Revista de Salud Animal

Pasteurella multocida, Bordetella bronchiseptica y Streptococcus suis EN EL COMPLEJO RESPIRATORIO PORCINO

El complejo respiratorio porcino (CRP) es un proceso dinámico que involucra una variedad de factores e incluye las condiciones ambientales, el hospedero y las diferentes interacciones microbianas que se establecen entre los microorganismos primarios como Mycoplasma hyoneumoniae o el virus del síndrome respiratorio-reproductivo porcino y bacterias secundarias como Pasteurella multocida, Bordetella bronchiseptica o Streptococcus suis. La mayoría de estas entidades corresponden a géneros y especies que pueden formar parte de la microbiota normal del tracto respiratorio, pero la capacidad patógena de las cepas reside fundamentalmente en la presencia y expresión de genes asociados a la virulencia, que en muchos casos se adquieren por transferencia horizontal, por lo que existen diferentes genotipos y es necesario el monitoreo mediante pruebas sensibles. El propósito de esta revisión es ampliar el conocimiento sobre los atributos de virulencia de las bacterias que actúan como agentes secundarios en el CRP. Al considerar la complejidad del mismo el mejor método de control radica en la prevención, en este sentido los programas vacunales priorizan a los agentes primarios, pero es necesario disponer de ensayos de monitoreo que permitan vigilar la presencia y potencialidades patógenas de las bacterias que incrementan la severidad de los procesos respiratorios actuando como agentes secundarios.

The porcine respiratory complex is the denomination for multiple changes and lesions that result in a decreased respiratory capacity of affected pigs. It is a dynamic process which involves different factors such as environment, host and different microbial interactions between primary agents like Mycoplasma hypneumoniae or the porcine reproductive respiratory syndrome virus with Pasteurella multocida, Bordetella bronchiseptica or Streptococcus suis which act as secondary pathogens and increase the severity of the disease. These entities correspond to genera and species being part of the normal flora and the pathogenic capacity lies on different genes which are acquired by horizontal transfer, thus there are different genotypes associated or not to the pathogen. The aim of this article is to make an analysis about bacteria virulence attributes which act as secondary pathogens in the respiratory disease in pigs. It is important to consider the management and control of the farm based on biosecurity and it is necessary to have different diagnostic methods for testing bacteria virulence attributes that act as secondary agents, because nowadays vaccination program are directed to primary agents.

DETECCIÓN DE PESTIVIRUS POR REVERSO TRANSCRIPCIÓN ACOPLADA A REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA DE LA REGIÓN 5' cDNA NO TRADUCIDA

Pestivirus genus of the family Flaviviridae includes different viral species that cause significant losses to the livestock industry worldwide affecting cattle, sheep, goats and pigs. A rapid, sensitive, and specific detection of these agents is therefore essential for diagnosis and control of the viral infections. An RT-PCR assay was developed and standardized for the specific panpestivirus detection in serum based on a generic pair of primers that amplifies a 119 pb DNA fragment from a highly conserved region in the 5´-UTR RNA genome. The RT-PCR assay showed to be a specific, rapid, sensitive and highly repeatable purpose.

El género Pestivirus de la familia Flaviviridae incluye diferentes especies virales que causan pérdidas importantes a la industria ganadera en todo el mundo afectando bovino, ovino/caprinos y cerdos. La detección rápida, sensible y específica de estos agentes es por lo tanto esencial para el diagnóstico y control de estas infecciones virales. Se desarrolló y estandarizó un ensayo de RT-PCR para la detección específica de pestivirus en suero basado en una pareja de cebadores que amplifica un fragmento de 119 pb de una región altamente conservada en el extremo 5´UTR del genoma ARN del virus. Este ensayo mostró ser propósito específico, sensible y altamente repetible.

**OPTIMIZACIÓN DE LAS FUNCIONES DE PUNTUACIÓN DE DOCKING PARA EL DISEÑO DE FÁRMACOS ANTIVIRALES CONTRA EL GÉNERO CORONAVIRUS**

The development of a wide-spectrum antiviral drug against pathogenic coronavirus is nowadays a attractive prospect and may provide an effective first line of defense against emerging CoV-related diseases. The most attractive target for the design of anticoronaviral inhibitors is the main protease or 3CL PRO. Ligand docking and screening algorithms are now frequently used in the drug-design process. The aim of this work based on a validation study of scoring functions is to find a consensus function or to select the scoring function that better predicts the orientation of the ligand in the pocket binding site, in order to perform a virtual screening in ligand databases, with a lower computational cost in the intent of finding a leader compound for antiviral drug against coronaviruses. For this purpose, the scoring functions were implemented within the Dock4.0 program suite and the 2ALV main protease three dimensional structures will be used. The protein structure was selected because it was crystallized with a non-peptidic ligand. The main protease coronavirus pocket including the catalytic dyad Cys145 His41 was obtained. The closer RSMD media values to 4.0 Aº were obtained using the contact score function from the rigid ligand dock method. This score function was selected as the best ranking tool for the search based on virtual screening of the potential candidate inhibitors of the important pathogen group belonging to the genus coronavirus.

El desarrollo de fármacos antivirales de amplio espectro que se puedan utilizar contra diferentes patógenos emergentes del género coronavirus como primera línea de defensa es hoy una perspectiva atractiva. La proteasa principal de los coronavirus 3CL PRO es la diana de mayor atractivo para el diseño de inhibidores anticoronavirus. Los algoritmos de screening y docking son actualmente muy utilizados en los procesos de diseño racional de fármacos. El objetivo de este trabajo es, basados en un estudio de validación de las funciones de score, encontrar una función consenso o seleccionar la función de score que mejor prediga la orientación del ligando en el bolsillo catalítico de la 3CLpro, con el fin de mejorar las búsqueda por screening virtual en las bases de datos de ligandos, compuestos que puedan servir de líderes como candidatos a usarse como fármacos inhibidores anticoronavirus, con un menor costo computacional. Con este propósito se utilizaron las funciones de score implentadas en el paquete de programas del DOCK4.0 y la estructura cristalizada de la 3CLpro 2ALV, esta última se seleccionó por estar cristalizada con un ligando de naturaleza no peptídica. Se diseñó el bolsillo catalítico de la proteasa principal de coronavirus que incluyó los residuos que conforman la díada catalítica Cys145 His41. La función con la cual se obtuvieron los mejores valores de RSMD más cercanos a 4.0Aº, fue la función de contacto, siguiendo un algoritmo de orientación de ligando rígido, esta función se seleccionó como la mejor herramienta en la puntuación de búsquedas basadas en screening virtual de candidatos potenciales como inhibidores del importante grupo de patógenos del género coronavirus.

CLONAJE BIOLÓGICO DE UN AISLADO DE CORONAVIRUS BOVINO

Con el objetivo de obtener un aislado de Coronavirus bovino clonado biológicamente se adaptó el aislado VB73/04 a la multiplicación en la línea celular MDBK. Este aislado indujo la formación de placas, las cuales resultaron homogéneas después del clonaje biológico. La población viral obtenida fue identificada como Coronavirus bovino por RT-PCR y Seroneutralización.

In order to obtain a biologically cloned bovine coronavirus isolate, the isolate VB73/04 was adapted to multiplication in MDBK cell line. This isolate induced the formation of plaques, which were homogeneous after biological cloning. The viral population obtained was tested for bovine coronavirus by RT-PCR assay and seroneutralization.

REPRODUCCIÓN EXPERIMENTAL DE LA GASTROENTERITIS TRANSMISIBLE DEL CERDO

Se logró la reproducción experimental de la gastroenteritis transmisible del cerdo, luego de la inoculación por vía oral de un una cepa del virus aislado en Cuba. La aparición de las diarreas se produjo a partir de las 24 horas post-inoculación. En todos los cerdos inoculados se observaron en la necropsia, lesiones anatomo e histopatológicas compatibles con el cuadro descrito para esta enfermedad. A partir de la instauración de la diarrea hubo eliminación viral sin hallarse asociación de otro microorganismo patógeno; lo que demostró la enteropatogenicidad del aislado.

The experimental reproduction of transmissible gastroenteritis was achieved in newborn piglets, after inoculation by oral route of a strain of this virus isolated in Cuba. In both cases, diarrheas appeared at 24 hours post-inoculation. In all inoculated piglest, anatomo and histopathological lesions which corresponded to the disease were observed in necropsy. Transmissible gastroenteritis virus was excreted after the establishment of diarrhea and not any other pathogenic microorganism involved was found. This sustained the enteropathogenicity of the isolate.

APLICACIÓN DE LA HEMOAGLUTINACIÓN EN HECES PARA EL DIAGNÓSTICO DE BROTES DE DISENTERÍA INVERNAL BOVINA

La disentería de invierno es una enfermedad infecciosa del bovino, altamente contagiosa, de curso agudo producida por coronavirus bovino (BCoV), que se caracteriza por la producción de diarreas epizoóticas y la dramática disminución de la producción de leche de las vacas en ordeño. Después de diagnosticada por primera vez, en el país existía la necesidad de desarrollar una técnica sencilla, de bajo costo, y con la que se pudiera analizar un gran número de muestras. Se obtuvo un antisuero específico y se estandarizó el ensayo basado en la aglutinación de eritrocitos de hámster para detectar la presencia del virus en heces fecales de bovinos enfermos y su identificación mediante la inhibición de la hemaglutinación empleando el antisuero obtenido. La prueba resultó específica y capaz detectar 5.4 DICT50/mL del virus en heces fecales. La especificidad diagnóstica fue de un 96.15%, mientras que la sensibilidad resultó ser de 79.13%. Durante el diagnóstico activo realizado dentro del programa de control de la enfermedad, la técnica fue aplicada a 480 muestras procedentes de 38 unidades bajo sospecha y permitió la confirmación del diagnóstico clínico epizootiológico de foco de WD en 36 unidades.

Winter dysentery is a highly contagious acute infectious disease in bovine, which is produced by bovine coronavirus (BCoV). It is characterized by the production of epizootic diarrheas and the dramatic diminution of milk production in milking cows. After being diagnosed for the first time in the country, it was needed to develop a simple and cheap technique for analysing a great number of samples. A specific antiserum was obtained, and the test based on the erythrocyte of hamster agglutination was standardized in order to detect the presence of the virus in faeces of diseased bovines and their further identification by means of the inhibition of hemagglutination using the antiserum obtained. The test was specific and it was able to detect 5,4 TCID50/mL of virus on fecal extracts. The diagnosis specificity was of 96,15%, whereas sensitivity 79,13%. During the active diagnosis conducted in the control program of the disease, the technique was applied to 480 samples coming from 38 farms under suspicion and it allowed the confirmation of the clinic-epizootiologic diagnosis of the diseased herd in 36 farms.

EVALUACIÓN DE CUATRO ANTIPARASITARIOS FRENTE A ESTRONGÍLIDOS GASTROINTESTINALES DE OVINOS

Con el objetivo de evaluar la eficacia del Levamisol 10%®, LABIOMEC®, Cydectin® y Virbamax® contra estrongílidos gastrointestinales se diseñó una investigación para lo cual se utilizaron 45 ovinos Pelibuey con un considerable nivel de infestación parasitaria que se distribuyeron de forma aleatoria para formar cinco grupos que incluyó además de los fármacos, un grupo control sin tratamiento antiparasitario. Los animales se pesaron de forma individual y se dosificaron según las dosis recomendadas para cada producto. Se realizó un muestreo el día del tratamiento para determinar los niveles de infestación parasitaria con la técnica de McMaster modificada y se realizaron mezcla de heces por cada grupo para determinar los géneros presentes a través de coprocultivos. Al décimo primer día posterior al tratamiento se realizó un segundo muestreo para evaluar la reducción del conteo fecal de huevos (RCFH%). La eficacia en la reducción de la infestación parasitaria de Virbamax® y Cydetin® fue de un 100% sin embargo aparece un nivel considerable de resistencia al Levamisol 10% ®y al LABIOMEC® (87 y 61% de RCFH para cada producto, respectivamente). Se apreció resistencia de Haemonchus spp al Levamisol 10% y resistencia multiespecífica de Haemonchus spp., Trichostrongylus colubriformis y Oesophagostomum columbianum al LABIOMEC®.

In order to evaluate the efficacy of Levamisol 10%®, LABIOMEC®, Cydectin® and Virbamax® against gastrointestinal strongyles, a study was designed for which 45 Pelibuey sheep with a remarkable rate of parasite infestation were used. The animals were randomly distributed to form five groups which included, in addition to the drugs, a control group without antiparasitic treatment. The animals were weighed individually and the dosage was made according to the doses recommended for each product. A sampling was carried out the day of the treatment to determine the rates of parasite infestation with the modified McMaster technique, and feces pools were performed for each group in order to determine the genera present by means of coprocultures. In the tenth day post-treatment, a second sampling was made to evaluate the reduction of the faecal egg count (RFEC%). The determination of the efficacy was based on the recommendations of the WAAVP in which every product showing a RFEC lower than 95% or its confidence intervals lower than 90% is considered resistant. The efficacy in the reduction of parasite infestation of Virbamax® and Cydectin® was 100%, however there is a remarkable resistance rate to Levamisol 10%® and LABIOMEC® (87 and 61% RFEC for each product, respectively). In the case of Levamisol 10%, Haemonchus spp. was observed to be resistant, while LABIOMEC® showed multi-specific resistance (Haemonchus spp., Trichostrongylus colubriformis and Oesophagostomum columbianum).

FERTILIDAD EN YEGUAS CUARTO DE MILLA TRATADAS CON GONADOTROPINA CORIONICA HUMANA (hCG) UTILIZANDO SEMEN CONGELADO

Se evaluó el efecto de la Gonadotropina Coriónica humana (hCG) sobre el porcentaje de concepción en yeguas, utilizando semen congelado en la inseminación artificial, para esto se seleccionaron 20 yeguas ciclando de manera natural, de la raza Cuarto de Milla en edad reproductiva (6 a 12 años de edad), en un criadero ubicado en México Distrito Federal. Se conformaron 2 grupos: Grupo 1 tratadas con 2,000 UI de hCG cuando presentaron folículo de Graff igual o mayor a 35 mm inseminadas 30 horas después de la aplicación del tratamiento y el Grupo 2 control, la inseminación se realizó a 30 horas después de que las yeguas presentaron un folículo mayor o igual a 35 mm mediante la observación por ultrasonido. Para la inseminación artificial se utilizó semen congelado con una concentración total de 1,000 millones de espermatozoides. El diagnóstico de gestación se realizó mediante la observación de la vesícula embrionaria en el día 16 después de la inseminación artificial, con un ultrasonido transrectal de 5 MHz. Los resultados muestran que las yeguas tratadas con hCG, tienen un porcentaje de fertilidad de 80% (8/10), mientras que el grupo 2 (grupo control), presentó una fertilidad de 20% (2/10). Se concluye que la hCG ayudó a mejorar el porcentaje de preñez en las yeguas tratadas.

The human Chorionic Gonadotropin (hCG) by its effect similar to the one of LH, was used to improve the percentage of conception in mares, using frozen semen in the artificial insemination. For this, 20 mares cycling of natural way, belonging to the breed Cuato de Milla (Quarter Horse), in their reproductive age (6 to 12 years of age), were selected in a farm located in Mexico D.F. The animals were divided into 2 groups: Group 1; mares treated with 2000 UI hCG when presented Graff follicle equal or higher than 35 mm and inseminated 30 hours after the application of this hormone. Group 2; considered the control group in which insemination was made 30 hours after the mares presented follicle equal o higher than 35 mm by means of the ultrasound observation. For the artificial insemination, frozen semen in straw of 5 mL containing a total concentration of 1000 million spermatozoa was used. The gestation diagnosis was made by means of the observation of the embryonic vesicle in day 16 after the artificial insemination, with a transrectal ultrasound of 5 MHz. The results show that group 1 (mares treatment with hCG) have an 80% fertility percentage (8/10), whereas group 2 (control group), presented a 20% fertility (2/10). It is concluded that hCG helped to improve the pregnancy percentage in treated mares.

Oestrus ovis (DIPTERA: OESTRIDAE) EN OVINOS EN CUBA

Se describe, de manera preliminar, la sintomatología clínica de oestrosis en ovinos de la región oriental de Cuba. Se muestra la presencia de larvas de diferentes estadios, en senos nasales de los animales infestados.

The symptoms of oestrosis in sheep are preliminary described in the eastern part of Cuba. The presence of larvae at different stages is shown in nasal sinuses of the infected animals.

**PRESENCIA DE Cooperia curticei (Railliet, 1893) EN OVINOS EN LA PROVINCIA DE MATANZAS**

Con el objetivo de constatar la presencia de C. curticei en ovinos, se sacrificaron 24 ovinos Pelibuey de donde se recuperaron los vermes adultos de diferentes fragmentos del sistema digestivo. Los ejemplares del género Cooperia, se aclararon en solución de lactofenol y las especies se identificaron mediante la clave morfológica descrita por Soulsby, En los parásitos machos destacaron espículas simétricas con un tamaño promedio de 144,25 µm y la porción distal de las mismos, ligeramente dobladas. En tanto las hembras presentaron una cola fina terminada en punta; la intensidad de invasión promedio fue de 8 vermes por animal.

In order to verify the presence of C. curticei in Pelibuey sheep, 24 animals were slaughtered and adult worms were recovered from different parts of the digestive system. Cooperia spp. specimens were clarified in lactophenol solution and identified by the morphological key described by Soulsby. The male parasites showed symmetrical stressed spicules with an average size of 144.25 ìm and the distal portion slightly bent. In the females a failed tail was found. The intensity of invasion was 8 worms per animal.

DISENTERÍA DE INVIERNO: DIAGNÓSTICO Y CARACTERIZACIÓN DE UNA CEPA AUTÓCTONA

COMPORTAMIENTO epidemiolÓgico DE LA COLIBACILOSIS ENTÉRICA PORCINA EN LA PROVINCIA DE VILLA CLARA, PATOTIPOS, GENES DE VIRULENCIA Y RESISTENCIA A ANTIBIÓTICOS EN LOS AISLADOS DE Escherichia coli