Revista de Salud Animal

INFLUENZA A H1N1/2009 PANDÉMICA EN CERDOS Y OTRAS ESPECIES ANIMALES

En este trabajo se describen y analizan los casos de influenza H1N1/2009 pandémica en cerdos y otras especies animales ocurridos hasta enero de 2010, donde se observa que el número de países que han reportado casos en porcinos ha ido ascendiendo en el tiempo, los casos han sido leves y la morbilidad variable; mientras que la mortalidad ha sido prácticamente nula, la fuente de infección en la mayor parte de los casos se atribuye a la presencia de trabajadores que estaban o habían presentado síntomas gripales. El diagnóstico se realizó por técnicas moleculares y las principales medidas aplicadas fueron generales tales como cuarentena e incremento de la bioseguridad de las instalaciones. También se hace énfasis en evitar el contacto directo de personas enfermas con los cerdos. El virus se ha reportado además en otras especies tales como pavos, gatos, perros y hurones, entre otras; aunque se desconoce la participación de estas en la cadena epidemiológica de la enfermedad. Se alerta sobre la necesidad de incrementar la vigilancia sobre todo en los cerdos, dada la importancia de esta especie en la epidemiología de esta enfermedad.

Cases of pandemic H1N1/2009 influenza occurred in pigs and other animals up to January/ 2010 are described and analysed. Countries reporting swine cases have been increasing over time, but mild with variable morbidity and mortality almost nule. The infection source has been mostly attributed to the occurrence of workers with flu symptoms. The diagnosis was done by molecular techniques and the main measures applied were of general type, such as quarantine and enhancing the biosecurity on the facilities. It is also emphasizes on avoiding direct contact with sick pigs. The virus has also been reported in other species such as turkeys, cats, dogs and ferrets, among others, although the role of these in the epidemiological chain of the disease is unknown. It is necessary to warn on the needs of increasing the surveillance mainly in pigs, due to the importance of this specie on epidemiology of the disease.

**MADURACIÓN Y FERTILIZACIÓN in vitro DE OVOCITOS DE CERDAOBTENIDOS POR PUNCIÓN Y CORTE DE FOLÍCULOS**

Se recuperaron 1331 ovocitos de ovarios obtenidos en mataderos, de estos 670 fueron obtenidos por punción y 661 por corte de folículos los cuales se cultivaron en medio definido TCM-199 suplementado. La maduración fue evaluada por la técnica de fijación y tinción con orceína acética. De 302 ovocitos fijados a partir del método de punción 97 maduraron y de 294 ovocitos fijados a partir del método de corte maduraron 95 para 32.1% y 32% de maduración respectivamente. Fueron fertilizados 368 ovocitos del método de punción y 367 del método de corte en medio amortiguador TBM con Tris y posteriormente transferidos a medio de desarrollo embrionario NCSU-23. Los resultados obtenidos fueron 40 embriones en el método de punción y 36 embriones en el método de corte, para un 11.8% y 11.2% de desarrollo embrionario respectivamente. Se concluye que la eficiencia en los dos procedimientos empleados es la misma ya que no se afecta significativamente los porcentajes en la maduración y desarrollo embrionario in vitro.

A number of 1331 oocytes were recovered from ovaries obtained in slaughterhouses; from these 670 were obtained by puncture and 661 by follicles cutting, then cultivated in the medium defined suplemented TCM-199. Maturation was evaluated by fixation and staining with acetic orceín from 302 ovocytes fixed by puncture method 97 matured and from 294 oocytes fixed by cutting method 95 matured corresponding 32,1 and 32 from maturation percentage respectively, between both groups. A number 368 oocytes from the puncture method and 367 from the cutting one were fertilized in , TBM buffered medium with Tris and then transfered to the development embryo medium NCSU-23. The obtained results were 40 embryos in those of method of puncture and 36 embryos in cutting method, corresponding 11,8% and 11,2% of embryonic development respectively, not observing any significant statistical difference (P>0.05), between both groups. One concludes that the efficiency in both procedures of obtaining of oocytes for maturation in vitro of oocytes of pig and its fertilization in vitro is equal, since they significantly did not affect the percentage in the maturation and embryonic development in vitro.

AFLATOXINA M₁ EN LECHE Y QUESO DE CABRA PRODUCIDOS EN APASEO EL GRANDE, GUANAJUATO, MÉXICO

El presente estudio se realizó con el objeto de conocer el nivel de aflatoxina M1 (AFM1) en leche y queso de cabra. Las muestras de leche (n=60) fueron tomadas durante el periodo de julio del 2008 a junio del 2009 provenientes de 5 unidades de producción caprina. Las muestras de queso (n=20) se obtuvieron en julio de 2009. Las muestras fueron analizadas mediante cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC) bajo los métodos propuestos por la AOAC. Los resultados señalan que el 30% de las muestras de leche presentaron algún nivel de AFM1, el 18% de las muestras estuvieron por arriba del nivel máximo permitido (0.05 µg Kg-1) por la Comunidad Europea, con un nivel máximo de 1.61 µg Kg-1. Las muestras de queso presentaron un 15% de incidencia de AFM1, con un nivel máximo de 0.23 µg Kg-1.

The present study was conducted to assess the level of aflatoxin M1 (AFM1) in goat milk and cheese. Milk samples (n=60) were taken during the period July 2008 to June 2009 from 5 goats production units. Cheese samples (n=20) were taken in July 2009. Samples were analyzed by high performance liquid chromatography (HPLC) using the methods proposed by the AOAC. The results show 30% of milk samples with some level of AFM1, 18% were above the maximum permissible level (0.05 µg Kg-1) by the European Community, with a peak of 1.61 µg Kg-1. Cheese samples showed a 15% incidence of AFM1, with a maximum level of 0.23 µg Kg-1.

**ANALISIS MULTIVARIADO DE Boophilus microplus (ACARI: IXODIDAE):FASE NO PARASÍTICA**

Multivariate statistical methods are relatively new tools for data analysis. They have a lot of applications in biological researches: nevertheless, for several reasons, they have not been widely employed in this subject yet. Recently, present authors published a paper applying multivariate statistics on non-parasitic phase of Anocentor nitens. In the present article Boophilus microplus has received a very similar statistic treatment. In this paper, the influence of different incubation conditions was studied in groups of 12-15 individuals in each of the 24 combinations of six temperatures 24, 27, 30, 32, 34 and 36ºC and four relative humidity values, 100, 80, 75.5 and 70% over the cycle variables of B. microplus. According to the results, the best conditions are 30ºC and 100% relative humidity and the worse ones were higher temperatures together with lower relative humidity. It was remarked that this ixodid is better adapted to warm humid conditions in tropic than A. nitens is. Some other issues have been discussed in this new approach, like the possibility of its applications in prognosing geographical distribution of ixodids.

Los métodos de estadística multivariada constituyen herramientas relativamente nuevas para el análisis de datos. Ellos tienen una gran aplicación en las investigaciones biológicas, sin embargo, por diversas razones, aún no han sido ampliamente empleados. Recientemente los autores publicaron un artículo aplicando estadística multivariada a la fase no parasitaria de Anocentor nitens. En el presente trabajo la fase no parasitaria de Boophilus microplus recibió un tratamiento estadístico similar. En este artículo se estudia la influencia de las condiciones de incubación en grupos de 12-15 individuos en cada una de las 24 combinaciones de seis temperaturas 24, 27, 30, 32, 34 y 36ºC y cuatro valores de humedad relativa 100, 80, 75.5 y 70%, sobre las variables del ciclo de B. microplus. De acuerdo con los resultados obtenidos, las condiciones más favorables fueron 30ºC y 100% de humedad relativa y las condiciones más desfavorables resultaron las temperaturas más elevadas unidas a las humedades relativas bajas. Esto indica que este ixódido está mejor adaptado que A. nitens a las condiciones cálido-húmedas del trópico. Se discuten otros aspectos como la posible aplicación de estos métodos al pronóstico de la distribución geográfica de los ixódidos.

APLICACIÓN DEL HPLC EN EL ESTABLECIMIENTO DEL PERIODODE LATENCIA DE LA OXITETRACICLINA EN MÚSCULO DE CAMARÓN(Litopenaeus vannamei) EN UN SISTEMA DE PRODUCCIÓNSEMI-INTENSIVO EN CUBA

Se desarrolló una metodología para la determinación de oxitetraciclina en músculo de camarón por cromatografía líquida de alta resolución empleando columna de fase reversa y detección UV a 340 nm. La extracción se desarrolló con una solución Mcllvaine-EDTA y los extractos fueron purificados empleando columnas de extracción fase sólida (C18-500mg-6mL). El método presentó un recobrado entre 78.2±9.9 % con una precisión menor del 10% en las concentraciones de 200 y 400 ng/g, la linealidad mostró un coeficiente de correlación mayor de 0.99 y el límite de detección fue 105 ng/g, Se estableció el periodo de latencia de la oxitetraciclina en músculo de camarones (Litopenaeus vannamei) entre 14-20 días cuando se suministra el alimento medicamentado a una dosis de 4g/kg durante 14 días en condiciones de producción semi-intensivo. Los análisis de residualidad en cinco camaroneras en el momento de la cosecha nos mostraron niveles de oxitetraciclinas superiores a 100 ng/g.

A methodology for determining of oxytetracycline in shrimp muscle by high performance liquid chromatography was developed using reverse phase column and UV detection at 340 nm. Extraction was done with a solution Mcllvaine-EDTA and the extracts purified using solid phase extraction columns (C18-6mL-500mg). The method showed a recovered between 78.2 ± 9.9% with a precision lesser than 10% in the concentrations of 200 and 400 ng/g, linearity showed a correlation coefficient higher than 0.99 and the detection limit was 105 ng/g. Oxytetracycline latency period in shrimp muscle (Litopenaeus vannamei) was set between 14-20 days when the medicated feed containing 4g/kg was supplied for 14 days under semi intensive production conditions. The analyses of residues in five shrimp farm at the harvest time showed oxytetracycline levels above 100 ng/g.

EFICACIA TERAPÉUTICA DE LA IVERMECTINA POR VÍA SUBCUTÁNEA FRENTE A LA DEMODICOSIS CANINA GENERALIZADA HÚMEDA

Con el objetivo de evaluar la eficacia de la Ivermectina por vía subcutánea frente a la demodicosis canina generalizada húmeda, se investigaron 120 canes que presentaban esta forma clínica de la demodecia. Se formaron tres grupos de 40 perros cada uno, de diferentes razas y entre 4 y 12 meses de edad. Previamente, se comprobó que no fueran positivos a dirofilariasis. El grupo control fue tratado con amitraz. Un segundo grupo se trató con Ivermectina subcutánea una vez por semana y el tercero fue tratado con Ivermectina más terapia de apoyo. El protocolo terapéutico aplicado al grupo tres tuvo una eficacia similar al tratado con amitraz (control), por lo que este protocolo pudiera ser utilizado para el tratamiento de esta entidad y el mayor número de animales recuperados se obtuvo en la semana 12. Recomendamos que se extienda el tiempo de evaluación de los protocolos terapéuticos, de forma que se puedan evaluar las posibles recidivas.

With the objective of evaluate the efficacy of the Ivermectin for subcutaneous route opposite to the canine humid generalized demodicosis, there were investigated 120 dogs that were presenting this clinical form of the demodecia. It were formed three groups of 40 dogs each one, of different races and between 4 and 12 months of age. Previously, it was proven that they didn’t go positive to dirofilariasis. The control group was treated with amitraz. A second group talked once to subcutaneous Ivermectina for week and the third, it was treated with Ivermectina more support therapy. The therapeutic protocol applied to the group three had an efficacy similar to the agreement with amitraz (control), by what this protocol could be used for the treatment of this entity and the biggest number of convalescent animals it was obtained in the week 12. We recommend expanding the time of evaluation of the therapeutic protocols; so that the possible relapses they can be evaluated.

DETECCIÓN EN MUESTRA CLÍNICA E IDENTIFICACIÓN DE AISLADOS DEL VIRUS DE LA BRONQUITIS INFECCIOSA AVIAR POR UN ENSAYO DE REVERSO TRANSCRIPCIÓN ACOPLADO A REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA

La bronquitis infecciosa aviar (BIA) es una enfermedad viral ampliamente diseminada en el mundo y se considera una de las principales causas de pérdidas económicas significativas en la industria avícola, debido a que afecta el desarrollo de aves de engorde y ponedoras. En Cuba, el diagnóstico actual se realiza por aislamiento viral y es difícil su identificación por métodos convencionales. Para identificar la posible presencia del virus de la BIA en aislados cubanos se aplicó un ensayo de reverso transcripción acoplado a reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR) específico para este virus. Las muestras de tráquea-pulmón fueron tomadas como grupos de tres y cuatro aves después de la necropsia de cada una, evaluándose un total de once aves. Las secuencias del virus de la BIA fueron detectadas en dos de los tres grupos evaluados. En uno de estos grupos se logró además, la detección del virus a partir de la muestra clínica; aspecto importante para la diferenciación con enfermedades graves que cursan con un cuadro clínico similar como la Influenza aviar y la Enfermedad de Newcastle. La RT-PCR mostró potencial para ser usado en la identificación de aislados del virus de la BIA, así como en el examen directo a partir de muestras clínicas, lo que aporta posibilidades de su empleo en nuestro país para la detección rápida, sensible y específica de este agente, aspecto esencial en el diagnóstico y control de esta infección viral.

Avian infectious bronchitis (AIB) is a viral disease worldwide distributed and it is considered one of the main causes of economic losses for poultry industry because of its characteristic of affecting development of broiler and laying hens. In Cuba, the current diagnosis is carried out by viral isolation and its identification by conventional methods is difficult. In order to identify the possible presence of avian infectious bonchitis virus in cuban isolates a reverse transcription-polymerase chain reaction assay (RT-PCR) specific for this virus was applied. Trachea-lung samples were taken as pooles of three and four birds after each necropsy, evaluating a total of eleven birds. The sequences of AIB virus were detected in two of three pools. In one of these pools the detection from clinical sample was also obtained, a very important aspect for its differentiation with serious diseases with a similar clinical course as Avian influenza and Newcastle disease. The RT-PCR showed a potential in order to be used in the identification of isolates from AIB virus, as well as in the direct examination of clinical samples opening the possibilities of its use in the quick, sensitive and specific detection of this agent in our country an essential aspect in the diagnosis and control of this viral infection.

EVOLUCIÓN DE LOS PROTOZOOS

Se realiza un análisis de la bibliografía existente sobre la evolución de los protozoos desde los procariotas, y las adaptaciones ocurridas para alcanzar el estadio parasitario como endoparásitos. Se brindan algunos ejemplos de estudios realizados por los autores.

An analysis of literature relating protozoan evolution from prokaryotes, and adaptations occurring in parasites in order to reach the stage of endoparasites, is carried out. Some examples of studies made by the authors are provided.

Mycoplasma meleagridis EN PAVOS DE UNA GRANJA EN AMECAMECA, ESTADO DE MÉXICO

Se estudiaron en el Estado de México 30 aves a la tercera semana de edad con signos respiratorios compatibles con infección por M. meleagridis desde el punto de vista clínico-patológico y serológico. El diagnóstico para la detección de anticuerpos contra el agente, fue realizado por medio de la técnica inmunoenzimática (ELISA) con el Kit específico de los Laboratorios IDEXX. Las aves presentaron manifestaciones clínica-patológicas compatibles con enfermedad respiratoria complicada, serológicamente se obtuvo un 76% de positivos a M. meleagridis. Este es el primer estudio donde se determinan anticuerpos a este agente en México mediante la prueba inmunoenzimática (ELISA), los resultados obtenidos alertan acerca de la necesidad de ampliar estas evaluaciones y considerarlos en el desarrollo de futuros métodos de control contra este microorganismo.

Thirty birds in the third week of age were studied in the State of Mexico with respiratory signs compatible with an infection by M. meleagridis from the clinical - pathological and serological point of view. The immunoenzyme technique (ELISA) was performed using an specific kit from IDEXX Laboratories for detecting antibodies against the agent. From birds showing clinical and pathological manifestations compatible with complicated respiratory disease, 76% were seropositive against M. meleagridis. This is the first study using immunosorbent assay (ELISA) which identifies antibodies to this agent in Mexico, the results warn about the need to expand these evaluations and consider them in developing future control methods against this organism.

**PRIMER INFORME EN CUBA DE VARIACIÓN GENOTÍPICADE Staphylococcus aureus AISLADO DE LECHE BOVINA**

Staphylococcus aureus es un contaminante importante y frecuente de la leche. Actualmente los estudios de tipificación genética arrojan datos importantes para el control de su diseminación; los que se basan en la variabilidad genética de la especie bacteriana. Con el objetivo de detectar polimorfismo genético se aplicaron técnicas de tipificación basados en la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) de los genes coa y RNAr en aislamientos de S. aureus, a partir de leche de tanque de varias empresas de provincia La Habana y un caso de mastitis clínica. Por primera vez se comprobó la variabilidad genética de Staphylococcus aureus aislados en Cuba y se demostró la utilidad de las técnicas empleadas a nivel de zonas geográficas relativamente distantes y cercanas, con lo que se evidencia la distribución de ciertas variantes genéticas como aportes a la epidemiología molecular de este patógeno alimentario.

Staphylococcus aureus is an important and frequent contaminant of raw milk. At present the studies of genetic typing gives important data for controling their dissemination; those are based on genetic variability of the bacterial specie. With the goal of detecting genetic polymorphism typing techniques based on the Polymerase Chain Reaction (PCR) of the genes coa and RNAr were applied in S. aureus isolates from bulk and mastitic milk in Havana. The genetic variability of S. aureus isolates from bovine milk was proven for first time in Cuba and the usefulness of the techniques employed on relatively distant and near geographical areas was demonstrated, as well as the distribution of certain genetic variants as contribution to the molecular epidemiology of this food pathogen.

EVIDENCIAS HISTOPATOLÓGICAS EN UN GALLO FINO CUBANOINFESTADO POR Dispharynx nasuta

Con el objetivo de estudiar los cambios histopatológicos ocasionados por Dispharynx nasuta en un gallo fino cubano, se sacrificó el animal por desangramiento y sección de la médula cervical y se practicó la necropsia. Seguidamente, se realizó la descripción macroscópica detallada de cada órgano y tejido. Se tomó un fragmento de 1cm² de proventrículo en solución de formol al 10%, y el resto del conducto proventricular se colectó en placa Petri estéril. Se evidenció por primera vez en nuestras condiciones, los daños morfológicos microscópicos ocasionados por una helmintiasis grave por D. nasuta en esa raza. Se obtuvo una Extensión de Invasión e Intensidad de Invasión de 100 y 4.0 %, respectivamente.

In order to study the histopathological changes caused by Dispharynx nasuta in a Cuban fine rooster, the animal was slaughtered by bleeding and cervical spinal section necropsied. The macroscopic detailed description of each organ and tissue was made. A piece of 1cm² of proventriculus was conserved in formalin solution 10%, and the rest of proventricular duct was collected in sterile Petri dish. It was evidenced, for the first time in our conditions, the microscopic morphological damage caused by a severe helminthiasis caused by D. nasuta on this type of host. The prevalence and intensity of parasitism were also calculated (100 and 4.0 %, respectively).

Rhipicephalus (Boophilus) microplus **(ACARI: IXODIDAE) EN BÚFALO (Bubalus bubalis), EN CUBA**

Con el objetivo de estudiar la presencia de garrapatas en búfalos en Cuba, se muestrearon 242 búfalos en 8 unidades de producción. Se realizó conteo e identificación de garrapatas adultas en animales de ambos sexos y de diferentes edades, para conocer la tasa de infestación y las especies presentes. La presencia de Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Can) se evidenció en el 94,8% de los bucerros, en tanto en los animales adultos fue poco frecuente (27,7%). La tasa de infestación resultó significativa en los bucerros (19,7 garrapata/animal). Se observó el establecimiento del ectoparásito en las regiones ventral y auricular de los bucerros, en tanto en los adultos se observó en la región perineal.

In order to study the presence of ticks in buffalo, in Cuba, 242 animals from 8 farms were sampled. Counting and identification of adult ticks from animals of both sexes and different ages were carried out for knowing the infestation range and the species. Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Can) was evident in 94, 8 % of the bucerros, while in adults was a little infrequent (27,7%). The infestation rate was significant in the bucerros (19,7 ticks/animal). The localization of ectoparasites was in the ventral area and ears of bucerros, while in adults were observed in the perineal area.

NEW OUTBREAKS OF BOVINE CORONAVIRUS IN DAIRIES OF HAVANA

EVALUACIÓN RETROSPECTIVA DE LA INTERACCIÓN ÉPOCA/AÑO DEL PARTO EN LA PRODUCCIÓN DE LECHE DEL SIBONEY DE CUBA