Revista de Salud Animal

ORIGIN AND EVOLUTION OF ARTHROPODA

Se realiza un análisis de la bibliografía existente sobre la evolución de los artrópodos, la gran plasticidad que tiene ese grupo que le ha permitido abarcar tan disímiles hábitas hasta llegar a los actuales grupos de importancia parasitaria. Se brindan ejemplos de estudios realizados por algunos de los autores ejemplificando con las experiencias obtenidas en Cochliomya hominivorax, C. macellaria, Psoropotes cuniculi, Amblyomma cajennense y Anocentor nitens.

An analysis of existing literature on the evolution of arthropods, the great plasticity of that group it has allowed him to cover such dissimilar live up to the current major parasitic groups. Examples of some author studies in relation to Cochliomya hominivorax, C. macellaria, Psoropotes cuniculi, Amblyomma cajennense and Anocentor nitens are provided.

EQUINE ORAL DISORDERS

La enfermedad dental es el principal desorden bucal de los caballos y de gran importancia en la práctica veterinaria equina. La enfermedad bucal equina más común es el desarrollo de sobrecrecimientos dentales agudos causando laceraciones de las mejillas y la lengua durante la masticación, evitando el normal funcionamiento lateral de la mandíbula. Comparado con los molares, los desórdenes de los incisivos son poco comunes y se pueden visualizar fácilmente, aunque sean problemas menores. El impacto de los factores genéticos y ambientales podría conducir al desarrollo anormal de los dientes y contribuir a alteraciones de la erupción. Las patologías del periodonto incluyen inflamación y distrofia neoplásica. Por lo general estas lesiones comienzan especialmente en las áreas interproximales de los dientes, siendo los espacios mandibulares caudales los más afectados. Los tumores odontogénicos más frecuentes son el ameloblastoma, el odontoma ameloblástico y el cementoma. Desafortunadamente, el examen oral realizado por la mayor parte de los veterinarios equinos consiste sólo en separar los labios, observar los incisivos y colocar un dedo en el carrillo para palpar puntas sobre los primeros dientes superiores del carrillo. Este tipo de examen detecta sólo un pequeño porcentaje de las enfermedades, poniendo en riesgo no solo la salud bucal del equino sino la vida del animal. Los tratamientos que se realizan con mayor frecuencia en odontología equina son profilaxis, procedimientos de limado y restauraciones de los dientes. Otras alternativas terapéuticas se realizan con menor asiduidad debido a la complejidad y costo de los procedimientos. Para lograr adecuada prevención es necesario una evaluación detallada, exámenes periódicos de la cavidad oral, en equinos que realicen entrenamiento de actividad hípica, salto, rodeo, polo, enduro y adiestramiento, se recomienda al menos dos tratamientos al año.

Dental disease is the major mouth disorder of horses and it is of great importance for the equine veterinary practice. The most common equine mouth disease is the development of acute dental overgrowth causing lacerations of the cheeks and tongue during mastication, avoiding the normal lateral functioning of the jaw. Compared with the molars, the disorders of the incisors are rare and can be easily visualized , even if they are minor problems. The impact of genetic and environmental factors could lead to abnormal development of the teeth and contribute to the deterioration of the eruption. Periodontal pathologies include inflammation dystrophy and malignant abnormalities. Usually these injuries are beginning particularly in the interproximal area of teeth and jaw spaces flows are the most affected. The most frequent odontogenic tumors are ameloblastoma, ameloblastic odontoma and cementoma. Unfortunately, the oral examination conducted by most equine veterinarians only consist in separating the lips, to note the incisors and place a finger on the cheek to feel tips upon the first upper cheek teeth. This type of examination detects only a small percentage of diseases, threatening not only the oral health of horses but the animal life. The treatments most commonly performed in equine dentistry are prophylaxis, procedures filing and restorations of the teeth. Other therapeutic alternatives are made less frequently because of the complexity and cost of the procedures. To achieve adequate prevention , a detailed evaluation is needed , periodical examination of the oral cavity on equine on training , for hipic activity , jumping, rodeo, pole, endure and training, it is also recommended at least two treatment per year.

A POLYCLONAL -ANTIBODY-IMMUNOPEROXIDASE-CONJUGATE FOR THE SPECIFIC DETECTION OF PORCINE CIRCOVIRUS TYPE 2

Porcine circovirus 2 is nowadays accepted as the essential infectious agent of postweaning multisystemic wasting syndrome which causes severe economic losses in porcine production worldwide. The diagnosis of PMWS is a difficult task and must follow three criteria: (i) the presence of compatible clinical signs, (ii) the presence of characteristic microscopic histopathological lesions, and (iii) the presence of PCV2 within these lesions in moderate or high. The presence of PCV2 in lymphoid tissues must be demonstrated by in situ hybridization or immunohistochemical methods. The in situ hybridization is a more complex and expense compared to other diagnostic tools, on the other hand, one problem concerning the immunohistochemical methods for PMWS diagnostic is the lack of a commercial anti-PCV2 peroxidase conjugate; therefore, the aim of this work was to obtain a polyclonal-antibody-immunoperoxidase-conjugate for the PCV2 specific detection. An anti-PCV2-peroxidase conjugated for the PCV2 specific detection was obtained based on the use of the available commercial vaccine against PCV2 as immunogenic inoculation for producing a polyclonal antibody in rabbits. The conjugate obtained was able to discriminate between PCV2 and PCV1 infections and a high sensitivity and specificity of the conjugate were observed.

El circovirus porcino 2 (PCV2) se considera actualmente como el agente infeccioso esencial del síndrome del desmedro post-destete (PMWS), el cual causa grandes pérdidas económicas en la producción porcina de todo el mundo. El diagnóstico del PMWS es difícil y debe seguir tres criterios: (i) la presencia de signos clínicos compatibles, (ii) la presencia de lesiones histopatológicas microscópicas características y (iii) la presencia de cantidades moderadas o altas del PCV2 dentro de las lesiones. La presencia de PCV2 en los tejidos linfoides se debe demostrar por hibridación in situ o métodos inmunohistoquímicos. La hibridación in situ es un método más complejo y costoso comparado con otras herramientas diagnósticas, por otra parte, un problema con relación a los métodos inmunohistoquímicos para el diagnóstico de PMWS es la carencia de un conjugado con peroxidasa comercial específico contra PCV2, por lo tanto el objetivo de este trabajo fue obtener un anticuerpo policlonal conjugado con peroxidasa par la detección específica de PCV2. Se obtuvo un conjugado con peroxidasa para la detección específica de PCV2 con el uso de una vacuna contra PCV2 disponible comercialmente como inmunogéno en conejos con el fin de obtener el anticuerpo policlonal contra PCV2. El conjugado obtenido fue capaz de discriminar la infección por PCV2 de la infección por PCV1, y mostró elevadas sensibilidad y especificidad.

HUMORAL RESPONSE TO DIFFERENT VACCINATION SCHEMES AGAINST CLASSICAL SWINE FEVER (CSF) SUCCESSIVELY APPLIED DURING AN OUTBREAK OF THE DISEASE

Vaccination against classical swine fever (CSF) is an essential measure for its control in endemic areas, and the Chinese Strain has been used with success in already disease free countries. Nevertheless the complexity of the factors interacting on the epidemiology and control of CSF, when the expected success is not reached with the vaccination of premises, doubts always fall on the vaccine used and the vaccination scheme applied In consecuences, many changes in vaccination scheme by the breeders are frecuently observed whitout positive influence in CSF control. To clarify the CSF recurrence in a herd vaccinated by a different scheme as the one recommended in the national control program, serological samples were taken to different animal groups in three moments. Sample I, to evaluate the response to the vaccination scheme decided by producers (litters on 5 and 40 days); and samples II and III, to know its behaviour after the implementation of the scheme recommended by official veterinary service (litters at weaning, at 33 days). The presence of titres =1:50 in all litters at 3 days of age (Sample I), indicated that primo-vaccination at 5 days is not correct. The absence of protective titres on 22% of the animals (9/41), belonging to the groups with clinical cases of the disease, at only 23-30 days from the second doses, confirmed that the double vaccination scheme at 5 and 40 days was not correct. Although at 33 days of age a risk of vaccinating in the presence of high titres of passive antibodies (=1:50) in 65% of the pigs was present (Sampling II), it was verified that at 37 post-vaccination days all pigs showed high neutralizing antibodies titres (Sampling III). This result, together with the clinical behaviour and humoral response of pigs on pre- fattening demonstrated that primo-vaccination at 33 days was adequate and contributed to the control of clinical manifestation of the diseases in the herd.

La vacunación contra la peste porcina clásica (PPC) es una medida esencial para su control en áreas endémicas, y la cepa china ha sido empleada con éxito en países ya libres de la enfermedad. No obstante la complejidad de los factores que interactúan en la epidemiología y el control de la PPC, cuando no se obtiene el éxito esperado con la vacunación de los rebaños, las dudas siempre recaen en el producto vacunal y su esquema de aplicación. Es así como muchos criadores hacen cambios en los esquemas de vacunación sin que se observen influencias favorables en el control de la enfermedad. Para esclarecer la recurrencia de la enfermedad en un rebaño donde se estaba aplicando un esquema de vacunación diferente al recomendado en el programa de control vigente, se realizaron muestreos serológicos a diferentes grupos de animales en tres momentos: Muestreo I, para evaluar la respuesta al esquema de vacunación orientado por los productores (crías a 5 y 40 días); y Muestreo II y III, para conocer su comportamiento tras la implementación del esquema recomendado por el servicio veterinario oficial (crías al destete, a los 33 días). La presencia de títulos =1:50 en todas las crías a los tres días de nacidas (Muestreo I), indicaron que no era correcta la primovacunación a los cinco días. También la ausencia de títulos protectores en el 22 % de los cerdos (9/41), pertenecientes a los grupos con casos clínicos de la enfermedad, a solo 23-30 días de aplicada la segunda dosis, corroboró que el esquema de vacunación doble a los 5 y 40 días era incorrecto. Aunque a los 33 días de edad se tuvo el riesgo de vacunar en presencia de altos títulos de anticuerpos pasivos (=1:50) en el 65 % de los lechones (Muestreo II), se constató que a los 37 días post-vacunación (DPV) todos los cerdos tenían títulos altos de anticuerpos neutralizantes (Muestreo III). Este resultado, junto al comportamiento clínico y respuesta humoral posterior de los cerdos en preceba, demostraron que la primovacunación a los 33 días fue adecuada y que contribuyó al control de la manifestación clínica de la enfermedad en el rebaño.

**EVALUATION OF METHODS FOR THE PRIMARY ISOLATION OF Brucella melitensis IN GOAT MILK**

Con el propósito de evaluar varios métodos para el aislamiento primario de Brucella melitensis a partir de leche procedente de rebaños caprinos infectados se seleccionaron de forma aleatoria 45 cabras bajo los siguientes criterios: 30 vacunadas previamente, con la cepa Rev-1 de Brucella melitensis; y 15 hembras nunca vacunadas. El tamaño de muestra se basó en un modelo probabilístico con población desconocida y con prevalencia conocida de 35% (n = 1 - p / p v); donde, n = tamaño de muestra, p = prevalencia y v = coeficiente de variación (0.05). Todas las cabras seleccionadas se muestrearon por tres ocasiones a intervalos de 30 días entre uno y otro muestreo. Las muestras de leche fueron tomadas en forma aséptica de cada mitad de la ubre, en tubos estériles de cierre hermético y se refrigeraron a 4°C hasta su procesamiento en el laboratorio, dentro de las siguientes 24 horas. Las muestras se centrifugaron por 20 minutos a 10,000 X g a 4°C. y para la siembra, se utilizaron los medios de cultivo de Farrell y de agar de soya tripticaseína (TSA) enriquecidos con suero fresco de bovino. De las muestras de leche centrifugadas, se sembraron por duplicado en cada medio, porciones de grasa y sedimento de acuerdo con técnicas establecidas en la NOM - 041 - ZOO - 1995. Los resultados obtenidos, se evaluaron a través del análisis de datos categóricos (c²). Una mitad de cada uno de los medios empleados, se incubó bajo presión de bióxido de carbono del 5 al 10% y la otra, en aerobiosis. Se recuperó B. melitensis biovar-1 en el 76% de 135 muestras procesadas; y la mayor cantidad de cepas de campo se aislaron a través del medio Farrell (p<0.05); de la grasa, el 57% y del sedimento, el 67%. Además, el mejor desarrollo de las bacterias (p<0.05) en este medio se observó en la incubación bajo atmósfera de aerobiosis. Se concluye que el medio de Farrell fue más eficaz que el de TSA para ese fin, tanto a partir de la grasa de la leche como del sedimento; asimismo, la incubación de las muestras en atmósfera de aerobiosis tuvo un mejor y más exitoso desarrollo de las bacterias.

In order to evaluate different methods for the primary isolation of Brucella melitensis in goat milk from infected herds, Ver., 45 female adult goats were randomly selected trough the following criteria: 30 previously vaccinated with Brucella melitensis Rev-1 strain, and 15 never vaccinated. Sample size was estimated by a probabilistic model, with unknown population and 35% known prevalence rate (n = 1 - p / pv); where n corresponds to sample size, p for prevalence rate and v variation coefficient (0.05). All goats selected were sampled three times within a 30 day interval to guarantee Brucella spp. milk shedding. Milk samples were aseptically collected into sterile glass tubes from half udder and were refrigerated at 4°C until they were laboratory processed into the next 24 hours. Milk samples were 10,000 X g centrifuged during 20 minutes, in a refrigerated centrifuge at 4ºC. Farrell and Tripticase Soy Agar (TSA) media, were the isolation culture media selected and both were enriched with bovine fresh serum during their formulation. Both isolation culture media selected were inoculated by duplicate with fat and sediment from centrifuged milk as it is established in the Mexican regulations. The results obtained were statistically evaluated by Chi square (c²). A half of both inoculated isolation culture media was incubated under 5 to 10% carbonic dioxide atmosphere and the other half in aerobic one. From 76% of 135 milk samples obtained, only Brucella melitensis biovar - 1 was isolated using both culture media; however, the majority of isolated field strains were recovered from Farrell culture medium (p<0.05); from milk fat 57% of isolated strains and from milk sediment 67%. Also, the best Brucella melitensis biovar - 1 development (p<0.05) from Farrell culture medium was observed by aerobic atmosphere incubation. It is conclusive that Farrell culture medium is more effective than TSA medium for that purpose, both from the fat and sediment of milk, likewise incubation of the samples in aerobic atmosphere was better and there was more successful development of bacteria.

**ANTIOXIDANT PROPERTIES OF Rhizophora mangle (L.) AND ITS RELATION WITH THE WOUND HEALING PROCESS IN RATS**

El extracto acuoso de Rhizophora mangle (L.) y su fracción polifenólica mayoritaria fueron evaluados en un modelo de curación de heridas abiertas asépticas en ratas para la determinación de sus propiedades antioxidantes y su efecto sobre el balance redox durante el proceso de reparación de las heridas. La curación de las heridas fue evaluada al séptimo día mediante la medición del área de las herida (mm²) empleando el Sistema de Procesamiento Digital de Imágenes MADIP 3.0 Lab Lapdis del Hospital Carlos J. Finlay. El balance redox durante el proceso de reparación de las heridas se analizó mediante la determinación de los indicadores: superóxido dismutasa, catalasa, glutatión reducido y malonildialdehído en el nuevo tejido cicatricial a los 0, 3, 7 y 14 días de realizadas las heridas. Los resultados demostraron las propiedades antioxidantes in vivo del extracto acuoso de Rhizophora mangle (L.) y que su fracción polifenólica mayoritaria constituyó el principal determinante de dichos efectos. Además el tratamiento de heridas cutáneas con estas preparaciones redujo el área de las heridas (p< 0,05) y modificó el balance redox durante el proceso de reparación del tejido. La actividad antioxidante del extracto y su fracción en el tejido cicatricial puede explicar, al menos en parte, el efecto acelerador de la curación de heridas mostrado por esta planta en estudios previos.

Rhizophora mangle (L.) aqueous extract and its major polyphenolic fraction were evaluated in an aseptic open wound healing model in rats in order to evaluate their antioxidant properties and the effect on redox balance during the wound reparation process. Wound healing was evaluated at the seventh day measuring the wound area (mm²) using MADIP 3.0 Lab Lapdis Image Digital Processing System from Carlos J. Finlay Hospital. The redox balance during wound reparation process was analyzed using the indicators: superoxide dismutase, catalase, reduced gluthatione and malondialdehyde in the new tissue at 0, 3, 7 and 14 days after provoking the wounds. The results showed that Rhizophora mangle (L.) aqueous extract had antioxidant properties in vivo and its major polyphenolic fraction was responsable of this effect. Beside, the treatment of cutaneous wounds with these preparations reduced the wound area (p< 0,05) and modified the redox balance during the tissue reparation process. Antioxidant activity of the extract and its fraction can explain, at least in part, the wound healing accelerator effect shown in previous studies.

PORCINE PARVOVIRUS INFECTIONS IN CUBA

To obtain information about the porcine parvovirus (PPV) infection status of pigs in Cuba, tissue samples collected from ill pigs were evaluated using polymerase chain reaction (PCR). The PCR analysis showed the presence of PPV in 12 of the 34 (35.3%) field clinical samples assessed. Pigs from three of the seven swine herds of six different geographic regions were detected to be positive for PPV. A field PPV strain was isolated for the first time in the country. A swine herd showed 57 of 60 sera sampled (95%) positive for PPV specific antibodies by a commercial ELISA. This study is the first report of PPV infecting pigs in Cuban swine herds.

Con el fin de conocer el estatus de infección por parvovirus porcino (PPV) de cerdos en Cuba, se colectaron muestras de órganos de cerdos para su evaluación por reacción en cadena de la polimerasa (PCR). El análisis de PCR mostró la presencia de infecciones por PPV en 12 de las 34 (35.3%) muestras clínicas de campo evaluadas. Se detectaron como positivos a PPV tres rebaños porcinos del total de siete evaluados pertenecientes a seis diferentes regiones geográficas del país. Se aisló PPV de una muestra clínica de campo por primera vez en el país. Un rebaño porcino mostró 57 de 60 muestras (95%) como positivas para anticuerpos a PPV por un ELISA comercial. Este estudio constituye el primer reporte de PPV infectando cerdos en rebaños porcinos en Cuba.

**PRESENCE OF Philophthalmus sp. (TREMATODA: PHILOPHTHALMIDAE) IN BACKYARD FOWLS**

Se identificó, por primera vez en el país, la presencia del género Philophthalmus, a partir del examen físico de una gallina semirústica procedente de un traspatio de la provincia de Guantánamo. El animal, explorado clínicamente, mostró hiperemia en conjuntiva ocular y mucosa palpebral de ambos ojos, así como la presencia de 13 ejemplares de trematodos que fueron fijados en solución alcohol-formol a los que les fue realizado un estudio morfométrico, con ayuda de un estereoscópico. Los parásitos encontrados presentaron características morfométricas compatibles con Philophthalmus sp. Se maceró uno de los helmintos y pudieron observarse huevos similares a los descritos para este género. Este hallazgo constituye la primera notificación del agente en aves, en Cuba.

The presence of the genus Philophthalmus has been identify for first time in Cuba from the physical examination of a semi rustic fowl in a Guantanamo backyard. The animal was clinically explored and showed hyperemia on conjunctival and eyelid mucosa of both eyes together with the presence of 13 trematodes which were fixed in formalin-alcohol solution for morphometrical studies under stereoscope. The parasites showed morphometric characteristics compatible with Philophthalmus sp. One of the helminth were macerated and eggs similar to those described for this genus were observed. This finding is the first notification of the agent in birds in Cuba.

EVALUATION OF FAMACHA© COLOR CHART IN THE DETECTION OF ANEMIA IN GOATS UNDER SILVOPASTORAL SYSTEM CONDITIONS: PRELIMINARY STUDIES

Con el objetivo de evaluar la factibilidad del empleo de la carta de colores FAMACHA© en la detección de anemia en cabras mestizas, se muestrearon 70 animales mantenidos en un área de pastoreo (Dichrostachys cinerea- Acacia farnesiana _ complejo Dichantium spp., Brotriochloa spp) alrededor de 9 horas diarias. Por dos meses se determinó el color de la mucosa ocular (CMO) según la escala de la carta de colores FAMACHA© y se extrajeron muestras de sangre y heces a cada animal. Se determinó volumen celular aglomerado (VCA), el conteo fecal de huevos (CFH) de estrongílidos y las especies presentes por coprocultivos. El coeficiente de correlación (Spearman) entre el VCA y los valores del color de la mucosa fue de -0,58 para un nivel de significación p<0,01. Para los valores 4 y 5 de la carta FAMACHA© y hematocrito = 19% como indicador de anemia, se obtuvo una sensibilidad y una especificidad de 91% y 62,4% respectivamente. El valor de predicción de un caso negativo fue de un 91,3% mientras que el valor de predicción de un caso positivo fue de 45,7%. Por otro lado los animales con categoría 4 y 5 fueron los que mayor conteo fecal de huevos presentaron aunque no mostraron diferencias significativas. Los resultados indican que la metodología FAMACHA© puede ser una herramienta en la detección de anemia en cabras en nuestras condiciones.

With the objective to evaluate the feasibility of the use of FAMACHA© color card in the detection of anemia, 70 goats were used. These animals were grazed in a silvopastoral system around 9 hours daily (Dichrostachys cinerea- complex Dichantium spp., Brotriochloa spp.). During 2 month, the colour of the ocular mucosa was determined (CMO) according to the scale of FAMACHA© color card. Besides, faecal and blood samples were extracted from each animals to determine the faecal strongyle egg count, genera by coprocultures and packed cell volume (PCV) through centrifugation. The correlation coefficient (Spearman) between the VCA and the values FAMACHA© card was -0, 58. Sensitivity and specificity for 4 and 5 FAMACHA© card values and PCV =19% as indicator of anemia were 91% and 62.4%, respectively. The predictive value of a negative case was of 91.3%, whereas the predictive value of a positive case value was 45, 7%. On the other hand, the animals with category 4 and 5 showed the highest faecal egg count, but no differences among groups were detected. The results indicate that the FAMACHA methodology© can be a useful tool in the detection of anemia in goats under our condition.

**IDENTIFICATION OF TOX A GENE IN CUBAN ISOLATES OF Pasteurella multocida FROM SWINE USING THE POLYMERASE CHAIN REACTION (PCR)**

Pasteurella multocida es parte de la flora comensal del tracto respiratorio superior de cerdos. Usualmente, las cepas de P. multocida del serotipo A se asocian a neumonía en animales de crecimiento y las del serotipo D codifican para una toxina de 145 kDa asociada a la rinitis progresiva. En este trabajo se realizó la caracterización bioquímica y molecular de 30 cepas de P.multocida aisladas a partir de cerdos con clínica respiratoria. Todos los aislamientos presuntivos de P.multocida fueron positivos para los cebadores KMT1SP6 y KMT1T7, amplificando un producto de 460 pb. La presencia del gen tox A solo se detectó en 4 muestras, demostrando la baja frecuencia de cepas toxigénicas y mayor prevalencia de cepas de P.multocida asociadas a procesos neumónicos en las granjas estudiadas. Estos resultados revelan por primera vez en el país la factibilidad del uso de la PCR a partir de una simple colonia para el monitoreo de cepas toxigénicas o no toxigénicas de P.multocida.

Pasteurella multocida is part of the commensal flora in the upper respiratory tract of pigs. Usually, P. multocida type A strains are associated to pneumonia in grower pigs and the ones from serotype D encode for a 145 kDa toxin associated to progressive rhinitis. Thirty Pasteurella multocida strains isolated in Cuba from swine samples with respiratory signs were identified and characterized. All the isolates showed an amplification product of 460 pb when KMT1SP6 and KMT1T7 primers were used. Only four toxigenic strains of P. multocida were identified by PCR. These data presented revealed low frequency of toxigenic P.multocida and a higher incidence of non toxigenic P.multocida associated to pneumonie.The PCR specifically for identifing P.multocida and the specific primers for tox A gene have been used for the first time in the country from a simple colony showing its feactibility for the monitoring of toxigenic and non toxigenic P.multocida strains.

MYCOPLASMA DIAGNOSTIC LABORATORY PERFORMANCE BY INTERLAB COMPARISONS

Se comprobó el desempeño en los laboratorios de diagnóstico de Micoplasma del Instituto de Medicina Tropical Pedro Kouri y MYCOLAB del CENSA, mediante un programa anual de ensayos de aptitud por medio de comparaciones interlaboratorios para la detección de micoplasmas en fluidos biológicos. Ambos laboratorios por dos años consecutivos identificaron de forma correcta seis muestras negativas y nueve muestras positivas de referencia incluidas a ciegas. Se demostró la capacidad para obtener resultados confiables en la detección de micoplasmas por las técnicas de cultivo y reacción en cadena de la polimerasa.

The performance of diagnostic laboratories for mycoplasmas from the Tropical Medicine Institute Pedro Kouri and MYCOLAB from CENSA was proved an annual program of proficiency assays testing by interlab comparisons for mycoplasmas detection in biological fluids. During two consecutive years both laboratories, correctly identified six blind negative reference samples and nine blind positive reference samples. The ability to obtain reliable results in detecting mycoplasmas by culture and PCR was demonstrated.