Revista de Salud Animal

Uncertainty associated to the analytical results of agricultural and livestock testing laboratories

La estimación de la incertidumbre en las mediciones caracteriza a la dispersión de los valores atribuidos a un resultado de una magnitud que se ha medido. La medición de la incertidumbre amplía la información sobre un resultado analítico, que de manera común se expresa como un valor absoluto; sin embargo los analistas de los laboratorios conocen que el resultado de un ensayo, tiene un componente de variabilidad y por ello es conveniente expresar el resultado como un intervalo de valores probables. Esta forma de expresión se justifica plenamente bajo un enfoque estadístico, pero no se utiliza de forma regular para expresar los resultados de una prueba, debido entre otras razones a la forma tradicional de expresar el resultado como valor absoluto, sin tener que estimar previamente la incertidumbre del ensayo. Sin embargo, las regulaciones vigentes para laboratorios acreditados establecen como requisito obligatorio, determinar la incertidumbre de las mediciones de los ensayos. Por otra parte, los clientes pueden en sus contratos de servicio exigir un resultado que contenga la incertidumbre del ensayo; también el laboratorio en ocasiones decide aportar mayor información útil al cliente para fines de diagnóstico o control de la calidad de productos terminados. En la actualidad, se cuenta con varias normas internacionales que buscan armonizar los resultados y proponen la estimación de la incertidumbre por diferentes procedimientos con resultados comparables. Esta se puede determinar por desglose de cada etapa del ensayo o de manera global y el procedimiento a seguir estará en correspondencia con la necesidad que se tenga del conocimiento del ensayo y la complejidad del mismo. Este documento tiene como objetivo actualizar el conocimiento para la estimación de la incertidumbre de las mediciones por los laboratorios de ensayo de la rama agropecuaria.

Measurement uncertainty estimation characterizes the dispersion of the values attributed to a result of a magnitude measured. Uncertainty measurement widens the information on an analytical result, commonly expressed as an absolute value. However, laboratory analysts know that the result of a test has a variability component, and therefore, it is convenient to express the result as a range of likely values. This form of expression is completely justified in a statistical approach, but it is not regularly used to express test results, due among other reasons, to the traditional way of expressing the result as a single value without previously estimating the uncertainty of the test. Nevertheless, the current regulations for accredited laboratories establish the determination of uncertainty measurements of assays as a mandatory requirement. On the other hand, regarding service contracts, customers can demand results containing the uncertainty of the test; also sometimes, the laboratory decides to provide the client or laboratory a more useful information for diagnostic purposes or the quality control of finished products. At present, there are several international standards seeking to harmonize the results, and they propose uncertainty estimation by different methods with comparable results. Each trial stage can be determined step by step or globally; and the procedure to follow will be in accordance to the need of knowledge about the test and its complexity. This paper is aimed at updating the knowledge about measurement uncertainty estimation for agricultural and livestock testing laboratories.

Oestrus ovis (Diptera: Oestridae): an important ectoparasite of sheep in Cuba

Oestrus ovis L. (Diptera: Oestridae) constituye un importante agente productor de miasis en diversos ambientes de explotación de ovinos y caprinos. A pesar de la distribución cosmopolita del agente, el primer informe de su presencia en Cuba data de 1995 en el municipio Imias de la provincia de Guantánamo. Desde ese momento la oestrosis se ha informado en otras dos provincias orientales (Santiago de Cuba y Granma). Se resumen aspectos de la biología, acción sobre el hospedero y control de Oestrus ovis. Se aportan elementos de estudios realizados en Cuba por los autores sobre la fase parasitaria, la clínica y el tratamiento de la enfermedad. Los brotes de oestrosis registrados en la provincia de Guantánamo en un periodo de 6 años (2006-2011) revelan una morbilidad promedio de 50,2%; mientras la mortalidad y letalidad suelen ser bajas (2,17% y 4,33% respectivamente). Por su parte el diagnóstico activo de la enfermedad en esta provincia reveló que el 80% de los rebaños examinados están afectados, lo cual es una prevalencia alta. Estos datos sugieren que la oestrosis puede tener un alto impacto económico en la producción ovina debido a la alta cuantía de animales susceptibles en la región oriental de Cuba.

Oestrus ovis L. (Diptera: Oestridae) is an important myiasis-producing agent of sheep and goats in diverse production environments. Despite of the cosmopolitan distribution of this agent, the first report of its presence in Cuba was in 1995 in Imias municipality, Guantánamo province. Since that, oestrosis has been reported in other two eastern provinces (Santiago de Cuba and Granma). Some aspects regarding biology, host action and control of Oestrus ovis have been summarized. Information on the parasitic phase, clinical expression as well the treatment of the disease is provided from studies conducted by the authors in Cuba. Oestrosis outbreaks registered by the Veterinary Services during a 6 year period (2006-2011) in Guantánamo province showed that disease has an morbidity average of 50.2%; while either mortality or lethality used to be lower (2.17% and 4.33% respectively). The active diagnosis of oestrosis revealed that the 80% of the herds examined are affected by its causal agent, indicating a high prevalence. According to these data, oestrosis may have an important economic impact on sheep production because of the high amount of susceptible animals in the eastern region of Cuba.

**Prevalence of condemned livers and economic losses by Fasciola sp. in Huambo, Angola**

La fasciolosis hepática, ocasionada por Fasciola hepatica y F. gigantica, es una parasitosis común en los rebaños bovinos de crianza extensiva existentes en la provincia de Huambo, Angola. Con el objetivo de evaluar la prevalencia de hígados decomisados por esos trematodos y las pérdidas económicas asociadas, se obtuvieron los datos retrospectivos de la inspección sanitaria realizada por el Servicio Veterinario Oficial durante el período 2008-2011en los dos mataderos existentes en la provincia. Se hizo prueba de X² para comparar la prevalencia por años y para la prueba de tendencia lineal. Durante el período evaluado se sacrificaron 16739 bovinos y 2809 fueron objeto de decomiso de hígado, para una prevalencia general (P) del 16.78 %, diferente significativamente entre años (p<0.001) y con una tendencia lineal creciente (p<0.001), desde 12.71 % en el 2008 hasta 25.19% en el 2011. El total de hígados decomisados ascendió a 5869.7 Kg de hígado, equivalente a la pérdida de 5 869 700 kwanzas (58697.00 USD). Se demuestra la elevada prevalencia e impacto económico de la fasciolosis en la ganadería bovina de Huambo y la necesidad de implementar un programa de control contra esta importante zoonosis.

Fascioliasis, caused by Fasciola hepatica and F. gigantica, is a parasitosis of high prevalence in extensive livestock raising in Huambo province, Angola. The aim of this work was to evaluate the prevalence of condemned livers by these trematodes and the associated economic losses. The retrospective data of the sanitary inspections carried out by the Official Veterinary Service were obtained in two slaughterhouses in the province in the period 2008-2011. During this period, 16739 bovines were slaughtered, and 2809 livers of them were condemned. The general prevalence (P) in the period was 16.78 %, significantly different between the years (p<0.001), with an increasing linear-trend (p<0.001) over the period from 12.71 % in 2008 to 25.19% in 2011 (p<0.001). The total of condemned livers ascended to 5869.7 kg, equivalent to 5 869 700 kwanzas (58 697.00 USD). The high prevalence of fascioliasis and its economic impact are shown in livestock in Huambo, and the necessity to start a control program against this important zoonoses is pointed out.

Effect of Lactobacillus sp. isolated from fermented cabbage on the weight and immunological markers of white shrimp Litopenaeus vannamei

El empleo de probióticos para el control de enfermedades en la acuicultura intensiva es una alternativa al uso de antibióticos. En este trabajo se aisló la cepa bacteriana IC1 a partir de una fermentación acido láctica de col y se identificó por técnicas moleculares y convencionales como Lactobacillus sp. Se determinó la actividad antagónica in vitro de IC1 contra cepas patrones. Para la evaluación de la actividad probiótica un grupo de postlarvas de Litopenaeus vannamei se trató cada 24 horas con 1-2 x10(4) ufc/ml de IC1 y otro se mantuvo sin tratamiento. A los 25 días se cuantificaron el peso húmedo y el comportamiento de los parámetros inmunológicos (actividad de las enzimas superóxido dismutasa, fenoloxidasa y peroxidasa). El peso de los animales que se trataron con Lactobacillus sp. IC1 fue significativamente mayor en 1,3 veces respecto al control (p<0,05). Las actividades de las enzimas fenoloxidasa y superóxido dismutasa también se incrementaron, lo que indica la estimulación del sistema inmune de las postlarvas. La cepa tiene además actividad antagonista in vitro contra Vibrio harveyi R1, Pseudomonas aeruginosa ATCC 25 853 y Bacillus subtilis ATCC 6633. La bacteria ácido-láctica Lactobacillus sp. IC1 tiene potencialidades para el empleo como probiótico en camarón.

The use of probiotics for controlling diseases in intensive aquaculture is an alternative to antibiotics. In this paper, the bacterial strain IC1 was isolated from an acid lactic fermentation of cabbage and it was identified by molecular and conventional techniques like Lactobacillus sp. The in vitro antagonistic activity against several pattern strains was determined. For probiotic activity evaluation, a group of Litopenaeus vannamei postlarvae was treated every 24 h with 1-2 x 10(4) cfu / ml of IC1 and the other remained untreated. At 25 days, the wet weight and the behaviour of the immunological parameters (superoxide dismutase, phenoloxidase and peroxidase enzyme activities) were measured. The weight of animals treated with Lactobacillus sp. IC1 was significantly higher in 1.3 times than the control (P <0.05). Superoxide dismutase and phenoloxidase activities also increased significantly, indicating the stimulation of the immune system. The strain also had in vitro antagonistic activity against Vibrio harveyi R1, Pseudomonas aeruginosa ATCC 25 853 and Bacillus subtilis ATCC 6633. The acid lactic bacteria Lactobacillus sp. IC1 has a great potential as probiotic for use in shrimp cultures.

In vitro antihelmintic activity of an accuos extract of Neem (Azadirachta indica A. Juss) leaves and seeds. I. Inhibition of eggs hatching and larval development

Con el objetivo de evaluar la actividad antihelmíntica in vitro de extractos acuosos de hojas y semillas de Neem (A. indica) se diseñó un experimento que estudió el efecto de la adición del extracto acuoso en la eclosión de huevecillos y el desarrollo larvario de estrongílidos gastrointestinales. Se prepararon tres concentraciones de extractos acuosos (500, 250 y 125 mg/ml) a partir de hojas y semillas secadas a la sombra. Se realizó una prueba in vitro de eclosión de huevecillos y otra de inhibición del desarrollo larvario. El extracto de semilla fue más efectivo pues en dosis de 500 mg/ml logró reducir la eclosión de huevecillos en un 99.1% sin diferencias significativas (p<0.01) con el Albendazol y en un 88.8% el desarrollo de las larvas hacia L3. Por su parte, el extracto de hojas inhibió más de un 80% la eclosión de huevos e interfirió en el desarrollo de las larvas en más de un 70%. Los resultados indican que el árbol del Neem puede ser empleado como estrategia no farmacológica para el control parasitario, sin embargo se necesita de estudios in vivo y pruebas de toxicidad.

In order to evaluate the in vitro antihlemintic activity of an accuos extract of Neem (Azadirachta indica) leaves and seeds, two trials were designed to evaluate its effect on egg hatching and larval development of gastroduodenal strongyles. Three extract concentrations were prepared (500, 250 and 125 mg/ml) to perform an egg hatch assay and larval development test. The seed extract was the most effective at 500 mg/ml reducing egg hatching at 99.1% without differences (p<0.01) with the control group (Albendazol); the larval development test was reduced at 88.8% at this same dose. The leaf extract inhibited egg hatching at 80% and the larval development in more than 70%. These results suggest that A. indica extracts may be useful in the control of gastrointestinal nematodes of small ruminants; however, in vivo studies and toxicological evaluation are still necessary.

Ptaquiloside levels in bovine milk samples in farms of San Miguel de Bolivar, Bolivar province, Ecuador

En diferentes regiones ganaderas del mundo y en particular de América Latina se ha reportado la invasión de helechos tóxicos correspondientes al Género Pteridium que afectan la crianza animal vacuna y que supone un riesgo potencial al ser humano por la residualidad que manifiestan los componentes tóxicos de la planta en carne y leche. El objetivo del presente trabajo fue determinar los niveles de ptaquilósido (Pta) en muestras de leche fresca procedentes del Cantón de San Miguel de Bolívar, Provincia Bolívar, Ecuador, mediante cromatografía líquida de alta resolución. Las muestras de leche fueron colectadas de granjas invadidas por helechos Pteridium arachnoideum (Kaulf.) Maxon localizadas a diferentes niveles de altitud. Los resultados obtenidos mostraron la presencia de niveles residuales de ptaquilósido en el 82,76 % de las muestras analizadas, con una concentración máxima obtenida de 2219,67 µg/ml y una concentración promedio de 805,42 µg/ml; por lo que puede inferirse que altos niveles de infestación por el helecho P. arachnoideum, no sólo afecta la salud animal, sino que representa una amenaza para la Salud Pública de aquellos sectores rurales expuestos al consumo reiterado de la leche con residuos tóxicos (ptaquilósido).

The invasion of toxic ferns for the Genus Pteridium adversely affecting bovine breeding has been reported in different agricultural regions of the world and particularly in Latin America. This genus is a potential risk to humans by the residuality showed by the toxic components of the plant in meat and milk. The aim of this study was to determine the ptaquiloside levels (Pta) in milk samples from San Miguel de Bolívar municipality, Bolívar Province, Ecuador, using high resolution liquid chromatography. Milk samples were collected from farms contaminated by the ferns Pteridium arachnoideum (Kaulf.) Maxon located in different altitudes. The results showed the presence of ptaquiloside residual levels in 82.76% of the samples analyzed, with a maximum concentration obtained from 2219.67 µg/ml and a mean concentration of 805.42 µg/ml. It was associated that high levels of infestation by the fern P. arachnoideum do not only affect animal health, but also represent a threat to public health of those rural sectors exposed to the repeated use of toxic waste in milk (ptaquiloside).

Territorial risks analysis by transboundary animal diseases in Cuba

A methodology for the territorial risk analysis of biological disasters due to transboundary animal diseases (TADs) was developed and conducted in all municipalities in the country. The methodology identifies the relevant places for the potential entry and the following spreading of TADs (objectives with biological risk-OBR), and characterizes the level of their vulnerability (sanitary gaps) as well as that of the local animal populations. The vulnerability of animal populations considers many topics divided into four aspects: structure of animal production, sanitary control, urbanization of animal rearing, and general characteristics of the municipality. In 161 municipalities, 1597 OBRs were identified. Few municipalities were classified at the highest level of risk but sanitary breaches were identified in many of them. The identification of sanitary breaches and the General Index of Biological Risk in each municipality and OBR was usefull for the improvement of the disaster risk reduction plan. The communication of the biological risk is better understood and accepted by the stakeholders through this process. The use of the methodology for developing plans for prevention diseases at local level is discussed.

Se desarrolló y aplicó en todos los municipios del país una metodología para el análisis territorial de riesgo de desastres biológicos por enfermedades transfronterizas de los animales (ETrans). La metodología identifica los lugares relevantes para la entrada y consiguiente diseminación potencial de las ETrans (objetivos con riesgo biológico-ORB) y caracteriza el nivel de su vulnerabilidad (brechas sanitarias), así como de la población animal local. La vulnerabilidad de la población animal considera varios tópicos divididos en cuatro aspectos: estructura de la producción animal, el control sanitario, la urbanización en la crianza de animales y las características generales del territorio. En 161 municipios evaluados se identificaron 1597 ORB. Pocos municipios fueron clasificados con el mayor nivel de riesgo, pero se identificaron brechas sanitarias en muchos de ellos. La identificación de brechas sanitarias y del Índice General de Riesgo Biológico en cada municipio y ORB fue útil para el perfeccionamiento de los planes de reducción de riesgo respectivos. Este proceso de análisis de riesgo facilita su comunicación, así como su entendimiento y aceptación, por parte de los decisores. Se discute el uso de esta metodología para el desarrollo de los planes de prevención a nivel local.

**Level of knowledge about toxoplasmosis in owners and its association with seroprevalence in Felis catus in Havana**

En ocasiones, la prevalencia de Toxoplasma gondii está asociada con la baja percepción del riesgo de infección de este protozoo en la población humana, lo cual pudiera también influir negativamente sobre sus mascotas. Por ello, se trazó como objetivo determinar el nivel de conocimiento sobre toxoplasmosis en propietarios y su asociación con la seroprevalencia en Felis catus en La Habana. Se entrevistaron los 300 propietarios de los gatos muestreados para obtener respuestas a 10 preguntas relacionadas con: etiología, transmisión, sistema de órganos afectados, diagnóstico y control. Se realizó un análisis de frecuencia para determinar el nivel de conocimiento general y por temáticas (para el primero se asignaron 10 puntos a cada respuesta correcta, 100 en total). Se consideró asociación significativa entre el nivel de conocimiento y la seroprevalencia (70%), pW0,05 según la prueba Chi-cuadrado. Se estableció una escala con cinco niveles: 90-100 (conocimientos muy abundantes), 70-89 (conocimientos abundantes), 50-69 (conocimientos moderados), 30-49 (conocimientos escasos) y <30 (conocimientos muy escasos). Resultaron 121 gatos positivos (90%) de propietarios con conocimientos muy escasos y 52 seropositivos (87%) con propietarios que tenían escasos conocimientos (pW0,05). Asimismo, fue elevado el desconocimiento en el análisis por temáticas: al diagnóstico le correspondió el mayor valor con 99% (297), a diferencia del sistema afectado en el propietario con un 24% (72), el resto de las temáticas indicaron entre 30-53% de desconocimiento. Se concluye que la elevada seroprevalencia de Toxoplasma gondii en Felis catus en La Habana está asociada con el bajo nivel de conocimiento en sus propietarios.

Toxoplasma gondii prevalence is sometimes associated to the low perception of infection risk of this protozoan in human population, which could also influence negatively in pets. Therefore, the objective of this paper was to determine the level of knowledge about toxoplasmosis in owners and its association with seroprevalence in Felis catus in Havana. Three hundred owners of sampled cats were interviewed for obtaining answers to 10 questions related to: etiology, transmission, system of organs affected, diagnosis and control. Frequency analysis was carried out to determine the level of general knowledge and per subjects (for the first, 10 points per each correct answer were assigned, 100 in total). Significant association was considered between the level of knowledge and seroprevalence (70%), pW0.05 according to the Chi-square test. A five-level scale was established: 90-100 (very abundant knowledge), 70-89 (abundant knowledge), 50-69 (moderate knowledge), 30-49 (scarce knowledge) and <30 (very scarce knowledge). One hundred twenty one cats were positive (90%) in owners with very scarce knowledge and 52 seropositive (87%) to owners who had scarce knowledge (pW0.05). Also, ignorance in the analysis per subjects was high; diagnosis had the biggest value with 99% (297), unlike the system affected in the owner with 24% (72), the rest of the subjects indicated between 30-53% of ignorance. In conclusion, the high seroprevalence of Toxoplasma gondii in Felis catus in Havana is associated to the low level of knowledge in their owners.

Antihelmintic efficacy of Ivermectin 1% (Labiomec®) in sheep herds from Camagüey province, Cuba

Con el objetivo de evaluar la eficacia antihelmíntica de la Ivermectina 1 % (Labiomec®, LABIOFAM, Cuba), en rebaños ovinos de la provincia de Camagüey, Cuba, se formaron 15 grupos de ovinos, uno por rebaño con 10 animales cada uno. Se realizó el test de reducción del recuento de huevos (TRCH) a partir de muestras de material fecal. Para el cálculo de eficacia y los intervalos de confianza se utilizó el Programa RESO 2.0. De los 15 rebaños sólo se diagnosticó resistencia antihelmíntica en uno con un 36,3 % de eficacia. Por primera vez en Cuba, se valora el estado de dispersión de la resistencia antihelmíntica en los rebaños de una zona geográfica y se demuestra la baja dispersión de dicho fenómeno.

The aim of this work was to evaluate the antihelmintic efficacy of Ivermectin 1% (Labiomec®, a commercial product of national production) in sheep herds from Camagüey province, Cuba. Fifteen groups of sheep were formed, one per herd with 10 animals each. Egg count reduction (ECR) test was performed, and RESO Program 2.0 was used to calculate the effectiveness and the confidence intervals. Only in one of 15 herds, the anthelmintic resistance was diagnosed, with a 36.3% efficiency. For the first time in Cuba, the dispersion state of the anthelmintic resistance was assessed in a geographical area, and a low dispersion of this phenomenon was demonstrated.

Epididymal sperm cryopreservation at different postmortem times in canine

Con el objetivo de evaluar la calidad de espermatozoides obtenidos de cola de epidídimo de caninos, antes y después de ser criopreservados, a 3, 24, 48 y 72 horas postmortem, se obtuvieron los mismos, mediante orquiectomía de caninos sacrificados, a los cuales se les realizó la disección del epidídimo y mediante flujo retrogrado con el diluyente Andersen se recolectaron los espermatozoides. A las muestras obtenidas se les evaluó la movilidad progresiva, viabilidad e integridad acrosomal antes y después de ser criopreservadas a -196°C en nitrógeno líquido. Los resultados muestran que el promedio de espermatozoides con movilidad progresiva va decreciendo significativamente (p<0.05) después de las 48 horas donde se obtiene un 70.45±5.88, 25.85±4.04 postmortem y postdescongelado, respectivamente. Para los espermatozoides vivos también va disminuyendo de manera significativa (p<0.05) obteniendo un porcentaje de 92.35±1.78 a las 3 horas, a las 24 horas de 79.95±3.48; a las 48 horas de 60.75±6.73 y a las 72 horas de 58.45±3.37. Asimismo el promedio de espermatozoides vivos al descongelar fue disminuyendo de manera significativa (p<0.05), a las 3 horas 73.30±4.64 de espermatozoides vivos, a las 24 horas 61.75±5.46, a las 48 horas 48.95±5.15 y a las 72 horas 29.75±5.8. Por último la integridad acrosomal obtuvo una disminución con diferencia significativa (p<0.05) encontrando los mejores resultados postmortem y postdescongelado hasta las 24 horas 78.05±4.57, 61.95±4.55. Se concluye que la técnica de extracción con el diluyente utilizado, así como la congelación son favorables para la recuperación de espermatozoides de cola de epidídimo de perros postmortem.

The quality of the spermatozoa obtained from canine epididymis tail before and after being cryopreserved at 3, 24, 48 and 72 hours postmortem was evaluated. The sperm was obtained by orchiectomy of sacrificed canines, which after dissection of the epididymis, the sperm was collected by retrograde flow with the diluent Andersen. The progressive motility, viability and acrosomal integrity were evaluated in the samples obtained before and after being cryopreserved at -196°C in liquid nitrogen. The results showed that the average number of spermatozoa with progressive motility decreased significantly (p<0.05) after 48 hours, when values of 70.45±5.88 and 25.85±4.04, postmortem and post-thawed respectively, were obtained. The live spermatozoa also decreased significantly (p<0.05) to obtain percentages of 92.35±1.78 at 3 hours, to of 79.95±3.48 at 24 hours, to 60.75±6.73 at 48 hours and 58.45±3.37 at 72 hours. Likewise, the averages of live spermatozoa at thawing decreased significantly (p<0.05), where the the percentages of live spermatozoa were 73.30±4.64 at 3hours, 61.75±5.46 at 24 hours, 48.95±5.15 at 48 hours and 29.75±5.8 at 72 hours. Finally, the acrosomal integrity was significantly reduced (p<0.05) with the best results observed until the 24 hours, 78.05±4.57 and 61.95±4.55 for post-thawing and postmortem, respectively. It was concluded that the extraction technique with the diluent used and freezing allows a favorable postmortem recovery of sperm from epididymis tail of dogs.

**Genetic diversity estimation in Apis mellifera L. in a queen bee breeding center of Mayabeque Province**

Design and implementation of an integrated system for food quality and safety, in dairy processing plants

Development of a PCR system with internal control for the reliable detection of mycoplasmas contaminating cell cultures and biological products