Vaccimonitor

Evaluation of efficacy, cell mediated and humoral immune response of two different mycoplasma vaccines in specific pathogenic free chickens

ABSTRACT To investigate cell mediated and humoral immune response following vaccination with live mycoplasma vaccines, 100 specific pathogenic free chickens were inoculated with two different live mycoplasma vaccines: Mycoplasma gallisepticum (ts-11) and Mycoplasma synoviae (H); another 50 chickens were kept as controls (non vaccinated chickens). To evaluate the cell mediated immune response, peripheral blood leucocytes were obtained from vaccinated and control chicken groups and the lymphocyte proliferative response and nitric oxide level were determined. The immunomodulatory cytokines expression profiles elicited by the vaccines were evaluated; the mRNA expression level of interleukin-6 and gamma interferon were determined in spleen of vaccinated specific pathogenic free chickens. In parallel, sera collected from vaccinated and control chickens were examined using an enzyme-linked immunosorbent assay antibody kit to assess the humoral immune response. A challenge test was applied at 4th week post vaccination to all vaccinated chickens and controls against virulent strains of Mycoplasma gallisepticum and Mycoplasma synoviae. The results confirm the presence of consistent lymphoproliferation with production of interferon and nitric oxide in vitro in the two vaccinated chicken groups compared to the negative control. Moreover, the tested vaccines induced high seroconversion level with satisfactory protection (%) at 4th week post vaccination. It was concluded that the two live mycoplasma vaccines can protect the vaccinated chickens against Mycoplasma gallisepticum and Mycoplasma synoviae infections suggesting a significant role for cell-mediated immunity.

RESUMEN Se estudió la respuesta inmune mediada por células y la humoral después de la vacunación con vacunas vivas contra micoplasma. Para ello se inocularon 100 pollos libres de patógenos específicos con dos diferentes vacunas vivas de micoplasma: Mycoplasma gallisepticum (ts-11) y Mycoplasma synoviae (H); otros 50 pollos se mantuvieron como control (pollos no vacunados). Para evaluar la respuesta inmune mediada por células, se obtuvieron leucocitos de sangre periférica de los grupos de pollos vacunados y controles y se determinó la respuesta proliferativa de los linfocitos y el nivel de óxido nítrico. Se evaluaron los perfiles de expresión de las citocinas inmunomoduladoras provocadas por la vacuna y se determinó el nivel de expresión del ARNm de la interleucina 6 y el interferón gamma en el bazo de los pollos libres de patógenos específicos vacunados. Paralelamente, los sueros recogidos de los pollos vacunados y controles se evaluaron mediante un ensayo inmunoenzimático para determinar la respuesta inmune humoral. En la 4ª semana posvacunación se aplicó a todos los pollos vacunados y controles una prueba de provocación contra cepas virulentas de Mycoplasma gallisepticum y Mycoplasma synoviae. Los resultados confirman la presencia de linfoproliferación con producción de interferón y óxido nítrico in vitro en los dos grupos de pollos vacunados en comparación con el control negativo. Además, las vacunas ensayadas indujeron un alto nivel de seroconversión con una protección satisfactoria (%) a la 4ª semana posvacunación. Se concluyó que las dos vacunas vivas contra micoplasma pueden proteger a los pollos vacunados contra las infecciones por Mycoplasma gallisepticum y Mycoplasma synoviae, sugiriendo un papel significativo para la inmunidad celular.

Vaccines for arboviral prevention: an update

RESUMEN Los arbovirus representan una creciente amenaza para la salud pública mundial, observándose un aumento notable en su propagación, relacionado con factores como: viajes internacionales, comercialización mundial, calentamiento global, urbanización no planificada, deforestación. La vacunación contra los arbovirus es la medida de salud pública que permitirá lograr el control y posible eliminación de las enfermedades que provocan. Se han evaluado diferentes plataformas para el diseño de vacunas, entre ellas, virus inactivados, virus vivos atenuados, vacunas basadas en péptidos y proteínas, vectores virales y partículas similares a virus. Esta revisión proporciona un resumen actual de los avances en las vacunas establecidas o en las vacunas candidatas contra algunas enfermedades arbovirales.

ABSTRACT Arboviruses represent an emergent problem to global public health, with a marked increase in their propagation, related to factors such as: international travel, global trade, global warming, unplanned urbanization, and deforestation. Vaccination against arboviruses is the public health measure that will allow control and possibly eliminate diseases caused by these viruses. Different platforms have been evaluated for the design of vaccines, including inactivated virus, live attenuated virus, peptide and protein-based vaccines, viral vectors, and virus-like particles. This review provides a current summary of advancements in the established vaccines or vaccine candidates against some arboviral diseases.

Validation of an ELISA for the quantification of tetanus and diphtheria antitoxin in guinea pig serum

RESUMEN Se validó un ensayo serológico inmunoenzimático en fase sólida de tipo indirecto para la cuantificación de antitoxina tetánica y diftérica en suero de curiel, para lo cual se empleó un suero estándar previamente calibrado. La curva de calibración presentó un buen ajuste lineal y paralelismo con las muestras, presentando R2 ≥ 0,98 y CV ≤ 10 %. Los coeficientes de variación en los ensayos de precisión intra e interensayo estuvieron en los intervalos establecidos para cada uno (≤10 y ≤20 %, respectivamente). El ensayo demostró ser específico. La exactitud del método se demostró a través de la correlación entre el ensayo serológico y el ensayo de seroneutralización in vivo dosis L+/10/50 para determinar potencia de tétano y dosis Lr/100 para determinar potencia de difteria. Los resultados obtenidos avalan el empleo de este método analítico basado en el principio de las 3Rs (Reducción, Refinamiento y Reemplazo) para la evaluación de la actividad inmunogénica de vacunas antidiftéricas y antitetánicas.

ABSTRACT It was validated an indirect solid phase immunoenzymatic serological assay for the quantification of tetanus and diphtheria antitoxin in guinea pig serum; a previously calibrated standard serum was used. The calibration curve presented a good linear fit and parallelism with the samples, showing R2 ≥ 0.98 and CV ≤10 %. The coefficients of variation in the intra- and inter-assay precision tests were within the intervals established for each one (≤10 and ≤ 20 %, respectively). The assay proved to be specific. The accuracy of the method was demonstrated through the correlation between the serological assay and the in vivo seroneutralization assay dose L+/10/50 to determine potency of tetanus and dose Lr/100 to determine potency of diphtheria. The results obtained support the use of this analytical method based on the 3Rs principle (Reduction, Refinement and Replacement) for the evaluation of the immunological activity of vaccines containing tetanus and diphtheria toxoids.

Establishment of the area of operation for large-scale culture of Chinese hamster ovary cells to obtain a viral vaccine

RESUMEN El cultivo de células de mamífero en perfusión se caracteriza por alcanzar mayores densidades celulares y la más alta productividad. En el Centro de Inmunología Molecular, con más de 15 años de experiencia en el empleo de esta tecnología a nivel industrial, se desarrolló el cultivo en perfusión de células de ovario de hámster chino productoras de la proteína recombinante rC21 (materia prima biológica empleada en la formulación de una vacuna viral) en un biorreactor tipo tanque agitado de 2.000 L de volumen efectivo. La presente investigación se enfocó en establecer la zona de operación en el cultivo a gran escala a partir de la caracterización de la ingeniería de procesos, en función de parámetros hidrodinámicos. Se estableció una velocidad tangencial de 1,41 m/s que implicó operar una potencia por unidad de volumen alejada de los valores que provocan daño celular. El tamaño de los remolinos que genera esta condición de agitación es superior al diámetro de las células de mamíferos, condición que no tiene impacto en el daño celular a partir del criterio de la microescala de turbulencia de Kolmogorov. La zona de operación posibilitó alcanzar una alta viabilidad celular y parámetros cinéticos típicos de las células de mamíferos.

ABSTRACT Mammalian cell culture in perfusion is characterized by higher cell densities and higher productivity. At Center of Molecular Immunology, with more than 15 years of experience in the use of this technology at the industrial level, perfusion culture of Chinese hamster ovary cells line to produce the recombinant protein rC21 (a biological raw material used in the formulation of a viral vaccine) was developed in a stirred tank bioreactor of 2,000 L effective volume. The present investigation focused on establishing the operating zone in the large-scale culture based on characterization of the process engineering, as a function of hydrodynamic parameters. A tangential velocity of 1.41 m/s was established, which implied operating a power per unit volume far from the values that cause cell damage. The size of the eddies generated by this agitation condition is larger than the diameter of mammalian cells, a condition that has no impact on cell damage according to the Kolmogorov turbulence microscale criteria. The operating zone made it possible to achieve high cell viability and kinetic parameters typical of mammalian cells.

Preliminary evaluation of humoral immune response for rabies vaccine using a developed lateral flow immunochromatographic test

ABSTRACT In this study, a nanogold lateral flow immunochromatographic test was developed for the detection of rabies antibodies using a panel of well-characterized clinical and experimental serum samples. The lateral flow immunochromatographic rabies virus antibody test underwent a comprehensive evaluation, including an assessment of its limit of detection, cross-reactivity, interference from potential substances, and overall performance. Sensitivity evaluation revealed a limit of detection of 0.5 IU/mL, indicating a positive result. When compared with ELISA using different sera samples, the lateral flow immunochromatographic rabies virus antibody test exhibited robust performance with a sensitivity of 91.1 %, specificity of 92 %, and an overall accuracy of 91.5 %. These results suggest that the lateral flow immunochromatographic rabies virus antibody test could be a suitable tool for evaluating antibody levels in vaccinated animals. Moreover, it provides an alternative approach for assessing the efficacy of inactivated rabies virus vaccines.

RESUMEN En este estudio se desarrolló una prueba inmunocromatográfica de flujo lateral basada en nanopartículas de oro para la detección de anticuerpos contra la rabia, utilizando un panel de muestras clínicas y experimentales de suero bien caracterizadas. Este ensayo se sometió a una evaluación exhaustiva, que incluyó una valoración de su límite de detección, reactividad cruzada, interferencia potencial de sustancias y rendimiento general. La evaluación de la sensibilidad reveló un límite de detección de 0,5 UI/mL para esta prueba inmunocromatográfica de flujo lateral desarrollada, lo que indica un resultado positivo. Cuando se comparó con el ensayo de ELISA, utilizando diferentes muestras de suero, la prueba inmunocromatográfica de flujo lateral para anticuerpos del virus de la rabia mostró un sólido rendimiento con una sensibilidad del 91,1 %, una especificidad del 92 % y una precisión global del 91,5 %. Estos resultados sugieren que la prueba inmunocromatográfica de flujo lateral para anticuerpos contra el virus de la rabia podría ser una herramienta adecuada para evaluar los niveles de anticuerpos en animales vacunados. Además, constituye un método alternativo para evaluar la eficacia de las vacunas inactivadas contra el virus de la rabia.

CD8⁺ T-cell activation after vaccination with SOBERANA^®02/SOBERANA^®Plus heterologous schedule in children aged 5-11 years

RESUMEN En los niños, la COVID-19 se manifiesta habitualmente en formas leves, sin embargo, se han descrito secuelas derivadas de la enfermedad y un impacto importante de las poblaciones pediátricas en la trasmisión de la enfermedad. En este escenario, la vacunación sigue siendo la alternativa más prometedora y la respuesta vacunal debe ser caracterizada, no solo por la generación de anticuerpos neutralizantes, sino también por la capacidad de generar respuesta T citotóxica. Este trabajo tuvo como objetivo evaluar la polarización y activación de linfocitos T CD8+ tras la vacunación con el esquema heterólogo SOBERANA®02/SOBERANA®Plus en comparación con la respuesta natural en niños. Para ello se seleccionó un subgrupo de niños de 5-11 años (n = 15) vacunados y un grupo de niños recuperados de enfermedad COVID-19 leve o moderada (n = 10) como control. Muestras de sangre fueron tomadas 14 días después de la dosis con SOBERANA®Plus. Se evaluaron las subpoblaciones celulares Tc1, Tc2 y Tc17 mediante citometría de flujo multiparamétrica. Adicionalmente, se determinó la capacidad de activación de estas células y la frecuencia de células secretoras mediante ensayo de secreción de IFN-γ tras estimulación in vitro. Como resultado se observaron mayores valores en la frecuencia de células Tc1 (CCR4+ CCRX3+ CCR6-) en vacunados, en comparación con los niños recuperados (p < 0,0001). Las células Tc2 (CCR4+ CCRX3- CCR6-) y Tc17 (CCR4+ CCRX3- CCR6+) muestran los mayores valores en los sujetos controles recuperados en comparación con los vacunados (p = 0,0318) y (p = 0,0017), respectivamente. Tras el estímulo in vitro con péptidos de la proteína S1 no se observaron diferencias entre el grupo vacunado con respecto al control recuperado de COVID-19 en frecuencia de linfocitos T CD8+CD69+ activados (p = 0,0563). Con respecto al control, los niños vacunados mostraron mayores valores de células CD8+ IFN-γ+ (p = 0,0096). En conclusión, la vacunación con el esquema heterólogo SOBERANA®02/SOBERANA®Plus activa los linfocitos T CD8+ con polarización a células Tc1.

ABSTRACT In children, COVID-19 usually manifests in mild forms, but sequelae of the disease and a significant impact of pediatric populations on disease transmission have been described. In this scenario, vaccination remains the most promising alternative and the vaccine response should be characterized not only by the generation of neutralizing antibodies, but also by the ability to induce a cytotoxic T response. The aim of this study was to determine the activation of CD8+ T cells after vaccination with the heterologous schedule of two doses of SOBERANA®02 and one dose of SOBERANA®Plus in children. For this purpose, a subgroup of vaccinated children aged 5-11 years (n = 15) and a group of children recovering from moderate COVID-19 disease (n = 10) were selected as controls. Blood samples were taken 14 days after administration of SOBERANA®Plus. Tc1, Tc2 and Tc17 subpopulations were assessed by multiparametric flow cytometry. In addition, the activation capacity of these cells and the frequency of secreting cells were determined by IFN-γ secretion assay after in vitro stimulation. As a result, higher values for the frequency of Tc1 cells (CCR4+ CCRX3+ CCR6-) were observed in vaccinated compared to recovered children (p < 0.0001). Tc2 (CCR4+CCRX3-CCR6-) and Tc17 (CCR4+ CCRX3- CCR6+) cells show the highest values in recovered controls compared to vaccinated (p = 0.0318) and (p = 0.0017), respectively. After in vitro stimulation with S1 protein peptides, no differences in the frequency of activated CD8+CD69+ T lymphocytes were observed between the vaccinated group and the COVID-19 recovered control (p = 0.0563). Compared to the control group, vaccinated children showed higher levels of CD8+ IFN-γ+ cells (p=0.0096). In conclusion, vaccination with the heterologous SOBERANA®02/SOBERANA®Plus regimen activates CD8+ T lymphocytes with polarization to Tc1 cells.

Determinants of COVID-19 pediatric vaccine hesitancy and uptake among parents from Pakistan

ABSTRACT Parental hesitancy to vaccinate their children may be an obstacle to achieving herd immunity against COVID-19. The current study was aimed to assess the prevalence of parental vaccine hesitancy, vaccine uptake, and factors associated with these behaviors. A web-based descriptive study design was used in this study. A self-administered questionnaire was used to collect data conveniently from Pakistani parents with children younger than 18 years. The participants self-reported the vaccination status among their children along with their socio-demographic details and attitudes towards COVID-19 vaccination in children. The association between different variables was assessed using the Chi-square test, while logistic regression analysis was performed to assess the predictors of vaccine hesitancy and uptake. Among the 386 study participants, 30 % were hesitant to be vaccinated, while 70 % got their children vaccinated against COVID-19. The younger parents, having one child (<12 years), were more hesitant to vaccinate them. Vaccine uptake was most commonly reported among participants who agreed with the safety and effectiveness of the COVID-19 vaccine in children. Health authorities should start educational campaigns to convince hesitant Pakistani parents about the benefits and safety of pediatric vaccination in order to promote the vaccination of children against COVID-19.

RESUMEN La reticencia de los padres a la hora de vacunar a sus hijos puede ser un obstáculo para lograr la inmunidad contra la COVID-19. El objetivo del presente estudio fue evaluar la prevalencia de la vacilación de los padres frente a la vacunación, la aceptación de la vacuna y los factores asociados a estos comportamientos. En este estudio se utilizó un diseño de estudio descriptivo basado en la web. Se utilizó un cuestionario autoadministrado para recopilar convenientemente datos de padres pakistaníes con hijos menores de 18 años. Los participantes informaron del estado de vacunación de sus hijos, junto con sus datos sociodemográficos y sus actitudes hacia la vacunación infantil contra la COVID-19. La asociación entre las distintas variables se evaluó mediante la prueba de Chi-cuadrado, mientras que el análisis de regresión logística se realizó para evaluar los factores predictivos de la reticencia y la aceptación de la vacuna. De los 386 participantes en el estudio, el 30 % dudó vacunarse, mientras que el 70 % vacunó a sus hijos contra la COVID-19. Los padres más jóvenes, con un solo hijo (<12 años), se mostraron más reticentes a vacunarlos. La aceptación de la vacuna fue más frecuente entre los participantes que estaban de acuerdo con la seguridad y eficacia de la vacuna contra COVID-19 en niños. Las autoridades sanitarias deberían iniciar campañas educativas para convencer a los padres pakistaníes indecisos sobre los beneficios y la seguridad de la vacunación pediátrica con el fin de promover la vacunación de los niños contra la COVID-19.

Serum anti-measles IgG is affected by serum iron level in patients with beta thalassemia major

ABSTRACT Measles remains a significant cause of morbidity and mortality despite the availability of an effective vaccine. This study compared the impact of serum iron on the immunogenicity of the measles vaccine in healthy volunteers and beta thalassemia major patients. In this case-control study, 180 beta thalassemia major patients (cases) were compared to 180 healthy volunteers (controls). The study received ethical approval, and all participants provided informed consent. IgG antibody responses to measles were measured using the ELISA method, and the association between serum iron and serum anti-measles IgG concentrations was analyzed using linear regression. The results showed that immunity to measles was achieved in 98.3 % of controls and 93.9 % of cases volunteers, with a significant difference between the two groups (p=0.026). The mean serum IgG concentration was significantly higher in controls compared to cases (296.4 ± 60.0 and 254.9 ± 35.7 IU/mL, respectively, p<0.001). Among controls, immune individuals had a significantly higher serum IgG concentration than non-immune individuals (59.3 ± 27.5 and 21.0 ± 6.9 IU/mL, respectively, p=0.034), whereas immune patients had a significantly lower mean serum IgG concentration than non-immune patients (166.8 ± 33.1 and 247.9 ± 49.2 IU/mL, respectively, p<0.001). Linear regression analysis confirmed that serum IgG concentrations were directly related to serum iron levels in controls, but indirectly associated with serum iron levels in patients. In conclusion, our results suggest that both iron deficiency and iron overload are associated with lower serum anti-measles IgG antibody levels in controls and patients, respectively. Therefore, maintaining serum iron concentrations within the normal range is recommended for a better response to vaccination.

RESUMEN El sarampión sigue siendo una causa importante de morbilidad y mortalidad a pesar de la disponibilidad de una vacuna eficaz. Este estudio comparó el impacto del hierro sérico en la inmunogenicidad de la vacuna contra el sarampión en voluntarios sanos y pacientes con beta talasemia mayor. En este estudio de casos y controles, se comparó a 180 pacientes con beta talasemia mayor (casos) con 180 voluntarios sanos (controles). El estudio recibió la aprobación ética y todos los participantes dieron su consentimiento informado. Se midieron las respuestas de anticuerpos IgG contra sarampión mediante el método ELISA, y se analizó la asociación entre las concentraciones séricas de hierro y las concentraciones séricas de IgG contra sarampión mediante regresión lineal. Los resultados mostraron que la inmunidad al sarampión se alcanzó en el 98,3% de los controles y en el 93,9% de los casos voluntarios, con una diferencia significativa entre los dos grupos (p=0,026). La concentración sérica media de IgG fue significativamente mayor en los controles que en los casos (296,4 ± 60,0 y 254,9 ± 35,7 UI/mL, respectivamente, p<0,001). Entre los controles, los individuos inmunes tenían una concentración sérica de IgG significativamente mayor que los individuos no inmunes (59,3 ± 27,5 y 21,0 ± 6,9 UI/mL, respectivamente, p=0,034), mientras que los pacientes inmunes tenían una concentración sérica media de IgG significativamente menor que los pacientes no inmunes (166,8 ± 33,1 y 247,9 ± 49,2 UI/mL, respectivamente, p<0,001). El análisis de regresión lineal confirmó que las concentraciones séricas de IgG estaban directamente relacionadas con los niveles séricos de hierro en los controles, pero indirectamente asociadas con los niveles séricos de hierro en los pacientes. En conclusión, nuestros resultados sugieren que tanto la deficiencia como la sobrecarga de hierro se asocian a niveles más bajos de anticuerpos IgG antisarampión en suero en controles y pacientes, respectivamente. Por lo tanto, se recomienda mantener las concentraciones séricas de hierro dentro del rango normal para obtener una mejor respuesta a la vacunación.