Revista Cubana de Medicina Tropical

Medical Care Organization to Face Dengue Epidemics

INTRODUCTION: dengue is only a disease with a wide clinical spectrum including undifferentiated fever or fever with malaise and general manifestations, and severe dengue, induced mainly by plasma extravasation leading to prolonged or recurrent shock and death. Medical care organization during epidemics is crucial to prevent fatalities and includes at least five components: 1. Training of medical and nurse personnel. It is an investment that shall be programmed, controlled and evaluated. The time and resources for training must be considered as the equivalent of the expenses in still unavailable vaccines or drugs against dengue. 2. Health education. To involve patients and their families in their own care, so that they can be prepared to ask for medical care at the right time, avoid self medication, identify skin bleedings (petechiae), and look for warning signs. 3. Classification of every suspected dengue case (triage). A good classification of patients should be simple to be used in every place and should be dynamic to allow changes in treatment. Early recognition of warning signs that announce dengue severity and intravenous fluids (crystalloids) given at that very moment can prevent dengue shock and other complications. 4. Rearrangement of medical services and warranty of some resources. It is not correct to think that the preparation to face a dengue epidemic will include big amounts of drugs, blood and blood products. The most important resource continues being the human resource. If doctors and nurses are well trained, the prescription of such drugs and procedures will decrease, including platelet transfusion or blood transfusions. 5. Research. Biomedical and social research are needed, with emphasis on the impact of health education on patients and their families, the natural course of the illness and the best way to do ambulatory treatment. CONCLUSIONS: The future of the severe dengue cases will be usually decided upon not in the Intensive Care Unit but long before, in the Primary Care unit, Hospital Emergency Department or hospital ward. Good health managers can save more lives than physicians or intensive care specialists during dengue epidemics.

INTRODUCCIÓN: el dengue es solo una enfermedad con un amplio espectro clínico que abarca fiebre común o fiebre con malestar y manifestaciones generales, mientras el dengue severo es provocado sobre todo por la extravasión del plasma que ocasiona un shock prolongado o recurrente y finalmente la muerte. La organización de los servicios de atención médica durante una epidemia es crucial para evitar decesos, abarca como mínimo cinco componentes: 1. Preparación del personal médico y de enfermería, constituye una inversión que se programa, se controla y se evalúa. El tiempo y los recursos que se emplean deben considerarse como el equivalente de los gastos en que pudiera incurrirse para adquirir vacunas o medicamentos contra esta enfermedad, que todavía no están disponibles. 2. Educación para la salud. Involucrar a los pacientes y sus familias en el cuidado de su salud, hacer que estén preparados para solicitar atención médica en el momento adecuado, evitar la automedicación, identificar los sangramientos por la piel (petequias), y buscar señales de aviso. 3. Clasificación de cada caso con sospecha de dengue (selección). Una buena clasificación de pacientes debe ser sencilla en todos los lugares y dinámica para permitir modificaciones en el tratamiento. El reconocimiento precoz de las señales de aviso que anuncian la gravedad del dengue y los fluidos intravenosos (cristaloides) administrados en ese preciso momento pueden evitar el shock y otras complicaciones. 4. Reordenamiento de los servicios médicos y aseguramiento de algunos recursos. No es correcto pensar que la preparación para enfrentar la epidemia de dengue incluirá grandes cantidades de medicamentos, volúmenes de sangre y de productos sanguíneos. El recurso más importante continúa siendo el recurso humano. Si los médicos y las enfermeras están bien adiestrados, las prescripciones para el uso de esos medicamentos y la aplicación de métodos disminuirán, incluida la transfusión de plaquetas o las transfusiones de sangre. 5. Realizar estudios investigativos. Son necesarios los estudios investigativos biomédicos y sociales, con énfasis en el efecto de la educación para la salud sobre los pacientes y sus familiares, el desarrollo natural de la enfermedad y la mejor forma de aplicar el tratamiento ambulatorio. CONCLUSIONES: el futuro de los casos graves de dengue se deciden por lo general no en la Unidad de Cuidados Intensivos sino mucho antes, en la Unidad de Atención Primaria, el Departamento de Urgencias Médicas o la sala del hospital. Los buenos directivos del sistema de salud pueden salvar más vidas que los médicos o los especialistas de cuidados intensivos durante la epidemia de dengue.

Validation of the titration method for the human immunodeficiency virus type 1

INTRODUCCIÓN: en la validación de los procesos de producción de productos biológicos, la cuantificación viral es esencial para demostrar su seguridad. OBJETIVO: en este trabajo se evaluó el método de titulación del virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1, para ello se determinó la exactitud, precisión, linealidad y límite de detección. MÉTODOS: la titulación se realizó por el método del cálculo de la dilución punto final, mediante la visualización del efecto citopático y la determinación de la producción de antígeno p24 por medio de un ensayo inmunoenzimático, la dosis infectiva media en cultivo de células por mililitro se calculó según el método de Reed y Muench. RESULTADOS: la exactitud del método coincidió con el título de referencia, los valores del coeficiente de variación de la precisión (repetibilidad y precisión intermedia) fueron menores que 5 y 10 %, respectivamente; la linealidad mostró un adecuado coeficiente de correlación y el límite de detección se determinó en la dilución 10-12. CONCLUSIONES: el método evaluado demostró un adecuado desempeño para la cuantificación viral.

BACKGROUND: viral quantification is essential to demonstrate biological product safety during the validation of the production process. OBJECTIVE: to evaluate the accuracy, linearity and detection limit of a titration method for the human immunodeficiency virus type 1. METHODS: the titration was performed by calculating the end-point dilution method, through the cytopathic effect assay and the determination of Ag p24 production by an enzyme immunoassay. Mean infective dose in cultured cells per milimeter was estimated by Reed and Muench´s method. RESULTS: the accuracy of the method was similar to that of the reference titration, the variation coefficient figures for accuracy (repeatability and intermediate accuracy) were lower than 5 % and 10 %, respectively, the linearity showed adequate correlation coefficient and the detection limit was determined in the 10-12 dilution CONCLUSIONS: the evaluated method was suitable for viral quantification

Standardization of a real-time polymerase chain reaction system for quantification of human herpesvirus 8

OBJETIVO: normalizar un sistema de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real para determinar la carga viral del herpesvirus humano 8, en diferentes muestras clínicas de pacientes en los que se sospeche la infección por este agente. MÉTODOS: se evaluaron 3 de los métodos reportados internacionalmente para obtener ADN estándar en la construcción de curvas externas estándar, que permiten determinar el número de copias de ADN diana en la muestra problema. RESULTADOS: se obtuvieron 3 ADN estándar a partir del clonaje de un fragmento del gen ORF26 del herpesvirus humano 8 en un vector (ADN plasmídico), con la utilización de productos purificados de reacción en cadena de la polimerasa y el empleo de ADN genómico de la línea celular BCBL. Se pudieron construir las curvas patrón a partir de cada uno de los ADN estándar obtenidos, los que mostraron una fuerte correlación lineal (r= -1) y valores muy bajos de error a lo largo de 6 magnitudes de concentración de ADN diana. El límite inferior de detección a partir del ADN plasmídico y de los productos de reacción en cadena de la polimerasa fue de hasta 100 copias, mientras que con el ADN genómico fue de hasta 10 copias; este último sistema resultó el más sensible. CONCLUSIONES: la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real normalizada a partir de los 3 ADN estándar probó ser un sistema rápido, específico y altamente sensible que permitirá un mejor diagnóstico y además desarrollar estudios sobre la patogenia de la infección por el herpesvirus humano 8 en Cuba.

OBJECTIVE: to standardize a real-time polymerase chain reaction system to determine the human herpes virus 8 viral load in several samples from patients suspected of this type of infection. METHODS: three internationally known methods were evaluated to obtain standard DNA in standard external curve constructions, which allow determining the number of target DNA copies in the suspected samples. RESULTS: three standards DNA were obtained from cloning ORF26 gene fragment of human herpesvirus 8 in a vector (plasmid DNA), with the use of purified polymerase chain reaction products and of genomic DNA of BCBL cell lines. The pattern curves were constructed on the basis of each of the resulting standard DNA, which showed strong linear correlation (r= -1) and very low error values throughout 6 target DNA concentrations. The lower detection limit based on plasmid DNA and the polymerase chain reaction products was 100 copies, whereas that obtained with genomic DNA reached up to 10 copies; this last system turned to be the most susceptible. CONCLUSIONS: real-time polymerase chain reaction system, standardized for the three standard DNA proved to be a rapid, specific and highly sensitive system for better diagnosis, and for the development of studies on the pathogenesis of human herpesvirus 8 infection in Cuba.

Seroepidemiological situation of human leptospirosis in Valle del Cauca, Colombia

OBJETIVO: confirmar serológicamente la ocurrencia de leptospirosis humana en casos presuntivos procedentes del departamento del Valle del Cauca, estudiar variables clínico-epidemiológicas asociadas a la enfermedad e identificar los serogrupos de Leptospira más prevalentes en la región. MÉTODOS: se analizaron 150 muestras séricas colectadas en fase aguda, de casos con sospecha clínica y con riesgo epidemiológico de leptospirosis. Fueron evaluadas mediante hemoaglutinación indirecta y microaglutinación tomando como criterio de confirmación de la enfermedad la presencia de un título por microaglutinación mayor o igual que 1:800. Se analizaron datos epidemiológicos de interés así como síntomas y signos presentados en cada caso. RESULTADOS: las técnicas serológicas empleadas permitieron definir 31 casos confirmados (20,6 %) y 16 casos probables (10,6 %). Icterohaemorrhagie fue el serogrupo de mayor reactividad serológica tanto en casos confirmados como probables. Los síntomas más comunes fueron fiebre (89,3 %), cefalea (86,7 %) y mialgias (77,3 %). Síntomas de leptospirosis severa como ictericia e insuficiencia renal fueron observados en 36 % y 6,7 % de los casos, respectivamente. Cerca de 70 % de los casos confirmados o probables procedía de zonas urbanas y 85 % resultó de hombres con un promedio de edad de 40 años. Los factores de riesgo más frecuentes fueron la exposición a roedores o animales domésticos (95,7 %) y aguas potencialmente contaminadas (36,2 %). CONCLUSIONES: los resultados del presente estudio sugieren que la leptospirosis constituye un problema de salud pública en el Valle del Cauca, región suroccidental de Colombia.

OBJECTIVE: to serologically confirm the occurrence of human leptospirosis in presumptive cases from the department of Valle del Cauca in Colombia, to study clinical-epidemiological data associated to the disease and to find out the most prevalent leptospiral serogroups. METHOD: a total of 150 serum samples collected during the acute phase from clinically suspected patients of having leptospirosis were analyzed. Samples were evaluated by indirect hemagglutination and microagglutination tests, taking a microagglutination titer equal to or greater than 1:800 as definition of confirmed case. Epidemiological data as well as symptoms and signs of interest were analyzed. RESULTS: these serological techniques allowed defining 31 confirmed cases (20.6%) and 16 probable cases (10.6 %). Icterohaemorrhagiae was the serogroup with the higher serological reactivity in both confirmed and probable cases. Most common symptoms were fever (89.3 %), headaches (86.7 %) and myalgias (77.3 %). Symptoms of severe leptospirosis like jaundice and renal failure were observed in 36 % and 6.7 % of cases, respectively. About 70 % of confirmed or probable cases came from urban areas and 85 % of them were men aged 40 years as average. The epidemiological risk factors were exposure to rats and domestic animal (95.7 %) and potentially contaminated water (36.2 %). CONCLUSIONS: the results of the present study suggest that leptospirosis is a public health problem in Valle del Cauca, a region located on the south west of the country.

Characterization of a casein acid hydrolysate

INTRODUCCIÓN: la mayor disponibilidad de caseína seca en polvo en el mercado y la escasa oferta de caseína húmeda, ocasionaron la factibilidad de modificar el proceso tecnológico de obtención del hidrolizado ácido de caseína. OBJETIVO: caracterización del hidrolizado ácido de caseína obtenido a escala industrial por una nueva tecnología en el Centro Nacional de Biopreparados (Cuba) y su desempeño en los medios de cultivo. MÉTODOS: se evaluaron 10 lotes del producto, a los cuales se les realizó el análisis químico, así como la evaluación del desempeño mediante la determinación de la densidad microbiana en el tiempo y la realización de las pruebas de susceptibilidad antimicrobiana. RESULTADOS: se demostró que el hidrolizado posee valores de los principales componentes químicos característicos de los productos que se comercializan en el mercado internacional: nitrógeno amínico 6,59 ± 0,71 %, nitrógeno total 8,12 ± 0,41 % y composición aminoacídica. Como características distintivas el producto muestra un contenido reducido de cloruro de sodio (32,63 ± 2,46 %), calcio (334 mg/L), magnesio (133 mg/L) y pérdida por desecación (3,34 ± 0,66 %). La capacidad de promoción de crecimiento de Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 y Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 no mostraron diferencia significativa con respecto a hidrolizados proteicos de otros proveedores: Biotécnica International, Merck y Oxoid Ltd. (p< 0,05). Se alcanzó un crecimiento bacteriano en el caldo Mueller Hinton a altas diluciones (10-6). Los valores de susceptibilidad de diferentes microorganismos a los antibióticos en el medio agar Mueller Hinton concordaron en relación con los establecidos en las normas del Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). CONCLUSIÓN: el producto obtenido puede ser empleado como componente de medios de cultivo con diferentes requerimientos y con adecuada estabilidad.

INTRODUCTION: the great availability of dry powdered casein in the market and low accessibility of wet casein induced the viability of modifying the technological process for obtaining casein acid hydrolysate. OBJECTIVES: to characterize the casein acid hydrolysate obtained at industrial scale by a new technology in the National Center of Biological Products of Cuba and to test its performance in culture media. METHODS: ten product batches were tested by chemical composition analysis, and their performance was evaluated through measuring the microbial density vs time and conducting susceptibility antimicrobial tests. RESULTS: it was demonstrated that the hydrolysate had values of the main chemical components inherent to the products in the international market such as amino nitrogen 6,59 ± 0,71 %, total nitrogen 8,12 ± 0,41 % and aminoacid composition. As distinctive characteristics, the product shows reduced contents of some components like: sodium chloride (32,63 ± 2,46 %), calcium (334 mg/L), magnesium (133 mg/L) and loss on drying (3,34 ± 0,66 %). The growth encouraging capacity for Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 and Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 did not show significant differences with protein hydrolysates from other commercial sources, namely Biotecnica International, Merck and Oxoid Ltd. (p<0,05). It appeared bacterial growth in Mueller Hinton´s broth at high dilutions (10-6). The antimicrobial susceptibility values in the Mueller Hinton Agar agreed with those established by the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). CONCLUSIONS: the product may be used as a component of culture media with different requirements and adequate stability.

Anti-tuberculosis chemotherapy in Cuba in the period 1963-1970: experience systematization and further impact

INTRODUCCIÓN: el Programa Nacional de Control de la Tuberculosis (PNCT) cubano adoptó en 1963-1970 el esquema de quimioterapia antituberculosa recomendado internacionalmente en esa época, pero sus resultados no quedaron bien documentados en la literatura científica nacional. OBJETIVOS: sistematizar la experiencia pionera del período 1963-1970 en la quimioterapia antituberculosa en Cuba y su influencia en el control de la enfermedad. MÉTODOS: se aplicó un cuestionario semiestructurado a informantes clave, para la caracterización del esquema de tratamiento antituberculoso, su organización, fortalezas y debilidades. Los cambios ocurridos posteriormente se identificaron mediante la revisión de documentos del Programa Nacional de Control de la Tuberculosis. La información fue introducida y analizada con el programa QSR Nvivo 7. Se utilizó la técnica de análisis de contenido cualitativo para la clasificación de la información en categorías deductivas creadas a partir de las preguntas de investigación. RESULTADOS: como fortalezas, se refirieron la cobertura del Programa Nacional de Control de la Tuberculosis, la disponibilidad de recursos y suministro constante de medicamentos, la capacitación del personal de salud, la gratuidad del tratamiento, la estandarización de los procedimientos, la toma de decisiones colectivas y la protección económica a los enfermos y sus familiares. Se identificaron debilidades de su organización, criterios no suficientemente estandarizados para el diagnóstico, para la educación sanitaria y esquema no óptimo de medicamentos. Las decisiones tomadas en consecuencia permitieron eliminar las debilidades, con resultados favorables en el control de la enfermedad. CONCLUSIONES: la sistematización de las experiencias de la quimioterapia antituberculosa en el período explorado permite esclarecer y explicar sus éxitos posteriores, basados en las decisiones tomadas por las autoridades políticas y sanitarias del país.

INTRODUCTION: the National Program for the Control of Tuberculosis in Cuba adopted the internationally recommended anti-tuberculosis chemotherapy pattern of that time in the period 1963-1970, but its results were not duly documented in the national scientific literature. OBJECTIVES: to systematize the first pieces of experience in the anti-tuberculosis chemotherapy in Cuba from 1963 to 1970 and its further impact on the control of this disease. METHODS: a semi-structured questionnaire was administered to key informers in order to make the characterization of the anti-tuberculosis therapy pattern, its organization, strengths and weaknesses. The changes occurred afterwards were all identified through the review of the National Program for the Control of Tuberculosis documents. Data were introduced and analyzed with QSR Nvivo 7 software. Qualitative content analysis technique was used to classify the information into the deductive categories created on the basis of the questions. RESULTS: strengths were referred as the coverage of the National Program for the Control of Tuberculosis, the availability of resources and permanent supply of drugs, training of the health staff, free-of-charge treatment, standardization of procedures, group decision taking and economic support to patients and relatives. The main identified weaknesses were found in organization of the program, not fully standardized criteria for diagnosis and for health education, and non-optimal drug schedule. Therefore, the decisions allowed eliminating the weaknesses and achieving positive results in the control of disease. CONCLUSIONS: the systematization of experience in the anti-tuberculosis chemotherapy in the studied period made it possible to clear up and explain the reasons for further success, on the basis of the decisions made by the political and health authorities of the country.

Cloning of 20 kDa heat shock protein of Leishmania amazonensis

INTRODUCCIÓN: la inducción de las proteínas de choque térmico constituyen un mecanismo homeostático que protege a las células del efecto destructivo del calor u otras condiciones de estrés ambiental, paralelamente, ellas cumplen importantes funciones celulares. La proteína de choque térmico de 20 kDa se reportó recientemente en Leishmania amazonensis. OBJETIVO: describir la metodología utilizada para realizar el clonaje de las proteínas de choque térmico, lo que permitió acometer estudios de algunas propiedades biológicas. MÉTODOS: la región codificante del gen hsp20 se amplificó mediante la reacción en cadena de la polimerasa con cebadores adecuados. El producto amplificado se clonó inicialmente en el vector pCR2.1 (Invitrogen) y después en el vector de expresión en procariotas pET-28b (Novagen), para obtener proteína recombinante. De manera paralela, el mismo fragmento se clonó en el vector de expresión en eucariotas pcDNA3 (Invitrogen) para obtener un posible preparado vacunal de ADN. Se realizó la secuenciación nucleotídica de los clones obtenidos, con la finalidad de verificar su fidelidad. RESULTADOS: se obtuvieron plásmidos recombinantes que codifican la HSP20 de Leishmania, y permiten la obtención de proteína recombinante y de ADN en forma masiva. CONCLUSIONES: ambos plásmidos fueron útiles para estudiar algunas de las propiedades biológicas de esta proteína. Este acercamiento puede ser de interés en otros trabajos de esta índole y constituir una guía metodológica.

INTRODUCTION: the induction of heat shock proteins is a homeostatic mechanism that protects cells from the deleterious effects of thermal and other environmental stresses. In addition, they have important cell functions. The 20kDa heat shock protein in Leishmania amazonensis was recently reported. OBJECTIVE: to describe the methodology used for cloning of heat shock proteins, which allowed the study of some biological properties. METHODS: the hsp20 gene coding region was amplified by polymerase chain reaction using adequate primers. The amplified product was initially cloned in pCR2.1 vector (Invitrogen) and then in pET-28b vector (Novagen), to obtain recombinant protein. The same fragment was cloned also in the eukariote expression vector pcDNA3 (Invitrogen). The nucleotidic sequencing of the different clones was made, in order to verify their fidelity. RESULTS: the recombinant plasmids that encode HSP20 protein in Leishmania and allow obtaining massively recombinant protein and DNA were produced. CONCLUSIONS: both plasmids were useful to study some of the biological properties of this protein. This approach could be useful for similar research and represent a suitable methodological guideline.

**Larval indexes of Aedes aegypti before and after control intervention in Limón, Costa Rica**

INTRODUCCIÓN: Costa Rica ha sufrido un incremento paulatino en la incidencia del dengue, con la presencia de algunos casos hemorrágicos. OBJETIVO: analizar el comportamiento de los índices entomológicos antes y después de intervenciones de control sobre el vector, así como identificar los sitios de cría de Aedes aegypti. MÉTODOS: se utilizó como fuente de información la base de datos de los trabajadores de vectores del Cantón de Limón en 15 localidades visitadas, antes y después de intervenciones sobre el vector durante septiembre-diciembre de 2007. Las intervenciones realizadas fueron: recogida de basura no convencional, destrucción de criaderos, uso de abate como larvicida y tratamiento térmico adulticida intradomiciliario y extradomiciliario. RESULTADOS: la primera encuesta mostró valores de índice casa por encima de 5 en 12 localidades, mientras que, 5 mostraron un aumento de sus valores después de las intervenciones durante la segunda encuesta. Se encontraron valores por encima de 30 % pertenecientes a viviendas cerradas y renuentes a la visita. Los porcentajes de positividad en los terrenos baldíos fueron bajos, 3,6 y 2,9 % antes y después de las intervenciones, respectivamente. Se reportaron 901 recipientes con larvas y pupas, los más positivos resultaron: diversos, tarros, estañones, llantas, baldes, cubetas y canoas. CONCLUSIÓN: la evaluación crítica de los resultados mostró un impacto significativo sobre los índices entomológicos después de las medidas de intervención, sin embargo, se recomienda para futuras intervenciones una revisión detallada del trabajo de terreno, para disminuir fallos en su implementación e incorporar nuevas medidas.

INTRODUCTION: Costa Rica has undergone a gradual increase of dengue incidence, including some hemorrhagic dengue cases. OBJECTIVE: to analyze the bahaviour of the entomological indexes before and after the control interventions on the vector as well as to identify the breeding sites of Aedes aegypti. METHODS: the source of information was the database from the vector control campaign workers in el Cantón de Limón in 15 visited locations, before and after the interventions from September through December 2007. The interventions comprised non-conventional garbage collection, destruction of breeding sites, use of abate as larvicide and heat treatment for adult vectors inside and outside the house. RESULTS: the first survey showed house-index values over 5 in 12 localities, whereas 5 exhibited increased values after the interventions during the second survey. Values exceeding 30% were found due to non-visited closed houses and to families that rejected to be visited. Positivity percentages in swampy places were low, 3,6 and 2,9% before and after the interventions, respectively. Nine hundred one reservoirs with larvae and pupas, being the most positive cans, jars, tyres, buckets and canoes. CONCLUSIONS: the critical assessment of the results showed a significant impact on the entomological indexes after the interventions; however, for future interventions, it was recommended to make a detailed review of the in situ work so as to reduce problems in the implementation and introduction of new measures.

Stratification for the entomological surveillance of dengue

INTRODUCCIÓN: la vigilancia entomológica se emplea para determinar los cambios en la distribución geográfica del vector y así obtener mediciones relativas de su población a lo largo del tiempo, para facilitar las decisiones apropiadas y oportunas en lo referente a las intervenciones. OBJETIVOS: proponer un sistema de estratificación utilizando algunos indicadores del programa de erradicación de Aedes aegypti que permita la vigilancia entomológica del dengue en el municipio Boyeros. MÉTODOS: se realizó un estudio descriptivo retrospectivo donde se incluyeron los indicadores: índice casa, índice de depósito, índice de Breteau, índice de manzana positiva, índice de muestras colectadas, índice de depósitos útiles y no útiles por estaciones (seca y lluvia). RESULTADOS: los indicadores entomológicos permitieron determinar las áreas de salud con mayor riesgo en las 2 estaciones. El índice de infestación casa se incrementa a partir de la época de lluvia, al igual que los depósitos no útiles positivos. En la estratificación las áreas de mayor riesgo para el municipio fueron Boyeros y Armada en la estación de seca, luego se incorporó Mulgoba en la etapa de lluvia seguido por Wajay. CONCLUSIONES: el sistema de estratificación propuesto responde a una integración de los indicadores entomológicos que permitiría evaluar el trabajo del programa y accionar de forma oportuna en la lucha antivectorial.

INTRODUCTION: the entomological surveillance is used to determine the changes in the geographical distribution of the vectors and to obtain the relative measurements of their populations in the course of time, in order to facilitate prompt and adequate decisions about interventions. OBJECTIVES: to submit a stratification system, based on some indicators of the Aedes aegypti eradication program, which allows the entomological surveillance of dengue in Boyeros municipality. METHODS: A retrospective descriptive study was made with the following indicators: house index, reservoir index, Breteau index, positive neighbourhood index, collected sample index, useful and non useful reservoir index by season (dry and rainy). RESULTS: the entomological indicators allowed determining the most risky health areas during the two seasons. The infestation index per house increases in the rainy seasons as well as the number of non useful reservoirs that are positive to the vector. In the stratification, the most risky areas were Boyeros and Armada during the dry season, followed by Mulgoba and Wajay in the rainy season. CONCLUSIONS: the stratification system presented in this paper responds to the integration of the entomological indicators that would make it possible to evaluate the functioning of the program and to promptly act in the anti-vector eradication campaign.

**Situation of the insecticidal resistance and its mechanisms in Aedes aegypti in Boyeros municipality**

INTRODUCCIÓN: el control de Aedes aegypti continúa siendo la única medida disponible para poder disminuir la transmisión de dengue. Desafortunadamente Ae. aegypti ha demostrado la habilidad de desarrollar resistencia a una gran variedad de tóxicos. OBJETIVO: evaluar la resistencia a insecticidas químicos en larvas y adultos del municipio Boyeros, Ciudad de La Habana, así como los mecanismos que contribuyeron a esta. MÉTODOS: se evaluó la resistencia a insecticidas químicos en larvas y adultos a través de metodologías de la OMS. Los mecanismos de resistencia se determinaron a través de sinergistas y pruebas bioquímicas. Se realizó electroforesis en gel de poliacrilamida para la visualización de enzimas esterasas. RESULTADOS: en larvas se observó susceptibilidad a los insecticidas organofosforados evaluados. Resistencia se observó a los piretroides cipermetrina y deltametrina. Los bioensayos en larvas con el producto comercial de temefos mostraron 100 % de mortalidad con recambio diario de agua hasta 10 d. Se demostró que ni las esterasas, ni la enzima glutatión transferasa, desempeñaron un papel importante en la resistencia a insecticidas en larvas. Se observó la presencia de la esterasa A4 amplificada a baja frecuencia en las muestras estudiadas. En el estado adulto, la cepa Boyeros resultó resistente a los piretroides ciflutrina y lambdacialotrina, en verificación a deltametrina, y resultó susceptible a cipermetrina; también resultó ser resistente al organofosforado clorpirifos y al organoclorado DDT. CONCLUSIONES: estos resultados corroboran que aun el piretroide cipermetrina, a pesar de su uso en el municipio Boyeros, continúa siendo efectivo para el control de Ae. aegypti.

INTRODUCTION: the control of Aedes aegypti remains the only available measure to reduce dengue transmission. Unfortunately, this vector has proved that it is capable of developing resistance to a great variety of toxic substances. OBJECTIVE: to evaluate the resistance to chemical insecticides in larvae and adult vectors in Boyeros municipality, City of Havana as well as those mechanisms supporting it. METHODS: insecticide resistance of mosquito larvae and adults was evaluated with the WHO methodologies. The resistance mechanisms were determined through synergy and biochemical tests. Polyacrylamid gel electropheresis was applied to visualize esterases. RESULTS: larvae were susceptible to the evaluated organophosphate insecticides whereas resistance to pyrethroids, cypermethrin and deltamethrin was observed. Bioassays performed in larvae with temephos-made commercial product showed 100 % mortality up to 10 days, with daily change of water. It was proved that neither esterases nor glutathione transferase played an important role in larval insecticide resistance. Low frequency amplified esterase A4 was present in the studied samples. In adult stage, Boyeros strain was resistant to pyrethroids ciflutrhine and Lambdacyalothrine, in verification to deltamethrine and susceptible to cypermethrine; it was also resistant to organophosphate chlorpiriphos and organochlorate DDT. CONCLUSIONS: these results confirm that although the pyrethroid cipermethrine has been widely used in Boyeros municipality, it continues being effective for Ae. aegypti control.

**Susceptibility of three Aedes aegypti strains associated to 3 insecticides**

OBJECTIVO: para el control de Aedes aegypti es de vital importancia conocer el estado actual de la susceptibilidad ante los insecticidas en uso en el control de esta especie, para la sostenibilidad de las estrategias de uso de insecticidas. MÉTODOS: se utilizaron 3 cepas de Aedes aegypti procedentes de los municipios Cerro, Plaza y Boyeros, de Ciudad de La Habana, que fueron colectadas en estadios inmaduros de larvas y pupas, de varias poblaciones procedentes de diversas áreas de salud. Los bioensayos se realizaron según metodología de la Organización Mundial de la Salud para determinar susceptibilidad y/o resistencia en larvas y adultos. Se utilizaron los insecticidas en uso actualmente en el país; cipermetrina, lambdacialotrina y clorpirifos. RESULTADOS: en los bioensayos larvales las 3 cepas resultaron susceptibles a los insecticidas evaluados, no así en los bioensayos con adultos, los cuales fueron resistentes a los insecticidas piretroides, pero no al insecticida organosfosforado clorpirifos. CONCLUSIONES: la susceptibilidad en los bioensayos con larvas a cipermetrina, lambdacialotrina y clorpirifos es porque esos insecticidas no se usan con este propósito en el país. La susceptibilidad en adultos obtenida con clorpirifos en nuestros estudios es atribuida al poco uso que ha tenido este insecticida como adulticida en etapas intensivas durante los últimos 5 años. Sin embargo, cipermetrina y lambdacialotrina han sido las opciones adulticidas en brotes epidémicos. La similitud en el comportamiento de las cepas pudiera atribuirse al hecho de que la política de control utilizada es la misma para todo país, por lo que el programa de erradicación utiliza los mismos insecticidas e iguales tipos de tratamientos en etapas intensivas.

OBJECTIVE: it is vital for the Aedes aegypti control to find out the present status of susceptibility to insecticides that are being used in order to maintain the sustainability of strategies for the application of insecticides. METHODS: three Aedes aegypti strains from Cerro, Plaza and Boyeros municipalities in the City of Havana, trapped in their immature stages as larvae and pupas from several vector populations coming from various health areas, were used. Bioassays were performed in line with the World Health Organization methodology to determine susceptibility/resistance (or both) in larvae and adult vectors. Those insecticides presently used in the country were included, namely, cypermethrine, lambdacyalothrine and chlorpiriphos. RESULTS: all the three strains were susceptible to the evaluated insecticides in larval stage whereas they were resistant to pyrethroids in adult stage except for organophosphate insecticide known as chlorpiriphos. CONCLUSIONS: susceptibility found in larval bioassays to cypermethrin, lambdacyalothrin and chlorpiriphos is due to the fact that these products are not used for this end in the country. Adult vector susceptibility to chlorpiriphos in our study is attributed to the little use of this insecticide to eliminate adults in the intensive stages of the eradication campaign during the last five years. However, cypermethrin and lambdacialothrin have been the choices to fight adult vectors in outbreaks. The similar behaviour of these strains could be the result of implementing the same controlling policy throughout the country, since the eradication campaign uses the same type of insecticides and treatment in intensive phases.

Effectiveness of the mosquito larvae control (Diptera: Cullicidae) by larvivorous fish

OBJETIVO: se realizó un estudio de cohorte en los Consejos Populares de Báez y Guaracabulla, pertenecientes al municipio Placetas, provincia Villa Clara, para determinar la eficacia de 3 especies de peces fluviales: Gambusia punctata Poey, 1854, Gambusia puncticulata Poey, 1854 y Poecilia reticulata Peter, 1895, en el control de larvas de mosquitos en depósitos utilizados por la población para almacenar agua. MÉTODOS: la investigación se inició en el mes de abril de 2006 y culminó en mayo de 2007, se seleccionaron solo los tanques bajos (interior y exterior de las viviendas) por ser más factibles de evaluar, se trabajó con una muestra de 1 740 depósitos que se dividieron en 2 grupos, los cuales se evaluaron por espacio de 1 año. RESULTADOS: el riesgo de encontrar focos de mosquitos fue superior en el grupo de depósitos que no estaban expuestos a la presencia de peces, la diferencia de riesgo permitió plantear que por cada 100 depósitos tratados con peces, se logró evitar 8 focos de mosquitos. CONCLUSIONES: los peces larvívoros constituyen una excelente alternativa contra las poblaciones larvales de culícidos en depósitos utilizados por la población para almacenar agua, que resulta un factor de protección ante la incidencia de focos de mosquitos.

OBJECTIVE: a cohort study was conducted in People´s councils in Báez and Guaracabulla located in Placetas municipality, Villa Clara province, for the purpose of determining the effectiveness of three river fish called Gambusia punctata Poey, 1854, Gambusia puncticulata Poey, 1854 y Poecilia reticulata Peter, 1895 in the control of mosquito larvae inside water reservoirs used by the population. METHODS: the study began in April 2006 and ended May, 2007; the selected water tanks were placed inside and outside the houses) since they were more easy to be evaluated. The sample covered 1 740 tanks divided into 2 groups and evaluated for one year. RESULTS: the risk of finding mosquito foci was higher in the group of reservoirs non-exposed to the action of fish; this difference allowed stating that 8 mosquito foci were prevented per every 100 reservoirs treated with fish. CONCLUSIONS: larvivorous fish are an excellent choice to treat Cullicidae larval populations existing in water tanks and also a protective factor against incidence of mosquito foci.

**Identification of Leishmania species by the random amplified polymorphic DNA technique**

INTRODUCCIÓN: la leishmaniosis ha sido clasificada por la Organización Mundial de la Salud como una de las enfermedades tropicales más importantes. El control de esta parasitosis es muy difícil, porque no existen vacunas y el tratamiento es tóxico e insatisfactorio. Es de crucial importancia establecer un método de diagnóstico oportuno junto a la identificación del parásito, lo cual incide en la selección del tratamiento adecuado y en el diseño de las medidas de control apropiadas. Recientemente, los avances en biología molecular han permitido la caracterización de especies de Leishmania por diferentes métodos. La técnica de ADN polimórfico amplificado al azar es una técnica simple para detectar el polimorfismo genético del ADN. OBJETIVO: estandarizar la técnica de ADN polimórfico amplificado al azar para su utilización en la tipificación de especies de Leishmania del Nuevo Mundo. MÉTODOS: empleando una concentración de cebador de 5 pmol, 75 ng de ADN molde, 2 mM de cloruro de magnesio y 2 U de Taq ADN polimerasa en 25 mL de reacción, se obtuvieron patrones de amplificación reproducibles. La técnica optimizada de ADN polimórfico amplificado al azar se empleó para determinar las diferencias genéticas entre 10 cepas de referencia de Leishmania, con la utilización de 6 juegos de cebadores comerciales diseñados al azar. La relación filogenética entre las especies estudiadas se determinó utilizando la estrategia de agrupaciones mediante el método de UPGMA. RESULTADOS: los cebadores OPA 3, 4 y 8 permitieron diferenciar las 10 cepas de referencia de Leishmania estudiadas. Se obtuvieron 2 grupos genéticos bien definidos donde se agrupan las especies del subgénero Leishmania y Viannia, respectivamente; los 2 subgéneros mostraron diferencias genéticas. CONCLUSIONES: de esta forma se cuenta en el laboratorio con la técnica del ADN polimórfico amplificado al azar optimizada para la identificación de especies de Leishmania.

INTRODUCTION: leishmaniosis has been regarded by the World Health Organization as one of the most important tropical diseases. It is very difficult to control such parasitosis because there are not vaccines, and therapy is generally toxic and unsatisfactory. It is of vital importance to set prompt diagnostic method along with identification of the parasite in order to select the suitable treatment and to design the most convenient control measures. Recently, the advances in molecular biology have made it possible to characterize Leishmania species by different methods. The random amplified polymorphic DNA technique is a simple method to detect the genetic polymorphic DNA. OBJECTIVE: to standardize the random amplified polymorphic DNA technique for its use in New World Leishmania species typing. METHODS: by using 5 pmol primer concentration, 75 ng of template DNA, 2 mM of magnesium chloride and 2 U of polymerase DNA Taq in 25µL reaction, two reproducible amplification patters were obtained. The optimized random amplified polymorphic DNA technique served to determine the genetic differences among ten reference strains of Leishmania, with 6 sets of randomly designed conventional primers. The UP GMA method-based grouping strategy determined the phylogenetic relation among the studied species. RESULTS: OPA primers -3, 4 and 8 allowed distinguishing the ten reference strains of Leishmania under study. Two well defined genetic groups including species of Leishmania and Viannia subgenres were obtained; these 2 subgenres showed genetic differences. CONCLUSIONS: in this way, our laboratory has the optimized random amplified polymorphic DNA for the identification of Leishmania species.

**Preservation of human stools for the detection of Fasciola hepatica excretory secretory antigens**

INTRODUCCIÓN: la fasciolosis en Cuba es una enfermedad endémica en el ganado y en los últimos años ha tenido un incremento en el número de casos reportados en humanos. OBJETIVOS: por causa de las dificultades para realizar el diagnóstico de esta enfermedad en zonas rurales o alejadas del laboratorio se ha hecho necesario buscar soluciones preservantes, que permitan conservar las muestras de heces hasta el momento de la determinación de antígeno por el método de FasciDIG®. MÉTODOS: se utilizaron diferentes soluciones preservantes (dicromato de potasio 2 %, hibitane acuoso 0,5 %, glutaral 2 %, cloruro de benzalconio 1 %, azida sódica 0,04 % y agua destilada con tween 20 0,05 %) a temperatura ambiente, 4 ºC y - 20 ºC. RESULTADOS: en las muestras preservadas a temperatura ambiente, las que no tenían preservo sufrieron un gran deterioro, mostraron valores superiores a las conservadas con agua tween 20 y con azida sódica. Esta última es un producto altamente tóxico, por ser un inhibidor de la cadena respiratoria y requeriría de un mayor cuidado en su utilización. CONCLUSIONES: se sugiere que la solución preservante de agua destilada con tween 20 0,05 % a temperatura ambiente mostró los mejores resultados en el estudio.

INTRODUCTION: fascioliasis is an endemic disease in cattle in Cuba, but in the last few years, there has been an increase in the number of reported human cases. OBJECTIVES: the difficulties in diagnosing this disease in rural areas or in zones far away from the laboratory make it necessary to find adequate solutions that allow preserving the stool specimens until the antigen is detected by the FasciDIG® method. METHODS: several preserving solutions were used (2 % potassium dichromate, 0,5 % aqueous hibitane, 2 % glutaral, 1 % benzalkonium chloride, 0,04% sodic azide and 0,05 % distilled water with 20 tween) at room temperature, 4 ºC and - 20 ºC. RESULTS: among the samples kept at room temperature, those with no preserve suffered a significant deterioration, and their values were higher than the ones of the samples conserved with distilled water with tween 20 and with sodium azide. The latter is a very toxic product and its use would require a greater care. CONCLUSIONS: 0,05 % distilled water with 20 tween at room temperature was the preserving solution with the best results in this study.

Genital white piedra

ANTECEDENTES: la piedra blanca es una micosis caracterizada por la presencia de nódulos de color blanco a pardo claro, adheridos a los pelos de la región genital, axilas, cejas, pestañas y cuero cabelludo, es causada principalmente por Trichosporon inkin y Trichosporon ovoides. PRESENTACIÓN DEL CASO: paciente del sexo femenino de 35 años, originaria de San Pedro Sula, Honduras, de buena presencia física y buenos hábitos higiénicos, acude a consulta por presentar nódulos en los pelos púbicos, asintomáticos, de 2 meses de evolución. Al examen físico se pudo observar la presencia de nódulos de color blanquecino a pardo claro, blandos, de 1 a 2 mm, que rodeaban los pelos. No se detectó fluorescencia de los pelos a la luz de Wood. Al examen microscópico se observaron blastoconidios y artroconidios; en el cultivo se obtuvo el crecimiento de colonias levaduriformes, elevadas, de aspecto cerebriforme; en el microcultivo en agar extracto de malta se observaron hifas hialinas, tabicadas que formaban apresorios, pseudohifas fragmentadas, artroconidios rectangulares y blastoconidios. Mediante el sistema API ID32C fue identificado como Trichosporon inkin. Se instauró tratamiento con crema de isoconazol, previo rasurado del vello púbico. Los exámenes realizados al final del tratamiento fueron negativos. CONCLUSIONES: se presenta un caso de piedra blanca genital en el sexo femenino y se hace una actualización sobre la taxonomía del género Trichosporon sobre la base de los estudios moleculares, se discute el papel de T. inkin en esta micosis y su relevancia creciente como agente de infecciones invasivas en pacientes inmunocomprometidos, así como la importancia del diagnóstico de laboratorio para la confirmación de los casos.

INTRODUCTION: white piedra is a type of mycosis characterized by white to light brown nodules attached the hair shafts of genitals, axilla, eyelashes, eyebrowns, and scalp and is mainly caused by Trichosporon inkin and Trichosporon ovoides. CASE PRESENTATION: a 35 years-old female with good physical condition and good hygienic habits, who came from San Pedro Sula in Honduras, went to the doctor because of some nodules in their genital hair, asymptomatic, two months of evolution. On physical examination, it was observed that there were white-to-light brown coloured nodules measuring 1-2mm and surrounding the hair shafts. No fluorescence was detected in the hair on Wood´s light. On microscopic examination, blastoconidia and arthroconidia were observed; the culture yielded the growth of elevated yeastlike colonies; the microculture in malt extract agar showed disarticulating hyaline hyphae, partitioned appressoria, fragmented pseudohyphae, rectangular arthroconidia and blastoconidia. Through the API ID32C system, it was identified as Trichosporon inkin. The patient was treated with Isoconazole cream after her genital hair had been shaved. At the end of treatment, the exam results were negative. CONCLUSIONS: the case of a female with genital white piedra was presented and an updating on Trichosporon genus taxonomy on the basis of molecular studies. The role of T. inkin in this mycosis, and its growing importance as an agent of invasive infections in immunocompromised patients, as well as the relevance of lab diagnosis to confirm cases, were discussed.