Revista de Salud Animal

CENLAC: A 25 year experience on science, innovation and extension to the dairy service from the Cuban perspective

Linear particulate b1-3 glucan and other formulations based on b glucan and its effects on cattle and poultry

Se hace una valoración general del empleo de diferentes formulaciones basadas en b glucano en bovinos y aves. Las formulaciones evaluadas fueron; b 1-3 glucano particulado lineal (b 1-3gpl), b1-3/1-6 D glucano y b-glucano con diferentes grados de purificación (1.8% y 70%) combinado con ascorbil-2-polifosfato. Los criterios de evaluación variaron, pero todos mostraron el impacto favorable de las formulaciones sobre indicadores de la respuesta inmune, la respuesta frente a desafíos experimentales, e indicadores productivos y de salud. El b 1-3gpl estimuló la actividad de células fagocíticas en bovinos así como disminuyó el desarrollo de procesos neumónicos en terneros y novillas. La infusión intramamaria de b 1-3 glucano incrementó la expresión del MHC II. El b-glucan derivado de la pared celular de levadura: 1.8-2% + Ácido ascórbico provocó incremento de células mononucleares periféricas. En pollos y gallinas tratadas, el empleo de formulaciones basadas en b 1-3gpl, incrementó la respuesta humoral a las vacunas y el desempeño productivo y viabilidad. Se apreció un comportamiento favorable incluso en aves sometidas a regímenes de manejo variable. El b1-3/1-6 D glucano provocó en pollos el incremento de IgAs e IgG sérica. Se evidencia el efecto positivo de los b glucanos sobre la inmunidad, la salud y expresión de caracteres productivos independientemente de la formulación elaborada, el esquema de aplicación empleado y la especie. A partir de las evidencias experimentales de varios grupos de investigación, se señala un posible mecanismo de acción que sustente los resultados. Los datos presentados demuestran las potencialidades del empleo de las formulaciones en b glucano en bovinos y aves.

In this paper, there is a general assessment about the use of different formulations based on b glucan in cattle and poultry. The formulations were evaluated; b 1-3 linear glucan particulate (b 1-3GPL), b1-3/1-6 D glucan and b-glucan with different purification degrees (1.8% and 70%) combined with ascorbyl-2 -polyphosphate. The evaluation criteria varied, but all of them showed the favorable impact of formulations on immune response indicators, the response to experimental challenges and production and health indicators. b 1-3 gpl stimulated the activity of phagocytic cells in cattle and reduced the development of pneumonic processes in calves and heifers. b 1-3 glucan intramammary infusion increased the expression of MHC II. The b-glucan derived from yeast cell wall: 1.8-2% + ascorbic acid caused increase of peripheral mononuclear cells. In chickens and hens treated, the use of formulations based on b 1-3GPL increased the humoral response to vaccines and the productive performance and viability. A favorable behavior was observed even in birds subjected to variable management regimes. b1-3/1-6 D glucan in chickens caused the increase of IgAs and serum IgG. It demonstrates the positive effect of b glucans on immunity, health and productive character expression regardless the formulation developed, the application schema used and the species. From the experimental evidences of several research groups, a possible action mechanism supporting the results has been pointed out. The data presented demonstrate the potential of using b-glucan formulations in cattle and poultry.

Effect of cryopreservation of sheep semen related to its viability and acrosomal status

In the present research, the effects of cryopreservation on the viability and acrosomal status of sheep sperms were analyzed. Forty five ejaculates were obtained by the artificial vagina method for analysis, evaluating in fresh semen the following characteristics: volume (Vol), progressive motility (PM), viability percentage (Viab), normal morphology (NM), spermatic concentration (Concentr); as well as its viability and acrosomal status, The last two parameters were evaluated staining with fluorescein isothiocyanate conjugated with Arachis hypogaea lectin and propidium iodide (FITC-PNA/IP), in which there were different patterns of staining: live sperms without acrosomal reaction (VsRA), live with acrosomal reaction (VcRA), dead without acrosomal reaction (MsRA) and dead with acrosomal reaction (McRA), obtaining averages of: 1.2±0.3 ml, 88.0±3.4%, 91.4±3.8%, 94.2±2.9%, 1768.1±5.5 x106/ml, 76.7±5.5%, 7.6±2.7%, 11.2±4.1% and 4.5±2.6% respectively. Semen was frozen in a commercial diluent (Triladyl(r)) and packaged in 0.5 ml straws at a concentration of 150x106/ml in liquid nitrogen for 8 days, thawed at 37°C for 60 seconds. In post-thawed semen evaluation, the following values were determined: PM= 37.4±5.3%, Viab= 67.5±4.7, NM= 79.5±5.7, VsRA= 26.9±7.3%, VcRA= 29.2±6.4%, MsRA= 27.7±7% y McRA= 15.9±6.2%, obtaining statistically significant differences (p<0.05) caused by cryopreservation effects. It is concluded that although viability and acrosomal status of sperm are affected by cryopreservation, live sperm without acrosomal reaction can be used in assisted reproduction techniques.

En la presente investigación, se analizaron los efectos de la criopreservación sobre la viabilidad y el estado acrosomal de espermatozoides ovinos. Se obtuvieron 45 eyaculados por el método de vagina artificial para el análisis, evaluando en semen fresco las siguientes características: volumen (Vol), motilidad progresiva (MP), porcentaje de viabilidad (Viab), morfología normal (NM), concentración espermática (Concentr); así como su viabilidad y el estado acrosomal, Los dos últimos parámetros se evaluaron usando tinción con isotiocianato de fluoresceína conjugada con Arachis hypogaea lectina y yoduro de propidio (FITC-PNA/IP), en los que había diferentes patrones de tinción: espermatozoides vivos sin reacción acrosomal (VsRA), vivos con reacción acrosomal (VcRA), muertos sin reacción acrosomal (MsRA) y muertos con reacción acrosomal (McRA), obteniéndose un promedio de: 1,2 ± 0,3 mL 88,0 ± 3,4%, 91,4 ± 3,8%, 94,2 ± 2,9%, 1768,1 ± 5,5 x106/mL 76,7 ± 5,5%, 7,6 ± 2,7%, 11,2 ± 4,1% y 4,5 ± 2,6%, respectivamente. El semen se congeló en un diluyente comercial (Triladyl (r)) y se empacó en pajuelas de 0,5 mL a una concentración de 150x106/ml en nitrógeno líquido durante 8 días, descongeladas a 37°C durante 60 segundos. En la post-evaluación del semen descongelado, se determinaron los valores siguientes: MP = 37,4 ± 5,3%, Viab = 67,5 ± 4,7, NM = 79,5 ± 5.7, VsRA = 26,9 ± 7,3%, VcRA = 29,2 ± 6,4%, MsRA = 27,7 ± 7% y McRA = 15,9 ± 6,2%, obteniéndose diferencias estadísticamente significativas (p <0,05) causadas por los efectos de la criopreservación. Se concluye que, a pesar de que la viabilidad y el estado acrosomal de los espermatozoides se ven afectado por la criopreservación. Los espermatozoides vivos sin reacción del acrosomal se pueden utilizar en las técnicas de reproducción asistida.

Post-thaw acrosomal viability and reaction in sperm obtained from equine epididymis tail

In order to evaluate the post-thaw effect on acrosomal viability and reaction of sperm collected from equine epididymis tail, 62 testes were collected and transported at 4°C. Epididymis was dissected to perform the retrograde flushing of the epididymis tail , using 10 mL of a diluent based on skim milk (INRA 82). The diluent obtained with the spermatic content was recovered in graduated collecting tubes and 1mL of each sample was taken to be evaluated. For evaluations, the samples having a minimum of 30% of progressive motility were selected. The evaluations were on: percentage of live sperm, normal morphology, sperm concentration, percentage of live sperm without acrosomal reaction (VsRA) and live with acrosomal reaction (VcRA), evaluating this indicator with FITC-PNA staining and propidium iodide (PI). Averages of 53.2%, 72.7%, 82.9%, 507.3X106, 65.3% and 6.0% were respectively obtained. Subsequently, samples were packed into 0.5 ml straws at a 100x106 concentration, frozen in liquid nitrogen and stored for 8 days. Thawing was performed at 38°C for 37 seconds, resulting for sperm motility, percentage of live sperm, normal morphology and VcRA VsRA the following values: 26.3%, 60.9%, 73.8%, 43.4% and 14.2%, respectively. Although all studied sperm quality values were affected by cryopreservation (P <0.05), a 43.4% of cells was recovered with characteristics making them suitable for use in biotechnological applications of assisted reproduction.

Con el objetivo de evaluar el efecto de la congelación sobre la viabilidad y reacción acrosomal de espermatozoides obtenidos de cola de epidídimo de equinos se recolectaron 62 testículos los que fueron transportados a 4°C., se diseccionó el epidídimo, para realizar el lavado retrógrado de la cola de epidídimo, utilizando 10 ml de un diluyente a base de leche descremada (INRA 82). El diluyente obtenido con el contenido espermático fue recuperado en tubos colectores graduados, se tomó 1 ml de cada muestra para ser evaluadas. Para las evaluaciones se seleccionaron las que presentaran como mínimo 30.0% de motilidad progresiva, a éstas se les evaluó: porcentaje de espermatozoides vivos, morfología normal, concentración espermática y porcentaje de espermatozoides vivos sin reacción acrosomal (VsRA) y vivos con reacción acrosomal (VcRA) evaluando este indicador con la tinción FITC-PNA y Ioduro de propidio (IP); obteniendo promedios de 53.2%, 72.7%, 82.9%, 507.3X106, 65.3% y 6.0%, respectivamente. Posteriormente las muestras se envasaron en pajillas de 0.5 ml en concentración de 100X106 y se congelaron en nitrógeno líquido, almacenándose durante 8 días. La descongelación se realizó a 38°C., por 37 segundos, obteniendo como resultado para motilidad espermática, porcentaje de espermatozoides vivos, morfología normal, VsRA y VcRA los siguientes valores: 26.3%, 60.9%, 73.8%, 43.4% y 14.2%, respectivamente. Aunque todos los valores de calidad espermática estudiados fueron afectados por la criopreservación (P<0,05), se recuperaron un 43.4% de células con características que las hacen aptas para su empleo en aplicaciones biotecnológicas de reproducción asistida.

Active and passive surveillance of bovine spongiform encephalopathy in herds introduced in Cuba

En Cuba,el programa de vigilancia activa y pasiva de la encefalopatía espongiforme bovina se implementa en el mes de noviembre del año 2002, con su generalización en todo el territorio nacional. El presente estudio muestra los resultados obtenidos en la vigilancia activa y pasiva de la encefalopatía espongiforme bovina en rebaños de bovinos introducidos en el país, procedentes de países definidos como de riesgo controlado. Durante el período del 2005 al 2010 se investigaron 219 encéfalos bovinos pertenecientes a ambos tipos de vigilancia, cumpliendo con los datos de remisión establecidos y de acuerdo al tipo de vigilancia. Se emplearon las técnicas diagnósticas de histopatología e inmunohistoquímica de forma simultánea y se determinaron las diferentes causas luego de la realización del diagnóstico diferencial de la enfermedad y el establecimiento del diagnóstico confirmativo. Todos los casos investigados resultaron negativos a la enfermedad por la ausencia de lesiones compatibles. A partir de la realización del diagnóstico diferencial de la enfermedad y la emisión del diagnóstico confirmativo se determinan 9 causas fundamentales, siendo las principales por hemoparasitosis, desnutrición e infecciones puerperales. Se demuestra que no hay evidencia de la presencia de la enfermedad en los rebaños de bovinos introducidos en el país.

In Cuba, the active and passive surveillance program of bovine spongiform encephalopathy (BSE) was implemented in November 2002, with its generalization in all national territory. This study presents the results obtained in the active and passive surveillance of BSE in herds introduced in the country, from countries defined as controlled risk. During the period 2005-2010, two-hundred nineteen brains belonging to both types of surveillance, were analyzed fulfilling with the remission data established and according to the types of surveillance. Histopathology and immunochemistry techniques were used in a simultaneous way and the different causes were determined after carrying out the differential diagnosis of the disease and the establishment of the confirmative diagnosis. All the cases researched were negative to the diseases due to the absence of compatible lesions. From the differential diagnosis, nine main causes were determined in the confirmative diagnosis. The main ones were hemoparasitosis, malnutrition and puerperal infections. In the present study, it has been demonstrated that there is no evidence about the presence of the disease in bovine herds introduced in the country.

**Serological simultaneity of Neospora caninum with Brucella abortus and infectious bovine rhinotracheitis and viral diarrhea viruses in herds from Hidalgo, Mexico**

El objetivo del presente trabajo fue determinar la seroprevalencia de Neospora caninum en establos bovinos lecheros del estado de Hidalgo, México y la coexistencia serológica con Brucella abortus y los virus de la rinotraqueitis infecciosa bovina y diarrea viral bovina. Se tomaron al azar 500 muestras sanguíneas de vacas lecheras, raza Holstein- Freisan en producción por venopunción, para su análisis por la técnica inmunoenzimática ELISA. La seropositividad a N. caninum fue 54.2% (271/500). La coexistencia serológica de N. caninum y B. abortus y los virus de la rinotraqueÍtis infecciosa bovina (RIB) y diarrea viral bovina (DVB) resultó en 21.2% (106/500), 30.6% (153/500) y 33.6% (168/500) respectivamente. Estos datos advierten sobre la elevada existencia y coexistencia de anticuerpos circulantes contra N. caninum con la serología de otros agentes, por lo que es fundamental contar con un programa integral de manejo sanitario de hato que se traducirá en una mayor eficiencia en la producción.

The objective of this study was to determine the seroprevalence of Neospora caninum in the state of Hidalgo, Mexico dairy cattle stables and the serological coexistence with Brucella abortus and bovine infectious rhinotracheitis and bovine viral diarrhea viruses. Five hundred blood samples of Holstein - Freisan dairy cows were taken randomly by venipuncture, for analysis by immunoenzymatic test (ELISA). Seropositivity to N. caninum was 54.2% (271/500). The serological coexistence of N. caninum and B. abortus and infectious bovine rhinotracheitis (IBR) and bovine viral diarrhea viruses (BVD), resulted in 21.2% (106/500), 30.6% (153/500) and 33.6% (168/500), respectively. These data warn about the elevated existence and co-existence of circulating antibodies against N. caninum with the serology of other agents, thus it is essential to have a comprehensive program of sanitary herd management, which will result in greater production efficiency.

**Diagnostic of Babesia bovis in buffaloes from the western region of Cuba by an nPCR assay**

Este trabajo se realizó con el objetivo de determinar si los búfalos en el Occidente de Cuba son portadores de la infección por Babesia bovis, empleando un ensayo de PCR Anidada (nPCR). Se procesaron 222 muestras de ADN, extraído de sangre de búfalos, de diferentes edades, procedentes de siete granjas de la región occidental de Cuba, a los que también se les realizó frotis sanguíneo. Como resultado encontramos que todas las muestras resultaron negativas al frotis sanguíneo. Sin embargo, 94 de ellas (42,1%) resultaron positivas en el nPCR, visualizándose bandas de 298pb. La infección estuvo presente en animales de todas las granjas y de las cuatro categorías estudiadas. Se secuenció el producto del nPCR de una muestra positiva. La secuencia obtenida se depositó en el GenBank y se comparó con otras secuencias disponibles en diversas bases de datos, verificándose elevada identidad con respecto a aislados geográficos de B. bovis. Se concluye que los búfalos en Cuba son portadores de la infección por Babesia bovis.

The objective of this work was to determine if water buffaloes from the western region of Cuba are carrier of Babesia bovis infection, using a nested PCR (nPCR) test. Two hundred twenty two DNA samples, extracted from buffalo blood at different ages, from six farms in the western region of Cuba were processed. Visualization of blood smear in the optical microcopy was previously carried out. The results showed that all the samples were negative to blood smear; however, 94 (42.1%) samples were positive in the nPCR, visualizing bands of 298 pb. Infection was present in animals from all farms and categories studied. A positive nPCR sample was sequenced and such sequence was deposited in the GenBank, comparing it with others available in diverse databases. Its high identity was verified with several geographical isolates of B. bovis. It is concluded that water buffaloes in the western region of Cuba are carrier of Babesia bovis infection.

Genetic polimorphism in growth hormone receptors and prolactin in Siboney de Cuba: Development of methodologies

Se han realizado estudios previos para la determinación del genotipo del SNP en el exón ocho del gen receptor de la hormona del crecimiento (GHR), causante de la sustitución aminoacídica F279Y y el SNP en el exón tres del gen receptor de la prolactina (PRLR) que provoca la sustitución aminoacídica S18N. Se describe que ambos polimorfismos están fuertemente asociados al rendimiento y componentes lácteos. Nuestro objetivo fue describir dos nuevas metodologías para identificar dichos polimorfismos y determinar las frecuencias génicas para ambos loci en la raza Siboney de Cuba (N=130). Las metodologías propuestas fueron la amplificación creando el sitio de restricción (ACRS) en el locus GHR y la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) combinada con polimorfismo de longitud de los fragmentos de restricción (RFLP) en el locus PRLR. Se identificaron los tres genotipos en ambos loci, con frecuencias en el locus GHR de 0.517, 0.428 y 0.025 para los genotipos FF, FY y YY respectivamente, mientras que la frecuencia de los genotipos SS, SN y NN fueron de 0.686, 0.24 y 0.074 en el locus PRLR. Ambos loci se encuentran desviados de la condición de equilibrio Hardy-Weinberg (p<0.05).

There are several previous studies on the typing of SNP in exon eight of the growth hormone receptor gene (GHR) causing F279Y amino acid substitution, and SNP in exon three of the prolactin receptor gene (PRLR) causing S18N amino acid substitution. Both polymorphisms have been strongly associated with milk yield and milk components. The aim of the present study was to describe two new methods to identify these polymorphisms and determine gene frequencies for both loci in the breed Siboney de Cuba (N = 130). The genetic polymorphism of the GHR locus was detected by amplification creating restriction sites (ACRS), and the genetic polymorphism of the PRLR locus was detected by polymerase chain reaction (PCR) combined with restriction fragment length polymorphism (RFLP). Three genotypes were identified in both loci, with frequencies in the GHR locus of 0.517, 0.428 and 0.025 for genotypes FF, FY and YY respectively; and the frequency of genotypes SS, NS and NN were 0.686, 0.24 and 0.074 in the PRLR locus. Both loci do not fit Hardy-Weinberg equilibrium in this population (p <0.05).

Thiocyanate content in raw milk under the american tropic conditions in relation to the activation of the lactoperoxidase system

The potential risks in the use of thiocyanate salt for the activation of the Lactoperoxidase System (LPs) have been strongly discussed at international level. This study approaches different factors associated to variations of the thiocyanate ion concentrations in milk under the tropic conditions. Mean thiocyanate concentrations in bulk milk are between 0,10-0,15 mmol/liter, with a general mean of 0,140 mmols/L, which indicates that the exogenous activation of the LPs can be done with a lesser salt quantity and that the maximal natural concentration is 2,4 times higher than that established by the guidelines about its use. A criterion regarding of overdose, for the control of use of the LPs is established. Under these conditions, activation is safe and does not involve toxicological risks for consumers.

Los riesgos potenciales en el uso de una sal de tiocianato para activar el sistema lactoperoxidasa (LP), es un tema de discusión a nivel internacional. El estudio aborda los diferentes factores asociados a la variación de las concentraciones del ion tiocianato en la leche en condiciones del trópico. La concentración media de tiocianato en mezclas se encuentran entre 0,10-0,15 mmoles/litro, con una media general de 0,140 mmoles/L, lo que indica que la activación exógena del sistema LP se puede realizar con una cantidad menor de la sal y que la máxima concentración natural es 2,4 veces superior al establecido por las directrices de uso. Se establece un criterio de sobredosificación para el control de uso del sistema LP. Bajo estas condiciones la activación es segura y no entraña riesgo toxicológico para los consumidores.

**Antimicrobial resistance in Salmonella enterica subsp. enterica strains isolated in imported chicken meat**

La carne de ave importada contiene peligros como Salmonella, la cual pude conllevar a riesgos en la población consumidora. Este estudio se llevó a cabo con el fin de detectar la presencia de cepas de Salmonella enterica subsp. enterica resistente a los antibióticos en carnes de ave importada, que pueden pasar a la cadena alimentaria. Se analizaron 3132 muestras. La investigación se realizó según metodología establecida en normas cubanas. Se demostró el peligro Salmonella enterica subsp. enterica en carnes de aves importadas. Los serogrupos más frecuentes correspondieron a C2, B y D. Las cepas de Salmonella enterica subsp. enterica aisladas de las carnes de ave importadas mostraron resistencia antimicrobiana en una alta proporción.

Imported chicken meat contains hazards like Salmonella which could lead to risks for consumer population. This study was carried out in order to detect the presence of Salmonella enterica subsp. enterica strains, resistant to antibiotics in imported chicken meat, which can pass to the food chain. Three thousan one hundred thirty-two samples were analyzed. This research was carried out according to the methodology established by the Cuban Standards. The hazard caused by Salmonella enterica subsp. enterica in imported chicken meat was demonstrated. The most frequent serogroups were C2, B and D. Salmonella enterica subsp. enterica strains isolated in imported chicken meat showed a high antimicrobial resistance.

Isolation of swine influenza virus in Cuba

Con el fin de realizar el aislamiento del virus de la influenza, porcina se seleccionaron 10 muestras de tejido pulmonar de un total de 49 que resultaron positivas por RT-PCR en tiempo real. El aislamiento se realizó en embriones de pollo con resultados positivos en 4 de las 10 muestras inoculadas. De estas cuatro muestras tres fueron identificadas como virus de influenza pandémicos (H1N1). Los resultados de este trabajo constituyen el primer reporte de aislamiento del virus de influenza porcina en las poblaciones de cerdos de Cuba.

In order to accomplish swine influenza virus isolation, 10 tissue lung samples were selected from 49 real time RT-PCR positive samples. Lung homogenate sample were inoculated into 10 day old chicken eggs. Four viral isolates were obtained from the 10 samples selected. Three swine influenza virus isolates obtained were subtyped as pandemic influenza A virus H1N1. This study is the first report of swine influenza isolation in Cuban swine farms.

**Morphometric characterization of Bubalus bubalis oocytes in Cuba**

Con el objetivo de caracterizar morfométricamente los ovocitos de Bubalus bubalis, se evaluaron 274 complejos cúmulos-ovocitos, extraídos por el método de disección quirúrgica de los folículos superficiales de 48 ovarios. Los ovocitos se obtuvieron mediante la maduración in vitro, La captura de los mismos se realizó bajo visión estereoscópica con capilares y se procedió a removerlos de las células del cúmulo. Los indicadores evaluados fueron: diámetro total del ovocito, diámetro del citoplasma y espesor de la zona pelúcida. Los ovocitos se maduraron en TCM 199 con 10% de SFB durante 24 h a 37ºC. A las 24 horas de maduración in vitro se les realizaron las mismas mediciones bajo visión microscópica. Los datos se procesaron por prueba T para comparación de medias. Los valores obtenidos fueron para el diámetro total 154,61µm vs. 167,14µm, para el citoplasma 145,21µm vs. 148,46µm y para la zona pelúcida 7,85µm vs. 17,79µm (ovocitos inmaduros vs. maduros, respectivamente). Se evidenció que el incremento del diámetro total responde fundamentalmente al aumento del grosor de la zona pelúcida en 9,94 µm. Este tipo de caracterización se realiza por primera vez en Cuba para Bubalus bubalis y es parte de los elementos previos para la realización de biotecnologías relacionadas con el proceso reproductor.

In order to morphometrically characterize Bubalus bubalis oocytes, 274 oocyte-cumulus complexes were evaluated. They were extracted by the surgical dissection method of the superficial follicles of 48 ovaries. The oocytes were obtained by in vitro maturation. Their capture was carried out under stereoscopic vision with hair, removing the cumulus cells. The indicators evaluated were: total diameter of oocyte, cytoplasm diameter and thickness of the pellucid zone. Oocytes were matured in TCM 199 with 10% FBS for 24 hours at 37ºC. After 24 hours of in vitro maturation, the same measurements under microscopic vision were performed. Data were processed by t-test for mean comparison. The values obtained were: for the overall diameter: 154.61µm vs. 167.14µm, for cytoplasm: 145.21µm vs. 148.46µm and for the pellucid zone: 7.85µm vs. 17.79µm (immature oocytes vs. mature oocytes, respectively). It was evidenced that the overall diameter increase responds primarily to the thickness increase of the pellucid zone (PZ) at 9.94µm. This type of characterization has been carried out for Bubalus bubalis for the first time in Cuba, and it is part of the previous elements in performing biotechnologies related to the reproductive process.

**Amplification of genes codifying for VirB9, VirB10, conjugal transfer protein and elongation factor Tu in Anaplasma marginale Habana isolate**

Characterization of new Leptospira spp. isolates from Nicaragua Republic for the development of future antileptospirosic vaccine preparations

Reliable detection of mycoplasmas in cell cultures, sera and biopharmaceutical products of biomedical application