Revista de Salud Animal

Tendencies in diagnostic of bovine anaplasmosis

Anaplasma marginale es una Rickettsia que parasita los eritrocitos maduros del ganado bovino, provocando grandes pérdidas económicas en las regiones tropicales y subtropicales. La enfermedad se caracteriza por marcada anemia hemolítica, disminución del peso, aborto y en ocasiones la muerte. Los animales que logran recuperarse de la fase aguda de la enfermedad permanecen persistentemente infectados y se convierten en reservorio para la transmisión de la misma a los animales sanos, por lo que se hace necesario poder contar con técnicas de diagnóstico más sensibles para ser utilizadas en el movimiento internacional de ganado hacia zonas libres de la enfermedad, que permitan la detección de animales portadores, así como para conocer la prevalencia de la enfermedad en las regiones tropicales y subtropicales. Para el diagnóstico de la anaplasmosis se utilizan diferentes técnicas, dentro de las que se incluyen para la detección del agente, la tinción con Giemsa a los frotis sanguíneos; la inoculación de animales esplenectomizados, que constituye el estándar de oro del diagnóstico de la enfermedad y los métodos de diagnóstico molecular, los cuales se utilizan en la actualidad para el movimiento internacional de ganado, debido a su sensibilidad y especificidad. Para la detección de anticuerpos, la fijación del complemento fue muy utilizada hasta hace unas décadas. La aglutinación en tarjeta, la inmunofluorescencia indirecta y las pruebas ELISA son las más utilizadas para la detección de anticuerpos, pero muchas de estas técnicas utilizan antígenos crudos, contaminados con membranas del eritrocito, lo que da como resultado un número elevado de falsos negativos cuando se analizan animales persistentemente infectados. Los avances recientes y el desarrollo de nuevas metodologías de diagnóstico pueden proporcionar grandes ventajas en la mejora en el diagnóstico de esta entidad. En el presente trabajo se expone las tendencias que existen en el diagnóstico de Anaplasma marginale.

Anaplasma marginale is a Rickettsia infecting mature erythrocytes of cattle, causing great economic losses in tropical and subtropical regions. The disease is characterized by a marked hemolytic anemia, weight loss, abortion and sometimes death. Animals, which recover from the acute phase of the disease, stay persistently infected and become reservoir for transmission to healthy animals. There is a need of more sensitive diagnostic techniques to be used in the international movement of livestock towards disease free areas, which allow the detection of carrier animals, as well as to determine the prevalence of the disease in tropical and subtropical regions. For anaplasmosis diagnostic, different techniques are used, among them, agent detection, Giemsa staining to blood smears, inoculation of splenectomized animals, which is the gold standard for diagnosing the disease and the molecular diagnostic methods, which are currently used for the international movement of livestock, because of their sensitivity and specificity. For the detection of antibodies, a complement fixation has been extensively used since a few decades. Card agglutination, indirect immunofluorescence and ELISA tests are the most commonly used for the detection of antibodies, but many of these techniques use crude antigens, contaminated with erythrocyte membranes, which results in a high number of false negatives when persistently infected animals are analyzed. Recent advances and development of new diagnostic methodologies can provide great benefits in improving the diagnostic of this entity. This study discusses the trends existing in the diagnostic of Anaplasma marginale.

**Seroprevalence of Brucella abortus, Leptospira sp. and Neospora caninum in cattle, buffaloes and mixed farms, in the Department of Caqueta, Colombia**

Con el objetivo de determinar y comparar la prevalencia de anticuerpos a Brucella abortus, Leptospira sp. y Neospora caninum, se investigaron siete predios, dos de bovinos, dos bubalinos y tres mixtos; además se incluyeron tres instalaciones para la venta de búfalos. La prevalencia de anticuerpos fue mayor en bubalinos que en bovinos para las tres entidades estudiadas, Leptospira sp. (37.3% vs 28%); Neospora caninum (45.4% vs 12.5%) y Brucella abortus (11.9% vs, 5.3%). Hubo presencia de anticuerpos a los seis serovares tanto en bovinos como en bubalinos y los valores de seroprevalencia a los serovares Grippotyphosa y Hardjo, fueron superiores en las dos especies. La prevalencia de anticuerpos para leptospirosis fue superior en los predios simples, tanto en bovinos como en búfalos. En el caso de brucelosis, la seroprevalencia en los bovinos de predios mixtos fue superior al ser comparada con la obtenida en los simples con una Razón de Prevalencias (RP) de 6,8; (IC, 1,58-29,6); mientras que en los bubalinos fue superior en los simples (RP, 2,8; IC=1,18-5,71). En los bovinos, no hubo asociación entre la seroprevalencia a Neospora caninum y el tipo de predio; sin embargo, en los búfalos la seroprevalencia fue superior en los simples con una RP de 2,3 (IC=1,75-3,01). Se concluye que los búfalos y bovinos presentan altos niveles de anticuerpos a Neospora caninum y Leptospira sp. en todos los tipos de predios y áreas de venta y que aún existen rebaños afectados por Brucella abortus a pesar de los programas de control establecidos.

In order to determine and compare the prevalence of antibodies to Brucella abortus, Leptospira sp. and Neospora caninum, two cattle, two buffaloes and three mixed (both species) farms, were researched, besides including three buffaloes sale facilities. Antibody prevalence was higher in buffaloes than in cattle for the three studied agents, Leptospira sp. (37,3% vs 28%), Neospora caninum (45.4% vs. 12.5%) and Brucella abortus (11,9% vs. 5,3%). Antibodies were present at six serovars in both, cattle and water buffaloes and seroprevalence values for Hardjo and Grippotyphosa serovars were superior in both species. The prevalence of antibodies to leptospirosis was higher in simple premises in both cattle and buffaloes, and the seroprevalence to brucellosis in cattle of mixed farms was higher when compared with that obtained in simple farms with a prevalence ratio (PR) of 6,8; (CI, 1,58 to 29,6), whereas in buffaloes, the prevalence of antibody was higher in those single (OR, 2,8 , CI = 1,18 to 5,71 ). In cattle, there was not an association between the seroprevalence to Neospora caninum and the herd type, but in buffaloes seroprevalence was higher in simple farms with a RP of 2,3 (CI= 1,75 to 3,01). It is concluded that buffaloes and cattle have a high prevalence of antibodies to Neospora caninum and Leptospira sp. in all herds and sale facilities and there are still herds affected by Brucella abortus in spite of having the control programs established.

Energy supplementation and its effect on cholesterol levels and preovulatory hormonal profile in cows

Un balance energético negativo en vacas se traduce en un retraso en la ovulación postparto, por falta de metabolitos para secreción hormonal, afectando la rentabilidad de las producciones lecheras. El presente trabajo tiene como objetivo evaluar el efecto de la suplementación, con grasa protegida, sobre la concentración sanguínea de colesterol, progesterona, estradiol y hormona luteinizante preovulatoria en vacas en el municipio de Paipa, Boyacá. Se emplearon 12 vacas de raza Holstein mantenidas en pastoreo a base de kikuyo, trébol y falsa poa y con consumo de agua ad libitum; se formaron tres grupos al azar para el suministro de las siguientes dietas: Dieta control, D1: 200g de grasa protegida (Megalac-E®) y D2: 400g de grasa protegida. El periodo de suplementación fue de 60 días; la toma de muestras de sangre se realizó en el pico preovulatorio, examinado mediante evaluación ecográfica, aproximadamente entre 30 y 90 días postparto. Las muestras de sangre fueron enviadas al laboratorio para la cuantificación de cada parámetro. Las vacas suplementadas con grasa protegida evidenciaron un incremento en los niveles de colesterol, progesterona y estradiol, respecto a las del grupo control, con diferencias estadísticas (p<0,05) entre grupos. En cuanto a la hormona luteinizante (LH) se presentaron diferencias entre la D2 y los otros dos grupos (p<0,05). Se puede inferir que la inclusión de suplementos tales como la grasa protegida en la dieta de vacas recién paridas sirve de coadyuvante para la producción de hormonas gonadotrópicas y esteroides que están directamente relacionadas con la próxima ovulación.

A negative energy balance in cows results in a delayed postpartum ovulation, due to the lack of metabolites for hormone secretion, affecting the profitability of milk production. The aim of this work was to valuate the effect of protected fat supplementation on blood cholesterol concentration, progesterone, estradiol and LH preovulatory hormone in cows of Paipa municipality, Boyacá. Twelve Holstein cows were used; they were kept consuming kikuyu, clover and false poa pasture and water ad libitum. Three randomized groups were formed for the provision of the following diets: Control diet, D1: 200 g of protected fat (Megalac - E ®) and D2: 400 g of protected fat. The supplementation period was 60 days and blood sampling was examined in the preovulatory peak with ultrasound evaluation, approximately 30 to 90 days postpartum. Blood samples were sent to a laboratory for the quantification of each parameter. Protected fat supplemented cows showed an increase in cholesterol, progesterone and estradiol levels, regarding the control group with statistically significant differences (p<0,05) between groups; regarding LH, there were differences between D2 and the other two groups (p<0,05). The inclusion of supplements such as protected fat in the diet of fresh cows is as an adjuvant for the production of gonadotropic hormones and steroids that are directly related to the next ovulation.

Lesions associated to the Enzootic Bovine Hematuria (EBH) in animals of abattoir (slaughterhouse) of Bolivar province, Ecuador

Con el objetivo de estudiar las alteraciones anatomopatológicas en vejiga y esófago de bovinos enviados al matadero, se analizaron 228 animales procedentes de diferentes cantones de la provincia Bolívar, Ecuador. Para el análisis de los resultados de las lesiones macroscópicas en estos órganos, se clasificaron en cuatro grupos de acuerdo a la gravedad de las mismas. Las muestras que se tomaron para el estudio histopatológico se fijaron en solución de formol neutro tamponado al 10% y se procesaron por la técnica clásica de corte e inclusión en bloques de parafina y teñidos con hematoxilina y eosina. Las lesiones asociadas a la Hematuria Enzootica Bovina (HEB), fueron observadas en el 53,5% de los órganos estudiados en el camal de Babahoyo, lo que indica la alta frecuencia de presentación de las mismas. Los resultados morfopatológicos de los animales procedentes de las zonas ganaderas estudiadas, evidenciaron la presencia de lesiones y neoplasias de origen vascular y epitelial fundamentalmente, con diferentes grados de severidad (p<0,05) en vejiga urinaria 77,9%, esófago 14,7% y en ambos órganos el 7,4%, lo que confirma el diagnóstico clínico de animales afectados con esta enfermedad en la región.

With the objective of studying the anatomopathological alterations in bladder and oesophagus of bovine sent to the abattoir, 228 animals from different cantons of Bolivar province were analyzed. Macroscopic injuries in these organs were classified according to the gravity of lesions and grouped into four categories. The samples taken for the histopathological study were fixed in 10% buffered formalin, embedded in paraffin wax and stained with hematoxylin and eosin. The lesions associated to EBH were observed in 53.5% of the affected organs at Babahoyo slaughterhouse, which indicated the high frequency of their presentation. The morphopathological results of the animals from the affected areas evidenced the presence of injuries and neoplasias from vascular and epithelial origin, mainly with different severity degrees (p<0.05) in urinary bladder 77.9%, in oesophagus 14.7% and in both organs 7.4%, which confirm the clinical diagnosis of affected animals regarding this disease in the region.

Economic impact of oestrosis in Cuban sheep herds

Con el objetivo de determinar el impacto económico de la oestrosis en los rebaños ovinos de Cuba, se tomó como fuente de datos un periodo de seis años (2006-2011) de ocurrencia de brotes de la enfermedad. De acuerdo a la mortalidad y prevalencia observadas, se estimaron las pérdidas directas por disminución de la productividad debidas a dilación del periodo de crianza y mortalidad. Los resultados obtenidos revelan que el monto total de las pérdidas superó el millón de pesos en un área de estudio con una población susceptible de 139 536 individuos. Las pérdidas directas por la oestrosis, como costo de oportunidad, demostraron un margen considerable para planificar intervenciones de control o lucha contra la enfermedad, pues se pueden invertir hasta 7 pesos/ovino, lo cual superó varias veces el costo en medicamentos del tratamiento antiparasitario. La crianza de ovinos en la región estudiada es básicamente para producción de carne y como consecuencia de la enfermedad, expresada en esta producción, se pierden 472 kg de carne en pie por cada mil ovinos susceptibles.

The aim of this work was to assess the economic impact of oestrosis in the Cuban sheep herds affected. A data set of oestrosis outbreaks during six years (2006-2011) regarding relative mortality and prevalence was used for assessing disease loss. The direct disease cost exceeded a million of the local currency (pesos) on a susceptible population of 139 536 sheep. The cost opportunity for fighting or either controlling oestrosis was considered beneficial, because the antiparasitic price was lower concerning 7 pesos/sheep as disease impact. The Cuban sheep raising is mainly for meat production. As a consequence of the disease, there is a loss of 472 kg of sheep live weight/thousand susceptible animals.

Association between glycemia and some productive and healthy indicators in swine breeding

Se realizó una investigación en un centro multiplicador porcino de la provincia Mayabeque, con el objetivo de evaluar la asociación entre la glucemia y algunos indicadores productivos y de salud. Para ello, se controló en las crías las variables glucemia, peso al nacer, peso al destete, ganancia media diaria, temperatura rectal y mortalidad. Los niveles de glucosa se midieron al nacimiento y a los tres días posteriores a este. Para el procesamiento de los datos se realizó el análisis de los estadígrafos descriptivos y la prueba de regresión múltiple. Los resultados revelaron que la media de glucemia al nacimiento (4,02 mmol/l) fue inferior que a los tres días de nacido (5,72 mmol/l). Se obtuvo además, un 45,24% de crías con hipoglucemia y un 23% con bajo peso al nacer. El análisis de regresión mostró asociación entre la glucemia y el peso al nacimiento, peso al destete, temperatura rectal y mortalidad en crías porcinas.

A study was developed in a swine multiplier center of Mayabeque, with the objective of evaluating the association between glycemia and some productive and healthy indicators. Newborn piglets were selected for controlling blood glucose levels, birth weight, weaning weight, daily average weight gaining, rectal temperature and mortality. Glycemia levels were measured at birth and three days later. Multiple regression tests and analysis of descriptive statistics were carried out for processing data. The results revealed that blood average glucose levels at birth (4,02 mmol/l) were lower than at 72 hours later (5,72 mmol/l). A 45, 24% of hypoglycemic breeding and a 23% of low weight at birth were also observed. The regression analysis showed the influence of blood glucose levels on the birth weight, weaning weight, rectal temperature and mortality.

Comparison between an enzyme-linked immunosorbent assay and the microscopic agglutination test for the detection of leptospiral antibodies in dogs

Con el objetivo de comparar un ELISA indirecto elaborado a partir de Leptospira biflexa serogrupo Semaranga serovar Patoc, con la técnica de aglutinación microscópica (de su sigla en inglés MAT) en el diagnóstico serológico de la leptospirosis canina, se utilizaron 77 muestras de suero sanguíneo de caninos con sospecha de leptospirosis (Grupo 1) y 84 muestras de animales aparentemente sanos (Grupo 2), los cuales fueron investigados simultáneamente por el ensayo inmunoenzimático y por la técnica de aglutinación microscópica (MAT). Los valores de prevalencia obtenidos por el MAT y el ELISA, así como entre ambos grupos no mostraron diferencias significativas, lo que indica la coincidencia entre ambos métodos y la existencia de una amplia circulación de cepas de leptospiras en animales clínicamente sanos. Los serovares más frecuentes fueron Canicola e Icterohaemorrhagiae en el Grupo 1 y Canicola y Ballum en el Grupo 2. La técnica de ELISA indirecto en ambos grupos mostró una coincidencia con el MAT de 92.2% y 91.6% respectivamente. El ELISA evaluado mostró una sensibilidad relativa de 92,8% y una especificidad relativa de 91,8%, en el Grupo 1 y de 90,3% y 92,4% en el Grupo 2. El Coeficiente Kappa fue similar en ambos grupos (0,8) confirmando la concordancia entre ambas técnicas. Por los resultados obtenidos se recomienda continuar el desarrollo de este ELISA con el fin de utilizarlo en el diagnóstico de la leptospirosis canina.

In order to compare an indirect ELISA with the use of antigen derivated from Leptospira biflexa Semaranga serogroup, serovar Patoc and microscopic agglutination test (MAT) in the serological diagnosis of canine leptospirosis, 77 samples of blood serum from dogs with suspected leptospirosis (Group 1) and 84 samples from apparently healthy animals (Group 2) were used. They were simultaneously researched by the enzyme immunoassay technique and microscopic agglutination test (MAT). Prevalence values obtained by MAT and ELISA, and between the two groups, showed no significant differences indicating coincidence between the two methods and the existence of a widespread circulation of leptospire strains in clinically healthy animals. The most frequent serovars were Canicola and Icterohaemorrhagiae in Grupo 1 and Canicola and Ballum in Group 2. The indirect ELISA in both groups showed full coincidence with MAT, 92,2% and 91,6% respectively. The ELISA evaluated showed a relative sensitivity of 92,8% and a relative specificity of 91,8% in Group 1, and 90,3% and 92.4% in Group 2 respectively. Kappa coefficient was similar in both groups (0,8) confirming correlation between the two techniques. From the results obtained, it is recommended to continue this development with the use this ELISA in the diagnosis of canine leptospirosis.

In vitro characterization of acid lactic bacterias with probiotic potential

Las propiedades beneficiosas de las bacterias ácido lácticas (BAL) posibilitan su uso como probióticas en animales y humanos. El objetivo del presente trabajo fue caracterizar, mediante pruebas in vitro, cepas BAL procedentes de fuente animal para considerar su posterior aplicación como probiótico en animales. Se evaluaron 72 cepas, identificadas hasta el nivel de género, de Lactobacillus spp., Leuconostoc spp., Lactococcus spp., Streptococcus spp. y Pediococcus spp. A todas las cepas se les determinó su estabilidad de crecimiento a diferentes pH, temperatura y tolerancia a altas concentraciones de cloruro de sodio. De ellas se seleccionaron 14 cepas que presentaron las mejores características como candidatos a probióticas por sus resultados a las pruebas de hidrofobicidad frente a solventes orgánicos (xileno y hexadecano), tiempo de autoagregación y la prueba de antagonismo microbiano; ante Bacillus cereus y Staphylococcus aureus el 63,6% de las cepas inhibieron el crecimiento, ante Salmonella typhimurium el 75,7% y frente a Pseudomonas aeruginosa el 72,7 %.

The beneficial properties of the lactic-acid bacteria (LAB) in animals and humans make possible their use as probiotics. In order to characterize LAB from animal sources using in vitro tests to consider their subsequent application as a probiotic, 72 strains belonging to the genera Lactobacillus spp., Leuconostoc spp., Lactococcus spp., Streptococcus spp. and Pediococcus spp. were evaluated. Growth stability of all strains was determined at acid pH, different temperatures and tolerance to high concentration of sodium chloride. From them, there were 14 strains showing the best probiotic characteristics as candidates due to their scores on tests of hydrophobic versus organic solvents (xylene and hexadecane), autoaggregation time and microbial test. The 63,6% of the strains inhibited growth against Bacillus cereus and Staphylococcus aureus, the 75,7% against Salmonella typhimurium and the 72,7% against Pseudomonas aeruginosa.

**Influence of culture medium components on Mycoplasma gallisepticum growth**

The composition of a culture medium produced in Cuba to grow Mycoplasma gallisepticum was evaluated using a response surface methodology. Initially, the influence of Mycoplasma base, horse serum and yeast extract on biomass production was assessed in a 2³ factorial experimental design. Then, a central composite design was applied. Mycoplasma base and horse serum factors were selected for this study. In 7 L and 35 L bioreactors, the variations carried out in the culture medium composition were estimated. The experimental results were fitted to a second order polynomial model equation. Finally, the optimal growth conditions established were at concentrations of 1,88% Mycoplasma base and 18,16% horse serum (v/v) with 0,6% of yeast extract. For the conditions tested, at a bioreactors scale, a high cellular yield of M. gallisepticum (higher than 0,5 ODu/mL) was obtained.

Se evaluó la composición de un medio de cultivo de producción nacional para el crecimiento de Mycoplasma gallisepticum, utilizando la metodología de superficie de respuesta. Inicialmente se estudió la influencia de los componentes Micoplasma base, suero equino y extracto de levadura para la producción de biomasa, mediante un diseño factorial 2³ y a continuación se aplicó un diseño compuesto central. Los valores de los componentes del medio de cultivo, definidos a escala de laboratorio, fueron experimentados en fermentadores de 7 L y 35 L. Los resultados del diseño compuesto central fueron ajustados en un polinomio de segundo orden, alcanzando un crecimiento óptimo a las concentraciones de 1,88% de Micoplasma base y 18,16% de suero equino (v/v) fijando el extracto de levadura en 0,6%. Se alcanzaron rendimientos celulares de M. gallisepticum superiores a 0,5 ODu/mL en fermentadores de 7 L y 35 L.