Revista de Salud Animal

In vitro evaluation of the probiotic potential of Lactobacillus acidophilus SS80 and Streptococcus thermophilus SS77

RESUMEN El presente trabajo tuvo como objetivo evaluar in vitro las propiedades probióticas de las cepas de Lactobacillus acidophilus SS80 y Streptococcus thermophilus SS77 para uso animal. Las cepas fueron caracterizadas mediante pruebas bioquímicas, de hemólisis, de resistencia a diferentes pH, a concentraciones de sales biliares, y prueba de antagonismo microbiano frente a cinco patógenos de animales y autoagregación, coagregación e hidrofobicidad. Los resultados mostraron que ambas cepas producen peróxido de hidrógeno, lipasa y lecitinasa. S. thermophilus SS77 fue positivo a proteólisis de la caseína; sin embargo, las cepas no produjeron aminas biógenas desde los aminoácidos Lisina, Tirosina y Triptofano. Además, S. thermophilus SS77 utilizó la Alanina a partir de las 36 h, mientras que L. acidophilus SS80 usó Histidina a partir de las 72 h. Las dos cepas resultaron negativas a la prueba de hemólisis y difieren significativamente en los valores de pH alcanzados en leche descremada en polvo a partir de las 2 h. Crecieron a pH 6,5 y 5,5 y resistieron al jugo gástrico simulado por 3 h, con porcentajes de supervivencia por encima de 98 %. La cepa de L. acidophilus SS80 creció solo con 0,3 % de bilis (% p/v), mientras que S. thermophilus SS77 con 0,3 %, 0 % y 1 % (% p/v). Se produjo inhibición del crecimiento sobre todas las cepas patógenas evaluadas; resultó más efectiva Lactobacillus acidophilus SS80. Ambas cepas resultaron positivas a la prueba de autoagregación, coagregación e hidrofobicidad con valores superiores a 48 %. Se concluye que ambas cepas tienen potencial para ser utilizadas como aditivos probióticos en la alimentación animal.

ABSTRACT The objective of this work was to evaluate in vitro the probiotic properties of Lactobacillus acidophilus SS80 and Streptococcus thermophilus SS77 strains for animal use. Strains were characterized by biochemical tests, hemolysis, resistance to different pH, bile salt concentrations, microbial antagonism test against five animal pathogens, and auto-aggregation, co-aggregation and hydrophobicity tests. The results showed that both strains produce hydrogen peroxide, lipase and lecithinase. S. thermophilus SS77 was positive to casein proteolysis; however, the strains did not produce biogenic amines from the amino acids Lysine, Tyrosine and Tryptophan. In addition, S. thermophilus SS77 used alanine from 36 h on, whereas L. acidophilus SS80 used histidine from 72 h on. Both strains were negative to the hemolysis test and differed significantly in the pH values reached in skimmed milk powder after 2 h. They grew at pH 6.5 and 5.5 and resisted the simulated gastric juice for 3 h, with survival rates above 98 %. The strain of L. acidophilus SS80 grew only at 0.3 % bile (% w / v), while S. thermophilus SS77 did it at 0.3 %, 0 % and 1 % (% w / v). Growth inhibition occurred on all pathogenic strains evaluated, being Lactobacillus acidophilus SS80 more effective. Both strains were positive to the auto-aggregation, co-aggregation and hydrophobicity tests with values higher than 48 %. It is concluded that both strains have potential to be used as probiotic additives in animal feeding.

Prevalence of Ancylostoma caninum in Canis lupus familiaris in Havana, Cuba

RESUMEN Con el objetivo de determinar la prevalencia de Ancylostoma caninum en canes de ocho municipios de la provincia La Habana, se realizó un análisis coproparasitoscópico y un estudio hematológico (leucocitos totales y diferencial sanguíneo) a 299 perros. Se obtuvieron los datos relacionados con la edad, el sexo y el tratamiento anterior con antiparasitarios. Se compararon los resultados del diferencial sanguíneo y el conteo de eosinófilos según el sexo, grupo etario (adultos y cachorros) y por lugar de procedencia (municipios). En el diferencial sanguíneo el conteo de eosinófilos evidenció diferencia significativa (p≤0,05) entre el lugar de procedencia (municipios) y la edad de los animales. Los resultados coprológicos evidenciaron 49,2 % de prevalencia de Ancylostoma caninum, sin mostrar diferencia significativa (p≤0,05) al comparar el municipio de procedencia, la edad y el sexo. Se encontró concordancia de 93,3 % e índice Kappa de 0,87 entre la presencia de eosinofilia y los casos positivos a Ancylostoma caninum por coprología.

ABSTRACT With the aim of determining the prevalence of Ancylostoma caninum in dogs from eight municipalities of Havana province, a coproparasitoscopic analysis and a haematological study (total leukocytes and blood differential test) were carried out in 299 dogs. Data related to age, sex and previous treatment with antiparasitics were obtained. The results of the blood differential test and the eosinophil count were compared according to sex, age group (adults and puppies) and place of origin (municipalities). In the blood differential test, the eosinophil count showed a significant difference (p≤0.05) between the place of origin (municipalities) and the age of the animals. The coprological results showed 49.2 % prevalence of Ancylostoma caninum, without showing significant difference (p≤0.05) when comparing the municipality of origin, age and sex. There was a concordance of 93.3 % and Kappa index of 0.87 was found between the presence of eosinophilia and positive cases of Ancylostoma caninum by coprology.

Microbiological and genotypic characterization of Pasteurella mutocida strains associated with the cunicular respiratory syndrome

RESUMEN Pasteurella multocida es una bacteria Gram negativa que se asocia a síndromes respiratorios en diferentes especies de animales. Esta bacteria presenta una alta heterogeneidad intraespecie, donde es posible encontrar diferentes biovares, cinco serogrupos capsulares con diferencias en los factores de virulencia y la expresión de la patogenicidad, así como en los perfiles de susceptibilidad a los antibióticos y la capacidad para la formación de biopelículas. El objetivo del presente trabajo es la caracterización de cepas de P. multocida recobradas de conejos. Se realizó la identificación microbiológica, la genoserotipificación capsular y la detección de genes que participan en la expresión de factores de virulencia. Se determinó la susceptibilidad a varias familias de antibióticos y la capacidad de producir biopelículas in vitro. Se confirmó que las cepas pertenecen a la especie P. multocida subespecie multocida biotipo 1, al tipo capsular A. Las cepas fueron positivas a la detección de fragmentos de genes de los locis relacionados con la biogénesis de fimbrias, neurominidasa y proteínas de membrana externa, que constituyen factores de virulencia, específicamente para la colonización e interacción con el hospedero. Las cepas revelaron multirresistencia y solo dos mostraron moderada capacidad para la producción de biopelículas. La caracterización de estas cepas esclarece aspectos epidemiológicos relacionados con el serogrupo capsular, que son de utilidad para la obtención de candidatos vacunales y contribuir a la prevención o profilaxis de infecciones por esta bacteria, por lo que el presente trabajo constituye una contribución al control de esta infección en conejos.

ABSTRACT Pasteurella multocida is a Gram-negative bacterium associated with respiratory syndromes in different species of animals such as pigs, birds, rabbits, cats, and dogs. This bacterium presents high intra-species heterogeneity, where it is possible to find different biovars, five capsular serogroups with differences in virulence factors and the expression of pathogenicity, as well as profiles of susceptibility to antibiotics and the capacity for the formation of biofilms. The objective of this work is to characterize of P. multocida strains isolated from rabbits. The microbiological identification, capsular genoserotyping and the detection of genes involved in the virulence factors were carried out. Susceptibility to several families of antibiotics and the ability to produce biofilms in vitro were determined. It was confirmed that the strains belong to the species P. multocida subspecies multocida biotype 1 capsular A serogroup. The strains were positive to the detection of loci gene fragments related to the biogenesis of fimbrias, neurominidase and outer membrane proteins, which constitute virulence factors, specifically for colonization and interaction with the host. The strains revealed multi-resistance and only two of them showed moderate capacity for the production of biofilms. The characterization of these strains clarifies the epidemiological aspects related to the capsular serogroup, which are useful for obtaining vaccine candidates and contribute to the prevention or prophylaxis of infections by this bacterium, thus the present work contributes to the control of this infection in rabbits.

In vitro-fertilized bovine embryos co-cultured with oviductal and cumulus oophorus cells

RESUMEN La presente investigación tuvo como objetivo evaluar el efecto del cocultivo de los embriones con células oviductales y del cúmulo oóforo (cumulus oophorus) sobre el desarrollo de embriones in vitro en estadio de blastocisto. Los oviductos y ovarios se colectaron de hembras bovinas sacrificadas en un rastro. Las células oviductales se obtuvieron tras una incisión longitudinal del oviducto; las células del cumulo oophorus se colectaron del líquido folicular. Ambos tipos celulares se colocaron para su cultivo en TCM-199 con 20 % de Suero Fetal Bovino (SFB). Los complejos cúmulo-ovocitos (COC’s) fueron colectados por aspiración de folículos de 2 a 7 mm de diámetro y colocados para su maduración en TCM-199 con 10 % de SFB; posteriormente, se fertilizaron utilizando una concentración de 1x106 espermatozoides/mL. Después de la fertilización se dividieron en tres tratamientos: 1) Control, 2) Cocultivo con células de cúmulo, 3) Cocultivo con células del oviducto. El desarrollo se evaluó a 192 horas de cultivo in vitro, determinando la cantidad de embriones divididos, mórulas y blastocistos. Se cultivaron en medio SOF secuencial, por tratamiento: 1) 538 ovocitos, 2) 627 ovocitos y 3) 478 ovocitos. Los resultados fueron los siguientes: 14 % de blastocistos en el cocultivo de células cúmulo, 7 % en el cocultivo de oviducto y 4 % en el control, con una diferencia estadística significativa (p<0,05) entre los tres tratamientos. Se concluye que el uso de medios condicionados con células somáticas puede estimular el desarrollo in vitro hasta estadio de blastocisto de los embriones bovinos.

ABSTRACT The research was aimed at evaluating the effect of embryos co-cultured with oviductal and cumulus oophorus cells on the development of blastocyst in vitro. Oviducts and ovaries were collected from slaughtered bovine females. Oviductal cells were obtained after a longitudinal incision of the oviduct and cumulus cells were collected from follicular fluid; both cell types were placed for culture in TCM-199 with 20 % Fetal Bovine Serum (FBS). The cumulus-oocyte complexes (COC's) were collected by the aspiration of follicles from 2 to 7 mm diameter and they were placed for maturation in TCM-199 with 10 % FBS. Subsequently, they were fertilized using a concentration of 1x106 spermatozoa/mL. After fertilization, they were divided into three treatments: 1) Control, 2) Co-culture with cumulus cells and 3) Co-culture with oviduct cells. The development was evaluated at 192 hours of in vitro culture, determining the amount of divided embryos, morulas and blastocysts. They were cultured in sequential SOF medium by the treatment: 1) 538 oocytes, 2) 627 oocytes and 3) 478 oocytes. The results were the following: 14 % of blastocysts in the co-culture of cumulus cells, 7 % in the co-culture of oviduct and 4 % in the control, with a significant statistical difference (p<0.05) among the three treatments. It is concluded that the use of somatic cells in conditioned medium can stimulate the blastocyst stage development in vitro to the bovine embryos.

Evaluation of the hygienic-sanitary quality of raw milk by flow cytometric methods

RESUMEN El desarrollo y la aplicación de modernos equipos en los sistemas de pago por calidad del sector lácteo mundial contribuyen a la mejora de la calidad de la materia prima y de los productos lácteos. El BactoScan FC® y el Fossomatic MinorTM son equipos automatizados que miden la calidad higiénico-sanitaria de la leche cruda por citometría de flujo con una confiabilidad demostrada. En Cuba, se tiene establecido un umbral mínimo para la calidad higiénico-sanitaria mediante la prueba de reducción del azul de metileno (TRAM) y el conteo cualitativo de células somáticas (CMT). El objetivo de este trabajo fue evaluar la calidad higiénico-sanitaria de la leche cruda por los equipos BactoScan FC® y Fossomatic MinorTM y su relación con los métodos convencionales TRAM y CMT, establecidos en el sistema de pago por calidad. Para ello se analizaron 1 540 muestras de leche cruda de tanque, por los métodos automatizados y los convencionales. Los resultados mostraron que, para los parámetros de calidad higiénico-sanitaria, el 83 % y 87,5 %, respectivamente de las muestras analizadas, se encontraban por encima del parámetro de especificación establecido por la Federación Internacional de Lechería. Existe una elevada correlación entre los resultados obtenidos por los métodos automatizados y los empleados para el pago de la calidad de la leche. Los equipos evaluados en este estudio pueden ser una alternativa a utilizar en el sistema de pago por calidad de la leche cruda en Cuba porque brindan resultados en menor tiempo y con mejor precisión.

ABSTRACT The development and application of modern equipment in the quality based raw milk payment system of the world dairy sector contribute to the improvement of the quality of the raw material and dairy products. BactoScan FC® and Fossomatic MinorTM are automated equipment that measure the hygienic-sanitary quality of raw milk by flow cytometry with proven reliability. In Cuba, a minimum threshold for the hygienic-sanitary quality has been established through the Methylene Blue Reduction (TRAM) test and the qualitative somatic cell count (CMT). The objective of this work was to evaluate the hygienic-sanitary quality of raw milk by BactoScan FC® and Fossomatic MinorTM equipment and their relationship with the conventional TRAM and CMT methods, established in the quality payment system. For this, 1,540 samples of raw milk from the tank were analyzed by automated and conventional methods. The results showed that, for the hygienic-sanitary quality parameters, 83 % and 87.5 % of the samples analyzed were above the specification parameter established by the International Dairy Federation. There is a high correlation between the results obtained by the automated methods and those used to pay for the quality of the milk. The equipment evaluated in this study can be an alternative to be used in the quality based raw milk payment system in Cuba because they provide results in less time and with better precision.

Morphology and polarity of the P wave of the electrocardiogram in cattle

RESUMEN El objetivo del presente trabajo fue determinar la polaridad y la morfología de la onda P del electrocardiograma (ECG) del bovino en derivaciones bipolares y monopolares. Se obtuvieron registros electrocardiográficos de 100 animales de la raza Holstein, clínicamente sanos y pertenecientes a diferentes grupos etarios de uno y de otro sexo: 10 terneras, 10 terneros, 20 novillas, 10 vacas lactantes, 25 sementales jóvenes ya incorporados al plan de extracción de semen y 25 sementales adultos, en 20 derivaciones, nueve bipolares y 11 monopolares. Las ondas P fueron codificadas de acuerdo a su morfología; se determinó la frecuencia con que aparecen sus diferentes formas y el tipo de polaridad en cada una de las derivaciones empleadas. Como resultado se obtuvo que en las derivaciones bipolares de hombro y en la de base-ápice, así como en las monopolares situadas hacia la base o hacia el ápice del corazón, se manifestó la menor variabilidad en la morfología y en la polaridad. Se concluye que al emplear en los cuadrúpedos las 12 derivaciones clásicas, establecidas en el hombre, la polaridad y la morfología obtenida para la onda P es muy variable. Sin embargo, se demostró que existen otros puntos de derivación en los que se manifiesta estabilidad en la polaridad de esta onda y un número más reducido de diferentes configuraciones.

ABSTRACT The objective of this work was to determine the polarity and morphology of the P wave of the electrocardiogram (ECG) of cattle in bipolar and monopolar derivations. Electrocardiographic records of 100 animals (Holstein breed), clinically healthy and belonging to different age groups and both sexes, were obtained. They were: 20 calves (10 females and 10 males), 20 heifers, 10 lactating cows, 25 young stallions already incorporated to the semen extraction plan, and 25 adult stallions, in 20 derivations (nine bipolar and 11 monopolar). P waves were coded according to their morphology. The frequency with which their different forms and the type of polarity appear in each of the derivations used, was determined. As a result, it was obtained that the lowest variability with respect to morphology and polarity was shown in the bipolar derivations of the shoulder, in the base-apex derivations, as well as in those monopolar derivations located towards the base or the apex of the heart. It is concluded that when the 12 classical derivations, established in humans, are used in quadrupeds, the polarity and morphology obtained for the P wave is very variable. However, it was shown that there are other points in which there is stability in the polarity of this wave and a smaller number of different configurations.

Staphylococcus aureus in the production chain of artisan fresh cheese

ABSTRACT Artisan fresh cheese is a nutritious and highly preferred food for populations in many countries. The production of artisan fresh cheeses constitutes one of the main sources of income and a tradition for the agricultural sector of many countries of Latin America, and Cuba is no exception. The cheese produced in Cuba is a typical product from raw milk, with the use of the artisan coagulant agent, whose quality is strongly influenced by the geographical area of production and its traditions. The hygiene of the milk and cheese obtain depends on the habits and production procedures of the microflora present in the milk and the local environment in which they are produced. However, this kind of food does not have a quality system associated with production. Different studies have reported deficiencies in the sanitary conditions of production of this food. The consumption of fresh cheese represents one of the greatest risks in the transmission of pathogenic microorganisms. Staphylococcus aureus can be transmitted to the food chain of dairy products, leading to contaminated dairy products and possible staphylococcal poisoning by the production of enterotoxins. These elements justify the objective of this study regarding the description of the food safety problem associated with the presence of Staphylococcus aureus in the production chain of artisan fresh cheese in Cuba.

RESUMEN El queso fresco artesanal es un alimento nutritivo y de alta preferencia en muchos países. La producción de quesos frescos artesanales constituye una de las principales formas de ingreso y tradición para el sector agrícola en América Latina; Cuba no es una excepción. El queso producido en Cuba es un producto a partir de leche cruda, con el uso de agente coagulante artesanal, cuya calidad está fuertemente influenciada por el área geográfica de producción y sus tradiciones. La higiene de la leche y del queso que se obtienen depende de los hábitos y procedimientos productivos, de la microflora presente en la leche y del ambiente del local en el que se producen. Sin embargo, este tipo de alimentos no tiene un sistema de calidad asociado con la producción. Diferentes estudios han informado deficiencias en las condiciones sanitarias de producción de este alimento. El consumo de queso fresco representa uno de los mayores riesgos en la transmisión de microorganismos patógenos. Staphylococcus aureus se puede transmitir a la cadena alimenticia de los productos lácteos, lo que lleva a productos lácteos contaminados y la posible intoxicación estafilocócica por la producción de enterotoxinas. Estos elementos justifican el objetivo del presente estudio, donde se describe el problema de inocuidad de los alimentos asociado a la presencia de Staphylococcus aureus en la cadena de producción de queso fresco artesanal en Cuba.

Morphology of Oesophagostomum columbianum (Strongylida: Chabertidae) by scanning electron microscopy

RESUMEN Con el objetivo de profundizar en la morfología del helminto Oesophagostomum columbianum, teniendo especial cuidado en la identificación de estructuras que permitieran realizar un diagnóstico certero de la especie, se llevó a cabo un estudio del parásito mediante microscopía electrónica de barrido. Se evidencian la cápsula bucal poco desarrollada con corona radiada de 22 hojas afiladas, seguida de la vesícula cefálica, las papilas exteriores simétricas anteriores, las alas laterales desarrolladas que se extienden a través de casi toda la extensión del cuerpo comenzando a partir del surco cervical, la bolsa copuladora bien desarrollada del macho, donde se destacan los radios que la sostienen, las dos espículas iguales y el cono genital; además, la vulva y el ano de la hembra. Estas observaciones contribuyen a un mejor diagnóstico de la especie estudiada.

ABSTRACT In order to deepen in the morphology of the helminth Oesophagostomum columbianum, taking a special attention to the identification of structures that would allow an accurate diagnosis of the species; a parasite study was carried out by scanning electron microscopy (SEM). The following characteristics were evidenced: a underdeveloped oral capsule with a radiating crown of 22 sharp blades, followed by a cephalic vesicle; previous symmetrical outer papillae; developed lateral wings that extend through almost the entire length of the body, starting from the cervical groove; well-developed male coupling bag where the spokes that support it stand out; two equal spicules and genital cone; as well as vulva and anus of the female. These observations contribute to a better diagnosis of the species studied.

Evaluation of physical-chemical and microbiological parameters of a rennet from pig

RESUMEN Se evaluaron los parámetros físico-químicos y microbiológicos de un coagulante lácteo proveniente de estómagos de cerdo. Los estómagos fueron lavados, salados y deshidratados naturalmente. El contenido de humedad de los estómagos de cerdos se determinó en días alternos. Se evaluaron el pH, la fuerza de cuajo, los recuentos de microorganismos a 30°C, coliformes totales, Escherichia coli, Enterobacterias, Staphylococcus coagulasa positivo, hongos y levaduras. Al evaluar el comportamiento de los estómagos, en cuanto al contenido de agua por gramos de materia seca por los dos métodos de secado con adición de cloruro de sodio, no se observaron diferencias significativas en el primer día mediante el análisis de varianza. Para los días cuatro, seis y ocho, los valores fueron estadísticamente diferentes. Los valores de pH se encontraron en el intervalo de 4,44 a 4,90 y los de la fuerza de cuajo entre 1:840 a 1:4706 para las 15 corridas evaluadas. La media del conteo de microorganismos a 30°C fue de 2,05 ± 0,76 log ufc/mL. Los conteos de coliformes totales, enterobacterias, hongos y levaduras fueron inferiores a 10 ufc/mL. No se detectó la presencia de Staphylococcus coagulasa positivo ni Escherichia coli. La obtención del coagulante lácteo a partir de estómago de cerdo brinda una alternativa para la mejora del proceso de producción de queso fresco artesanal, al comprobarse que los parámetros físico-químicos y microbiológicos se encuentran en correspondencia con lo establecido para coagulantes líquidos.

ABSTRACT The physical-chemical and microbiological parameters of a rennet from pig stomachs were evaluated. The stomachs were washed, salted and dehydrated naturally. The moisture content of stomachs was determined on alternate days. The pH, rennet strength, microorganism counts at 30°C, total coliforms, Escherichia coli, Enterobacteria, Staphylococcus coagulase positive, fungi, and yeasts, were evaluated. No significant differences were observed on the first day through the analysis of variance when evaluating the behavior of the stomachs, in terms of water content per gram of dry matter by the two drying methods with the addition of sodium chloride. The pH values were in the range of 4.44 to 4.90 and those of rennet strength between 1: 840 to 1: 4706 for the 15 runs evaluated. The mean microorganism count at 30°C was 2.05 ± 0.76 log cfu / mL. The counts of total coliforms, enterobacteria, fungi, and yeast were less than 10 cfu / ml. The presence of positive coagulase Staphylococcus or Escherichia coli was not detected. Obtaining the milk coagulant from pig stomach provides an alternative to improve the production process of artisan fresh cheese, when it is verified that the physical-chemical and microbiological parameters are in correspondence with what established for rennet.

External skeletal fixation and intramedullary nailing in a femoral fracture of a Puma concolor from the National Zoo of Cuba

RESUMEN Se presenta la resolución quirúrgica de una fractura femoral en un cachorro de Puma concolor perteneciente al Zoológico Nacional de Cuba. Por primera vez en el país, se describe un sistema de osteosíntesis mediante el enclavado intramedular en combinación con un sistema de fijación esquelética externa usando cuatro clavos roscados y una barra de Metilmetacrilato en un animal de fauna silvestre. Se describe la colocación del clavo intramedular totalmente intraóseo, mediante una guía artesanal, con lo cual se evita la presencia de segmentos del clavo que sobresalgan por la fosa del trocánter mayor; de esta manera se evitan migraciones, seromas, molestias y otras repercusiones negativas. El paciente fue ubicado en su cubil y atendido en el posoperatorio con antibióticos y analgésicos. Se retiró el fijador esquelético externo a los 21 días, al verificar la presencia de callo óseo por palpación y radiografía. El paciente en las primeras semanas solo caminaba en horario nocturno y, a partir de los 28 días posquirúrgico, comenzó a caminar sin claudicación en la mañana y en la noche. Mostró total recuperación a los 75 días posterior a la intervención quirúrgica.

ABSTRACT The surgical resolution of a femoral fracture is presented in a Puma concolor puppy belonging to the National Zoo of Cuba. For the first time in the country, an osteosynthesis system is described by intramedullary nailing in combination with an external skeletal fixation system using four threaded nails and a Methylmethacrylate bar in a wildlife animal. The placement of the intramedullary nailing completely intraosseous is described by means of an artisanal guide, which avoids the presence of nailing segments that protrude through the trochanteric fossa. In this way, migrations, seromas, discomforts and other negative repercussions are avoided. The animal was placed in its lair for postoperative treatment with antibiotics and analgesics. The external skeletal fixator was removed at 21 days, when verifying the presence of bony callus by palpation and radiography. The animal only walked at night in the first weeks, and 28 days postoperatively, it began walking in the morning and at night. It showed total recovery at 75 days after surgery.