Revista Cubana de Medicina Tropical

**Evaluación de la actividad de extractos marinos sobre Plasmodium falciparum in vitro y aspártico proteasas**

INTRODUCCIÓN: la búsqueda de nuevas drogas o alternativas terapéuticas para el tratamiento de la malaria es una alta prioridad en la lucha por el control de esta enfermedad. En la actualidad, varios estudios se concentran en la evaluación de inhibidores de proteasas de tipo aspártico presentes en la vacuola digestiva de Plasmodium falciparum, las cuales son parte de las enzimas que participan en la degradación de la hemoglobina. Los escasos reportes en la literatura sobre la purificación de inhibidores de proteasas aspárticas a partir de organismos marinos sugieren que constituyen una fuente de este tipo de moléculas prácticamente inexplorada. MÉTODOS: las especies de invertebrados marinos Phallusia nigra, Bugula sp., Lyssodendoryx isodictyalis, Ascidia sydneiensis, Microscosmus goanus, Holothuria mexicana, Lytechinus variegatus y Echinaster sp. fueron colectadas en la localidad de Puerto Esperanza, Pinar del Río, en abril de 2006 y se prepararon extractos etanólicos. Se realizó la evaluación antimalárica in vitro contra Plasmodium falciparum de estos extractos, con valores descriptivos de eficacia comparables a los utilizados internacionalmente. Los resultados se relacionaron con los hallazgos de los ensayos de inhibición de la actividad enzimática de pepsina como modelo de proteasa aspártica y con el perfil químico de metabolitos secundarios en estos extractos. RESULTADOS: se encontró una buena reproducibilidad de la actividad antimalárica de los extractos de P. nigra, M. goanus y L. isodictyalis con concentraciones inhibitorias medias menores que 50 µg/mL. El extracto de M. goanus mostró la posible presencia de un inhibidor de pepsina. El perfil químico obtenido para las ascidias se corresponde con los principales compuestos reportados para las familias Pyuridae y Ascidiidae. La actividad antimalárica, así como la actividad inhibidora de pepsina, pudiera ser atribuida a algunos de los grupos de metabolitos secundarios detectados. CONCLUSIONES: se recomienda el fraccionamiento de estos extractos para el aislamiento de los compuestos químicos responsables de las actividades biológicas obtenidas.

BACKGROUND: the search for new drugs or therapeutic alternatives for malaria treatment is a high priority in the struggle against this disease. At present, several studies are focused on the evaluation of aspartic protease inhibitors present in the digestive vacuole of Plasmodium falciparum, which are part of the enzymes involved in hemoglobin degradation. The few reports in literature on the purification of aspartic proteases inhibitors from marine organisms suggest that they are a practically unexplored source of this type of molecules. METHODS: marine invertebrate species Phallusia nigra, Bugula sp., Lyssodendoryx isodictyalis, Ascidia sydneiensis, Microscosmus goanus, Holothuria mexicana, Lytechinus variegatus y Echinaster sp.were detected in Puerto Esperanza area, Pinar del Rio province, on April 2006 and then ethanol extracts were prepared. In vitro antimalarial evaluation of these extracts against Plasmodium falciparum, with descriptive efficacy values being comparable with those used worldwide. The results were associated to the findings of aspartic protease model-like pepsin enzymatic action inhibition tests and to the chemical profile of secondary metabolites in these extracts. RESULTS: good reproducibility of antimalarial action of P. nigra, M. goanus y L. isodictyalis extracts was found, being the average inhibitory concentrations lower than 50 µg/mL. M. goanus extract showed a possible pepsin inhibitor. The chemical profile for ascidians corresponded to the main compounds reported in Pyuridae y Ascidiidae families. The antimalarial activity as well as the pepsin inhibitory activity might be attributed to some of the detected secondary metabolites. CONCLUSIONS: the breaking-up of these extracts is recommended in order to isolate the chemical compounds involved in the studied biological activities.

Manifestaciones cutáneas de la giardiasis, sobredimensión de un problema de salud

OBJETIVO: caracterizar desde el punto de vista clínico y parasitológico a un grupo de pacientes que en la red de salud de Ciudad de La Habana habían sido tratados, o serían tratados, por padecer de manifestaciones cutáneas atribuidas a giardiasis. MÉTODOS: previo acuerdo con los médicos de asistencia correspondientes, 114 individuos que habían sido tratados, o serían tratados, por padecer de lesiones dermatológicas atribuidas a giardiasis fueron remitidos al Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí" (IPK). A su arribo, a cada paciente se le realizó una caracterización de sus manifestaciones clínicas por parte de los médicos que formaban parte del equipo de investigadores. A cada individuo se le solicitó muestras seriadas de heces, a las que se le practicaron exámenes cropológicos mediante los procedimientos de frotis directo simple y de concentración de Ritchie. En aquellos casos en que la observación microscópica de las muestras de heces no permitió confirmar la infección por Giardia lamblia, se realizó drenaje biliar para la búsqueda microscópica de las giardias en el líquido duodenal correspondiente. A los pacientes en cuyas heces o líquido duodenal se detectó la presencia de G. lamblia, se les indicó tratamiento antigiardiásico y se orientaron las medidas higiénico-sanitarias necesarias para evitar la reinfección. Después de 3 meses de concluido el tratamiento antiparasitario, se repitieron los estudios antes descritos. RESULTADOS: se demostró que en Ciudad de La Habana las manifestaciones cutáneas de la giardiasis constituyen un problema de salud sobredimensionado. Se confirmó, además, que son las lesiones urticarianas las manifestaciones dermatológicas más frecuentes asociadas a giardiasis. CONCLUSIONES: demostrada la sobredimensión de la giardiasis como causa de lesiones dermatológicas, se hace necesario incursionar en la exploración de los conocimientos, percepciones y prácticas de los médicos relacionados con el diagnóstico, tratamiento y control de la giardiasis.

OBJECTIVE: to make a clinical and parasitological characterization of a group of patients, who had been or would be treated in the healthcare facilities of the City of Havana, due to their cutaneous manifestations attributed to giardiasis. METHODS: after the consent of their primary care physicians, 114 subjects, who had been or would be treated because of their giardiasis-attributed skin lesions, were referred to "Pedro Kourí" Institute of Tropical Medicine. On their arrival, the research team physicians characterized each patient according to their clinical manifestations. They were asked to collect their feces for serial sampling, which were subjected to chropological tests through direct simple smears and Ritchie´s concentration procedures. In those cases where microscopic observation of samples did not allow confirming Giardia lamblia infection, biliary drainage was performed to look for giardias in the corresponding duodenal fluid. The patients whose feces or duodenal fluid showed G.lamblia were instructed to follow an anti-giardiasis treatment and the necessary hygienic-sanitary measures to prevent re-infection. Three months after concluding the parasiticidal treatment, the above-mentioned tests were repeated. RESULTS: it was proved that the cutaneous manifestations of giardiasis in the City of Havana are an overdimensioned health problem. It was also confirmed that urticaria is the most frequent giardiasis-associated dermatological manifestation. CONCLUSIONS: once the overdimension of giardiasis as a cause of skin lesions is proven, it is necessary to explore the knowledge, perceptions and practice of physicians in charge of diagnosis, treatment and control of this disease.

Parasitismo intestinal en una cohorte de escolares en 2 municipios de Ciudad de La Habana

INTRODUCCIÓN: en Cuba el parasitismo intestinal constituye aún un problema de salud aunque mucho menor que en otros países subdesarrollados. OBJETIVO: esclarecer su magnitud en un grupo de escolares de Ciudad de La Habana. MÉTODOS: se estudiaron 312 niños de los 2 sexos, en edades comprendidas de 8 a 15 años, pertenecientes a la población escolar de las áreas de salud Vedado y Punta Brava, en los años 2002 y 2004. A cada niño se le realizó análisis de las heces mediante las técnicas de examen directo y de Kato Katz. RESULTADOS: la prevalencia correspondió a una tasa de 45,2 /100 habitantes en 2004 y 48,4/100 habitantes en 2002. Los protozoos prevalecieron en ambos estudios. Blastocystis hominis fue el parásito más frecuente diagnosticado, que presentó cifras mayores en 2004 con una tasa de prevalencia de 19,2/100 habitantes y 15,7/100 habitantes en 2002. Entamoeba histolytica/dispar tuvo una prevalencia mayor en 2004 (6/100 habitantes). Dentro de los helmintos, Trichuris trichiura y Ascaris lumbricoides tuvieron una prevalencia mayor en 2002 con cifras de 11,2/100 habitantes y 5,1/100 habitantes, respectivamente. El dolor abdominal fue el síntoma más referido con una mayor asociación en el niño parasitado (RR> 2; p< 0,001). La coincidencia de niños parasitados en ambos años fue de 20,8 %, y de estos, 38,4 % mostró un bajo percentil y se destaca 35,3 % de niños que nunca tuvieron parásitos. CONCLUSIONES: los resultados obtenidos demuestran que a pesar del avance alcanzado por el sistema de salud, el parasitismo intestinal continúa siendo un desafío.

BACKGROUND: Intestinal parasitism is still a health problem in Cuba, although much less serious than in other underdeveloped countries. OBJECTIVE: to determine the extent of this disease in a group of school children from the City of Havana. METHODS: Three hundred and twelve children from both sexes aged 8-15 years, who belonged to the school population from Vedado and Punta Brava health areas, were studied in the years 2002 and 2004. Each child´s feces were analyzed by direct examination and Kato Katz techniques. RESULTS: the prevalence rate was 48.4/100 pop in 2002 and 45.2/100 pop in 2004. Protozoa prevailed in both studies. Blastocystis hominis was the most diagnosed parasite presenting higher figures in 2004, with a prevalence rate of 19.2 /100 pop, whereas the figure was 15.7/100 pop in 2002. Entamoeba histolytica/dispar was more prevalent in 2004 (6/100 pop). Among the helminths, Trichuris trichiura y Ascaris lumbricoides exhibited higher prevalence rates in 2002, with 11.2/100 pop and 5.1/100 pop respectively. Abdominal pain was the most referred symptom, mostly associated to the affected child (RR> 2; p< 0.001). The coincident percentage of children with parasites was 20.8 % in both years; of these, 38.4 % showed low percentile and 35.3 % of children did never suffer from parasitism. CONCLUSIONS: the results revealed that despite the advances of the healthcare system in Cuba, the intestinal parasitism continues to be a real challenge.

**Actividad depredadora de Mesocyclops aspericornis (Daday, 1906) sobre larvas de Culex quinquefasciatus (Say, 1823)**

OBJETIVO: evaluar si la depredación del copépodo Mesocyclops aspericornis depende de su densidad o la de sus presas, en este caso, larvas de Culex quinquefasciatus. MÉTODOS: se realizaron 2 experimentos de depredación del copépodo Mesocyclops aspericornis, sobre larvas de primer estadio de Culex quinquefasciatus al cabo de 24 h. En el primero se valoró la depredación de diferentes cantidades del copépodo (5, 10, 15, 20 y 25 en 1 L de agua declorada) ante 120 larvas, con 10 réplicas. El segundo evaluó la influencia de la densidad de las larvas sobre la eficiencia del depredador, para ello se varió la cantidad de larvas (40, 60, 80, 100 y 150 en 1 L de agua), con igual número de réplicas ante 10 copépodos. En el procesamiento de los datos se empleó el paquete estadístico STATGRAPHIG versión 5.0. RESULTADOS: la media de las larvas depredadas mostró una fuerte dependencia de la densidad del depredador, se obtuvo diferencias significativas en todos los casos, así para 25 copépodos se alcanzó 87 % de mortalidad larvaria mientras que con 5 copépodos la mortalidad fue de 22,16 %. En el siguiente experimento, la media de larvas depredadas en los 2 primeros tratamientos (40 y 60 larvas) difiere significativamente entre sí y con el resto de los tratamientos, pero a partir de 80 larvas no se encontraron diferencias significativas. CONCLUSIONES: Mesocyclops aspericornis, incrementó la eficiencia depredatoria con su densidad en valores menores e igual que 25 copépodos/L, y que la eficiencia de depredación aumenta hasta una relación de 1 copépodo/8 larvas, que evidencia una respuesta funcional del tipo 2.

OBJECTIVE: to evaluate whether the predation efficiency of copepods Mesocyclops aspericomis depends on their density or on that of their preys that are Culex quinquefasciatus in this case. METHODS: Two experiments about the preying of copepod Mesocyclops aspericomis upon first stage Culex quinquefasciatus larvae were made in a 24h-interval. The first experiment assessed the preying capacity of different numbers of copepods (5, 10, 15, 20 and 25 in one liter of unchlorinated water) upon 120 larvae, with 10 replications. The second one evaluated the influence of larval density over the predation efficiency; to this end, the quantity of larvae changed (40, 60, 80,100 and 150 in one liter of water) exposed to 10 copepods, with 10 replications too. Statistical package STATGRAPHIC 5.0 allowed data processing. RESULTS: Killed larva mean showed strong dependence on the density of predators, there were significant differences in all the cases since 25 copepods achieved 87 % larval mortality whereas for 5 copepods, mortality rate was 22.16 %. During the second experiment, the killed larva mean after the 2 first treatments (40 and 60 larvae) significantly differed between them and from the rest of treatment, but from 80 larvae on, no significant differences were found. CONCLUSIONS: Mesocyclops aspericornis increased their predatory efficiency depending on their density in numbers lower or equal to 25 copepods/L, and the predation efficiency rises to 1 copepod/8 larvae ratio, which evinced a type-2 functional response.

**Actividad insecticida de 3 aceites esenciales de plantas en Musca domestica (Diptera: Muscidae)**

INTRODUCCIÓN: Musca domestica se transforma en vectores mecánicos de diversas enfermedades, transportando diferentes microorganismos patógenos en su morfología externa y en su tracto digestivo. Son numerosos los métodos utilizados para el control de esta especie con insecticidas químicos, tanto adulticidas como larvicidas, a los cuales se ha reportado resistencia. OBJETIVO: evaluar la acción insecticida de 3 extractos de aceites esenciales aislados de plantas sobre Musca domestica y obtener las dosis diagnóstico respectivas. MÉTODOS: se utilizaron aceites esenciales de las especies botánicas Eugenia melanadenia (Myrtales: Myrtacea); Psidium rotundatum Griseg (Myrtales: Myrtacea) y Piper aduncum (Piperales: Piperacea) en la determinación de actividad insecticida potencial. Los bioensayos de laboratorio se desarrollaron utilizando una cepa procedente de una localidad rural nombrada "Bentre". Se prepararon varias concentraciones de cada aceite para evaluar la mortalidades entre 10 y 100 %, aplicando 1 µL en el tórax, según metodología de la OMS para pruebas de susceptibilidad a insecticidas. RESULTADOS: para Eugenia melanadenia se obtuvieron valores de LD50= 0,21 % y LD95= 1,33 %, y una línea de regresión y= 4,82 + 2,05x. Los valores de las dosis letales (LD50 y LD95) para el aceite de Psidium rotundatum correspondieron a 0,18 y 2,4 %, respectivamente, la ecuación de la recta resultó y= 4,92 + 1,49x. El aceite de Piper aduncum mostró LD50= 0, 04 % y LD95= 0,33 % y su ecuación y= 5,19 + 2,10x. CONCLUSIONES: se comprobó la acción insecticida de estos aceites sobre hembras adultas de M. domestica. Se estimaron las dosis diagnóstico para Eugenia melanadenia (2 µg/insecto a 2,88 %); Psidium rotundatum (2 µg/insecto a 7 %) y Piper aduncum (2 µg/insecto a 0,6 %) para su utilización, como método alternativo de control, en la vigilancia de poblaciones adultas de Musca domestica.

BACKGROUND: musca domestica turns into vectors of several diseases by transporting different pathogenic microorganisms in its external morphology and digestive tract. A number of methods has been used to control this species by means of chemical insecticides both adulticides and larvicides, to which resistance has been reported. OBJECTIVES: to evaluate the insecticidal action of 3 essential oil extracts from plants on Musca domestica and to obtain the respective diagnostic doses. METHODS: essential oils from Eugenia melanadenia (Myrtales: Myrtacea); Psidium rotundatum Griseg (Myrtales: Myrtacea) y Piper aduncum (Piperales: Piperacea) were used to determine the potential insecticidal action. The lab bioassays used a strain from a rural area named "Bentre". Several concentrations of each of these oils were prepared to evaluate mortality from 10 to 100 %, by applying 1 µL on Musca domestica thorax according to WHO methodology for insecticide susceptibility tests. RESULTS: Lethal dose values for Eugenia melanadenia were LD50= 0.21 % and LD95= 1.33 %, being the regression line y= 4.82 + 2.05x. Psidium rotundatum oil had LD50= 0.18 and LD95= 2.4 % and its line equation y was 4.92 + 1.49x. Piper aduncum oil showed LD50= 0.04 % and LD95= 0.33 % and its line equation y= 5.19 + 2.10x. CONCLUSIONS: the insecticidal action of these essential oils on M. domestica adult females was confirmed. Diagnostic doses for Eugenia melanadenia (2 µg/insect at 2.88 %); Psidium rotundatum (2 µg/insect at 7 %) and Piper aduncum (2 µg / insect at 0.6 %) were estimated to be used as alternative controlling method in the surveillance of adult Musca domestica populations.

Identificación de serotipos del virus dengue circulantes en el estado de Campeche, México

INTRODUCCIÓN: el dengue en la actualidad es una arbovirosis que está impactando a los países latinoamericanos, y México no ha sido la excepción, donde de ser una región hipoendémica ha evolucionado a hiperendémica por la múltiple circulación de los serotipos. OBJETIVOS: determinar la seroprevalencia de los virus del dengue en el Estado de Campeche, México e identificar los serotipos circulantes en los diferentes municipios que conforman el estado. MÉTODOS: para este estudio se emplearon los métodos de ELISA de inhibición y la prueba de neutralización por reducción del número de placas. RESULTADOS: de un total de 600 muestras obtenidas, 67,5 % (405) presentó anticuerpos IgG contra virus dengue y 32,5 % (195) resultó negativo. Con respecto a los serotipos se detectó que 32,3 % tuvo una infección primaria con predominio del serotipo DEN-1 y 68 % infección secundaria; prevaleció la secuencia DEN-1/ DEN-2 y DEN-3/ DEN-4 en 9 municipios. El grupo de edad en el que fue más frecuente la infección a los 4 serotipos resultó el de 21 a 30 años. El serotipo que resultó con mayor circulación en el estado fue DEN-1. CONCLUSIONES: la seroprevalencia y la frecuencia de infección secundaria observada en niños y adultos, indica la elevada circulación de los virus en el Estado; este resultó un factor epidemiológico importante para la aparición de brotes epidémicos y de las formas graves de la enfermedad.

BACKGROUND: at present, dengue is an arbovirosis that is greatly affecting the Latin American countries, and Mexico is not the exception, where a hypoendemic region has evolved into a hyperendemic area because of the circulation of multiple serotypes. OBJECTIVES: to determine the seroprevalence of dengue virus in Campeche state, Mexico, and to identify the circulating serotypes in its various municipalities. METHODS: inhibition ELISA and plate reduction neutralizing test were the methods used in this study. RESULTS: of 600 samples, 67.5 % (405) had IgG antibodies to dengue virus whereas 32.5 % (195) were negative. Regarding the serotypes, 32.3 % had primary infection with serotype DEN-1 and 68 % showed secondary infection; the prevailing sequence was DEN-1/DEN-2 and DEN-3/DEN-4 in 9 municipalities. The infection with the 4 serotypes was mostly found in the 21-30 y age group. The most circulating serotype was DEN-1 throughout the state. CONCLUSIONS: seroprevalence and frequency of secondary infection observed in children and adults indicated an increased circulation of virus in the state and this was considered an important epidemiological factor for the emergence of outbreaks and the most severe forms of the disease.

Aislamiento y propagación del virus de la hepatitis E en diferentes líneas celulares

ANTECEDENTES: el virus de la hepatitis E es el agente causal de la hepatitis E. Las propiedades biológicas y moleculares de las cepas asiáticas del VHE ya han sido exploradas en cultivos celulares. OBJETIVOS: aislar y propagar una cepa cubana del virus de la hepatitis E en diferentes líneas celulares. MÉTODOS: la monocapa de las células A549 fue inoculada con una suspensión de heces obtenida de un paciente con diagnóstico serológico y molecular de hepatitis E. Estas células fueron observadas hasta el décimo pase. Mientras que, las líneas celulares MRC5, LLCMK2, HEP-2, FRhK4 y HeLa fueron utilizadas para propagar el virus de la hepatitis E, a partir del sobrenadante obtenido del tercer pase en A549. Estas células fueron seguidas hasta el tercer pase. El ARN y los antígenos de la cepa ECV/2349-03 fueron identificados por TR-RCP e inmunofluorescencia indirecta. RESULTADOS: en las células A549 el ECP apareció desde el primer pase, a los 3 d de posinoculación. El genoma y los antígenos del virus fueron identificados en todos los pases seriados. En el resto de las líneas celulares estudiadas no se observó el ECP. En estas células el material genético del virus de la hepatitis E se detectó desde el primer pase y los antígenos a partir del segundo pase, excepto en las HeLa. CONCLUSIONES: estos resultados confirman que las células A549 pueden ser utilizadas para aislar y propagar el virus de la hepatitis E, mientras que las células MRC5, LLCMK2, HEP-2 y FRhK4 son capaces de mantener el crecimiento viral.

BACKGROUND: hepatitis E virus (HEV) is the causative agent of hepatitis E. Biological and molecular properties of Asian HEV strains have been explored in cells cultures. OBJECTIVES: the aim of this investigation was to isolate and propagate a Cuban HEV isolate in different cell lines. METHODS: A549 cells monolayer was infected with faeces suspension from patient with sporadic hepatitis E and followed up until tenth passage. Lately, the supernatant harvested from third passage in A549 cells was inoculated in MRC5, HEP-2, LLCMK2, HeLa y FRhK4 for propagation study. These cells were observed up to third passage. RNA and viral antigen of ECV/2349-03 HEV strain were identified by RT-PCR and indirect immunofluorescence. RESULTS: CPE appeared since first passage, at third day of post-inoculation in A549 cells. HEV antigens and genome were detected in all serial passages. CPE was not observed in the rest of cellular cultures. In the cells used for propagation the viral genome was observed from first passage, while the antigens were detected since second passage, except HeLa. CONCLUSIONS: these results confirm that A549 can be used to isolate and propagate HEV. Meanwhile, the MRC5, HEP-2, LLCMK2 and FRhK4 were able to support viral growing.

Normalización de un ELISA de captura para la detección de anticuerpos de tipo IgM al virus de la parotiditis

INTRODUCCIÓN: la parotiditis es una enfermedad contagiosa aguda, que afecta fundamentalmente a los niños en edad escolar entre 5 y 14 años y requiere de técnicas rápidas para su diagnóstico. OBJETIVOS: se normalizó un ELISA de captura para la detección de anticuerpos de tipo IgM al virus de la parotiditis y se comparó con la inhibición de la hemaglutinación. MÉTODOS: se estudiaron 177 monosueros y 285 pares de suero que procedían de la vigilancia seroepidemiológica al virus de la parotiditis, enviados por las diferentes provincias del país en el período comprendido entre enero 2004-diciembre 2006. Fueron analizados con la técnica de inhibición de la hemaglutinación y se emplearon en la normalización del sistema. Se determinó la precisión del ensayo y se realizó el estudio de la reactividad cruzada a otros agentes virales. RESULTADOS: al evaluar el sistema, se obtuvieron valores de sensibilidad de 98,9 %, especificidad 98,5 % y concordancia 98,7 %; se encontró una buena relación en los valores del coeficiente de variación intraensayo e interensayo en todos los casos estudiados. No se observó reactividad cruzada con otros agentes infecciosos. CONCLUSIONES: este sistema demostró ser de gran utilidad para el diagnóstico temprano de la parotiditis, resultó ser más sensible y rápido que la inhibición de la hemaglutinación.

BACKGROUND: parotiditis is an acute contagious disease that mainly affects children aged 5-14 years and requires rapid diagnostic techniques. OBJECTIVES: a capture ELISA was standardized to detect IgM antibodies to parotiditis virus and this method was compared with hemagglutination inhibition. METHODS: one hundred and seventy seven monosera and 285 serum pairs sent by the different provinces from January 2004 to December 2006, as part of the seroepidemiological surveillance of the parotiditis virus, were studied. They were analyzed by the hemagglutination inhibition technique and used for the system standardization. Accuracy of the test was determined and the cross reactivity to other viral agents was also studied. RESULTS: the system evaluation yielded 98.9 % sensitivity, 98.5 % specificity and 98.7 % concordance; good relation was found in the variation coefficient values intra-assays and inter-assay for all the studied cases. No cross reactivity was observed with other infectious agents. CONCLUSIONS: this system proved to be useful for the early diagnosis of parotiditis, more sensitive and rapid than the hemagglutination inhibition.

**Detección molecular de Pneumocystis jiroveci en tejido parafinado de fallecidos por VIH/sida**

INTRODUCCIÓN: Pneumocystis jiroveci es uno de los más frecuentes patógenos oportunistas que afectan a los pacientes con el síndrome de inmunodeficiencia adquirida. OBJETIVO: detectar P. jiroveci en tejidos embebidos en parafina mediante la reacción en cadena de la polimerasa. MÉTODOS: se emplearon 6 bloques de parafina procedentes de 3 fallecidos por sida y neumonía por P. jiroveci. Se realizaron coloraciones de rutina y especiales de anatomía patológica, así como la técnica de la reacción en cadena de la polimerasa para el diagnóstico del microorganismo. RESULTADOS: con la técnica de la reacción en cadena de la polimerasa se identificó este agente infeccioso en los bloques de parafina estudiados. Se logró detectar P. jiroveci hasta una dilución de 1:100 del material genético extraído de cada bloque. CONCLUSIONES: contar con métodos moleculares que permitan identificar P. jiroveci en tejido parafinado abre el camino para la determinación de los genotipos involucrados en la pandemia sida cubana y permitirá determinar si la cepa infectante, en los casos que resulten fatales, presenta resistencia a los fármacos empleados.

BACKGROUND: Pneumocystis jiroveci is one of the most frequent opportunistic pathogens affecting the patients with the acquired immunodeficiency syndrome. OBJECTIVE: to detect P. jiroveci in paraffin-embedded tissues by means of the polymerase chain reaction. METHODS: six paraffin blocks from 3 dead persons who died from AIDS and P. jiroveci pneumonia. Routine and special staining of the pathological anatomy together with the PCR for diagnosis were performed. RESULTS: the PCR identified this infective agent in the studied paraffin blocks. It was possible to detect P. jiroveci up to 1:100 dilution of the genetic material extracted from each block. CONCLUSIONS: the availability of molecular methods to identify P. jiroveci in paraffined tissue opens up the road to determination of genotypes involved in the Cuban AIDS pandemics and will allow ascertaining whether the infective strain, in fatal cases, is resistant to the drugs that are being used.

Evaluación antileishmanial in vitro de extractos provenientes de Citrus limetta, Cucurbita maxima y Rhoeo spathacea

INTRODUCCIÓN: la leishmaniosis comprende un grupo de enfermedades infecciosas causadas por organismos hemoflagelados del género Leishmania. Hoy día, esta enfermedad prevalece en 88 países tropicales alrededor del mundo y existe un estimado de 1,5 a 2 millones de nuevos casos por año. Su control es deficiente, principalmente al no contar con una vacuna eficaz. Aunque existen varios fármacos para su tratamiento, todos requieren una administración parenteral, tratamientos muy largos, costosos, y causan una alta toxicidad al organismo. El programa de enfermedades tropicales de la Organización Mundial de la Salud considera la investigación de plantas como una esencial prioridad para el tratamiento de Leishmania. OBJETIVO: evaluar la actividad antileishmanial de extractos provenientes de Citrus limetta, Cucurbita maxima y Rhoeo spathacea. MÉTODOS: en este trabajo se utilizó una cepa de Leishmania amazonensis agente causal de la leishmaniosis cutánea. Se determinó la actividad de los extractos frente a los estadios de promastigote y amastigote del parásito, así como frente a macrófagos peritoneales de ratón BALB/c, para valorar su posible toxicidad. RESULTADOS: los extractos provenientes de Curcubita maxima y Rhoeo spathacea fueron los que mostraron un mayor porcentaje de inhibición del crecimiento frente a promastigotes. Frente a amastigotes también mostraron una buena actividad antileishmanial, mientras que su citotoxicidad fue moderada con un índice de selectividad de 3. CONCLUSIONES: solo los extractos de Curcubita maxima y Rhoeo spathacea fueron los que mostraron una actividad antileishmanial.

BACKGROUND: leishmaniosis covers a group of infectious diseases caused by Leishmania genus hemoflagellate organisms. At present, this disease is prevailing in 88 tropical countries worldwide; it is estimated that 1.5 to 2 million new cases will occur every year. The control of the disease is deficient, mainly because there is no effective vaccine available. Although several drugs for treatment exist, all of them require parenteral way of administration, delayed and costly therapies and cause high toxicity. The tropical disease program of the World Health Organization considers plant research as an essential priority for Leishmania treatment. OBJECTIVE: to evaluate the antileishmanial action of extracts from Citrus limetta, Cucurbita maxima y Rhoeo spathacea. METHODS: aLeishmania amazonensis strain, the causative agent of cutaneous leishmaniosis, was used in this paper. The extract effect on the stagings of promastigot and amastigot of the parasite as well as on the peritoneal macrophages from BALB/c mouse was determined to assess its possible toxicity. RESULTS: Curcubita maxima y Rhoeo spathacea showed higher percentage of growth inhibition in promastigots. Good anti-leishmanial activity was also observed against amastigots, whereas its citotoxicity was moderate, with a selectivity index of 3. CONCLUSIONS: Curcubita maxima y Rhoeo spathacea extracts were the only ones that had anti-leishmanial activity.

**Método de estratificación de depósitos colonizados por Aedes aegypti, Linnaeus, 1762**

INTRODUCCIÓN: hasta el momento no existe una vacuna para prevenir el dengue, por tal motivo la piedra angular para evitar la enfermedad es el control del mosquito en sus etapas de preadulto, de aquí la necesidad de buscar alternativas que contribuyan al control del vector en esos estadios de vida. OBJETIVOS: crear un método de estratificación de los depósitos utilizados por Ae. aegypti en la ovipostura, que unido a la etología del mosquito permite analizar su comportamiento en tiempo y espacio y la responsabilidad ciudadana en el control. MÉTODOS: los depósitos reportados positivos por la campaña anti-aegypti se disponen en 4 estratos, 2 de ellos se forman con los focos procedentes del ambiente domiciliario y los 2 restantes con los del extradomiciliario. Cada estrato se corresponde con la dinámica de cría del mosquito, la participación de la comunidad y los sectores involucrados en el control. Los porcentajes de depósitos de los 4 estratos se analizan en su conjunto, en cada uno de los 3 grupos constituidos según las características del mosquito de formar focos en numerosos depósitos, en depósitos diferentes y además ser algunos preferenciales como sitios de cría. RESULTADOS: se crea un método de estratificación de los depósitos utilizados por Ae. aegypti para la cría, atendiendo a su función y a los ambientes en los cuales se desarrolla. Se obtienen los porcentajes de focos por estrato, lo cual permite analizar el comportamiento del mosquito en tiempo y espacio según los ambientes colonizados; el comportamiento dentro de cada ambiente y estrato; y las preferencias de depósitos por estrato. En cada caso se infiere sobre la participación ciudadana en el control del Ae. aegypti. CONCLUSIONES: se dispone de una clasificación estratificada, abarcadora, dinámica y funcional que permite analizar el comportamiento del vector a través de los depósitos de cría e inferir sobre la responsabilidad ciudadana en el control del mosquito en sus primeros estadios.

BACKGROUND: there is no vaccine to prevent dengue till now, so the key to manage the disease is the control of the mosquito at its pre-adult stages. To this end, it is necessary to find alternatives that help in controlling the vector during these life stages. OBJECTIVES: to create a stratification method for the containers used by Ae aegypti for egg-laying, which together with the etiology of the vector, allows analyzing its behaviours in time and space, and also the civil responsibility for the control of vectors. METHODS: the containers reported as positive during the anti-Aegypti campaign were classified in 4 strata; two of them will be formed with the foci from indoor environment whereas the other 2 will have foci from the outdoor environment. Each stratum represents the dynamics of the mosquito breeding, the involvement of the community and the sectors participating in the control. The percentages of containers in the 4 strata were analyzed, as a whole, in each of the 3 groups, on the basis of characteristics of the mosquito to form foci in numerous containers, various containers and in some preferential containers as breeding site. RESULTS: a stratification method was devised for containers used by the mosquito for breeding, taking its function and the environments where they develop. The percentages of foci per stratum-which allows analyzing the mosquito´s behaviour in time and space _ its behaviour inside each environment and stratum, and the preferred containers per stratum were obtained. For each case, the population's participation in the control of the mosquito was inferred. CONCLUSIONS: a comprehensive, dynamic, functional and stratified classification was made available to analyze the vector´s behaviour through the breeding depots and to infer the civil responsibility in the control of the mosquito in its first stages of life.

Hepatitis C en pacientes VIH positivos

INTRODUCCIÓN: la infección por el virus de la hepatitis C (VHC) es un problema de salud mundial. El VHC y el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) comparten similares vías de transmisión y algunas características epidemiológicas; en coinfectados VHC/VIH, el comportamiento de la hepatitis y la evolución de la infección por VIH es acelerado. OBJETIVOS: contribuir al conocimiento de la infección por VHC en pacientes VIH (+), determinar la prevalencia de anticuerpos al VHC (anti-VHC) en un grupo de pacientes VIH (+), relacionar la detección del ARN-VHC con las fases VIH o sida, de estos pacientes y con el sexo. MÉTODOS: se estudiaron 1 065 muestras de sueros de pacientes VIH (+) recibidas en el Laboratorio Nacional de Referencia de Hepatitis viral, Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí", durante 2007. Las técnicas utilizadas fueron la determinación de anticuerpos al VHC (anti-VHC) por UMELISA HCV y determinación de ARN del VHC por UMELOSA HCV (Centro de Inmunoensayo). RESULTADOS: 14,27 % de los pacientes VIH fueron positivos a anti-VHC; a un grupo de estos con cifras de transaminasas por encima de los valores normales, se les realizó la técnica de UMELOSA y se detectó un elevado porcentaje de positividad (77,7 %) al ARN a VHC, como se reporta en la literatura universal. De los pacientes que estaban replicando VHC, 80 % estaba en fase SIDA; además, predominaron los pacientes del sexo masculino. CONCLUSIONES: se confima la importancia de la infección por VHC en los pacientes VIH (+).

BACKGROUND: the infection produced by the hepatitis C virus (HCV) is a world health problem. The HCV and the human immunodeficiency virus (HIV) share communicable ways and some epidemiological characteristics; in coinfected HCV/HIV patients, the behavior and the evolution of the infection in HIV patients is accelerated. OBJETIVES: to contribute to the expansion of knowledge on HCV infection in HIV-positive patients; to determine the anti-HCV prevalence in a group of HIV-positive patients; to associate the detection of the RNA-HCV with the HIV or AIDS stages in these patients and with the sex. METHODS: one thousand and sixty five serum samples from HIV-positive patients were examined in the National Reference Laboratory of Viral Hepatitis of "Pedro Kourí" Institute of Tropical Medicine during 2007. The used techniques were: antibodies to HCV determination using the UMELISA HCV and determination HCV RNA by UMELOSA HCV (Inmunoassay Center). RESULTS: in HIV-positive patients, 14.27 % was positive to anti-HVC; besides, a group of them with aminotransferase count above the normal values was applied UMELOSA, thus detecting a high percent (77.7 %) of positivity to HCV RNA, this results is in line with those reported in international literature. Almost 80 % of the patients that presented with HCV replication were already in the AIDS phase. The male sex was predominant. CONCLUSIONS: these results confirmed the weight of the HCV infection in HIV-positive patients.

Aislamiento y caracterización de cepas de Adenovirus que colonizan el tracto gastrointestinal de pacientes cubanos seropositivos al VIH

INTRODUCCIÓN: el tracto gastrointestinal es uno de los sistemas que se afecta con frecuencia en el paciente seropositivo al virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), de manera que las alteraciones o enfermedades en este sitio representan una causa importante de morbilidad y mortalidad. El hallazgo de cepas de adenovirus, raramente aisladas en pacientes inmunocompetentes, ha sido asociado en ocasiones a la presencia de diarrea, lo cual refleja la importancia del estudio y la tipificación de estas cepas. OBJETIVOS: conocer la prevalencia de los Adenovirus en muestras de heces fecales de pacientes infectados con el VIH, con diarrea aguda o crónica, así como la caracterización de los agentes aislados, mediante la implementación de métodos rápidos y confiables. MÉTODOS: fueron analizadas 167 muestras de heces fecales de individuos seropositivos al VIH y 127 seronegativos como grupo control. La prevalencia fue investigada mediante el aislamiento en cultivo celular, se realizó además la tipificación de las cepas aisladas, mediante técnicas de biología molecular como la reacción en cadena de la polimerasa y la secuenciación nucleotídica. El análisis estadístico se efectuó mediante la prueba exacta de Fisher contenido en el paquete estadístico Epi Info (Versión 6.04). RESULTADOS: la prevalencia en los pacientes VIH+ fue de 15 %, mientras que en los VIH- fue de 4 %; la diferencia resultó estadísticamente significativa; 96 % de las cepas aisladas en los pacientes VIH+ correspondieron al subgénero D, asociadas en 62,5 % a cuadros diarreicos y estadios avanzados de la infección por VIH. CONCLUSIONES: los resultados sugieren la importancia de incluir a los adenovirus y su tipificación en el diagnóstico de rutina de los pacientes VIH+, lo cual sería de interés en el manejo clínico de la infección y aportaría datos claves en la vigilancia y el control de la transmisión de la infección hospitalaria y los análisis epidemiológicos.

BACKGROUND: the gastrointestinal tract is one of the most frequently affected systems in HIV-positive patients, therefore, changes or diseases occurring in this site represent an important cause of morbidity and mortality. The finding of adenovirus strains, rarely isolated in immunocompetent patients, has been occasionally associated to diarrheas, which reflects the importance of study and typing of these strains. OBJECTIVES: to find out the prevalence of Adenovirus in feces samples from HIV patients having chronic or acute diarrheas, as well as the characterization of isolated agents through the application of reliable and quick methods. METHODS: one hundred and sixty seven fecal samples from HIV-positive patients and 127 from seronegative subjects as the control group were analyzed. Isolation in cell cultures determined the prevalence and molecular biology techniques as the polymerase chain reaction and nucleotide sequencing allowed typing of isolated strains. The statistical analysis was based on the Fisher´s exact test included in Epi Info (6.04) statistical software. RESULTS: the prevalence in HIV positive patients was 15 % whereas in the HIV-negative was 4 %. The difference was statistically significant; 96 % of isolated strains in HIV positive patients belonged to subgenus D, which are linked in 62.5 % of cases to acute diarrheal condition and advanced stages of HIV infection. CONCLUSIONS: the results indicated the importance of including adenovirus and their typing in the routine diagnosis of patients positive to HIV, all of which would be useful in the clinical management of infection and would contribute key data on surveillance and control of hospital infection transmission and the epidemiological analysis.

Paraparesia espástica tropical y sinovitis proliferativa asociadas al HTLV-I

IINTRODUCCIÓN: el virus linfotrópico de las células T humanas tipo I (HTLV-I) es endémico en la cuenca del Caribe, donde se reconoce como agente etiológico de la paraparesia espástica tropical. En Cuba se ha reportado una seroprevalencia de 0,037 %. OBJETIVOS: demostrar la asociación de la infección por HTLV-I en una paciente con paraparesia espástica tropical y sinovitis proliferativa de rodilla. MÉTODOS: se estableció el diagnóstico clínico de paraparesia espástica y sinovitis proliferativa crónica de rodilla. Se realizaron estudios humorales e imagenológicos para sustentar los diagnósticos positivo y diferencial; se emplearon sistemas de ELISA y western blot para la detección de anticuerpos contra HTLV-I. RESULTADOS: los estudios serológicos confirmaron la infección por HTLV-I. Los síntomas y signos resultaron compatibles con la guía para el diagnóstico establecida por la Organización Mundial de la Salud y se hizo el reporte número 33 de la relación de individuos con infección por HTLV-I diagnosticados en Cuba. CONCLUSIONES: se presentó, por primera vez en una paciente cubana infectada por HTLV-I, la asociación de paraparesia espástica tropical con manifestaciones articulares.

BACKGROUND: the Human T Cell Lymphotropic Virus type I (HTLV-I) is considered to be endemic in the Caribbean area, where it is recognized as the etiologic agent of the tropical spastic paraparesis (TSP). In Cuba, 0.037 % seroprevalence has been reported. OBJECTIVES: to demonstrate the association of the HTLV-I infection in a patient showing tropical spastic paraparesis and chronic proliferative knee synovitis. METHODS: the clinical diagnosis of spastic paraparesis and chronic proliferative knee synovitis was made. Humoral and diagnostic imaging studies were performed to support the differential and positive diagnoses. ELISA´s and Western Blot techniques were used for the detection of HTLV-I antibodies. RESULTS: the HTLV-I infection was confirmed by serologic studies. The symptoms and signs were compatible with those established in the WHO guidelines for the diagnosis of this disease. The case no. 33 with diagnosis of HTLV-I infection in Cuba was reported. CONCLUSIONS: it was the first time that the association of TSP and joint manifestations was found in a Cuban HTLV-I infected patient.

Meningitis bacteriana por Lactococcus lactis cremoris

INTRODUCCIÓN: Lactococcus lactis cremoris es una bacteria perteneciente a la familia Streptococcaceae que normalmente puede aislarse como parte de la microbiota transitoria o residente del tracto gastrointestinal en el ser humano. Se considera esencial en la industria alimenticia donde se emplea en la fermentación de la leche para la obtención de productos derivados como el queso, yogur, mantequilla, entre otros. OBJETIVOS: este caso constituye el primer reporte de un paciente adulto sin evidencias anteriores de inmunodepresión con una meningitis bacteriana por L. lactis. MÉTODOS: se estudió la evolución del caso de una paciente de 73 años de edad, que llegó al cuerpo de guardia del hospital con un cuadro clínico sobreagudo dado por trastornos de la conducta como irritabilidad con inmediata evolución a estado de obnubilación y desorientación. Se realizó el diagnóstico microbiológico utilizando las técnicas convencionales de identificación y los estudios de sensibilidad antimicrobiana. RESULTADOS: se diagnosticó una meningitis bacteriana por L. lactis, bacteria asociada a procesos infecciosos fundamentalmente en pacientes pediátricos e inmunodeprimidos. CONCLUSIONES: el modo de transmisión de la infección es indirecto por vía oral. No se determinó el foco primario de infección a partir del cual se produjo la diseminación dentro del organismo, la cual se considera fue por vía hematógena según la localización anatómica de los sitios donde se encontraron signos de sepsis. En los datos referidos en la historia clínica de la paciente no se encontró ningún antecedente de compromiso de su inmunidad antes del cuadro clínico que motivó el ingreso.

BACKGROUND: Lactococcus lactis cremoris is a bacteria from Streptococcaceae family that may usually be isolated as part of transient or residing microbiota in the human gastrointestinal tract. It is considered essential element in the food industry where it is used as milk fermenter to obtain byproducts such as cheese, yoghurt, butter and others. OBJECTIVES: this is the first report of an adult patient with bacterial meningitis by L. lactis, without a previous history of immunosuppresion. METHODS: the evolution of a 73 years-old female patient, who came to the Emergency Department with a very acute clinical picture of behavioural disorders like irritability, immediately evolving into obnulation condition and lack of proper orientation. The conventional identification techniques together with the antimicrobial sensitivity studies allowed making the microbiological diagnosis. RESULTS: bacterial meningitis caused by L. lactis was diagnosed. This bacterium is linked to infectious processes mainly in pediatric and inmmunosuppresed patients. CONCLUSIONS: the mode of transmission is indirect and orally. The primary focus of infection from which the virus disseminated inside the body was not found. It was considered then that it occurred according to the anatomical location of the sites where sepsis signs were found. According to the data provided by the patient´s medical history, not a single antecedent of compromised immunity was found before appearing the above-mentioned clinical picture.