Revista Cubana de Farmacia

Control of the use of antibiotics at the Cuban hospitals

Identification of two polymorphic forms of clopidogrel bisulphate crystal in pharmaceutical raw materials

Introducción: el clopidogrel bisulfato existe en numerosas formas cristalinas, que varían en su estabilidad fisicoquímica, por lo que algunas de estas formas, patentadas o no, son útiles en la fabricación de medicamentos. Objetivo: identificar las formas cristalinas existentes en dos muestras de clopidogrel bisulfato materia prima comercializadas para la fabricación de medicamentos y el estado de pureza de ambas muestras. Métodos: las muestras de materia prima se obtuvieron de una industria nacional. Se examinaron mediante técnicas analíticas avanzadas como difracción de rayos X, calorimetría diferencial de barrido, termogravimetría y espectroscopia infrarroja. Se compararon los valores encontrados con los del estado del arte reconocidos en la literatura revisada para el clopidogrel bisulfato materias primas y tomados como referencia. Resultados: se obtuvieron los difractogramas, termogramas y espectros de absorción correspondientes a las muestras analizadas. Se utilizó el software TA Universal Analysis para obtener el porcentaje de descomposición, punto de fusión y picos identificadores en las muestras. Conclusiones: la muestra 1 contiene la forma cristalina I del bisulfato de clopidogrel, que no es pura ya que existe una banda característica de la presencia de contaminación con la forma cristalina II. La muestra 2 corresponde a la forma cristalina II del producto en forma pura.

Introduction: clopidogrel bisulphate exists in many crystalline forms that vary in their physicochemical stability: some of these forms either patented or not are useful in the drug production. Objective: to identify the existing crystalline forms in two samples of Clopidogrel bisufhate raw material for the drug and the purity index of both samples. Methods: the raw material samples were taken from a domestic industry. They were tested through advanced analytical techniques such as differential scanning calorimetry, X-ray scattering pattern, infrared spectroscopy and thermogravimetric analysis. The final values were then compared with the well-established state-of-the-art values found in the reviewed literature for the clopidrogrel bisulfate raw materials and accepted as reference. Results: the physicochemical parameters were obtained from the absorption spectra, thermograms and diffractograms. The TA Universal Analysis software yielded the percentage of decomposition, the melting points and the peak identifiers in the samples. Conclusions: its was concluded that the sample 1 contained the crystal form I of the Clopridogrel bisulfate that is not a pure one since there is a characteristic band indicating contamination with the crystalline form II. The sample 2 had the pure crystalline form II of the product

Design of formulation of Zinc sulphate 10 mg Zn²⁺/5 mL oral solution for pediatric use

Introducción: el sulfato de cinc en forma de solución se administra por vía oral para uso pediátrico, en la profilaxis y tratamiento de estados carenciales de cinc, por escasos aportes o mala absorción, previa determinación de las concentraciones plasmáticas. En niños se emplea como coadyuvante en el tratamiento de bajo peso y talla. Objetivo: diseñar una formulación de sulfato de cinc solución oral 10 mg Zn2+/5 mL para uso pediátrico. Métodos: se presentó el estudio en el tiempo de los parámetros químicos, físicos, microbiológicos y toxicológicos de la formulación seleccionada. Se elaboraron tres lotes pilotos y un lote industrial. La estabilidad química en condiciones aceleradas y de estante fue conducida aplicando un método de valoración complejométrica con EDTA desarrollado en el Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM). Resultados: se obtuvo una formulación líquida incolora y traslúcida libre de partículas extrañas, con sabor dulce. En el ensayo de tolerancia por vía oral en ratas, no se observó toxicidad significativa atribuible a la administración de la formulación a la dosis estudiada. El resto de los parámetros evaluados en el estudio de estabilidad químico-físico de vida de estante mostraron resultados satisfactorios. Conclusiones: la solución resultó ser estable química, física y microbiológicamente, almacenada a temperatura de 32 ± 2 ºC en frascos de vidrio ámbar durante un período de 24 meses. Al comparar los resultados del lote industrial con los lotes pilotos se observa que son similares, lo que demuestra que la tecnología desarrollada es factible de escalar a nivel industrial.

Introduction: the zinc sulphate solution is orally administered for pediatric purposes, in prophylaxis and treatment of zinc deficiency resulting from inadequate diet or malabsorption. It is also used in children to manage low weight and height. Objective: design of a formulation of oral zinc sulphate solution at 10 mg Zn2+/5 mL for pediatric use. Methods: results of the physical-chemical stability studies, microbiology evaluation and toxicological test were shown for selected formulation. Three pilot scale-up batches and one industrial batch were prepared. The chemical stability under accelerated conditions and shelf-life studies were conducted on the basis of a compleximetric titration with EDTA method developed in the Center of Research and Development of Drugs (CIDEM). Results: a colorless, translucent and sweet liquid formulation, free of foreign matters, was obtained. In the orally administered tolerance test made in rats, no signs of significant toxicity attributable to the administration of the formulation at the study dose were observed. The other parameters evaluated in the physical-chemical stability of the shelf life study proved to be satisfactory. Conclusions: the solution was chemically, physically and microbiologically stable at a temperature of 32 ± 2 ºC for a 24 month period. When comparing the results of the pilot scale-up batch and those of the industrial batch, they were similar. This showed that the developed technology is feasible at industrial scale.

Validation of the analytical method for sodium dichloroisocyanurate aimed at drinking water disinfection

Introducción: en Cuba se han desarrollado las primeras tabletas efervescentes de 3,5 mg dicloroisocianurato de sodio, como ingrediente activo no terapéutico, el cual libera una determinada cantidad de cloro al disolverse en un litro de agua, capaz de inducir a una adecuada desinfección del agua potable y lista para ingerir después de transcurrido 30 min. Objetivo: desarrollar y validar un método analítico yodométrico, aplicable al control de la calidad de las tabletas efervescentes de 3,5 mg de dicloroisocianurato de sodio. Métodos: para la cuantificación del contenido de cloro activo libre en las tabletas efervescentes, se empleó como técnica un método potenciométrico, utilizando electrodos de platino y solución valorada de tiosulfato de sodio 0,1 N. El método desarrollado fue validado según los parámetros exigidos para la categoría I, que incluye las técnicas destinadas a cuantificar principios activos en las formas terminadas. Adicionalmente se realizaron otras pruebas para evaluar la influencia del analista y el día en los resultados analíticos. Resultados: los parámetros evaluados en la validación del método se encontraron dentro de los límites establecidos. El método resultó ser específico, lineal, exacto y preciso en el rango de concentraciones estudiadas. Conclusiones: los resultados permiten que el método pueda emplearse de manera confiable y segura.

Introduction: Cuba has developed the first effervescent 3.5 mg sodium dichloroisocyanurate tablets as a non-therapeutic active principle. This ingredient releases certain amount of chlorine when dissolved into a litre of water and it can cause adequate disinfection of drinking water ready to be taken after 30 min. Objective: developing and validating an analytical iodometric method applicable to the quality control of effervescent 3.5 mg sodium dichloroisocyanurate tablets. Methods: quantitation of the free active chlorine content in effervescent tablets by using a potentiometric method based on the platinum electrodes and the tittered 0.1 N sodium thiosulphate solution. The developed method was validated as per the category I parameters including the techniques for quantitation of the active principles in the finished forms. Additionally, other tests were conducted to evaluate the influence of the analyst and of the day on the analytical results. Results: the evaluated parameters in the validation of the method were within the set limits. The method was specific, linear, exact and precise in the range of studied concentrations. Conclusions: the results proved that this method can be used in a safe reliable way.

Validation of the ultraviolet spectrophotometry method for the quality control of ciprofloxacin chlorhydrate in Ciprecu tablets

Introduccción: las quinolonas son un grupo de agentes antimicrobianos de gran importancia en la clínica. El clorhidrato de ciprofloxacina monohidrato es una fluoroquinolona antibacterial de segunda generación que se indica en el tratamiento de diversas infecciones y se comercializa en forma de colirio, inyectable, cápsulas y tabletas. Objetivo: desarrollar y validar un método analítico por espectrofotometría ultravioleta, con vistas a su aplicación al control de calidad del clorhidrato de ciprofloxacina en tabletas Ciprecu recién elaboradas. Métodos: se desarrolló el método en el laboratorio y se realizó una validación exhaustiva atendiendo a los parámetros de la categoría I. El método se seleccionó teniendo en cuenta la presencia de grupos cromóforos en la estructura del compuesto analizado. Se determinó la longitud de onda de máxima absorción a 273 nm de 5 µg/mL en ácido clorhídrico 0,1 mol/L. Resultados: a partir del proceso de validación realizado, se demostró la adecuada especificidad frente a los componentes de la matriz en estudio, así como su linealidad, exactitud y precisión en el rango de 2,5 a 7,5 µg/mL. Los resultados de la aplicación de este método fueron similares a los obtenidos por el método oficial propuesto con iguales propósitos en USP 33, 2010. Conclusiones: el método fue válido con el objetivo propuesto, lo cual constituye una nueva alternativa simple, rápida y económica para el control de calidad de clorhidrato de ciprofloxacina en tabletas Ciprecu.

Introduction: quinolones are a group of antimicrobials of high clinical significance. Ciprofloxacin hydrochloride monohydrate is a second-generation antibacterial fluoroquinolone for treatment of several infections and is marketed as eye drops, injections, capsule and tablets. Objective: to develop and to validate an ultraviolet spectrophotometric analytical method to be used in the quality control of ciprofloxacin hydrochloride monohydrate in newly manufactured Ciprecu tablets. Methods: this method was devised at the laboratory and thoroughly validated pursuant to the category I parameters. The method was selected on account of the existence of chromophore groups in the structure of the analyzed compound. The maximum absorption wavelength was set at 273 nm of 5 µg/mL in 0.1 mol/L hydrochloric acid. Results: based on the validation process, it was demonstrated that this method has adequate specificity against the study matrix components, as well as its linearity, accuracy and precision in the range of 2.5 to 7.5 µg/mL. The results of the application of this method were similar to those of the official procedure suggested for the same purposes in USP 33, 2010. Conclusions: The analytical method was valid for the suggested purposes, so it is a new simple, rapid and economic alternative for the quality control of Ciprofloxacin hydrochloride in Ciprecu tablets.

Validation of the quality control methods for active ingredients of Fungirex cream

Introducción: Fungirex crema es un producto que contiene dos fármacos: ácido undecilénico y undecilenato de zinc en una base adecuada. Como se trata de un producto que no aparece en las monografías oficiales de las farmacopeas, se proponen métodos analíticos sencillos capaces de cuantificar los analitos de interés en la crema, útiles para la liberación de los lotes de crema recién elaborados. Objetivo: validar dos métodos volumétricos para control de calidad de los ingredientes activos presentes en Fungirex crema. Métodos: se propuso una volumetría de neutralización directa para cuantificar ácido undecilénico previa extracción del analito y la complejometría con EDTA para undecilenato de zinc. Atendiendo a la clasificación de ambos métodos en la categoría I, se realizó la validación de ambos métodos a través de los parámetros: especificidad, linealidad, exactitud, precisión y rango. Resultados: se corroboró la ausencia de interferencia de los restantes componentes de la matriz. Los criterios de aceptación establecidos para linealidad, exactitud y precisión se cumplieron satisfactoriamente para los dos métodos en estudio, por lo que fueron válidos en el rango de 50 a 150 % (método por volumetría de neutralización: 25,6-76,8 mg/g y método por complejometría: 111,1-333,3 mg/g). Conclusiones: los métodos volumétricos propuestos fueron lineales, precisos, exactos y específicos para realizar el control de calidad de Fungirex crema en base al contenido de ácido undecilénico y undecilenato de zinc.

Introduction: Fungirex cream is a two-drug product, that is, undecylenic acid and zinc undecylenate over a suitable basis. Since this is a product not documented in the official monographs of the pharmacopeae, simple analytical methods were suggested for quantitation of analytes of interest in the cream, which are useful for release of newly prepared cream batches. Objective: to validate two volumetric methods for the quality control of active ingredients in Fungirex cream. Methods: a direct neutralization volumetric method was suggested to quantitate undecylenic acid after the analyte extraction and EDTA complexometry for zinc undecylenate . According to the classification of both methods in the category I, they were validated through the parameters specificity, linearity, accuracy, precision and range. Results: the non-interference of the rest of the matrix components was corroborated. The set acceptance criteria for linearity, accuracy and precision were satisfactorily met for the two study methods, so they were valid in the 50-150 % range (neutralization volumetry method: 25.6-76.8 mg/g and complexometry method 111.1-333,3 mg/g). Conclusions: the suggested volumetric methods were linear, specific, precise, and accurate for the quality control of Fungirex cream based on the undecylenic acid and zinc undecylenate content.

Stability of Naproxen suppositories for children and adults

Introducción : el naproxeno en supositorios para uso infantil y adulto constituye una de las líneas de investigación en desarrollo de la Empresa "Roberto Escudero Díaz". Los estudios de estabilidad son una parte indispensable para el registro de una nueva formulación. Objetivo: determinar la estabilidad de los supositorios de naproxeno para uso infantil y adulto, teniendo en cuenta la estabilidad física y química del analito en las nuevas formulaciones. Métodos: se realizó el estudio de estabilidad para formulaciones en fase de desarrollo de supositorios de naproxeno para uso infantil y adulto, teniendo en cuenta la metodología propuesta por el Centro para el Control Estatal de la Calidad de los Medicamentos (CECMED). Se emplearon para cada dosis evaluada, supositorios de tres lotes pilotos envasados en tiras de aluminio termosellables. Se almacenaron los supositorios a temperatura de refrigeración (2-8 °C) y ambiente (30 ± 2 °C) durante un año, y se les realizaron muestreos a los 0, 1, 3, 6 y 12 meses de elaborados. Para el análisis de la estabilidad química, se consideraron los resultados del contenido de naproxeno obtenidos por volumetría de neutralización y por cromatografía líquida de alta resolución, así como la determinación de los posibles productos de degradación por cromatografía en capa delgada. Resultados: se demostró la adecuada estabilidad física de los supositorios de ambas dosis, independientemente de la temperatura de almacenamiento durante 12 meses, ya que se mantuvieron inalteradas las características organolépticas y el peso. Aunque el tiempo de liquefacción disminuyó durante el almacenamiento, siempre fue inferior al límite establecido. Con el método por cromatografía líquida de alta resolución, se detectaron pequeños cambios en la concentración de analito, por lo que este método fue superior para el seguimiento de la estabilidad química que la volumetría de neutralización. No se detectaron productos de degradación en los supositorios por ninguna de las técnicas cromatográficas utilizadas. Conclusiones: los supositorios fueron estables desde el punto de vista físico y químico a temperatura de refrigeración (2-8 °C) y ambiente (30 ± 2 °C) durante 12 meses.

Introduction: Naproxen suppository for children and adults is one of the developing research lines of "Roberto Escudero Diaz" drug production enterprise. The stability studies are indispensable for the registration of a new formulation. Objective: to determine the stability of Naproxen suppositories for children and adults, taking the physical and chemical stability of the analyte into account in the new formulations. Methods: pursuant to the methodology of the Center for the State Quality Control of Drugs (CECMED), the stability study for developing formulations was conducted in Naproxen suppositories for children and adults. These products packaged in heat-seal aluminum blister packs from three pilot batches were used for each evaluated dose. They were stored at 2 to 8 °C refrigeration and at air temperature of 30 ± 2 °C during one year, and sampled at 0, 1, 3, 6 and 12 months after preparation. For the analysis of the chemical stability, the Naproxen content determined by the neutralizing volumetry and high performance liquid chromatography tests and the possible degradation products identified in the thin layer chromatography test were taken into account. Results: this study proved the adequate physical stability of suppositories at both doses regardless of the storage temperatures during 12 months because their organoleptic characteristics and weight remained unchanged. Although the liquefaction time decreased under the storage conditions, it was lower than the set limit. The high performance liquid chromatography detected slight changes in the analyte concentration, so this method was better for the chemical stability analysis than the neutralization volumetry method. The chromatographic techniques did not detect any degradation product in the suppositories. Conclusions: the suppositories were physically and chemically stable at a refrigerating temperature of 2 to 8 °C and at air temperature of 30 ± 2 °C during 12 months.

In vitro evaluation of oral tablets of copper-non steroidal anti inflammatory complexes

Introducción: los antiinflamatorios no esteroideos (AINES), son un grupo diverso y químicamente heterogéneo de fármacos analgésicos, antipiréticos y antiinflamatorios; sin embargo, su funcionamiento se ve afectado por su baja solubilidad acuosa y por la incidencia de efectos secundarios gastrointestinales. Como una alternativa a este problema, la formulación de tabletas orales con complejos de cobre con AINES muestra un adecuado comportamiento in vitro y podría tener efectos secundarios reducidos comparados con el fármaco antiinflamatorio no complejado. Objetivo: evaluar los procesos de desintegración y de disolución de tabletas orales de complejos de cobre con AINES. Métodos: luego de la síntesis y la caracterización instrumental de los complejos, se evaluó por microscopia óptica el efecto de la morfología, el tamaño de partícula y las características superficiales en el proceso de disolución; estos resultados fueron considerados para la formulación de los complejos y permitieron junto con la adecuada elección de un desintegrarte, un modificador de flujo, un lubricante y un aglutinante, la obtención de tabletas por compresión directa. Finalmente, en los comprimidos se evaluaron propiedades fisicomecánicas y los procesos de desintegración y disolución. Resultados: las tabletas de los complejos mostraron tiempos de desintegración entre 5 y 15 min y una liberación in vitro del 75 al 93 %. Conclusiones: la disolución de los AINES se vio favorecida por la formación de complejos, el menor tamaño de partícula, la presencia de poros y grietas en la superficie de las partículas y la inclusión de excipientes para la formulación de tabletas orales.

Introduction: non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) are a diverse and chemically heterogeneous group of analgesic, antipyretic and inflammatory drugs; however their performance is affected by low aqueous solubility and the incidence of side gastrointestinal effects. As an alternative to manage this problem, the copper-NSAIDS complex in a tablet formulation shows adequate in vitro behavior and might have minor side effects compared to those of the single non-complexed anti-inflammatory drug. Objective: to evaluate the tablet disintegration and dissolution behaviors of copper-NSAIDS complex. Methods: copper-NSAIDS complexes were synthesized and characterized. The effect of morphology, particle size and surface characteristics on the dissolution process was assessed through the optic microscopy. These results were further considered for the complex formulation and allowed the right selection of a disintegrator, a flow modifier, a lubricant and a binder together with production of tablets through direct compression. The mechanical and physical properties and the dissolution and disintegration behaviors of these compacts were also evaluated. Results: complex tablets showed disintegration times from 5 to 15 min and in vitro release of 75 % to 93 %. Conclusions: NSAIDs dissolution improved due to complexation with copper, smaller particle size, presence of pores and cracks on the particle surface and the inclusion of excipients in the formulation of oral tablets.

**Laboratory production of Clostridium septicum IRP15 for the formulation of a veterinary vaccine**

Objetivo: establecer las condiciones de producción a nivel de laboratorio de la alfa toxina de Clostridium septicum IRP15 para la formulación de una vacuna veterinaria y la optimización del proceso de producción. Métodos: se caracterizó y estandarizó la edad apropiada del inóculo para los cultivos en un fermentador New Brunswick Scientific 7 L. Las condiciones de cultivo fueron: cepa C. septicum IRP15, medio de cultivo VBH, 5 L/vaso de 7 L, inóculo de 250 mL (5 %), 37 ºC, 24 h, bajo agitaciones prueba de 0, 25 y 50 r.p.m. Se estableció el perfil cinético morfológico, de biomasa, consumo de sustrato y producción de toxina. Resultados: para las fermentaciones de 0 y 25 r.p.m. no se presentó fase de adaptación; el microorganismo creció de manera exponencial hasta las 4 y 6 h de fermentación, consumiendo simultáneamente la mayor cantidad de glucosa presente en el medio. A partir de estas horas y hasta las 24, se realizó la prueba de DL50 en ratones y se destaca que a 25 r.p.m. se obtuvo el mayor título de toxina (1/23). En las fermentaciones a 50 r.p.m. se observó que el microorganismo experimenta una fase de adaptación de 4 h aproximadamente; con un retardo en producción de biomasa, consumo de glucosa y producción de toxina, condición que no resulta óptima para la producción del antígeno. Conclusiones: la producción de toxina se presenta en la fase logarítmica y durante la fase estacionaria, asociándose así al crecimiento y al fenómeno de esporulación.

Objective: to set the laboratory production conditions of Clostridium septicum IRP15 alpha toxin for the formulation of a veterinary vaccine and the optimization of the productive process. Methods: the appropriate inoculum age for the cultures was characterized and standardized in a 7L New Brunswick Scientific biorreactor. The conditions of culturing were C. septicum IRP15 strain, VBH medium at 5 L/7 L glass, 250 mL (5 %) inoculum, 37 ºC, and 24 h under shaking conditions of 0, 25 y 50 r.p.m. The following kinetic parameters were monitored: morphological changes, biomass production, glucose consumption and toxin production. Results: for the shaking conditions at 0 and 25 r.p.m., C. septicum did not show an adaptation phase growth. The bacteria kept growing at the log phase up to 4-6 hours of fermentation respectively, thus consuming the highest amount of glucose from the medium. As from the growth phase hours till the 24 h of cultivation, the 50 % lethal dose (LD50) in mice assay was conducted and at 25 r.p.m. condition, the best titre of toxin was reached (1/23). The cultures at 50 r.p.m. condition showed that the bacteria experienced adaptation phase for almost four hours, resulting in delayed biomass production, glucose consumption and toxin production. These results suggested that 50 r.p.m. is not useful for the antigen production. Conclusions : the toxin production occurred at the log phase and during the stationary phase, thus it is associated to growth and to sporulation.

Standarization of a spectrofluorometric method to measure secreted aspartic protease (Sap) from Candida albicans

Introducción: la proteasa aspártica secretada (Sap) es considerada un factor de virulencia en el proceso de infección por Candida albicans. La frecuencia de candidiasis a nivel mundial aumenta cada día, razón por la cual se hace necesario encontrar nuevos medicamentos que combatan esta enfermedad, al mismo tiempo desarrollar métodos que evalúen en forma rápida compuestos inhibidores de Sap. Objetivo: estandarizar un método fluorescente para identificar la inhibición de actividad de Sap. Métodos: se indujo la producción de Sap en cultivos de C. albicans según la metodología descrita por Capobiancoy se evaluaron sus niveles por electroforesis en geles SDS-PAGE en diferentes lapsos de tiempos. La actividad de Sap fue verificada por espectrofluorometría, para lo cual se determinaron las condiciones de reacción, variando las concentraciones de cobre y fluorexon, y los resultados de inhibición, se expresaron como disminución en la señal de fluorescencia. Como control de inhibición de Sap se utilizó Pepstatin A y como control positivo de actividad proteasa se utilizó pancreatina. Resultados: se establecieron concentraciones de 5,5 y 5,0 µM para fluorexon y cobre respectivamente; el tiempo óptimo de acoplamiento de estos fue de 120 min y la mayor actividad de Sap se alcanzó a las 22 h de incubación. Conclusiones: las condiciones estandarizadas para el método espectrofluorométrico, permiten confirmar la inhibición de Sap por Pepstatin A y demostrar que es un método viable para evaluar inhibidores de esta proteasa.

Introduction: the Secreted Aspartyl Protease (Sap) is considered a virulence factor in the infection process caused by Candida albicans. The frequency of candidiasis worldwide is increasing, hence the need for finding new drugs to fight this illness and also a quick and economic evaluation and screening methods to identify some Sap inhibition agents. Objective: to standardize fluorescent method for identifying the Sap activity inhibition. Methods: Sap production was induced in C. albicans cultures following the methodology described by Capobianco, their levels were evaluated by electrophoresis on SDS-PAGE gels at different periods of time. Sap activity was checked by spectrofluorometry, for which the reaction conditions were determined, varying the concentrations of copper and fluorexon, and the inhibition results were expressed as decreased fluorescence signal. Pepstatin A served as Sap inhibition control whereas pancreatin was the positive control of the protease activity. Results: the concentration rates of 5.5 µM and 5.0 µM were found for fluorexon and copper, respectively; their optimal coupling times was 120 min and the maximum Sap activity was observed after 22 h of incubation. Conclusions: the standardized conditions for the spectrofluorometric method allowed confirming the inhibition of Sap by Pepstatin A and showing that this is a viable method to evaluate inhibitors of this protease.

Improvement of the aftermarket service process

Introducción : la producción de medicamentos requiere de una exigente política de calidad que tenga la finalidad de salvaguardar los intereses del paciente, la sociedad y el Estado. Uno de los procesos más variable dentro del ciclo de vida de un producto y con requisitos muy específicos para el caso de los medicamentos es el servicio posventa. Objetivo: perfeccionar el proceso de servicio posventa de los productos para uso humano que comercializa el Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria. Métodos: el estudio se sustenta en la aplicación de herramientas de calidad, como son: diagrama causa-efecto, tormenta de ideas, lista de chequeo, representación de los problemas detectados y aplicación de la metodología planificar-hacer-verificar-actuar. Resultados : se logró identificar a los subprocesos de atención al cliente, competencia, distribución, garantía, adiestramiento para el uso, quejas y reclamaciones, retiro de productos y farmacovigilancia como los factores principales que caracterizan al proceso. Se definieron y evaluaron los requisitos de cada uno de ellos; se obtuvo solo el 54,5 % de su cumplimiento. El diseño e implementación de un plan de mejora, permitió el perfeccionamiento del proceso, con un cumplimiento del 100 % de los requisitos diseñados. Destacan el rediseño de las funciones, responsabilidades, interrelaciones, entradas, salidas, recursos, sistema de procedimientos y registros, con énfasis en subprocesos tan específicos y complejos como la distribución, retiro de productos y la farmacovigilancia. Conclusiones: se aportan indicadores para evaluar el desempeño y facilitar la toma de decisiones y administración más eficiente del proceso, que elevan el nivel de satisfacción de los clientes. Estos resultados contribuyen a mejorar el servicio posventa de los productos con interés comercial y al cumplimiento de los requisitos de las buenas prácticas de fabricación de medicamentos.

Introduction : drug manufacture requires strict quality policies that are aimed at safeguarding the interests of the patient, the society and the state. One of the most variable processes in a product's lifecycle, with very specific requirements in the case of drugs, is the aftermarket service. Objective : to upgrade the aftermarket service process for the human use products that the National Center of Agricultural Health markets. Methods: the study was based on the use of quality tools such as cause-effect diagram, brainstorm, checking list, depiction of detected problems and application of the methodology called planning-doing-checking-acting. Results : it was possible to identify the subprocesses of attention to the client, competition, distribution, warranty, training for use, complaints and claims, product withdrawal and pharmacovigilance are the main factors characterizing the process. Requisites of each of them were defined and evaluated, but just 54.5 % were fulfilled. The design and implementation of an upgrading program allowed improving the process and fulfilling all the planned requisites. There should be mentioned the re-design of functions, responsibilities, interrelations, inputs, outputs, resources, system of procedures and registrations, with emphasis on complex specific subprocesses like distribution, product withdrawal and pharmacovigilance. Conclusions : some indicators are provided to evaluate the performance and to facilitate decision-making and more efficient management of the process in order to raise the level of satisfaction of the client. These results contribute to improve the aftermarket service of products and the compliance with the good practice requirements in the drug manufacture.

Validation of the Ultra Micro Elisa for certification of human placent as a source of pharmaceuticals and cosmetics

Introducción: el Laboratorio de Control Viral de la Planta Derivados de la Placenta realiza la certificación de la placenta humana como materia prima farmacéutica y cosmética mediante el sistema ultramicroanalítico. Objetivo: validar el sistema ultramicroelisa de determinación de antígeno de superficie del virus de la hepatitis B, anticuerpos contra el virus de la hepatitis C y virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 y 2 en muestras de suero de cordón umbilical. Métodos: se realizó la calificación de la operación y la validación del desempeño analítico de los sistemas UMELISA HBsAg Plus, UMELISA HCV y UMELISA HIV 1+2 Recombinant empleandocomo sistemas de referencia el Hepanostika HBsAg Uni-FormII, Hepanostika HCV Ultra y Vironostika HIV-Uni-Form II Ag/Ab. Resultados: la calificación de la operación para las tres técnicas analíticas resultó satisfactoria. Los parámetros de especificidad diagnóstica y analítica fueron de 100 %, así como la concordancia con las técnicas de referencia. El coeficiente de variación fue menor del 10 % durante el estudio de precisión interensayo, menor que el 20 % intraensayo y se demostró la robustez de las técnicas para pequeños cambios en la temperatura de incubación. Conclusiones: los sistemas ultramicroelisa utilizados como método de control de la calidad de la placenta humana resultaron específicos, precisos y robustos en las condiciones ensayadas, por lo que pueden emplearse de manera segura y confiable.

Introduction: the Viral Control Laboratory of the Placenta Derivatives Production Plant certifies the human placenta as pharmaceutical and cosmetic raw material by means of the microultra analytic system. Objective: to validate the Ultra Micro System for determination of hepatitis B surface antigen, antibodies to Hepatitis C Virus, and Immunodeficiency Human Virus Type 1 and 2 in umbilical cord serum samples. Methods: the qualification of the operation and the validation of the analytic performance of the UMELISA HBsAg Plus system, UMELISA HCV and UMELISA HIV 1+2 Recombinant using the Hepanostika HBsAg Unite-Form II, Hepanostika Ultra HCV and Vironostika HIV-unite-Form II Ag/Ab as reference systems. Results: the qualification of the operation for the three analytic techniques was satisfactory. The diagnostic and analytic specificities were 100 %; as well as the agreement with the reference techniques. The variation coefficient was lower than 10 % during the inter-assay precision study, below 20 % intra-assay and the robustness of the techniques was shown to manage small changes in the incubation temperature. Conclusions: the ELISA Ultra Micro Systems used as quality control methods of the human placenta were specific, precise and robust under the tested conditions, so they can be safely and reliably used.

**Validation of a high performance liquid chromatography method for quantitation of L-proline in 20 % tincture from Murraya paniculata L. Jack**

Introducción: la búsqueda de técnicas analíticas para el control de la calidad de los medicamentos constituye un aspecto de gran interés en el campo farmacéutico, más si van dirigidas al estudio del o los marcadores químicos de las plantas medicinales, sus extractos y fitomedicamentos. Objetivo: validar un método de cromatografía líquida de alta resolución (CLAR) para la determinación cuantitativa del aminoácido L-prolina como sustancia marcador en la tintura de Murraya paniculata L. Jack. Métodos: en el método por CLAR, la separación se realizó en una columna C-18 (UP5ODB-150/046), se utilizó como fase móvil una mezcla de solución buffer fosfato, pH ajustado a 2,4 y acetonitrilo (70:30 v/v), con una velocidad de flujo de 0,6 mL/min, modo isocrático, con detección ultravioleta a 440 nm. El volumen de inyección de la muestra fue de 20 µL. El método fue validado según la categoría I, siguiendo las exigencias internacionales. Resultados: la curva de calibración fue lineal en el rango de concentraciones ensayadas (30 a 375 µg/mL), se observó una buena precisión con coeficientes de variación menores del 2 %. Los valores de recobrado estuvieron dentro de los límites establecidos para los métodos cromatográficos (98-102 %). Se demostró la especificidad del método, al no presentarse interferencias de picos adicionales en la zona de elusión del compuesto de interés (L-prolina). Conclusiones: el método analítico por CLAR, validado para la cuantificación del aminoácido L-prolina en la tintura de M. paniculata, demostró ser lineal, preciso, exacto y específico bajo las condiciones de estudio.

Introduction: the search for analytical methods that may monitor the quality of drugs is an issue of great interest in the pharmaceutical field, even more if they are directed to studying chemical markers of medicinal plants, their extracts and phytomedicines. Objective: to validate a high-resolution liquid chromatography (HPLC) method for the quantitative determination of the L-proline amino acid as a marker substance in Murraya paniculata L. Jack tincture. Methods: in the HPLC, the separation was performed on a C-18 (UP5ODB-150/046) column, with a mixture of phosphate buffer solution, pH adjusted to 2.4 and acetonitrile (70:30 v/v) used as mobile phase, the flow rate was 0.6 mL/min, isocratic mode with UV detection set at 440 nm. The injection volume of the sample was 20 µL. The method was validated according to category I, following international requirements. Results: the calibration curve was linear over the concentration range tested (30-375 mg/mL), good precision was observed with a variation coefficient less than 2 %. Recovery values were within the limits for chromatographic methods (98-102 %). The method was specific since there was no-interference by additional peaks in the elution zone of the compound in question (L-proline). Conclusions: the HPLC analytical method, validated for the quantification of L-proline amino acid in M. paniculata tincture, proved to be linear, precise, accurate and specific under the study conditions.

**Determination of biflavonoids in different parts of Garcinia bakeriana (Urb) Borhidi**

Introducción: el género Garcinia produce una gran variedad de metabolitos secundarios representados por xantonas, acilfloroglucinoles y biflavonoides fundamentalmente. Sin embargo, existe muy poca información sobre la composición química de las especies cubanas pertenecientes a este género. Objetivo: determinar la presencia de 11 biflavonoides en las hojas, la corteza del tallo y el látex de Garcinia bakeriana (Urb) Borhidi. Métodos : los extractos de las hojas, látex y la corteza del tallo de G. bakeriana fueron comparados empleando un método de cromatografía líquida de ultra alta eficacia (CLUAE) y 11 biflavonoides como sustancias de referencia. Resultados: los biflavonoides GB-1A, GB-2A, glicósido de GB-2A, glicósido de morelloflavona, 4´´´metoxi- I3,II8-biapigenina, I3,II8-biapigenina, amentoflavona y 4´´´-metoxiamentoflavona fueron detectados como constituyentes de las hojas y la corteza del tallo de G. bakeriana. Conclusiones: la especie G. bakeriana presenta biflavonoides como constituyentes de las hojas y la corteza del tallo. Además, la metodología de trabajo desarrollada contribuye al conocimiento de la composición química de la flora cubana y podría constituir una alternativa, rápida y de bajo consumo de disolventes, para el estudio comparativo de especies endémicas cubanas de escasa distribución y abundancia.

Introduction: previous studies have revealed genus Garcinia to be a rich source of secondary metabolites, namely xanthones, acylphloroglucinols and bioflavonoids. However, the chemical composition of Cuban species in this genus is almost unknown. Objective: to determine the presence of 11 biflavonoids in Garcinia bakeriana leaves, latex and stem bark. Methods: leaves, latex and stem bark extracts of G. bakeriana were compared by using an ultra high performance liquid chromatography method (UPLC) and 11 biflavonoid standards. Results: biflavonoids GB-1A, GB-2A, GB-2A glycoside, morelloflavone glycoside, 4´´´methoxy- I3,II8-biapigenin, I3,II8-biapigenin, amentoflavone y 4´´´-methoxyamentoflavone were detected as components in G. bakeriana leaves and stem bark. Conclusions: G. Bakeriana species has biflavonoids as components of its leaves and stem bark. The work methodology described in this paper helps to expand the knowledge about the chemical composition of the Cuban flora and may represent a rapid method with low dissolver consumption for the comparative study of poorly distributed and non abundant Cuban endemic species.

In vitro **antiviral activity of aqueous extract from red seaweed Tricleocarpa fragilis to Influenza A virus**

Introducción: los virus influenza constituyen importantes patógenos de humanos que anualmente causan alrededor de 500 000 muertes a nivel mundial. La emergencia de variantes virales resistentes a los fármacos antiinfluenza disponibles, motiva la búsqueda de nuevos antivirales. Los extractos obtenidos a partir de algas pueden ser empleados con esta finalidad, teniendo en cuenta la diversidad de metabolitos secundarios descritos en estos organismos. Objetivo: evaluar la actividad antiviral in vitro de un extracto acuoso del alga roja Tricleocarpa fragilis frente a virus influenza A(H1N1) y A(H3N2). Métodos: se determinó el valor de concentración citotóxica media (CC50) empleando el ensayo de reducción de MTT en células MDCK . El cálculo de la concentración inhibitoria media (CI50) se realizó mediante un ensayo de hemaglutinación y de inhibición del efecto citopático (ECP) en células MDCK. El índice selectivo (IS) se calculó a partir de la relación IS= CC 50/CI50. Resultados: el extracto acuoso de T. fragilis no resultó tóxico en las células MDCK, en el rango de concentraciones evaluadas. El alga inhibió la replicación in vitro de virus influenza A(H1N1), A(H3N2) con valores de IS> 11,4 y 106, respectivamente. Conclusiones: el extracto acuoso de T. fragilis posee actividad antiviral frente a virus influenza A y puede ser empleado en el desarrollo de fármacos antiinfluenza novedosos. Este trabajo constituye el primer informe sobre la actividad antiviral de esta especie de alga.

Introduction: influenza viruses are major human pathogens that cause over 500 000 deaths every year. The emergence of viral variants resistant to approved antiviral drugs has prompted the search for new anti-influenza compounds. Alga could be used as a source for the development of new anti-influenza drugs, taking into account the diversity of secondary metabolites previously described in these organisms. Objective: to evaluate the in vitro antiviral activity of aqueous extract of the red seaweed Tricleocarpa fragilis against influenza A virus. Methods: the mean citotoxicity (CC50) concentration of the extract was determined by using the MTT reduction assay in MDCK cells. The mean inhibitory concentration (CI50) was estimated by means of viral protein (hemagglutinin) test and a cytopathic effect inhibition test in MDCK cells. The Selective index was calculated from (SI)= CC50/IC50. Results: T. fragilis was not toxic at the concentrations evaluated in MDCK cells. The aqueous extract inhibited in vitro influenza A(H1N1) and A(H3N2) virus replication with SI values > 11.4 and 106; respectively. Conclusions: aqueous extract of T. fragilis showed in vitro anti-influenza activity and can be employed as a source for new antiviral drugs. This paper was the first report for the antiviral activity of T. fragilis.

Pharmacy specialist Manuel Serafin Jonhson Sarralde

El doctor Manuel Serafín Johnson Larralde se incorporó a la docencia en la Universidad de La Habana y al ejercicio de la profesión inmediatamente después de su graduación como doctor en Farmacia en 1883. Se presentan los principales datos sobre su trayectoria estudiantil en esa institución, la cual debió transitar con gran esfuerzo y perseverancia dada su condición de huérfano y la carencia de suficientes recursos económicos para abonar los pagos establecidos. También se ofrecen los detalles de su vida académica en la Universidad, marcada por reiteradas licencias que solicitó para viajar al extranjero por motivos de salud, según consta en su expediente administrativo. Se hace referencia a su destacado desempeño como propietario de una farmacia que llegó a convertir en farmacia-droguería, la cual logró prestigiar gracias a la profesionalidad de los servicios que se prestaban en ella. Johnson Larralde supo garantizar la formación universitaria de sus cinco hijos; cuatro de ellos farmacéuticos, quienes se convirtieron en continuadores de su tenaz dedicación a la especialidad. Por el legado que dejó tanto en la enseñanza universitaria, como en la práctica de la profesión merece un sitial de honor en la historia de la Farmacia en Cuba.

Dr Manuel Serafin Johnson Larralde became professor at the University of Havana and began performing his profession right after graduating as Doctor of Pharmacy in 1883. This article presented the main data on his student life in that institution, which required a lot of efforts and perseverance since he was an orphan and did not have enough financial resources to pay the fees. It also provided details of his academic life at the University where one may see that he had to ask for permissions several times to travel to other countries because of health problems. Reference was made to his outstanding performance as the owner of a drugstore that became one of the most famous thanks to the quality of service rendered there. Johnson Larralde could guarantee the university studies of his five children who became pharmacists (4 of them) and continued the tenacious and devoted work of their father in this specialty. Taking into account his legacy in the university education and in the field of pharmacy, he deserves to hold very special place in the history of pharmacy in Cuba.

New drugs manufactured by the Labiofam company: Acitan powder and Asmacan syrup