Revista Cubana de Farmacia

XIII Conferencia Internacional de Autoridades Reguladoras Nacionales de Medicamentos

Análisis inferencial de las potencialidades de promoción de absorción de una familia de 1-O-alquil gliceroles

La interrelación entre las propiedades físico-químicas y la biodisponibilidad de una familia de 1-O-alquil gliceroles son discutidas, se han utilizado como compuestos de referencia, moléculas que presentan una analogía estructural-funcional con estos compuestos, los cuales han sido reconocidos como agentes promotores clase I, de alta capacidad. El enfoque TOPS-MODE (ModesLab) fue utilizado para estimar los momentos espectrales, con diferentes ponderaciones, como descriptores de las propiedades físico-químicas más relevantes utilizadas en los modelos predictivos de permeabilidad intestinal obtenidos, e interpretar estos en términos de contribución de grupos funcionales de los 1-O-alquil gliceroles. A partir de este análisis se establecieron interpretaciones de tipo inferencial sobre las reales potencialidades teóricas de esta familia para su evaluación perspectiva como agentes promotores de absorción clase I. Este enfoque de tamizaje in sílico asistido por computadora permitió postular que los 1-O-alquil gliceroles, en particular el 1-O-hexadecil glicerol y 1-O-octadecil glicerol, son excelentes candidatos para demostrar su elevada capacidad promotora en estudios in vivo, los que han alcanzado altos niveles porcentuales de biodisponibilidad (> 90 %). Se concluye, según análisis por discriminante, que todos los miembros de la familia presentaron potencialidades para la absorción gastrointestinal.

The interrelation among the physical-chemical properties and the bioavailability of a 1-O-alkyl glycerol family is discussed. As reference compounds we used molecules presenting a structural-functional similarity with these compounds, which have been recognized as class I high quality promoting agents. TOPS-MODE approach (ModesLab) was used to estimate spectral moments with different weighing as descriptors of the more relevant physical-chemical properties used in the achieved predictive models of intestinal permeability, and its interpretation in terms of contribution of 1-O-alkyl glycerols functional groups of. From this analysis we established inferred interpretations on the theoretical potentials of this family for its prospective evaluation as promoting agents of class I absorption. This computer-assisted in silico screening approach allowed us to call for that 1-O-alkin glycerols, particularly in the 1-O-hexadecyl glycerol, and 1-O-octadecil glycerol, are excellent candidates to demonstrate its high promotion capacity according to in vivo studies, which have gained percentage high levels of bioavailability (> 90 ). We conclude that according a discriminating analysis, all family members had potentials for gastrointestinal absorption.

La técnica de Western Blot aplicada a la vacuna antimeningocócica VA MENGOC BC^®

Se desarrolló y validó la técnica de Western Blot aplicada a la vacuna antimeningocócica VA MENGOC BC® producida en el Instituto Finlay con el objetivo de demostrar criterio de identidad. Con el empleo de esta técnica se identificaron las proteínas antigénicas del tipo P1, P3, P5, 70 y 80 K presentes en la vesícula de membrana externa y vacuna final, por lo cual se utilizó como antisuero la gamma antimeningocócica. Los parámetros desarrollados en la validación de la técnica fueron: especificidad, límite de detección, repetibilidad, precisión intermedia, reproducibilidad y robustez. La técnica de identidad cumplió con los parámetros señalados anteriormente, por lo que se considera validada.

ABSTRACT Western Blot technique applied to VA MENGOC BC® antimeningococcal vaccine was developed and validated and produced in "Carlos J. Finlay" Institute to demonstrate the identity criterion. Using this technique it was possible to identify antigenic proteins type P1, P3, P5 70 and 80 K present in the vesicle of external membrane and final vaccine, thus, we used the antimeningococcal gamma. Parameters developed in validation of this technique included: specificity, detection limit, repetition, average accuracy, reproduction, and strength, identity technique fulfilled with abovementioned parameters, considering like validated

La técnica de Western Blot como criterio de identidad para la vacuna antimeningocócica Men B

Se desarrolló y validó la técnica de Western Blot aplicada a la vacuna antimeningocócica Men B producida en el Instituto Finlay con el objetivo de demostrar un criterio de identidad. En el estudio de las proteínas antigénicas de la vacuna, P1.15 y P1.4 en vesícula de membrana externa,monograneles y producto final se emplearon en la identificación anticuerpos monoclonales específicos para estas proteínas. Los parámetros desarrollados en la validación de la técnica fueron: especificidad, límite de detección, repetibilidad, precisión intermedia, reproducibilidad y robustez. El método cumplió con los parámetros señalados, por lo que se consideró validado.

Western Blot technique was developed and validated, applied to Men B meningococcal vaccine produced in "Carlos J, Finlay" Institute to demonstrate an identity criterion. In study of antigenic proteins of the vaccine, we used P1.15 y P1.4 in vesicle of external membrane, monogranels, and end product to identify the monoclonal antibodies specific of these proteins. Parameters developed in technique validation included: specificity, detection limit, repetition, average accuracy, reproduction, and strength. Method fulfilled with specified parameters, thus considering its validation.

Métodos analíticos necesarios para el desarrollo de tabletas de metformina 500 mg

El clorhidrato de metformina es un derivado de la biguanida usado en la diabetes mellitus no insulina dependiente, reduce la concentración de glucosa sanguínea sin incrementar la secreción de insulina, se considera un agente antihiperglucemiante y no un fármaco hipoglucemiante. El desarrollo tecnológico requiere de métodos analíticos confiables que permitan la cuantificación del fármaco en diferentes etapas de la investigación. El objetivo de este trabajo fue la validación del método analítico, reportado en la Farmacopea de los Estados Unidos (USP 31, 2008), por espectrofotometría ultravioleta y la adaptación del método analítico, reportado en la misma farmacopea, para el análisis de los compuestos relacionados en la determinación del principio activo en el producto terminado, por cromatografía líquida de alta resolución, validados para el control de la calidad y estudio de estabilidad de las tabletas de metformina 500 mg. A las técnicas validadas, por métodos cromatográficos y espectrofotométricos se le determinaron los parámetros de desempeño, especificidad, linealidad, exactitud y precisión. Las curvas de calibración para cada método, se realizaron en el intervalo de 60 al 140 %, donde fueron lineales con coeficientes de correlación igual a 0,9994 y 0,99903, respectivamente; la prueba estadística para el intercepto y la pendiente se consideró no significativa. Se obtuvieron recobrados de 100,01 y 99,1 %, respectivamente, en el intervalo de concentraciones estudiados y las pruebas de Cochran´(G) y Student´s (t) resultaron no significativas. Los coeficientes de variación en los estudios de la repetibilidad fueron iguales a 1,4 y 0,8 %, respectivamente, para las 6 réplicas ensayadas, mientras que en los análisis de la precisión intermedia las pruebas de Fischer y Student fueron no significativas. Los resultados permiten concluir que ambos métodos cumplen con los requisitos establecidos como aceptables para cada uno de los casos en el intervalo de concentraciones establecido.

Metformin hydrochloride is a biguanide-derivative used in non-dependent insulin diabetes mellitus reducing the blood glucose concentration without increases insulin secretion, and it is considered a anti-hyperglycemia agent and not a hypoglycemia one. Technological development requires of a reliable analytical methods allowing drug quantification in different stages of research. The aim of present paper was the analytical method validation, reported in USA Pharmacopeia (USP 31,2008) by UV-spectrophotometry and the adaptation of abovementioned method reported in the same pharmacopeia, for analysis of compound related in determination of active principle in end product, by high-performance liquid chromatography validated for quality control and study of Metformin (500-mg) tablets stability. In validated techniques by chromatographic spectrophtometric methods we determined performance parameter, specificity, linearity, accuracy, and precision. Calibration curves for each method was performed in intervals of 60to 140%, where they were linear with correlation coefficients equal to 0.9994 and 0.99903, respectively. Statistical test for interceptor and slope was considered as non-significant. We achieved recoveries of 100.01 and 99.1, respectively during interval of study concentrations, and the Cochran (G) and Student's (t) tests were not significant. Variation coefficients in studies of repetition were equal to 1.4 and 0.8, respectively for the 6 assayed replica, whereas in average precision analysis, Fischer and Student tests were not significant. Results allow concluding that both methods fulfill the established requirements as acceptable for each of cases during the concentration interval established.

Determinación de diclofenaco de sodio por cromatografía líquida de alta resolución en un colirio al 0,1 %

El diclofenaco de sodio es un medicamento que se indica para los tratamientos posoperatorios de la inflamación del segmento anterior del ojo, la inhibición de la miosis pre y posoperatoria de cataratas, el tratamiento sintomático de las conjuntivitis crónicas no infecciosas y de la inflamación ocular, del dolor ocular y fotofobia poscirugía refractiva. En este trabajo se desarrolló y validó un método analítico por cromatografía líquida de alta resolución, para el control de la calidad y los estudios de estabilidad del diclofenaco de sodio 0,1 %, colirio. El método se basó en la separación del principio activo a través una columna cromatográfica Lichrospher 100 RP-8 endcapped (5 µm) (250 x 4 mm), con detección UV a 254 nm, para lo cual se empleó una fase móvil compuesta por solución de hidrógeno fosfato de sodio a pH 2,5:metanol, en proporción 34:60. La curva de calibración se realizó en el intervalo de 60 al 140 %, donde fue lineal con un coeficiente de correlación igual a 0,9995; la prueba estadística para el intercepto y la pendiente se consideró no significativa. Se obtuvo un recobrado del 100,25 % en el intervalo de concentraciones estudiados y las pruebas de Cochran´(G) y Student´s (t) resultaron no significativas. El coeficiente de variación en el estudio de la repetibilidad fue igual a 0,39 % para las 6 réplicas ensayadas, mientras que en los análisis de la precisión intermedia las pruebas de Fischer y Student fueron no significativas. El método analítico resultó lineal, preciso, específico y exacto en el intervalo de concentraciones estudiadas.

Diclofenac sodium is a drug prescribed in eye anterior segment inflammation postoperative treatments, preoperative and postoperative cataract miosis inhibition, symptomatic treatment of non-infectious chronic conjunctivitis, of ocular inflammation, of ocular pain, and of refractory postsurgical photophobia. In present paper we developed and validated an analytical method by high-performance liquid chromatography to quality control, and stability studies of Diclofenac sodium of 1 % eyedrops. Method was based on active principle separation through endcapped 1 00RP-8 Lichrospher chromatographic column (5 µ) (250 x 4 mm) using UV detection to 254 nm, thus using a mobile phase including sodium a solution of hydrogen phosphate to a 2.5 pH: methanol in a 34:60 ratio. Calibration curve was plotted during the interval of 60 to 140 % where it was linear with a correlation coefficient equal to 0.9995; statistic test for interception and slope was considered as non-significant. We achieved a recovery rate of 100.25 % during study concentration interval, and Cochran (G) and Student (t) tests were not significant. Variation coefficient in repeating study was equal to 0.39 % for the 6 assayed replica, whereas in average precision analysis Fischer and Student tests were non-significant. Analytical method was linear, precise, specific and exact during the interval of study concentrations.

Validación del método por cromatografía líquida de alta resolución para ácido ascórbico en tabletas de producción nacional

Se realizó la validación de un método analítico por cromatografía líquida de alta resolución, para la determinación de ácido ascórbico en tabletas de vitamina C, el cual se diseñó como método alternativo para el control de calidad y para el seguimiento de la estabilidad química del principio activo, pues las técnicas oficiales para el control de calidad del ácido ascórbico en las tabletas, no son selectivas frente a los productos de degradación. El método se modificó con respecto al reportado en la USP 28, 2005 para el análisis del inyectable. Se empleó una columna RP-18 de 250 x 4,6 mm 5 mm con detector UV a 245 nm. Su validación fue necesaria para ambos propósitos, teniendo en cuenta los parámetros exigidos para los métodos de las categorías I y II. El método fue suficientemente lineal, exacto y preciso en el rango de 100-300 mg/mL. Además fue selectivo frente a los restantes componentes de la matriz y a los posibles productos de degradación obtenidos en condiciones de estrés. Se calcularon los límites de detección y cuantificación. Una vez validado el método se aplicó a la cuantificación de ácido ascórbico en 2 lotes de tabletas envejecidas, y se detectó una marcada influencia del envase en la degradación del principio activo transcurridos 12 meses a temperatura ambiente.

We validate an analytical method by high-performance liquid chromatography to determine ascorbic acid proportion in vitamin C tablets, which was designed as an alternative method to quality control and to follow-up of active principle chemical stability, since official techniques to quality control of ascorbic acid in tablets are not selective with degradation products. Method was modified according to that reported in USP 28, 2005 for analysis of injectable product. We used a RP-18 column of 250 x 4.6 mm 5 mm with a UV detector to 245 nm. Its validation was necessary for both objectives, considering parameters required for methods of I and II categories. This method was enough linear, exact, and precise in the rank of 100-300 mg/mL. Also, it was selective with remaining components of matrix and with the possible degradation products achieved in stressing conditions. Detection and quantification limits were estimated. When method was validated it was applied to ascorbic acid quantification in two batches of expired tablets and we detected a marked influence of container in active degradation principle after 12 months at room temperature.

Estabilidad de diagnosticador para infecciones vaginales

FemPure es un diagnosticador de infecciones vaginales compuesto por componentes biológicos multidosis. Se estudió su estabilidad en condiciones reales de conservación durante el uso hasta agotar el contenido del frasco y a largo plazo por 24 meses. Durante la estabilidad en uso los indicadores de la calidad mantuvieron los valores en los límites de aceptación establecidos. A largo plazo los látex-anti T.vaginalis y anti C. albicans conservaron las propiedades físicas, la detectabilidad y valores de sensibilidad y especificidad mayores del 90 %. El látex-anti G. vaginalis a los 18 meses no detectó G. vaginalis a la concentración establecida como límite de detección, lo que coincidió con la disminución de la sensibilidad hasta 71 %. Se conservó por primera vez una mezcla estable de suspensiones celulares compuesta por bacteria, levadura y parásito como control positivo. El control positivo a los 24 meses disminuyó su funcionamiento por daño celular del parásito T. vaginalis. Se estableció 12 meses como tiempo de validez del producto.

RemPure is a diagnosis tool for vaginal infections composed of multidose biological compounds. Its stability level under real conditions of preservation during from its use to selling-out of content and long-term at 24 hours was studied. During use of stability, quality indicators remain values within established acceptation limits. T.vaginalis and anti-C.albincans maintained physical properties, detection parameters, and sensitivity and specificity values over 90 %. The use of latex-anti G vaginalis at 18 months fails in the detection of this parasite at established concentration to detection limit, coinciding with decrease in sensitivity up to 71 %. We preserved an stable mix of cellular suspensions composed of bacterium, yeast, and parasite as a positive control. This control at 24 months decreases its functioning by cellular damage caused by T.vaginalis parasite.

**Effect of D-004, a lipid extract from royal palm (Roystonea regia) fruits, on phenylephrine-induced contractions of isolated rat prostate**

D-004, a lipid extract of Roystonea regia fruits, inhibits norepinephrine-elicited contraction in rat vas deferens. Nevertheless, the effect of D-004 on a1-adrenergic contractile responses in isolated prostate preparations had not been studied. Therefore, this study investigated the effects of D-004 on phenylephrine-induced contractions in isolated rat prostate strips. D-004 (125-500 mg/mL) was added to prostate preparations in which contractions were induced with phenylephrine (10-6-10-4 M) or with ClK (50 mM). D-004 (250-500 mg/mL) significantly (p < 0,01).and dose-dependently inhibited the phenylephrine-induced contractions through a non-competitive mechanism, since it reduced (12-60 %) the maximal contraction to phenyle phrine with respect to control preparations. D-004 at 500 mg/mL inhibited similarly both ClK and phenylephrine-contractile responses. Tamsulosin (0.01 mg/mL) abolished (100 % inhibition) the phenylephrine, but unaffected the ClK-induced contractions.

D-004, un extracto lipídico de las frutas de Roystonea regia, inhibe la contracción provocada por la norepinefrina en el vas deferens de las ratas. No obstante, el efecto de D-004 sobre las respuestas contráctiles adrenérgicas a1 en las preparaciones aisladas de la próstata no ha sido estudiado. Por lo tanto, este estudio investigó los efectos de D-004 sobre las contracciones provocadas por la fenilefrina en las extracciones aisladas de la próstata de la rata. D-004 (125-500 mg/mL) fue adicionado a las preparaciones a partir de la próstata en la que las contracciones fueron provocadas por la fenilefrina (10-6-10-4 M) o por CIK (50 mM). D-004 (250-500 mg/mL) en forma significativa y la dosis en forma dependiente inhibieron las contracciones provocadas por la fenilefrina mediante un mecanismo no competetitivo, reduciendo así (12-60 %) la contracción máxima por la fenilefrina con respecto a las preparaciones controles. D-004 a 500 µg/mL inhibieron de la misma forma tanto CIK como las respuestas contráctiles-fenilefrina. Tamsulosin (0,01 mg/mL) eliminó la acción de la fenilefrina (100 % de inhibición), pero no afectó las contracciones provocadas por CIK.

Longitud del ciclo estral en ratas Sprague Dawley tratadas in útero con extracto de Roystonea regia

El D-004 consiste en una mezcla de ácidos grasos que inhibe significativamente la hiperplasia prostática inducida por testosterona en roedores. El objetivo del presente estudio fue evidenciar los posibles efectos adversos sobre el ciclo estral de hembras F1 expuestas in útero al D-004. Se utilizaron ratas Sprague Dawley, distribuidas aleatoriamente en 4 grupos: un control y 3 tratados con D-004 a las dosis de 500, 750 y 1 000 mg/kg; las hembras recibieron la administración de la dosis por vía oral desde 15 días antes del apareo y hasta el fin de la lactancia. A una hembra por camada de la generación F1 se le estudió la citología vaginal y se calculó la longitud aproximada del ciclo, la cual no se vio afectada ya que no existieron diferencias significativas (p= 0,1537) entre los grupos tratados y el control. Estos resultados indican que el D-004 no reveló alteraciones del ciclo estral de las crías hembras expuestas in útero.

D-004 is a mix of fatty acids inhibiting significantly Testosterone- induced prostatic hyperplasia in rodents. The aim of present paper was to demonstrate the potential side effects on estrus cycle of F1 female rats exposed in uterus to D-004. We used Sprague Dawley rats, distributed randomly in 4 groups: a control one and another three treated with D-004 at a dosage of 500, 750 and 1 000 mg/kg; in the female rats we administered the dose by mouth from the 15 days before mating, and up to breast feeding termination. In each female rat by litter of F1 generation, the vaginal cytology was studied, and we estimated the approximate length of cycle, remained un-affected since there were not significant differences (p= 0,1537) among treatment groups and the control one. These results show that D-004 fails to reveals alterations in the estrum cycle of female litters exposed in uterus.

El estrés oxidativo y su impacto en las cataratas

Las cataratas, una acumulación opaca de proteínas dañadas en el cristalino del ojo, representan la causa principal de disminución visual en aquellas personas de más de 65 años de edad. De hecho, la mayoría de las personas en ese grupo de edad por lo menos presentan el inicio de formación de estas. En dicha afección se han identificado varios factores que predisponen su aparición. Se considera la enfermedad como un proceso multifactorial en cuanto a su agente causal. En los últimos años se ha sugerido que los radicales libres y el estrés oxidativo forman parte de este proceso, hecho que se corrobora en muchas ocasiones, pues se ha demostrado que la utilización preventiva de antioxidantes exógenos o la estimulación de los sistemas antioxidantes endógenos retardan la aparición de los principales signos y síntomas de la enfermedad.

Cataracts, an opaque accumulation of damaged proteins in eye lens, are the major cause of visual decrease in those persons aged over 65. In fact, most of persons included in that age group at least have the onset of cataracts. In such affection are identified some factors predisposing its appearance. This disease is considered like a multifactorial process, fact corroborated in many opportunities, since it has demonstrated that the preventive use of exogenous antioxidant or stimulation of endogenous antioxidant systems delays appearance of main signs and symptoms of this disease.

Sobre algunos precursores de la práctica farmacéutica en Cuba

Se presentan las semblanzas de algunos de los primeros profesionales que ejercieron la ciencia farmacéutica en Cuba. Los datos que sirvieron de fuente para preparar esta obra de referencia se extrajeron en principio de varios documentos inéditos del período colonial y de otras publicaciones que vieron la luz con posterioridad. Dicha información se procesó de modo conveniente para sacar de las sombras los nombres de estos hombres que no deben ser desconocidos por las generaciones actuales y futuras de los que se consagran a esta profesión. El presente trabajo, que aspira a cumplir ese propósito, trata asimismo de constituirse en modesto tributo a su memoria.

In present paper are showed the features of some of the first professional precursors of Pharmacy Science in Cuba. Previously, data as source to prepare this reference work were searched from some unpublished documents from colonial period and from other subsequent publications. Such information was processed in a suitable way to extract from the anonymity the name of these men that must no be unknown by present and future generations of that devoted to this profession. Present paper wants to fulfill this objective and to be a modest tribute to their memory.

Los prácticos de Farmacia en Cuba hasta 1912

La Universidad de La Habana dio forma académica a los estudios de Farmacia en 1842. El 15 de julio de 1863 se estableció por Real Decreto un nuevo plan de estudios en esa institución, que incluyó enseñanzas agregadas de practicantes o flebotomianos, dentistas y comadronas. Desde entonces quedó allí oficializada la formación de los prácticos de Farmacia. En la primera mitad del siglo XX la farmacia cubana dejó de ser un centro de salud para convertirse en un centro comercial y la profesión farmacéutica pasó a ser exclusividad de la élite de la sociedad que podía costear los estudios universitarios. De otro lado, se produjo la formación de los prácticos de Farmacia, los cuales mediante el estudio independiente de contenidos teórico-prácticos, previo abono de la matrícula correspondiente podían rendir los exámenes pertinentes. Lógicamente el acceso a estos tipos de estudios predominó en jóvenes provenientes de la clase media. Es importante destacar el mérito que tuvieron estos técnicos medios de la profesión conocidos como prácticos de Farmacia. A pesar de que en la actividad farmacéutica en esa época predominaba el criterio comercial, este personal se convirtió en "médico de los pobres" por su contribución al alivio de las dolencias menores de salud de los más desposeídos. Durante los primeros años del siglo XX, las autoridades estadounidenses interventoras en la isla, intentaron en 1908 oficializar académicamente el ejercicio profesional de los prácticos de Farmacia, acción a la que se opusieron graduados farmacéuticos y representantes de la Universidad. Ello favoreció la elaboración de una nueva Ley de Farmacia, que fue publicada por primera vez en la Gaceta Oficial el 29 de febrero de 1912.

In 1842, University of Havana formed the academy of Pharmacy studies. By royal decree, in July 15, 1863 was established a new syllabus in that institution, including aggregate teachings of practitioners or phlebotomy specialists, dentists and midwives. From then was made official the training or Pharmacy practitioner. In the first half of XX century, Cuban pharmacy becames exclusive of the society elite that could to pay the university studies. Besides, training of Pharmacy practitioner was done, which by means independent study of theoretical-practical contents, previous payment of the corresponding registration, could make the pertinent examinations. Logically, access to these types of studies had predominance in young people from middle class. It is important to emphasize the merit of these middle technicians of the profession known as Pharmacy practitioners. Despite that in pharmaceutical activity in that period, there was a predominance of commercial criterion, this staff became in the "physician of poor people" by its contribution in relief of slight health pain of the more dispossessed. During the first years of XX century, the intervening American authorities in Cuba, in 1908 they tried to make academically official the professional exercise of the Pharmacy practitioners, action with the opposition of pharmaceutical graduates and University representative. It favored the drawing up of a new Pharmacy Act, first published in the Official Gazette in February 29, 1912.

La toma de decisiones digital: los modelos computadorizados y la prescripción de antibióticos en el siglo XXI