Revista de Salud Animal

TERMINOLOGY CONCEPTS OF PROBIOTIC AND PREBIOTIC AND THEIR ROLE IN HUMAN AND ANIMAL HEALTH

The mode of action of specific probiotic bacteria and specific prebiotic ingredients and their effects on the intestinal microbiota modulation in humans and animals has been demonstrated in many studies. Intestine is characterized for harboring a complex and dynamic microbiota which, among others, has a function to protect the host from inflammatory disorders. A mature and balanced endogenous microbiota has also an important role in the maintenance of a desirable activity of the immune system. Deviations in gut microbiota composition, due to improper diet, radiotherapy, antibiotic treatment, stress and others, may lead to a variety of gastrointestinal disorders. To overcome an unbalanced microbiota, the consumption of specific probiotics and prebiotics has been proved to be effective. For more than three decades, many probiotic microorganisms have been characterized and evaluated. However, the term prebiotic has only recently been identified, characterized and evaluated in human intervention studies. The list of prebiotic ingredients remains limited, and yacon (Smallantus sonchifolia) is an Andean root to which prebiotic attributes have been inferred recently. Humans and animals could seemingly benefit from the consumption of specific prebiotics and probiotics. In this work, terminology aspects of pre- and probiotics, and their roles in human and animal health are discussed.

Se ha demostrado en muchos estudios el modo de acción de las bacterias probióticas específicas y de determinados ingredientes prebióticos y sus efectos en la modulación de la flora intestinal en humanos y animales. El intestino se caracteriza por hospedar una microbiota compleja y dinámica que, entre otras, tiene como función proteger al huésped de trastornos intestinales. Una microbiota endógena madura y equilibrada, también es importante para el mantenimiento de una actividad deseable del sistema inmunológico. La perturbación de la microbiota intestinal puede tener un impacto en la fisiopatología de una variedad de trastornos gastrointestinales. Para superar este desequilibrio debido a la dieta, radioterapia, terapias con antibióticos, situaciones de estrés y otros, se ha demostrado la eficacia del consumo de probióticos y prebióticos específicos. Durante más de tres décadas, se han descrito y evaluado muchos microorganismos probióticos; sin embargo, el término prebiótico sólo se ha identificado, caracterizado y evaluado recientemente en estudios de intervención humana. La lista de ingredientes prebióticos queda frenada y el yacón (Smallantus sonchifolia) es una raíz andina a la cual los atributos prebióticos se han indicado recientemente. Los seres humanos y animales, aparentemente se podrían beneficiar del consumo de prebióticos y probióticos especiales. En este trabajo se abordarán los aspectos de la terminología de pre y probióticos y su función en la salud humana y animal.

ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF A COMPETITIVE EXCLUSION PROBIÓTICO MIXTURE AND ITS STABILITY IN TIME

Se determinó la actividad antimicrobiana in vitro frente a bacterias potencialmente patógenas de una mezcla de exclusión competitiva (MEC) y se determinó la estabilidad de dicha mezcla en el tiempo. Para la obtención de la MEC se sacrificaron cinco pollos de ceba del híbrido H2 adultos y saludables de 45 días de edad. Para determinar la actividad antimicrobiana in vitro se emplearon diferentes cepas indicadoras y para evaluar la estabilidad durante el almacenaje se consideraron dos condiciones de temperaturas: ambiente (32 y 34 O C) y de refrigeración entre 4-8O C. Finalmente se realizó un análisis de la calidad microbiológica de la MEC. Se observó inhibición del crecimiento de todas las cepas indicadoras por la producción de ácido (variante 1), excepto para la cepa Lactobacillus salivarius. La MEC presentó una alta producción de ácido acético, propiónico y butírico. Se demostró una elevada capacidad de crecimiento y estabilidad durante el almacenaje por 30 días de la MEC en condiciones de refrigeración y ambientales, así como una buena calidad microbiológica.

The in vitro antimicrobial activity against pathogenic potentially bacteria from a competitive exclusion mixture (CEM) and its stability in time were determined. To obtain CEM, five adult and healthy broilers from H2 hybrid of 45 days of age, were sacrificed. The in vitro antimicrobial activity of CEM against indicator strains and its stability during storage at different temperatures were determined. Finally, a microbial quality analysis of CEM was carried out. Growth inhibition of all indicator strains was observed by acid production (variant 1), except from Lactobacillus salivarias. CEM showed a high level of acetic, propionic and butiric acids. A high grow capacity and satiability was demonstrated during 30 days of CEM storage under refrigeration and environmental conditions,as well as a good microbial quality.

In vitro **ISOLATION AND CHARACTERIZATION OF Lactobacillus spp. STRAINS AS A PROBIOTIC CANDIDATE**

El uso de los lactobacilos como probióticos en los últimos años cobra un interés creciente debido a sus propiedades benéficas en animales y humanos. Con el objetivo de aislar y caracterizar cepas vaginales de Lactobacillus spp., mediante pruebas in vitro para considerar su posterior aplicación como probiótico se aislaron 24 cepas identificadas a nivel de grupo por el perfil de fermentación de carbohidratos y la producción de gas a partir de la glucosa. A todas las cepas se les determinó su estabilidad de crecimiento a pH ácidos y a diferentes temperaturas. De ellas se seleccionaron 9 que presentaron las mejores características como candidatos a probióticas por sus resultados en las pruebas de hidrofobicidad frente a solventes orgánicos como tolueno, xileno y hexadecano, hemaglutinaron frente a eritrocitos humano, auto-agregaron, coagregaron con Escherichia coli y Candida albicans e inhibieron el crecimiento de estos patógenos. Se evaluó el perfil de susceptibilidad a 17 antimicrobianos y revelaron resistencia a 7 de ellos.

The use of lactobacilli as probiotics in recent years had has an increased interest due to their beneficial properties in animals and humans. In order to isolate and characterize Lactobacillus spp. vaginal strains by in vitro tests to consider their subsequent application as a probiotic, 24 strains identified at group level by the carbohydrate fermentation profile and gas production from glucose were isolated. Growth stability of all strains was determined at acid pH and at different temperatures. From them, 9 strains were selected showing the best probiotic characteristics as candidates by their scores on tests of hydrophobic versus organic solvents such as toluene, xylene and hexadecane positive hemagglutination against human erythrocytes, autoaggregation, coaggregation with Escherichia coli and Candida albicans, inhibiting the growth of these pathogens. The susceptibility profile of 17 antimicrobials was evaluated, showing resistance in 7 of them.

**VALIDATION OF HIGH-PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (HPLC) METHOD, USING EPIGALOCATEQUINGALLATE AS MARKER TO ASSESS THE QUALITY OF A SEMI-SOLID FORMULATION OBTAINED FROM Rhizophora mangle L.**

Con el objetivo de establecer un marcador químico de polifenoles y validar un método por cromatografía líquida de alta resolución (CLAR) para evaluar la calidad de productos semisólidos obtenidos a partir del extracto acuoso de la corteza de Rhizophora mangle L, se compararon cuatro procedimientos de extracción del analito de la muestra; donde la variante que emplea etil acetato y su aplicación directa al cromatógrafo fue la más efectiva. De los diferentes polifenoles identificados en la muestra, la epigalocatequingalato (EGCG) fue seleccionada como marcador. El producto semisólido en condiciones de estrés oxidativo muestra una disminución del marcador y cambios en el perfil cromatográfico. Los parámetros de desempeño del método revelan una linealidad en el rango de 1-15 µg/mL (r=0.999; p=0.05), con límite de detección y cuantificación de 2.5 µg/mL y 5.0 µg/mL respectivamente. El recobrado de la EGCG en un blanco de reactivos fue del 89±9%, y en el producto fue de 60.1±3.52 µg/g. Los valores de repetibilidad para el estándar y la muestra fueron de 1.29 y 10.67 % respectivamente. La reproducibilidad estimada a partir de la ecuación de Horwitz tuvo una variación entre 8-11%. Los lotes de productos tuvieron valores de EGCG que oscilaron entre 36.5 y 66.7 ug/g. El procedimiento analítico desarrollado empleando la EGCG como marcador químico resultó ser confiable para el control de calidad del producto semisólido evaluado.

With the aim of establishing a chemical marker of polyphenols and validating a HPLC method, for assessing the quality of semisolid products, obtained from Rhizophora mangle L aqueous bark extract, four methods for extracting the analyte from the sample, were compared. The variant using ethyl acetate and its direct application to the chromatograph was the most effective. The epigalocatequingallate (EGCG) was selected as a marker among other polyphenols identified. The semisolid product, under oxidative stress conditions, shows a decline and changes in the chromatographic profile. Performance parameters show a linear method in the range of 1-15 ug / mL with a regression coefficient of 0.999, and have a limit of detection and quantification of 2.5 ug / mL and 5.0 ug / mL, respectively. The recovered from EGCG in a reagent blank was 89 ± 9%, while, added to the product, was 60.1 ± 3.52 ug / g, due to interactions with the matrix. Repeatability studies (RSD) achieved for the standard and the sample were 1.29 and 10.67%, respectively. The reproducibility, estimated from Horwitz equation, showed a variation between 8-11%. EGCG assessment in product lots showed values ranging between 36.5 and 66.7 ug/ g. The analytical procedure developed, using EGCG as a chemical marker, proved to be reliable in the quality control of semi-solid products.

PROTECTION CONFERRED TO SWINE OFFSPRINGS INDUCED BY A VACCINE CANDIDATE OF PROTEIN SUBUNIT (E2) OF CLASSICAL SWINE FEVER VIRUS

Con el objetivo de evaluar la capacidad protectora conferida por los anticuerpos maternos de crías nacidas de reproductoras inmunizadas con un candidato vacunal de subunidad proteica E2, obtenido por transfección directa al epitelio glandular mamario de cabras, de un vector adenoviral contra el virus de la Peste Porcina Clásica (VPPC) frente al reto con una dosis de 10(4) PID50 (dosis infecciosa del 50% de los cerdos) de la cepa virulenta del VPPC «Margarita», se conformaron cuatro grupos de cerdos de la categoría crías de 34 días de edad promedio. El grupo 1 y 2 conformados por cinco cerdos con anticuerpos maternos transferidos pasivamente de madres inmunizadas con el candidato vacunal de subunidad proteica E2 y los grupos 3 y 4 (grupos controles), constituidos cada uno por tres cerdos seronegativos a Peste Porcina Clásica (PPC) mediante el ensayo de neutralización ligada a la peroxidasa (NPLA). Los grupos 1 y 3 se retaron por la vía intranasal, mientras los grupos dos y cuatro por la vía intramuscular. Los cerdos retados en presencia de anticuerpos maternos por la vía intranasal e intramuscular resultaron negativos a la viremia y mortalidad, mientras que los cerdos retados en ausencia de anticuerpos maternos se enfermaron y resultaron no protegidos frente a la viremia. El grupo control de cerdos retados por la vía intramuscular presentó un menor tiempo de instauración del proceso infeccioso con respecto a los cerdos retados por la vía intranasal.

Four groups of pigs of 34 days old were conformed in order to evaluate the protective capacity conferred for maternal antibodies to offspring from mothers vaccinated with a vaccine candidate of protein subunit E2, against Classical Swine Fever virus (CSFV), obtained for adenoviral vector transduced to the mammary gland of goats, against challenge with a highly pathogenic strain (Margarita) at doses of 10(4) PID50 (infective doses 50% pigs). Groups 1 and 2 were conformed by five pigs with passively transferred maternal antibodies from mothers vaccinated with a vaccine candidate of protein subunit E2, and groups 3 and 4 (control groups ), conformed by three seronegative pigs to Classical Swine Fever (CSF), determined by neutralizing peroxidase linked assay (NPLA). The groups 1 and 3 were challenged by intranasal route and groups 2 and 4 by intramuscular route. The pigs with passively transferred maternal antibodies from mothers vaccinated and challenge by intranasal and intramuscular route were negative to viraemia and mortality; while those from the control groups were found sick and not protected for viraemia after challenge. The control group challenge for intramuscular route presented a smaller time of onset of the infectious process with respect to the group challenged by intranasal route.

EPIDEMIOLOGICAL EVALUATION OF THE BREATHING PROCESS OF BACTERIAL IN REPLACEMENT LAYING HENS

Con el objetivo de evaluar la situación epidemiológica de los procesos respiratorios bacterianos en reemplazos de ponedoras, se realizó un estudio epidemiológico retrospectivo durante el periodo comprendido entre enero del 2004 hasta diciembre del 2008, en dos empresas comerciales. A partir de la captación de la información asentada en los registros oficiales del Instituto de Medicina Veterinaria provincial se calculó la mortalidad relativa por grupo de enfermedades. Se calculó la mortalidad relativa por coriza infecciosa y síndrome respiratorio crónico, mediante el programa WinEpi TASAS versión 2.0. Para conocer el comportamiento temporal de los eventos de salud referidos se realizó en STATGRAPHICS PLUS 5.1 un análisis de series cronológicas, determinando la tendencia, la variación estacional y la ciclicidad. Se aplicó la prueba Kruskal Wallis y U de Mann-Whitney (paquete estadístico Minitab 14) para comparar la mortalidad relativa de cada categoría entre los meses y las épocas del año. Se demostró que el grupo de enfermedades más relevantes en el reemplazo de ponedora fueron las enfermedades respiratorias bacterianas, que constituyó la primera causa de muertes en los cuatro primeros años analizados. Se observó una marcada variación estacional y variación cíclica en la época de lluvia en ambos procesos respiratorios para esta categoría en los años analizados.

With the objective of evaluating the epidemic situation of the breathing processes of bacterial in of replacement of egg-laying hens, a retrospective epidemiological study was carried out during the period between January, of 2004 to December, 2008, in two commercial companies enterprises. From the reception of the information seated in the official registrations of the provincial Veterinary Medicine Institute, the relative mortality per group of diseases were calculated. It were calculed the relative mortality for infections Coryza and chronic respiratory syndrome, you by means of the WinEpi TASAS version 2.0 program. In order to know the temporary behavior of the health events referred, a analysis of chronological series was carried out in STATGRAPHICS PLUS 5.1, determining tendency, seasonal variation and ciclicidad. Kruskal Wallis and U the Mann-Whitney (Minitab 14 statistical package) test were applied in order to compare the relative mortality between months and season of the year. It was demonstrated that the group of more excellent diseases in the replacement of egg-laying they were the breathing bacterial diseases, that it constituted the first cause of deaths in the first four analyzed years. A marked seasonal and recurrent variation was observed in the rainy season in both respiratory processes for this category in the years analyzed.

**ANTIPARASITIC EFFICACY OF IVERMECTIN AND CLOSANTEL IN NATURALLY Oestrus ovis INFESTED SHEEPS**

Con el objetivo de comparar la eficacia de la ivermectina y el closantel en el control de las larvas de Oestrus ovis, en ovinos adultos de una finca de la provincia de Guantánamo, se seleccionaron 27 animales de raza Pelibuey sobre la base de los signos clínicos que hacían sospechar de una infestación por el agente. Los ovinos se distribuyeron al azar en cuatro grupos de seis animales cada uno. En el día del inicio del ensayo (día 0), cada grupo recibió un tratamiento diferente: grupo (G1), tratado con ivermectina inyectable al 1% en dosis de 200 mcg/kg (1 mL/50 kg) por vía subcutánea; grupo (G2), tratado con closantel oral al 5% en dosis de 2 mL por cada 10 kg de peso; grupo (G3) testigo no tratado, inyectado con solución salina (1mL /50 kg) y el grupo (G4) centinela. Este último fue sacrificado el día 0 para estimar la carga parasitaria; todos los animales de los grupos restantes (G1, G2 y G3) fueron sacrificados el día 28 post tratamiento. La eficacia, calculada como el por ciento de reducción de larvas vivas en los grupos medicamentados respecto al control, resultó 100% en ambos antiparasitarios (G1 y G2). Se concluye que las dos drogas evaluadas fueron altamente eficaces en el control de los diferentes estadios larvarios de O. ovis.

The aim of this study was to compare the efficacy of ivermectin and closantel for controlling larvae Oestrus ovis in natutrally infested adult sheeps. To carry out this experiment, 27 Pelibuey animals, from a farm of Guantánamo province, were selected based on clinical signs, suspicious of an infestation by the agent. Those sheeps were random allotted into four groups of six animals each. At the beginning of the experiment (day 0), each group received a different treatment: group (G1), treated with 1% ivermectin injection at doses of 200 mcg / kg (1 mL/50 kg) subcutaneously (SC); group (G2), treated with a dose of 2 mL per 10 kg weight of oral closantel 5%; group (G3) untreated control, injected with saline (1 mL/50 kg) and group (G4) sentinel. This latter group was sacrificed on day 0 to estimate the parasite load. All animals from the other groups (G1, G2 and G3) were sacrificed on day 28 post-treatment. The efficacy of drugs used, based on the percentage reduction of live larvae with respect to the infested control animals, was 100% in both cases (G1 & G2). It is conclude that both drugs tested were highly effective for controlling the different larval stages of O. ovis.

**LESION FREQUENCY IN EXTERNAL GENITALS OF BOTTLENOSE DOLPHINS Tursiops truncatus IN THE NORTH-CENTRAL KEYS OF CUBA**

Entre las enfermedades virales de más reciente diagnóstico que afectan los delfines Tursiops truncatus se describe la Papilomatosis, una entidad tumoral generalmente benigna que afecta piel y mucosas de diferentes zonas del cuerpo, tanto de animales acuáticos como terrestres incluido el hombre. Con el objetivo de determinar la frecuencia de presentación de las lesiones en genitales externos de delfines Tursiops truncatus en zonas de la cayería norte central de Cuba, se estudiaron 263 delfines en el período comprendido entre los años 2000 y 2010. Mediante la identificación clínica de lesiones verrucosas compatibles con Papilomatosis en genitales externos, se pudo determinar que el 30% de animales presentaron lesiones típicas de la enfermedad. La frecuencia de presentación de estas lesiones fue superior en machos en relación con las hembras (20% vs. 10%, p<0,001), observándose que los individuos inmaduros son más propensos a presentar la enfermedad que los adultos (25% vs. 5%). Este trabajo reporta por primera vez en las costas cubanas, y por segunda ocasión para la costa atlántica, la presencia de Papilomatosis en genitales externos de delfines nariz de botella en vida libre, con una alta y sostenida frecuencia de aparición.

Among the most recent described viral diseases for bottlenose dolphins Tursiops truncatus is Papillomatosis; a kindly tumour entity that affects skin and mucosa of different parts in the body of aquatic and terrestrial animals, including humans. With the goal to determine the presentation frequency of these lesions in external genital, 263 bottlenose dolphins from north central coast of Sabana-Camaguey archipelago were studied between the years 2000 and 2010. Based on clinical identification of external warty lesions compatible with Papilloma, the 30% of all animals presented them. The presentation frequency of these lesions in males was higher than in females (20% vs. 10%, p<0,001). Besides, it was evident that immature animals are more susceptible to the disease than adults (25% vs. 5%). This is the first report in Cuban waters and the second in Atlantic waters, about the presence of Papilloma in genital of wildlife bottlenose dolphins, with a high and sustained presentation frequency.

CASE REPORT OF BOVINE ENZOOTIC HEMATURIA ASSOCIATED TO THE INGESTION OF Pteridium arachnoideum IN THE REGION OF SAN MIGUEL DE BOLIVAR, BOLIVAR PROVINCE, ECUADOR

El objetivo del presente trabajo fue demostrar que la Hematuria Enzoótica Bovina (HEB) está presente en el país. Se escogió la región de San Miguel de Bolívar, provincia Bolívar. La investigación incluyó encuestas a productores sobre signos clínicos y muertes con hematuria y posibles factores de riesgo asociados a presencia de helechos; estudios clínicos y de laboratorio, hematológicos, sangre en orina, detección de hemoparásitos. Se tomaron muestras de helechos contaminantes para la identificación botánica. Se midieron las coordenadas geográficas para georeferencia. Se identificó el helecho invasivo como Pteridium arachnoideum mas exuberante en una altitud media de 1698 m.s.n.m con un rango entre 1254 y 2210 m.s.n.m coincidente con las fincas afectadas. El análisis de riesgos arrojó que la mortalidad asociada a la hematuria solo ocurrió en presencia de P. arachnoideum y una tendencia (P>0.1) a presentar un alto Odds ratio (14) entre la presencia del helecho y los síntomas clínicos. Se comprobó un cuadro clínico de largo curso conducente a la caquexia, sin fiebre, con mucosas aparentes hipocoloreadas que se correspondió en los complementarios con anemia de variada intensidad y un cuadro leucocitario deprimido. Se demostró la presencia de sangre en la orina en los rebaños afectados. Los análisis fueron negativos a hemoparásitos. Los resultados arrojaron fuertes evidencias de la presencia de HEB en esta zona de Ecuador.

The objective of this study was to demonstrate that the Bovine Enzootic Haematuria (BHE) is present in the country. We chose the San Miguel de Bolivar, Bolivar Province. The research included surveys of producers on clinical signs and deaths with haematuria also possible risk factors associated to the presence of ferns, also laboratory analysis of the blood, presence of blood in urine and detection of blood parasites. Ferns were sampled for botanical identification. Geography coordinates were measured for georeference. The fern was identified as Pteridium arachnoideum present at an average altitude of 1698 m.o.s.l with a range between 1254 and 2210 m.o.s.l all coincident with the affected farms. Risk analysis showed that the mortality associated with haematuria occurred only in the presence of P. arachnoideum and a tendency (P> 0.1) to have a high odds ratio (14) between the presence of fern and clinical symptoms. It was also confirmed a long clinical course leading to cachexia without fever, with apparent hypo colored mucosa. The clinical analysis showed anemia with varied intensity and a depressed white blood cell picture. It was demonstrated blood in the urine in the affected herds. The tests were negative for blood parasites. The results showed strong evidence of the presence of HEB in this region of Ecuador.

REPRODUCTIVE PERFORMANCE OF PREGNANT SOWS IMMUNIZED WITH E2 VACCINE CANDIDATE AGAINST CLASSICAL SWINE FEVER VIRUS

En un rebaño porcino se procedió a la aplicación de un candidato vacunal de subunidad E2, contra la Peste Porcina Clásica (PPC). Las cerdas recibieron un esquema vacunal de dos dosis (25 µg), con intervalo de 21 días. Con el fin de evaluar la seguridad del producto sobre la gestación en curso, en cerdas hasta el segundo tercio de la gestación, se comparó su desempeño reproductivo con el de un grupo de cerdas en el último tercio de la gestación que no fueron vacunadas. Se registraron los datos referidos a repeticiones de celo, abortos, número de crías por parto y crías destetadas por cerda. La comparación entre ambos grupos no mostró diferencias para los parámetros evaluados. El candidato vacunal de subunidad E2 contra la peste porcina clásica resultó segura al aplicarse en cerdas gestantes hasta el segundo tercio de la gestación.

Vaccination was applied in a pig herd using an E2 vaccine candidate against classical swine fever (CSF). The sows received a two-dose vaccination schedule (25 µg) at intervals of 21 days. To evaluate the safety of E2 vaccine candidate in pregnant sows up to the second third of gestation, the reproductive performance of these sows was compared with a group of non-vaccinated sows in the last third of the gestation period. Data about repetitions of zeal, abortions, number of offsprings per litter and pups weaned per breeding by sow were registered. When comparing parameters between groups there were no differences. E2 vaccine candidate against CSF is safe when it is applied to pregnant sows until the second third of pregnancy.

II MEETING OF THE CARIBVET TICKS AND TICKS-BORNE DISEASES WORKING GROUP