Revista de Salud Animal

Detection of microorganisms of the class Mollicutes associated to the respiratory-reproductive complex in horses from Mayabeque, Cuba

RESUMEN Las investigaciones sobre la detección de micoplasmas en caballos son relativamente escasas; sin embargo, existen reportes sobre su asociación al complejo respiratorio-reproductivo. En Cuba se desconoce sobre la presencia de estos microorganismos en caballos, por lo que el objetivo de este trabajo fue detectar la presencia de microorganismos de la clase Mollicutes asociados al complejo respiratorio-reproductivo en caballos procedentes de San José de las Lajas, Mayabeque. Para esto se trabajaron 97 animales procedentes de cuatro localidades de este municipio. Se colectaron 131 exudados (97 nasales y 34 prepuciales) para el diagnóstico por cultivo microbiológico y PCR. En 37,11 % de las muestras se detectó la presencia de Mollicutes; de ellas 88,8 % correspondieron a exudados nasales y 11,2 % a exudados prepuciales. En todas las localidades se detectó la presencia de Mollicutes; la localidad “D” y los animales mayores de dos años fueron los de mayor número de resultados positivos. Se obtuvo un aislado procedente de exudado prepucial, el cual se identificó por pruebas bioquímicas, como Acholeplasma spp. Por primera vez en Cuba se realizan estudios relacionados con la presencia de Mollicutes en caballos, por lo que resulta necesario continuar los estudios relacionados con la epidemiología de estos patógenos, como parte del control del complejo respiratorio-reproductivo en esta especie.

ABSTRACT Researches on the detection of mycoplasmas in horses are relatively scarce. However, there are reports about their association to the respiratory-reproductive complex. In Cuba, the presence of these microorganisms in horses is unknown, so the objective of this work was to detect the presence of microorganisms of the class Mollicutes associated to the respiratory-reproductive complex in horses from Mayabeque, Cuba complex in horses from San José de las Lajas, Mayabeque. For this purpose, 97 animals from four localities of this municipality were analyzed. One hundred and thirty-one exudates (97 nasal and 34 preputial) were collected for diagnosis by microbiological culture and PCR. The presence of Mollicutes was detected in 37.11 % of the samples; of these 88.8 % corresponded to nasal exudates and 11.2 % to preputial exudates. The presence of Mollicutes was detected in all localities. Locality "D" and animals older than two years old had the highest number of positive results. An isolate was obtained from preputial exudate, which was identified as Acholeplasma spp. by biochemical tests. Studies related to the presence of Mollicutes in horses are being carried out for the first time in Cuba, so it is necessary to continue studies related to the epidemiology of these pathogens, as part of the control of the respiratory-reproductive complex in this species.

SYBR Green I Based Real-Time RT-PCR assay for the detection of bovine herpesvirus type 1

RESUMEN El herpesvirus bovino tipo 1 (BoHV-1) infecta los tractos respiratorio y genital del ganado bovino y varias especies de rumiantes. La infección puede resultar en diferentes enfermedades como rinotraqueitis infecciosa bovina, vulvovaginitis pustular infecciosa en hembras y balanopostitis pustular infecciosa en machos, con un severo impacto económico en la producción ganadera. La infección produce diferentes cuadros clínicos como respiratorios, conjuntivitis, abortos, enteritis e infección sistémica fatal en terneros recién nacidos. Una de las características más importante del herpesvirus bovino tipo 1 es el establecimiento de una infección latente que puede ser reactivada bajo condiciones de estrés o por tratamientos con altas dosis de corticosteroides. El presente trabajo tuvo como objetivo el desarrollo de un ensayo de PCR en tiempo real basado en SYBR-Green I para la detección de herpesvirus bovino 1, mediante la amplificación de un fragmento del gen de la timidina quinasa viral. Se establecieron los parámetros de los componentes críticos de la reacción de PCR, así como de las condiciones termodinámicas. Mediante el análisis de la curva de disociación se verificó que las curvas de amplificación fueron específicas (Tm = 93°C ± 1°C) y que no hubo amplificaciones inespecíficas. Se obtuvieron altos niveles de especificidad, repetibilidad y sensibilidad, con un límite de detección de 100.5 DICT50/mL. Se evaluó la sensibilidad diagnóstica a partir de exudados nasales procedentes de animales de una reproducción experimental, de reactivación de la infección latente y de vaquerías experimentales. El ensayo de PCR en tiempo real con SYBR-Green I demostró ser más sensible para el diagnóstico de BoHV-1, que el ensayo de PCR en punto final y el aislamiento viral.

ABSTRACT Bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1) infects the respiratory and genital tracts of cattle and several species of ruminants. The infection can result in different diseases such as infectious bovine rhinotracheitis, infectious pustular vulvovaginitis in females and infectious pustular balanoposthitis in males, with a severe economic impact on livestock production. The infection causes respiratory symptoms, conjunctivitis, abortions, enteritis, and fatal systemic infection in newborn calves. One of the most important characteristics of bovine herpesvirus type 1 is the establishment of a latent infection that can be reactivated under stress conditions or by treatment with high doses of corticosteroids. The present work was aimed at developing an SYBR Green I Based Real-Time RT-PCR assay for the detection of bovine herpesvirus type 1, by amplifying a fragment of the viral thymidine kinase gene. The parameters of the critical components of the PCR reaction as well as the thermodynamic conditions were established. Dissociation curve analysis showed that the amplification curves were specific (Tm = 93°C ± 1°C) and that there were no unspecific amplifications. High levels of specificity, repeatability and sensitivity were obtained, with a detection limit of 100.5 TCID50/mL. Diagnostic sensitivity was assessed on the basis of nasal exudates from experimental breeding animals, reactivation of latent infection and experimental dairy farms. The SYBR Green I Based Real-Time RT-PCR assay proved to be more sensitive for the diagnosis of BoHV-1 than the endpoint PCR assay and virus isolation.

Identification of Streptococcus agalactiae in western Cuba cattle milk affected by mastitis

RESUMEN Streptococcus agalactiae es uno de los principales agentes causantes de mastitis en el ganado lechero, con importantes implicaciones para el humano; por tanto, el diagnóstico, el control y la prevención de este microorganismo resulta fundamental para la salud animal, humana y la economía. El objetivo del presente trabajo fue detectar la presencia de S. agalactiae en leche de rebaños bovinos afectados con mastitis. Se colectaron 574 muestras de leche de cuartos afectados con mastitis (840 bovinos en producción de las razas Siboney de Cuba, Holstein y Jersey en 14 lecherías del occidente de Cuba). Se realizó el diagnóstico bacteriológico a todas las muestras. A partir de las colonias con características morfológicas y pruebas bioquímicas indicativas de S. agalactiae, se realizó la extracción de ADN y PCR con cebadores, que amplificaban un segmento de la región intergénica 16S-23S rRNA. El 43,45 % de los animales mostró síntomas de mastitis clínica o subclínica. En 57 muestras (9,97 %) se aislaron colonias características de S. agalactiae; 43 (75,43 %) resultaron positivas por PCR. De estas últimas, 26 (60,46) correspondieron a cuartos con tres cruces, 14 (32,55 %) a dos cruces y 3 (6,97 %) a cuartos clínicos. S. agalactiae fue aislado en ocho lecherías y las razas más afectadas fueron Holstein y Siboney de Cuba. Se aislaron e identificaron cepas de S. agalactiae en vacas afectadas con mastitis, lo cual indica la necesidad de programas para el control de la mastitis causada por S. agalactiae para mitigar los efectos causados por este microorganismo en las interfaces hombre-animal-medio ambiente.

ABSTRACT Streptococcus agalactiae is one of the main agents causing mastitis in dairy cattle, with important implications for humans; whereby the diagnosis, control and prevention of this microorganism is fundamental to animal and human health as well for the economy. The objective of this work was to detect the presence of S. agalactiae in milk from cattle herds affected by mastitis. Five hundred and seventy-four samples of milk were collected from quarters affected with mastitis (840 production cattle of Siboney de Cuba, Holstein and Jersey breeds of 14 dairy farms in western Cuba). Bacteriological diagnosis was performed in all samples. DNA and PCR were extracted with primers that amplified a segment of the 16S-23S rRNA intergenic region, from colonies with morphological characteristics and biochemical tests indicative of S. agalactiae. The 43.45 % of animals showed symptoms of clinical or subclinical mastitis. In 57 samples (9.97 %), colonies characteristic of S. agalactiae were isolated, and 43 (75.43 %) were positive by PCR. Of the latter, 26 (60.46 %) corresponded to quarters with three crossings, 14 (32.55 %) to two crossings and 3 (6.97 %) to clinical rooms. S. agalactiae was isolated in eight dairy farms and the most affected breeds were Holstein and Siboney de Cuba. Strains of S. agalactiae were isolated and identified in mastitis-affected cows, indicating the need for programs to control mastitis caused by S. agalactiae to mitigate the effects caused by this microorganism on human-animal-environment interfaces.

Rabbit polyclonal antibody against Erns protein for the detection of Classical Swine Fever Virus

ABSTRACT Classical swine fever (CSF) is an endemic disease in many countries. A key tool for laboratory confirmation of CSF is a differential diagnosis between vaccinated and actually infected pigs. Many enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) are based on the capture of antibodies in animal sera, but these tests cannot be used in animals that are persistently infected. In these cases, an antigen-capture ELISA may be a good choice to differentiate vaccinated animals from those that are infected. In order to produce a polyclonal antibody that allows this technique, two rabbits were immunized with recombinant Erns protein. The antibody was conjugated to horseradish peroxidase (HRP) and the optimal working dilution was 1:64 000 in a direct ELISA. Different coating conditions were evaluated to trap recombinant Erns in a sandwich ELISA and it was concluded that coating at 10 μg/mL would ensure greater capture. The ELISA was able to detect Erns from a mixture of sera from pigs vaccinated with the Chinese strain of classical swine fever virus (CSFV). In addition, no reaction was observed in sera from healthy animals or in sera from animals vaccinated with Porvac®, an E2 protein subunit vaccine. It was concluded that the generated polyclonal antibody can recognize the viral Erns protein in pig sera, so it could be used in a sandwich ELISA to differentiate healthy animals from those infected with CSFV.

RESUMEN La peste porcina clásica (PPC) es una enfermedad endémica en numerosos países. Una herramienta clave para la confirmación en laboratorio de la PPC es el diagnóstico diferencial entre cerdos vacunados y los que están realmente infectados. Muchos ensayos inmunoadsorbentes ligados a enzima (ELISA) están basados en la captura de anticuerpos en los sueros, pero estos ensayos no pueden utilizarse en aquellos animales que están persistentemente infectados. En tales casos, un ELISA de captura de antígeno podría ser una buena elección para diferenciar los animales vacunados de aquellos que están infectados. Con el objetivo de producir un anticuerpo policlonal que permita esta técnica, se inmunizaron dos conejos con proteína Erns recombinante. El anticuerpo fue conjugado a peroxidasa de rábano picante (HRP) y la dilución óptima de trabajo fue de 1:64 000 en un ELISA directo. Se evaluaron diferentes condiciones de recubrimiento para atrapar Erns recombinante en un ELISA y se concluyó que el recubrimiento a 10 μg/mL aseguraría mayor captura. En el ELISA se pudo detectar la Erns de una mezcla de sueros de cerdos vacunados con la cepa china del virus de la peste porcina clásica (VPPC). Además, no se observó reacción en sueros de animales sanos ni con sueros de animales vacunados con Porvac®, vacuna de subunidad basada en la glicoproteína E2. Se concluyó que el anticuerpo policlonal generado puede reconocer la proteína Erns viral en sueros porcinos y que podría ser utilizado en un ELISA sándwich para el diagnóstico de la PPC, en aquellos animales persistentemente infectados o inmunodeprimidos.

Frequency of presentation of head and neck neoplasms in canines of Havana, Cuba

RESUMEN El presente estudio tuvo como objetivo determinar la frecuencia de presentación de neoplasias de cabeza y cuello en caninos de La Habana, Cuba, atendidos en la consulta veterinaria de Patología y Cirugía Experimental del Instituto Nacional de Oncología y Radiobiología, durante el periodo 2016-2017. Se presentaron 74 animales con tumores en la región de la cabeza; de ellos, 35 resultaron positivos a células neoplásicas. Con el programa Microsoft Excel 2016, se crearon tablas de frecuencia relativa para las variables edad, sexo, raza y localización; su procesamiento fue por comparación de proporciones, utilizando el paquete estadístico CompaProWin 2.0.1 (2014). Los resultados evidenciaron mayor afectación en los machos, mayor frecuencia en animales de edades superiores a los ocho años y localización en cavidad oral. Los más predispuestos fueron los mestizos y en segundo lugar los de la raza Rottweiler.

ABSTRACT The aim of this study was to determine the frequency of presentation of head and neck neoplasms in canines in Havana, Cuba, treated in the veterinary consultation of Pathology and Experimental Surgery of the National Institute of Oncology and Radiobiology, during the period 2016-2017. There were 74 animals with tumors in the head region; of them, 35 resulted positive to neoplastic cells. The information was processed in the Microsoft Excel 2016 program. Relative frequency tables were made for each of the variables: age, sex, breed, and location. Their processing was carried out by comparison of proportions using the statistical package CompaProWin 2.0.1 program (2014). The results showed greater affectation in males, greater frequency in animals over eight years old and location in the oral cavity. The most predisposed were mestizos and in second place those of the Rottweiler breed.

Morphology and polarity of the T wave of the electrocardiogram in cattle

RESUMEN El objetivo de esta investigación fue determinar en qué áreas de la superficie corporal del bovino deben ser colocados los electrodos para registrar ondas T con polaridad y morfología estables, al emplear derivaciones bipolares y monopolares para detectar alteraciones en la conducción del impulso de repolarización ventricular. Se utilizaron 100 animales de uno y de otro sexo, de diferentes grupos etarios. Se codificó numéricamente cada forma de onda T y se clasificó su polaridad. Se observaron 16 formas diferentes de ondas T, las cuales presentan cuatro tipos de polaridad: positiva, negativa, bifásica +/- y bifásica -/+. En la derivación bipolar de hombro IH, la onda T resultó, en gran proporción, negativa o bifásica +/-; en las restantes derivaciones bipolares fue positiva o bifásica -/+. En las derivaciones monopolares basales del corazón, la onda T fue negativa o en algunos casos bifásicas +/-. En las derivaciones apicales se obtuvo siempre polaridad positiva o bifásica -/+ y se registraron de cuatro a seis formas diferentes. Se concluye que, en las áreas situadas hacia la base o hacia el ápice del corazón, se pueden emplear derivaciones que originan registros electrocardiográficos con gran estabilidad en la polaridad de la onda T y en las que la cantidad de formas diferentes detectadas es muy reducida, con gran predominio de la puntiaguda, por lo que se convierten en una referencia muy útil para diagnosticar las alteraciones en la conducción del impulso de repolarización por los ventrículos cardíacos.

ABSTRACT The aim of this research was to determine in which areas of the bovine body surface the electrodes should be placed to record T waves with stable polarity and morphology by using bipolar and unipolar leads to detect alterations in the conduction of the ventricular repolarization impulse. One hundred animals of both sexes from different age groups were used. Each T-wave form was numerically coded and its polarity was classified. Sixteen different forms of T waves were observed, presenting four types of polarity: positive, negative, biphasic +/- and biphasic -/+. In the bipolar shoulder lead IH, the T wave was largely negative or biphasic +/-; and it was positive or biphasic -/+ in the remaining bipolar leads. The T-wave was negative or in some cases biphasic +/- in the unipolar basal leads of the heart. Positive or biphasic polarity was always obtained in the apical leads -/+ and four to six different forms were recorded. It is concluded that, in the areas located towards the base or the apex of the heart, leads can be used originating electrocardiographic records with great stability in the polarity of the T wave and in which the quantity of different forms detected is very reduced, with great predominance of the pointed one, so that they become a very useful reference to diagnose the alterations in the conduction of the repolarization impulse through the cardiac ventricles.

Gastrointestinal strongyles parasitizing goats and sheep from the Wako-Cungo municipality, Angola

RESUMEN Con el objetivo de identificar los géneros de estrongílidos gastrointestinales de caprinos y ovinos en cuatro propiedades del municipio Waco-Cungo, provincia Cuanza Sul, Angola, se colectaron muestras de heces de estas especies directamente de la ampolla rectal. Las muestras se transportaron en cajas térmicas con hielo y se realizaron coprocultivos para la obtención de las larvas L3, que se identificaron por sus características morfológicas. En ambas especies, de las cuatro propiedades, se detectaron infecciones mixtas. En las cabras se identificaron larvas L3 de Haemonchus (81 %), Oesophagostomum (10 %), Trichostrongylus (5 %), y Ostertagia (4 %); mientras que en los ovinos se identificaron Haemonchus (70 %), Ostertagia (11 %), Trichostrongylus (10 %), y Oesophagostomum (9 %).

ABSTRACT In order to identify the genera of goat and sheep gastrointestinal strongyles in four localities of the Waco-Cungo municipality, CuanzaSul province, Angola, stool samples of these species were collected directly from the rectal ampulla. The samples were transported in thermal boxes with ice and co-cultures were carried out to obtain the L3 larvae, which were identified by their morphological characteristics. Mixed infections were detected in both species of the four locations. L3 larvae of Haemonchus (81 %), Oesophagostomum (10 %), Trichostrongylus (5 %), and Ostertagia (4%) were identified in goats; while Haemonchus (70 %), Ostertagia (11 %), Trichostrongylus (10 %), and Oesophagostomum (9 %) were identified in sheep.

Antimicrobial resistance in bacteria from animals, challenges for their contention from laboratory

RESUMEN La resistencia antimicrobiana (RAM) constituye una crisis global con impacto en la salud humana y animal. El consumo de antibióticos en la crianza animal, también propicia la selección y propagación de cepas y sus determinantes de resistencia al ambiente y en la cadena de producción de alimentos. Una de las iniciativas estratégicas para la contención de la RAM, es asegurar el uso apropiado de los antibióticos disponibles, en lo cual, los laboratorios de microbiología tienen un importante papel, a través del diagnóstico y las pruebas de susceptibilidad antimicrobiana. La presente revisión tiene como objetivo proporcionar información sobre las pautas, dificultades y los desafíos en la interpretación de datos derivados de las pruebas de laboratorio para la identificación de bacterias, su tipificación y la estimación del perfil de susceptibilidad a los antibióticos. También se describen enfoques para la distinción entre bacterias patógenas, comensales e indicadoras a considerar en los planes de vigilancia y monitoreo de la RAM. En la crianza de los animales suelen aparecer cepas zoonóticas o indicadoras de multirresistencia, que son prioridad en programas de vigilancia, bajo el concepto Una Salud, por presentar resistencia adquirida con ventaja para su diseminación. Ejemplos alarmantes en los últimos años son Escherichia coli productora de betalactamasas de espectro extendido (E. coli BLEE) y Staphylococcus aureus resistente a meticilina (SARM). Además, se diserta sobre las expresiones transitorias de resistencia microbiana, las biopelículas y células persistentes, que explican las recidivas de infecciones y aún son poco consideradas en la medicina veterinaria. Finalmente, se enfatiza en la necesidad de estrategias para armonizar y divulgar datos que soporten guías para el tratamiento de infecciones bacterianas de interés veterinario.

ABSTRACT Antimicrobial resistance (AMR) constitutes a global crisis with an impact on human and animal health. The consumption of antibiotics in animal husbandry also encourages the selection and propagation of strains and their determinants of resistance to the environment and in the food production chain. One of the strategic initiatives for the contention of AMR is to ensure the appropriate use of available antibiotics, in which microbiology laboratories play an important role, through diagnosis and microbial susceptibility testing. The purpose of this review is to provide information on patterns, difficulties and challenges in interpreting data derived from laboratory tests to allow the identification of bacteria, their typing and the estimation of the antibiotic susceptibility profile. Methodological approaches for the distinction between pathogenic, commensal and indicator bacteria to be considered in the AMR surveillance and monitoring plans are also described. In the breeding of animals, strains of zoonotic bacteria or multiresistance indicators usually appear, which are a priority in surveillance programs, under the concept of One health, for presenting acquired resistance with an advantage for their dissemination. Alarming examples in recent years are extended spectrum betalactamases producing Escherichia coli (E. coli ESBL) and methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA). It also discusses the transient expressions of microbial resistance, biofilms and persistent cells, which explain the recurrence of infections and are still poorly considered in veterinary medicine. Finally, the need for strategies to harmonize and disseminate data that support guidelines for the treatment of bacterial infections of veterinary interest is emphasized.

Parasite vaccines: a literature review

RESUMEN Se realizó una recopilación bibliográfica en bases de datos informativas: Academic Search Complete (EBSCO), Scopus y Web de la Ciencia, desde el año 1965 hasta 2019, con el objetivo de recopilar las principales investigaciones realizadas con vistas a lograr inmunógenos contra los parásitos más importantes que afectan a humanos y animales. Se evidencian los avances obtenidos, fundamentalmente, en Plasmodium falciparum, Giardia lamblia, Leishmania spp., Toxoplasma gondii, Taenia solium, Schistosoma mansoni, Rhipicephalus microplus, entre otros agentes parásitos patógenos. Se concluye que la elaboración de vacunas contra parásitos resulta un gran reto y actualmente se enfoca en nuevos trabajos de biología molecular para seleccionar antígenos más eficaces, así como se consideran estrategias para buscar nuevos adyuvantes que favorezcan la orientación apropiada de la respuesta inmune.

ABSTRACT A bibliographic compilation was carried out in informative databases: Academic Search Complete (EBSCO), Scopus and Web of Science, from 1965 to 2019, with the aim of compiling the main researches carried out with a view to achieving immunogens against the most important parasites in humans and animals. The advances obtained are mainly evidenced in Plasmodium falciparum, Giardia lamblia, Leishmania spp., Toxoplasma gondii, Taenia solium, Schistosoma mansoni, and Rhipicephalus microplus, among other pathogenic parasites. It is concluded that the development of parasite vaccines is a major challenge and it is currently focused on new works on molecular biology to select more effective antigens, as well as strategies to search for new adjuvants to support the appropriate targeting of the immune response.

Removal of a foreign body in a dog's stomach

RESUMEN Se presenta la realización de la técnica quirúrgica de gastrotomía en un animal de la especie canina con presencia de un cuerpo extraño. Para el diagnóstico se utilizó el método clínico. Como estudio complementario se realizó radiografía simple de abdomen para el diagnóstico confirmativo. Se observó la presencia de una estructura radiodensa que resultó un cuerpo extraño no lineal de superficie irregular (cuchilla) ubicado en el estómago. El correcto procedimiento para el diagnóstico clínico, transquirúrgico y cuidados posquirúrgicos permitieron la recuperación del paciente.

ABSTRACT A dog´s stomach with the presence of a foreign body was analyzed by the gastrotomy surgical technique. The clinical method was used for diagnosis. As a complementary study, a simple x-ray of the abdomen was performed to confirm the diagnosis. The presence of a radiodense structure was observed resulting in a non-linear foreign body with an irregular surface (blade) located in the stomach. The correct procedure for clinical, trans-surgical diagnosis and post-surgical care allowed the recovery of the animal.