Vaccimonitor

Old and New approaches for Vaccines against tuberculosis

¿Necesitamos esfuerzos renovados para desarrollar nuevas vacunas para combatir la tuberculosis? Los datos epidemiológicos muestran que la disminución de la ya baja incidencia de tuberculosis se ha detenido en los países en desarrollo. En ciertos países occidentales la incidencia de tuberculosis ha aumentado incluso en los últimos 10 años. En Africa y Asia se encontró una alta incidencia de tuberculosis similar a la del mundo occidental en los años 30. ¿Podemos predecir por la historia de la tuberculosis en Europa Occidental que la epidemia de tuberculosis en los países en desarrollo ya alcanzó su pico o se encuentra todavía en aumento? Datos revisados muestran que en Europa la epidemia de tuberculosis comenzó al menos tres siglos antes de alcanzar su apogeo a mediados del siglo XIX. Las razones para la disminución de la tuberculosis en la primera mitad del siglo XX en el mundo occidental todavía no son bien comprendidas.¿Las medidas de salud pública o el adecuado tratamiento con antibióticos reducirán o detendrán la tuberculosis en Africa y Asia o continuará aumentando la tuberculosis? Nuestra posibilidad para controlar la diseminación de la enfermedad se complica por la aparición de cepas resistentes a antibióticos y el VIH. Por lo tanto se requiere una mejor comprensión de la base molecular de la interacción entre el bacilo y sus huéspedes para el desarrollo de mejores enfoques de tratamiento e inmunización. La inmunidad celular y la hipersensibilidad de tipo retardado (HTR) son procesos claves en el curso de la infección por el Mycobacterium y están involucradas tanto en la infección primaria como en la secundaria, así como en la inducción de la inmunidad protectora en el huésped. Los diferentes tipos de vacuna contra la tuberculosis que están siendo reevaluadas incluyen: BCG con dosis de refuerzo, BCG oral, BCG modificada (multivalente), cepas auxotróficas atenuadas del M. tuberculosis, proteínas secretadas o recombinantes de M. tuberculosis con o sin inmunomoduladores y vacunas de ADN. Estas nuevas vacunas inducen una buena inmunidad celular y pueden contribuir al desarrollo de enfoques mejorados de inmunización y tratamiento.

Do we need renewed efforts to develop new vaccines to fight tuberculosis? Epidemiological data show that the decrease of the already low incidence of tuberculosis has stopped in developed countries. In certain Western countries the incidence of tuberculosis has even increased in the last ten years. In Africa and in Asia, a high incidence of tuberculosis is found similar to that of the Western world in the 1930s. Can we predict from the history of tuberculosis in Western Europe that the epidemic of tuberculosis in developing countries has reached his peak or is still developing? Revisited data from Europe show that the epidemic of tuberculosis started at least three centuries before it reached its apogee in the middle of the 19th century. The reasons for the decrease of tuberculosis in the first half of the 20th century in the Western world are still not well understood. Will public health measures and proper antibiotic treatment reduce and stop tuberculosis in Africa and in Asia or will the incidence of tuberculosis increase? Our ability to control the spread of the disease is complicated by the appearance of antibiotic resistant strains and HIV. Therefore, a better understanding of the molecular basis for the interaction between the bacilli and the hosts is necessary for the development of improved approaches for treatment and immunization. Cellular immunity and delayed type hypersensitivity (DTH) are key processes in the course of mycobacterial infection and are involved in both primary and secondary infection as well as in the induction of protective immunity in the host. The different types of tuberculosis vaccines being reevaluated comprise: BCG with booster, oral BCG, modified BCG (multivalent), auxotrophic M. tuberculosis attenuated strains, M. tuberculosis secreted proteins or recombinant proteins with or without immunomodulators and DNA vaccines. These new vaccines inducing a good cellular immunity may contribute to the development of improved approaches for immunization and treatment.

Epidemiological markers of Neisseria meningitidis strains isolated in Cuba during the 1985-1992 period

Para estudiar la variabilidad genética y estructura poblacional de cepas de Neisseria meningitidis aisladas en brotes y epidemias se utilizan actualmente marcadores genotípicos, que brindan una información más completa sobre la epidemiología de la enfermedad meningocócica (EM) y complementan la caracterización obtenida por otros marcadores utilizados tradicionalmente. El seguimiento epidemiológico de esta enfermedad es una importante tarea a desarrollar por el Instituto Finlay. Con este propósito se estudiaron 91 cepas epidémicas aisladas en el transcurso de los años 1985 a 1992. La identificación de género, especie y serogrupos se realizó por técnicas convencionales y en la clasificación de serosubtipos se empleó un ELISA de células enteras con anticuerpos monoclonales (AcMs). Se estudió además la sensibilidad y resistencia antimicrobiana a penicilina, cloranfenicol, sulfadiacina sódica, ciprofloxacina, rifampicina y ceftriaxona y se investigó por primera vez en nuestro país, el estudio de 14 enzimas obtenidas de lisados de las cepas. Se encontraron 26 tipos electroforéticos (ETs) entre las cepas cubanas, con predominio de los complejos ET-5 (67,0%) y A4 (3,3%). Sólo se detectó al serogrupo B, con predominio de los serotipos 4 (67,0%) y 15 (27,5%), junto a los subtipos P1.15, P1.10 y P1.16. La susceptibilidad intermedia (SI) a penicilina y resistencia (R) a sulfadiacina sódica fue del 80,0% y 42,8% respectivamente, al resto de las drogas todas las cepas se mostraron sensibles.

Genotypic markers, that give a more complete information on the epidemiology of meningococcal disease (MD) and complement the characterization obtained with the other traditional markers, are used to study the genetic variability and population structure of Neissseria meningitidis strains isolated in outbursts and epidemics. The epidemiological follow-up of the disease is an important task carried out by Finlay Institute. For this purpose 91 epidemic strains isolated from 1985 to 1992 were studied. The identification by genus, species and serogroups was carried out by conventional techniques and, for the classification in sero/subtypes, a whole-cell ELISA with monoclonal antibodies (AcMs) was used. Sensitivity and resistance against penicillin, chloramphenicol, sodium sulphadiazine, ciproflaxin, rifampin and ceftriaxone and the study of 14 enzymes obtained from strain lysates was carried out for the first time in our country. Among the Cuban strains 26 electrophoretic types (ETs) were found with complexes ET-5 (67,0%) and A4 (3,3%) prevailing. Only serogroup B was detected with predominance of serotypes 4 (67,0%) and 15 (27,5%), together with subtypes P1.15, P1.10 and P1.16. Moderate. susceptibility (MS) to penicillin and resistance (R) to sodium sulphadiazine were respectively of 80,0 and 42,8%. All strains were sensitive to the rest of the drugs.

Evaluation of different methodologies for the preservation of Clostridium tetani, used in the production of human vaccines

En el presente estudio se evaluaron diferentes metodologías para la preservación de Clostridium tetani. Para verificar el sustento del cultivo se realizó un adecuado control de calidad, que incluyó comprobación de pureza, viabilidad y estabilidad de las propiedades de interés. En este trabajo se compararon dos procedimientos para liofilizar y se evaluó el método de congelación a -20 0C para preservar C. tetani. Para medir determinados parámetros se realizaron procesos a escala industrial, empleándose para esto un Biorreactor Chemap de 35 L. Con este trabajo se buscó Alternativas y soluciones a problemas presentados en su conservación. Los resultados obtenidos sugieren la posible inclusión en el Programa de Mantenimiento establecido.

In this study different methodologies for the preservation of Clostridium tetani were evaluated. To verify the culture maintenance, an adequate quality control was carried out, including tests for purity, viability and stability of the main characteristics. Two procedures for liophyilization were compared and a method to preserve C. tetani by freezing at -20ºC was evaluated. In order to measure certain parameters, some processes were performed at an industrial scale, using a 35L Chemap biorreactor. Alternatives and solutions to conservation problems were looked for. The results obtained suggest the possibility of its inclusion in the Mantenance Program already established.

Validation of qualitative immunoassays used to evaluate the immunogenicity of vaccines

Se realizó una revisión y actualización sobre la importancia de la validación de los inmunoensayos cualitativos usados para evaluar la inmunogenicidad de vacunas, sus principios y procedimientos. Se discutieron los principales parámetros empleados para evaluar estas técnicas. Se analizaron detalladamente los procedimientos para estudiar la sensibilidad, especificidad, valores predictivos positivos y negativos, valor de discriminación y zona gris. Se exponen nuestras experiencias.

The importance of general principles and outline of procedures for the validation of qualitative immunoassays used to evaluate the immune response elicited by vaccines were analyzed. The main parameters used are discussed. Guidelines for the evaluation of the sensitivity, specificity, positive and negative predictive values, discrimination value and gray zone were carefully studied. Our experience is presented.

The influence of pH in the stability during the storage of intravenous immunoglobulins for human use

La eliminación o disociación de los agregados de IgG, es uno de los requisitos que debe poseer cualquier método de purificación de inmunoglobulinas para uso intravenoso. Se demostró con el uso de la Cromatografía en Gel y la Espectrofotometría, que el pH ácido (4,5), confiere una mayor estabilidad molecular a la IgG, permitiendo la disociación de la mayor parte de los agregados durante el almacenamiento prolongado utilizando dextrosa (5%) como estabilizante, fenómeno que está influido por la fuerza iónica del medio para cada uno de los pH. Muestras con contenido de polímeros entre 1% y 3% pierden los mismos en un período inferior a los seis meses. A su vez el uso de pH 4,0, mostró ventajas en la no formación de polímeros durante el calentamiento, en comparación con los pH más básicos. A los 5 minutos de calentamiento, la absorvancia de la muestra a pH 7,0, aumentó en un 60% en comparación con la muestra a pH 4,0.

One of the most important requirements that all methods of protein purification for intravenous use must fulfil is the elimination or dissociation of the immunoglobulin aggregates. The use of gel filtration and espectrophotometric techniques showed that acid pH (4.5), gives greater molecular stability to the IgG, dissociating most of the aggregates during lengthy storage using dextrose (5%) as stabilizer, this fact is influenced by the ionic strength of the medium for each pH. Samples with polymers (1-3%) lose them in 6 months. At the same time the use of pH 4.0 showed advantages as the non formation of polymers during the heat of the immunoglobulins, as compared to more basic pH. After 5 minutes of heating the sample at pH 7.0 the absorbance increased in 60% in comparison with the sample at pH 4.0.