Vaccimonitor

Reactogenicity of the first Trivalent Cuban Human Leptospirosis Vaccine in Phase II Clinical Trials

Con el objetivo de evaluar la reactogenicidad de la vacuna cubana trivalente contra la leptospirosis humana (vax- SPIRAL) en grupos de voluntarios sanos utilizando diferentes dosis, se realizó un ensayo clínico controlado, aleatorio y a doble ciego. Los voluntarios fueron distribuidos en dos grupos (vacunados y placebos) para evaluar las reacciones adversas en diferentes concentraciones de dosis (0,25 y 0,5 mL). Los síntomas y signos locales evaluados fueron: dolor, rubor, infiltración local, prurito, necrosis y absceso, y generales: fiebre, febrícula, cefalea, lipotimia, náuseas, vómitos, rash y malestar general. No se presentaron eventos adversos serios tras la administración de la vacuna. La febrícula, el dolor local en el sitio de inyección y el malestar general fueron los signos y síntomas más frecuentes reportados en mayor proporción en los vacunados con dosis de 0,5 mL. La mayoría desaparecieron a las 72 horas. Los resultados del estudio demostraron que vax-SPIRAL es una vacuna segura y poco reactogénica para adultos humanos en las edades comprendidas en los ensayos clínicos realizados.

With the objective of evaluating the reactogenicity of the trivalent Cuban human leptospirosis vaccine (vax-SPIRAL) in groups of selected healthy volunteers using several doses randomized and blind clinical controlled trials were carried out.In the study the volunteers were distributed in two randomized groups in order to observe the adverse reactions to the product at several doses (0,25 and 0,5 mL). The adverse reactions evaluated were symptoms and local signs: pain, redness, local infiltration, itch, necrosis and abscess, and general ones: fever, slight fever, headache, lipothymy, nausea, vomits, rash and general malaise. Serious adverse events were not observed after the administration of the vaccine. Slight fever, local mild pain and general malaise were the most frequent in those vaccinated with a dose of 0,5 mL. The majority of the symptoms and signs disappeared by 72 hours. It was concluded that the vaccine is safe and of low reactogenicity in the studied age groups.

Immune-pharmacological actions of Intravenous Immunoglobulins

Se ha recorrido un largo camino en la comprensión de los mecanismos de acción relativos a la infusión de preparados de inmunoglobulinas intravenosas desde los días donde un crudo de fracción II de Cohn obtenido de plasma humano fue administrado intramuscularmente a pacientes aquejados de agammaglobulinemia de Brutton, hasta nuestros días. Debemos hacer una distinción entre los mecanismos de acción al nivel del patógeno que provoca la enfermedad, de aquellos al nivel de una enfermedad dada provocada por la reacción del huésped contra el patógeno. El efecto de supresión de las inmunoglobulinas intravenosas en las respuestas autoinmunes abre nuevas perspectivas terapéuticas y permite un nuevo acercamiento a la comprensión de los mecanismos básicos que explican la autoinmunidad patológica.

We have come a long way in the understanding of the mechanisms of action occurring upon infusion of intravenous immunoglobulin since the days when crude Cohn fraction II of human plasma was administered intramuscularly to patients suffering from Brutton’s agammaglobulinemia, up to modern times. A distinction should be made between mechanisms of action at the level of the pathogen causing the disease and those at the level of a given disease caused by the reaction of the host against the pathogen. The suppresive effect of intravenous immunoglobulins on autoinmune responses opens novel therapeutic prospects and provides a new approach for understanding the basic mechanisms that explain pathological autoinmunity.

Use of the immunoperoxidase technique for the titration of a Dengue 1 virus strain

La aplicación de la técnica de inmunoperoxidasa para titular virus Dengue ha permitido eliminar algunas de las desventajas que presenta, para este mismo fin, la técnica de formación de placas en cultivos celulares, catalogada como un método fastidioso debido a los múltiples factores que influyen en la formación de las placas. En la literatura consultada se reporta la disminución del tiempo para la obtención de los resultados como la principal ventaja de la primera, pero no datos sobre su precisión. Teniendo esto en cuenta nos propusimos aplicar dicha técnica para titular virus Dengue 1. Se siguió el Procedimiento descrito para realizar la inmunoperoxidasa modificando el tiempo de fijación de las células infectadas de 5, 7 y 10 días y el bloqueo con TSF-Tween 20- SAB 1% durante una hora. La dilución de trabajo para el suero humano utilizado fue de 1/500 y para el líquido ascítico hiperinmune de ratón, contra Dengue 1 fue de 1/100; para los conjugados peroxidasa anti humano y anti ratón empleados, resultaron útiles diluciones de 1/100 y 1/200 para el primero y 1/500 y 1/1000 para el segundo. Se evidenciaron los focos de infección viral, al 7° y 10° días, pero no al 5º. Los títulos virales obtenidos por dos operadores presentaron un Coeficiente de Variación < 30%. Se seleccionó el 7º día para titular el virus, lográndose reducir el tiempo requerido para obtener los resultados con la técnica de placas. No hubo diferencias significativas entre los títulos virales calculados por ambas técnicas.

The use of the immunoperoxidase technique for the titration of Dengue virus has eliminated some of the disadvantages of plaque assay in cell culture for titration, which is considered a fastidious method due to the number of factors involved in the plaque formation. The time reduction to obtain results, is the principal advantage of the immunoperoxidase technique reported in the literature, but nothing is said about its precision. Our purpose was to test the immunoperoxidase technique to titrate Dengue 1 virus in our laboratory. The procedure described for this technique was followed, modified by the fixation of infected cells after 5, 7, and 10 days of incubation and by blocking with TSF-Tween 20- SBA 1% during one hour. The working dilution for the positive human sera was 1/500 and for the polyclonal ascitic fluid (AF) against Dengue 1 obtained in mice, 1/100. The useful dilutions for the anti human and anti mouse peroxidase conjugates were 1/100 and 1/200 for the first and 1/500 and 1/1000 for the second. In these conditions, it was possible to evidence the characteristic foci produced by Dengue 1 virus and to quantify it on the 7th and 10th days, but not on the 5th. The Variation Coefficient was < 30%. The 7th day was chosen as optimum to titrate the virus, leading us to titration faster than by the plaque method. Significant differences were not found between the viral titres obtained by both techniques.

In vitro assay to determine the presence of adventitious agents in a Working Cell Bank

Actualmente las colecciones de cultivos de tejidos son consideradas valiosas fuentes de material biológico para la investigación, diagnóstico y producción, sin embargo se hacen realmente útiles cuando las mismas están bien organizadas, caracterizadas y manipuladas como Bancos Celulares Maestros y de Trabajo, en dependencia de la dirección de los objetivos de trabajo. Las agencias reguladoras en todo el mundo consideran el establecimiento de Bancos Celulares Maestros y de Trabajo siguiendo las Buenas Prácticas de Fabricación vigentes y los “Puntos a Considerar en la Caracterización de Líneas Celulares utilizadas en la Producción de Biológicos”. El objetivo de este trabajo fue determinar que un Banco Celular de Trabajo (BCT) obtenido en nuestro laboratorio estaba libre de agentes adventicios, para lo cual se realizó la observación a través del microscopio óptico y electrónico para visualizar morfología y presencia de retrovirus, se verificó la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica y de micoplasmas; además se buscó presencia de otros agentes adventicios utilizando tres sistemas de cultivo celular. La morfología de las células fue seudofibroblástica como está reportado para esta línea, el Banco Celular está exento de bacterias, hongos y micoplasmas y los resultados de la prueba de agentes extraños fueron negativos, la observación al microscopio electrónico no reveló partículas tipo A y tipo C de retrovirus. Como conclusión podemos decir que el Banco Celular de Trabajo cumple con las regulaciones establecidas y pudiera ser empleado en la producción de vacunas veterinarias.

At present tissue culture collections are considered valuable sources of biological material for research and production, nevertheless they are really useful when they are well organized, characterized and handled as Master Cell Banks and Working Cell Banks, depending on the objectives of the work. Regulatory agencies all over the world consider that the establishment of Master Cell Banks and Working Cell Banks follows good manufacturing practices in effect and the “Points to consider in the Characterization of Cell Lines used for the Production of Biologicals”. The objective of this work was to determine if a Working Cell Bank (WCB) obtained in our laboratory was free of adventitious agents. To achieve this, optical and electronic microscopy were carried out looking for the morphology or presence of retrovirus. Absence of bacterial, fungi and micoplasma contamination was also verified. Also the presence of other adventitious agents tested using three cell culture systems. The cell morphology was pseudo fibroblastic as reported for this cell line. The Cell Bank is free of bacteria, fungi and micoplasma. The results of the test for adventitious agents were negative, electronic microscopy observation didn’t reveal type A or C retroviral particles. As a conclusion we may say that the Working Cell Bank complies with the regulations established and can be used in the production of veterinary vaccines.

First report on the isolation of Helicobacter pylori associated to digestive diseases in the City of Havana

La infección por Helicobacter pylori desempeña un papel fundamental en el desarrollo de diversas enfermedades digestivas. Actualmente se acepta que este microorganismo está relacionado con la gastritis crónica activa, la úlcera péptica (tanto gástrica como duodenal), el adenocarcinoma gástrico y el linfoma gástrico de células B del tejido linfoide asociado a mucosa (Linfoma MALT). Se estudiaron 121 pacientes, 53 con diagnóstico endoscópico de gastritis, 21 con úlcera péptica, 20 úlceras duodenales, 3 adenocarcinomas del antro gástrico, 5 neoplasias de esófago y 19 panendoscopias normales (dispépticos). A todos los pacientes se les practicó una gastroscopia y se tomaron cuatro fragmentos de biopsias distribuidas entre las regiones de antro y cuerpo gástrico. Para el diagnóstico y aislamiento de H. pylori se empleó la prueba de la ureasa rápida, la tinción de gram, y el cultivo en agar cerebro corazón con suero de caballo 10%, extracto de levadura 0,25% más suplemento Dent (OXOID SR 147) durante 7 días a 37 ºC en jarra en atmósfera de microaerofilia. También se evaluó la presencia de catalasa y oxidasa. Se observó una prevalencia de la infección del 79,2% en la gastritis crónica, un 100% en los pacientes con úlcera duodenal y un 90,4% en relación con la úlcera gástrica, lo que coincide con lo reportado por otros autores. En el 100% de los casos de adenocarcinoma gástrico y en el 60% de los casos de neoplasias de esófago se aisló el microorganismo. El aislamiento de H. pylori en el 78,9% de endoscopias realizadas e informadas como normales es una alerta de la prevalencia en pacientes dispépticos.

Infection by Helicobacter pylori plays an important role in different digestive diseases. At present it is accepted that this microorganism is related to active chronic gastritis, peptic ulcer (gastric as well as duodenal), gastric adenocarcinoma and B-cell gastric lymphoma of the lymphoid tissue associated with mucosa (MALT lymphoma). The study included 121 patients: 53 having an endoscopic diagnosis of gastritis, 21 with peptic ulcer, 20 with duodenal ulcers, 3 adenocarcinomas of the gastric antro, 5 esophagus neoplasm, and 19 normal panendoscopies (dyspeptic). Gastroscopy was carried out on all patients and four biopsy fragments were taken from the antro and body regions of the stomach. For diagnosis and isolation of H. pylori a fast urease test was used. Gram stain and culture in brain heart agar with 10% horse serum, 0,25% yeast extract and Dent supplement (OXOID SR 147) during 7 days at 37 ºC in a jar with a microaerophyllic environment were also done. The presence of catalase and oxidase were also evaluated. An infection prevalence of 79,2% was observed in chronic gastritis patients, 100% in duodenal ulcer patients, and 90,4% in those with gastric ulcer, in agreement with the reports from other authors. In 100% of the gastric adenocarcinoma cases and 60% of the ones with esophagus neoplasm the microorganism was isolated. Isolation of H pylori in 78,9% of the endoscopic cases considered and reported as normal is a warning of the prevalence in dyspeptic patients.