidis serogrupos A, C, Y, W y X para su uso en los ensayos de identidad**

Los serogrupos A, B, C, W, Y y X de Neisseria meningitidis (Nm) son los principales responsables de la enfermedad meningocóccica y contra ellos va dirigido actualmente el desarrollo de vacunas para la prevención de la enfermedad. El Instituto Finlay se encuentra desarrollando vacunas antimeningocóccicas polisacarídicas contra los serogrupos A, C, W, Y y X. En el desarrollo de estas vacunas, el ensayo de identidad constituye un requisito obligatorio para la liberación final del producto. Este ensayo se realiza mediante la técnica Dot Blot, utilizando anticuerpos policlonales (AcP) comerciales; sin embargo, el Instituto Finlay cuenta en este momento con una plataforma de Anticuerpos Monoclonales (AcM) contra los cinco polisacáridos (PsC) de Nm. El objetivo del trabajo fue evaluar la sensibilidad y especificidad de estos AcM para su uso en los ensayos de identidad de las vacunas antimeningocócicas polisacarídicas, con vista a sustituir los AcP comerciales empleados hasta el momento. La sensibilidad de los AcM se evaluó frente al PsC homólogo y la especificidad frente al resto de los PsC de Nm. Se realizó el ensayo de identidad por Dot Blot a cuatro vacunas polisacarídicas multivalentes, usando los AcM comparativamente con los AcP. Todos los AcM evaluados mostraron una alta sensibilidad y especificidad, no encontrándose reactividad cruzada y siendo capaces de identificar en las formulaciones vacunales multivalentes la presencia del PsC homólogo. Concluimos que los AcM obtenidos en nuestro instituto pueden ser usados para los ensayos de identidad de las vacunas.

Neisseria meningitidis serogroups A, B, C, W, Y and X are the main responsible of meningococcal disease. Vaccines are necessary to prevent this disease. The Finlay Institute is developing polysaccharide vaccines against serogroups A, C, W, Y and X. In the development of vaccines, the identity assay is a mandatory requirement for final product release. This test is performed by Dot Blot technique using commercial polyclonal antibodies (PAb). However, the Finlay Institute has monoclonal antibodies (mAbs) against capsular polysaccharides from N. meningitidis (CPs). The objective of this work was to use these mAbs in identity tests to replace commercial PAb. The specificity of the mAbs, the cross-reactivity with other CPs and the identity of the CPs present in four multivalent polysaccharide vaccines, were evaluated. All tested mAbs showed high specificity, and no cross-reactivity was found. Also all mAbs were able to identify the presence of homologous PsC in multivalent vaccine formulations. We conclude that the mAbs obtained in our institution can be used for identity assays of vaccines.

Implementación del algoritmo de predicción Freeman-Wimley en una aplicación web para la identificación in silico de proteínas de membrana barriles-beta

Las proteínas de tipo barril-beta desempeñan un importante papel tanto en medicina humana como veterinaria. Su localización en la superficie bacteriana y su participación en los mecanismos de virulencia de los patógenos, hacen que se hayan convertido en un interesante blanco en los estudios de búsqueda de candidatos vacunales. Freeman y Wimley desarrollaron un algoritmo de predicción basado en las propiedades físico-químicas de proteínas barriles beta transmembrana (BBTMs). Basado en el mismo y utilizando Grails, se implementó una aplicación web. Este sistema (Beta Predictor), procesa hasta 10.000 proteínas, con un tiempo de respuesta aproximado de 0,019 s por proteína de 500 residuos y permite un análisis gráfico para cada proteína. La aplicación se evaluó con un conjunto de validación de 535 proteínas no redundantes, 102 BBTMs y 433 no-BBTMs. Se calculó la sensibilidad, especificidad, coeficiente de correlación de Matthews, valor predictivo positivo y la exactitud, siendo estos 85,29%, 95,15%, 78,72%, 80,56% y 93,27%, respectivamente. El rendimiento de este sistema se comparó con el de los predictores de BBTMs, BOMP y TMBHunt y se utilizó el mismo conjunto de validación. Se obtuvieron los siguientes resultados en el orden anterior: 76,47%, 99,31%, 83,05%, 96,30% y 94,95% para el BOMP y 78,43%, 92,38%, 67,90%, 70,17% y 89,78% para el TMBHunt. El predictor BOMP superó al Beta Predictor, pero este último mostró mejor comportamiento que el TMBHunt.

Beta-barrel type proteins play an important role in both, human and veterinary medicine. In particular, their localization on the bacterial surface, and their involvement in virulence mechanisms of pathogens, have turned them into an interesting target in studies to search for vaccine candidates. Recently, Freeman and Wimley developed a prediction algorithm based on the physicochemical properties of transmembrane beta-barrels proteins (TMBBs). Based on that algorithm, and using Grails, a web-based application was implemented. This system, named Beta Predictor, is capable of processing from one protein sequence to complete predicted proteomes up to 10000 proteins with a runtime of about 0.019 seconds per 500-residue protein, and it allows graphical analyses for each protein. The application was evaluated with a validation set of 535 non-redundant proteins, 102 TMBBs and 433 non-TMBBs. The sensitivity, specificity, Matthews correlation coefficient, positive predictive value and accuracy were calculated, being 85.29%, 95.15%, 78.72%, 80.56% and 93.27%, respectively. The performance of this system was compared with TMBBs predictors, BOMP and TMBHunt, using the same validation set. Taking into account the order mentioned above, the following results were obtained: 76.47%, 99.31%, 83.05%, 96.30% and 94.95% for BOMP, and 78.43%, 92.38%, 67.90%, 70.17% and 89.78% for TMBHunt. Beta Predictor was outperformed by BOMP but the latter showed better behavior than TMBHunt.

**Caracterización molecular de cepas de Pasteurella multocida aisladas del ganado bovino**

La Pasteurelosis es una enfermedad producida por la bacteria Pasteurella multocida miembro del género Pasteurella, que afecta a una gran variedad de animales domésticos y salvajes. La bacteria se caracteriza por ser Gram negativa, inmóvil, cocobacilar y anaerobia facultativa. La aplicación de métodos genotípicos resulta de gran utilidad y permiten superar limitaciones de los procedimientos fenotípicos tradicionales. El objetivo de este trabajo fue determinar la relación genética entre las cepas B1, B2 y B3 de P. multocida propuestas como candidatos vacunales. Las cepas procedieron del cepario de la Empresa Productora de Vacunas Virales y Bacterianas, que pertenece a los Laboratorios LABIOFAM. Las cepas en estudio fueron analizadas con las técnicas moleculares de Reacción en Cadena de la Polimerasa y electroforesis en campo pulsado. Se pudo confirmar que las tres cepas pertenecían a la especie P. multocida, subespecie multocida tipo capsular A. De igual manera se detectó que las cepas B1 y B3 son indistinguibles genéticamente entre sí y que la B2 poseía un 91% de similitud con respecto a las dos primeras. Los resultados obtenidos mediante la identificación y clasificación de estas cepas, permitirán el desarrollo de vacunas contra P. multocida.

Pasteurellosis is a disease caused by Pasteurella multocida bacterium, which affects a variety of domestic and wild animals. P. multocida is a Gram negative, non-motile, and facultative anaerobic cocobacillus, from genus Pasteurella. Genotyping methods are useful to improve the limitations of the traditional phenotyping methods. The aim of this paper was to determine the genetic relationship between P. multocida strains B1, B2 and B3, proposed as vaccine candidates. The strains came from the culture collection of the Viral and Bacterial Vaccine Producing Enterprise, LABIOFAM (acronym in Spanish), and were analyzed with polymerase chain reaction and pulsed field electrophoresis. It was confirmed that the three strains belonged to P. multocida species, capsular type A multocida subspecies. It was also proved that B1 and B3 strains are genetically indistinguishable, and that B2 had a 91% of similarity with B1 and B3. Results obtained by the identification and classification of these strains will permit the development of vaccines against P. multocida.

Eficacia y seguridad de la inmunoterapia sublingual en niños de 6 a 24 meses de edad con rinitis y asma bronquial sensibilizados a los ácaros domésticos

Para evaluar eficacia y seguridad de la inmunoterapia sublingual (ITSL), se revisó el registro de pacientes del policlínico Previsora Camagüey, realizándose un estudio retrospectivo de casos y controles en rinitis alérgica y asma bronquial. Se seleccionaron 62 infantes entre 6 y 24 meses de edad: 34 de ellos habían recibido ITSL y 28 medidas de prevención. Todos recibieron medicamentos en las crisis. Se aplicaron los cuestionarios de calidad de vida modificados en rinitis (RQLQm) y asma (AQLQm). También preguntas sobre consumo de medicamentos y frecuencia de crisis. Se hizo valoración subjetiva a familiares y médicos del estado de salud del niño antes del tratamiento y después del mismo. Se evaluaron las reacciones locales y sistémicas a la ITSL. Se detectó un incremento de la puntuación en las preguntas de los cuestionarios de calidad de vida (p=0,033). El consumo de medicamentos se redujo más en los casos que en los controles (p=0,003). La frecuencia de sintomatología respiratoria disminuyó (p=0,029). Antes del tratamiento la puntuación de la valoración subjetiva fue negativa. Después del tratamiento el 85% de los casos obtuvieron 5 puntos y 15% entre 3 y 4 puntos. En los controles, el 55% de los pacientes alcanzó 5 puntos, 10% entre 3 y 4 puntos y 5% entre 0 y 2 puntos (p=0,011). Se reportaron 2 reacciones locales ligeras a ITSL. Los resultados revelan que la inmunoterapia sublingual con ácaros, en niños menores de 2 años que padecen rinitis y asma es eficaz y segura.

The efficacy and safety of sublingual immunotherapy (SLIT) was assessed in patients from Previsora Camagüey Clinic, who were diagnosed with allergic rhinitis and asthma. A retrospective case-control study was carried out. Cases and controls were selected in 62 children from 6 to 24 months of age: 34 children had used ITSL (cases); the other 28 children received only environmental prevention (controls). All children used medicines in the crisis stage. Quality of life questionnaires for rhinitis (RQLQm) and asthma (AQLQm) were applied. Medicine consumption and frequency of crises were analyzed. A subjective assessment of children health before and after the treatment was performed to relatives and physicians. Local and systemic reactions to SLIT were evaluated. An increase in the score of life quality questionnaires was detected (p=0.033). The medicine consumption was more reduced in cases than in controls (p=0.003). The frequency of respiratory symptomatology decreased (p=0.029). The score of subjective assessment was negative before treatment. After the treatment 85% of cases got 5 points, while the remaining 15% of cases obtained between 3 and 4 points. In the control group 55% of patients obtained 5 points, 10% of evaluated children between 3 and 4, and 5% between 0 and 2 points (p=0.011). Two mild adverse reactions to the SLIT were reported. Results showed that the sublingual immunotherapy with mites in children under 2 years old with rhinitis and asthma is effective and safe.

Predicción computacional cuantitativa de epítopos de células B

El presente trabajo desarrolla una metodología computacional para la predicción cuantitativa de epítopos de células B. Para ello, se definió la función This paper shows a computational approach for quantitative prediction of B cell epitopes. The function

Vaccimonitor

Obtención de un anticuerpo monoclonal murino que reconoce al polisacárido capsular Vi de Salmonella Typhi