Revista Cubana de Medicina Tropical

Development, current tendencies and challenges of Epidemiology in Cuba

Contribution of the National Influenza Laboratory to confront the 2009 pandemic influenza in Cuba

INTRODUCCIÓN: las infecciones respiratorias agudas son consideradas la causa más importante de morbilidad y mortalidad en todo el mundo. Estas infecciones adquieren mayor significación asociadas a eventos epidémicos y pandémicos ocasionados por los virus influenza. La necesidad de una vigilancia mundial para los virus influenza fue reconocida en 1947 y condujo a la creación de la Red Global de Vigilancia de los virus influenza por la Organización Mundial de la Salud. El Centro Nacional de Influenza de Cuba pertenece a esta red desde 1975. En el mes de abril de 2009 fue reconocido un nuevo virus influenza A (H1N1) de origen porcino que circulaban en humanos, identificado como el agente causal de la primera pandemia del siglo xxi por la Organización Mundial de la Salud. OBJETIVO: llevar a cabo la vigilancia nacional del nuevo virus pandémico. MÉTODOS: el Centro Nacional de Influenza de Cuba desarrolló y organizó un diagrama de diagnóstico para la confirmación en casos sospechosos de infección por este virus. Se emplearon diferentes ensayos de trancripción reversa-reacción en cadena de la polimerasa para el tipado y subtipado de los virus influenza A. RESULTADOS: entre abril y diciembre de 2009, un total de 6 900 muestras clínicas respiratorias fueron procesadas mediante el diagrama diagnóstico nacional y 980 casos fueron confirmados y notificados a las autoridades nacionales de salud y la Organización Panamericana de la Salud. Los rinovirus humanos resultaron otro de los agentes etiológicos de infecciones respiratorias agudas detectados con frecuencia. CONCLUSIÓN: mediante la estrategia nacional de vigilancia de laboratorio fue posible llevar a cabo un monitoreo efectivo de la circulación de los virus influenza y otros virus respiratorios para alertar a las autoridades nacionales de salud, con vistas a enfrentar la influenza pandémica 2009.

INTRODUCTION: acute respiratory infections are considered the most important causes of morbidity and mortality around the world. These infections became more significant when associated to epidemics and pandemic events caused by influenza virus. The need for global surveillance of influenza viruses was recognized as early as 1947 and led to the establishment of the World Health Organization (WHO) Global Influenza Surveillance Network (GISN). The Cuban National Influenza Centre (NIC) belongs to this network since 1975. On April 2009, the recognition of a new influenza A (H1N1) of swine origin circulating in humans was identified as the causative agent of the first pandemic in the 21st century declared by the WHO. OBJECTIVE: to carry out surveillance of the new pandemic virus nationwide. METHODS: the Cuban National Influenza Center developed a diagnostic diagram to confirm infection with the pandemic virus in suspected cases. Different PCR assays for typing and subtyping of influenza A virus were used. RESULTS: from April to December 2009, 6 900 clinical respiratory samples were processed by using this diagram, 980 cases were confirmed and notified to the national health authorities and to the Pan American Health Organization. Human rhinoviruses were other important etiologic agents of the frequently detected acute respiratory infections. CONCLUSION: with the national strategy for surveillance at lab, it was possible to effectively monitor the circulation of the influenza viruses and of other respiratory viruses in our country and to alert the national health authorities, with a view to facing up to the pandemic influenza (2009)

Design and implementation of a molecular method for influenza A virus (H1N1) in Cuba

INTRODUCCIÓN: entre marzo y abril de 2009 se produjeron en México brotes de enfermedad respiratoria, debido a un nuevo virus de influenza proveniente del cerdo, el cual se diseminó rápidamente mediante la transmisión humano-humano. Los métodos moleculares usados en la actualidad eran inadecuados, porque la composición del genoma del nuevo virus era muy diferente del virus influenza A (H1N1) que había circulado hasta el momento. En su composición, estaba formado por segmentos de genes de origen aviar, humano y cerdo. OBJETIVO: teniendo en cuenta las secuencias publicadas, se diseñó un juego de cebadores específicos para el gen de la hemaglutinina, con la finalidad de evaluar un nuevo ensayo de TR-RCP para detectar el nuevo virus pandémico en Cuba. MÉTODOS: se procesó un total de 3 197 muestras clínicas de casos sospechosos de infección por el virus influenza A (H1N1) pandémico (pdm) mediante un ensayo de transcripción reversa-reacción en cadena de la polimerasa. RESULTADOS: el ensayo optimizado permitió obtener una banda de 292 pb, sin reacciones inespecíficas. El nuevo método resultó ser útil en el diagnóstico y subtipado del virus de influenza H1N1 pdm. El producto amplificado fue analizado por secuenciación nucleotídica y se confirmó la identificación del virus. CONCLUSIONES: con la introducción de este nuevo ensayo para la vigilancia de influenza, se fortalece la capacidad diagnóstica del Laboratorio Nacional de Referencia.

INTRODUCTION: from March through April of 2009, Mexico notified outbreaks of respiratory illness, due to a new influenza virus of swine origin, which spread over rapidly via human-to-human transmission. The molecular methods currently in use were not suitable because the genome composition based on gene segments of swine, avian and human origin was quite different from the influenza A virus (H1N1) circulating at that time. OBJECTIVE: based on the published sequences, a set of specific primers for the HA gene was designed to evaluate a new RT-PCR assay. METHODS: the RT-PCR assay processed 3 197 clinical samples from suspected cases of pandemic influenza A (H1N1) infection. RESULTS: the novel optimized method obtained a 262 pb segment, without unspecific reactions. The new method proved to be useful in the diagnosis and subtyping of pandemic HINI influenza virus. The amplified product was verified by nucleotide sequencing, thus confirming the virus. CONCLUSIONS: the introduction of this new assay for the laboratory surveillance of influenza virus strengthens the diagnostic capacity of the National Reference Laboratory.

Cuban strategy for the molecular characterization of the pandemic influenza A virus (H1N1)

INTRODUCCIÓN: en Abril de 2009 se identificó una variante del virus influenza A/H1N1 de origen porcino, lo cual determinó que fuese declarada rápidamente la primera pandemia del siglo XXI. OBJETIVO: establecer una estrategia de secuenciación nucleotídica que permitiera diagnosticar diferencialmente los virus influenza A estacionales del nuevo virus pandémico, así como obtener la mayor cantidad de información posible desde el punto de vista molecular de los genes hemaglutinina y neuraminidasa, tanto de pacientes que sufrieron una enfermedad tipo influenza como los que padecieron de una infección respiratoria aguda grave y los que fallecieron. MÉTODOS: se diseñaron e implementaron tres estrategias de secuenciación que brindaron información importante acerca del nuevo virus en Cuba. RESULTADOS: a través de la tercera estrategia se obtuvieron los resultados más completos: diagnóstico diferencial, vigilancia de las mutaciones D222G/E en la hemaglutinina y las variantes virales H275Y resistentes al Tamiflu. A pesar de no haber detectado las mutaciones mencionadas, no se puede descartar su presencia en población cubana, debido a que estas estrategias no fueron diseñadas con ese fin. Se impone diseñar un estudio para cumplir con ese objetivo. CONCLUSIONES: las estrategias de secuenciación aplicadas en nuestro algoritmo permitieron realizar el diagnóstico diferencial de los virus influenza estacional del pandémico y su caracterización molecular.

INTRODUCTION: in April 2009, there was identified a variant of the A/H1N1 influenza virus of swine origin, and shortly after the first pandemic in XXI century was declared. OBJECTIVES: to establish a nucleotide sequencing strategy for the differential diagnosis of the seasonal and pandemic influenza A viruses, and to obtain as much molecular information as possible about hemagglutinin and neuraminidase genes in patients with influenza-like illnesses, in those with severe respiratory infection and in patients who died. METHODS: three sequencing strategies were designed and implemented, which also offered important information about the new virus in Cuba. RESULTS: the third strategy provided the most comprehensive results such as differential diagnosis, the surveillance of the D222G/E mutation in hemagglutinin and Tamiflu-resistant H275Y viral variants. In spite of the fact that the mentioned mutations were not detected, their presence in the Cuban population can not be ignored since these strategies were not designed for this end. It is imperative to design a study to fulfill this objective. CONCLUSIONS: the sequencing strategies in our algorithm allowed the differential diagnosis of the seasonal and the pandemic viruses, and their molecular characterization.

Severe acute respiratory infection in Cuban patients during the influenza A (H1N1) pandemic in Cuba, 2009

INTRODUCCIÓN: en abril de 2009 las autoridades de salud de México reportan a la Organización Panamericana de la Salud un incremento de las hospitalizaciones por neumonía con tasas elevadas de mortalidad. El Sistema Nacional de Vigilancia Epidemiológica, notó que este incremento se presentaba fundamentalmente en las edades de 20 a 40 años. Se identificó un nuevo virus influenza A de origen porcino subtipo (H1N1) como agente causal de la primera pandemia del siglo XXI. El 26 de abril de 2009 el plan nacional de enfrentamiento a la pandemia por influenza (H1N1) es activado por las autoridades nacionales de salud de la República de Cuba y el 7 de mayo se diagnosticó el caso índice de influenza pandémica (H1N1) en Cuba. Se estableció un sistema de vigilancia integrada con confirmación de laboratorio. OBJETIVOS: detectar e identificar el virus de la influenza pandémica durante la ola pandémica. MÉTODOS: durante las semanas epidemiológicas de la 37 a la 41 se observó un alza en el número de atenciones médicas. En este período se seleccionaron para este análisis solo las muestras colectadas de pacientes con diagnóstico clínico de infección respiratoria aguda grave divididas en tres grupos fundamentales, 370 niños y adultos graves, 55 gestantes graves y 30 fallecidos. El diagnóstico fue realizado por reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real para los virus de influenza pandémica y reacción en cadena de la polimerasa convencional para otros virus respiratorios. RESULTADOS: el virus de la influenza pandémica se detectó en 65, 20 y 9 casos, respectivamente. El virus de la influenza estacional A (H3N2) en 81 casos de infección respiratoria aguda grave, donde se incluyeron pacientes de todas las edades; 10 gestantes graves y en 5 fallecidos, los cuales fueron detectados por reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real. Otros virus respiratorios también fueron monitoreados por reacción en cadena de la polimerasa a punto final. CONCLUSIONES: el análisis integral de estos resultados constituye un aporte a la vigilancia nacional y regional de los virus respiratorios para el perfeccionamiento de los programas de prevención y control de las infecciones respiratorias agudas.

INTRODUCTION: on April 2009, the Mexican health authorities reported increased hospitalization indexes caused by pneumonia with high mortality rates to the Pan-American Health Organization (PAHO). The National Epidemiological Surveillance System of Mexico noticed that this increase mainly occurred in the 20-40 year old population. A new type of swine influenza A (H1N1) virus was identified by laboratory studies as the etiological agent of the first pandemic of the 21st century. On April 26 2009, the National Anti-pandemic Plan was activated by the Cuban Ministry of Public Health, and on May 7th, the lab-confirmed index case appeared. An integrated surveillance system with laboratory confirmation was set up. OBJECTIVES: to detect pandemic influenza virus during the pandemic wave. METHODS: the epidemiological weeks 37 to 41 witnessed a rise of the number of sick people seen by the medical services. In this period, the samples taken from patients clinically diagnosed with severe acute respiratory infection were selected for this analysis; they were divided into three groups, that is, 370 children and adults in critical condition, 55 pregnant women in severe condition and 30 fatal cases. The diagnosis of the pandemic virus was performed by Real Time Polymerase Chain Reaction Test (PCR). Other respiratory viruses were tested by conventional PCR. RESULTS: the pandemic influenza virus was detected in 65 children and adults, 20 pregnant women and 9 fatal cases. The seasonal influenza A (H3N2) virus was identified in 81 cases of severe acute respiratory infection covering all age groups, 10 pregnant women and 5 deceased on the basis of real time polymerase chain reaction test. Other respiratory viruses were also monitored by the end-point polymerase chain reaction. CONCLUSIONS: the comprehensive analysis of these results contributes to the national and regional surveillance of respiratory viruses for the improvement of the prevention and control programs of the acute respiratory infections.

Reactogenicity associated to the intradermally administered inactivated poliovirus vaccine with a needle-free injector

INTRODUCCIÓN: en la medida en que la meta de la erradicación de la poliomielitis llega a su concreción, la necesidad de contar con una vacuna de polio inactivada asequible y apropiada para el uso en países en vías de desarrollo se ha convertido en una meta para la Organización Mundial de la Salud. OBJETIVO: la evaluación de la reactogenicidad de la vacuna de polio inactivada. MÉTODOS: se realizó un estudio multicéntrico con diseño experimental, correspondiente a Fase I-II de un ensayo clínico controlado, aleatorio y a simple ciegas, en 471 lactantes sanos de ambos sexos nacidos entre los meses de julio y agosto de 2006 en Camagüey, cuyos padres brindaron su consentimiento por escrito y que cumplieron con los criterios de inclusión establecidos. Los niños recibieron a las 6, 10 y 14 semanas del nacimiento, tres dosis de vacuna de polio inactivada del Instituto de Sueros de Dinamarca, autorizada para su uso en esta investigación por las autoridades regulatorias nacionales. Al grupo de estudio A, se le administró por la vía intradérmica la dosis reducida de 0,1 mL de vacuna de polio inactivada en la cara anterolateral del muslo izquierdo utilizando el inyector sin aguja Biojector® 2000. El grupo control B recibió la dosis usual de 0,5 mL por la vía intramuscular profunda, administrada en el mismo sitio descrito antes con una jeringuilla prellenada. Se observaron los eventos adversos durante la primera hora, 24, 48, y 72 h subsiguientes, así como a los 7 y 30 d de administrada la vacuna. La reactogenicidad se evaluó inicialmente por el pediatra del área y luego por el médico de familia mediante la observación de los eventos adversos. RESULTADOS: 79,6 % del total de niños asignados al grupo A y 75 % del grupo B finalizaron el protocolo de investigación. No se detectaron eventos adversos moderados o serios. Predominaron las reacciones adversas locales menores, sobre todo induración, dolor y enrojecimiento en el sitio de la inyección. CONCLUSIÓN: el ensayo demostró la seguridad de la vacuna de polio inactivada para su uso por vía intramuscular y reconoció la seguridad del uso de la vía intradérmica y del inyector sin agujas.

INTRODUCTION: as the goal of poliomyelitis eradication is about to be accomplished, the need for an affordable and appropriate inactivated poliovirus vaccine (IPV) for use in developing countries has become a target for WHO. OBJECTIVE: to evaluate the reactogenicity of the inactivated poliovirus vaccine. METHOD: an experimental-type multicenter study was conducted, as part of a Phase I-II controlled clinical randomized and blinded assay, in 471 healthy infants of both sexes born in July and August 2006 in Camagüey province. The parents of the children who met the inclusion criteria gave their consent in writing. The children received three doses of the inactivated poliovirus vaccine at 6, 10 and 14 weeks after birth. This vaccine came form the Institute of Sera in Denmark and had been approved for use in this assay by the Cuban regularoty authorities, Low 0.1 ml inactivated poliovirus vaccine dose was intradermally administered to the study group A in the anterolateral side of the left thigh using the needle-free injector called Biojector ® 2000. The usual 0.5 mL dose was intramuscularly administered on the same site using a pre-filled syringe. The adverse events were observed during the first hour, 24, 48, and 72 hours after the immunization, as well as 7 and 30 days afterwards. The pediatrician in charge of the health area evaluated the reactogenicity at first and then the family physician was in charge of observing the adverse events in the remaining period. RESULTS: the 79.6% of children in group A and 75% in group B completed the research protocol. Mild local adverse reactions prevailed, mainly induration, pain and redness at the injection site. CONCLUSION: the clinical trial proved the safety of the inactivated poliovirus vaccine for intramuscular administration, and also showed the safety of the intradermal route of administration and of the needle-free injector.

Clinical and pathological correlation in fatal dengue cases found in Maracaibo, Venezuela

INTRODUCCIÓN: dada la importancia del dengue en América, es elemental conocer la causa de muerte de los infectados y evaluar los escasos estudios de necropsias. OBJETIVO: describir y analizar los hallazgos anatomopatológicos relevantes en casos fatales de dengue en un área endémica venezolana. MÉTODOS: se estudiaron 8 casos mortales con criterios clínico-epidemiológicos de dengue o comprobados mediante pruebas serológicas (o ambos), sometidos a necropsia clínica completa. Los tejidos se procesaron con técnicas histopatológicas habituales. RESULTADOS: todos los casos evidenciaron enfermedad pulmonar severa (daño alveolar difuso, edema pulmonar no cardiogénico, tromboembolismo, bronconeumonía, neumonitis, hemorragia intraalveolar); 6 mostraron derrame en cavidad pleural o abdominal, o en ambas. Necrosis hepática focal se presentó en 2 casos. La causa de muerte se relacionó con insuficiencia respiratoria en 6 casos secundaria a enfermedad pulmonar, 2 con choque hipovolémico y 1 desarrolló insuficiencia hepática. CONCLUSIONES: los casos mortales por dengue estudiados evidenciaron compromiso pulmonar severo relacionado con la muerte, a diferencia de lo reportado en otros estudios de necropsias en América. También desarrollaron afectación multiorgánica, que en la mayoría de los casos condujo a la muerte no vinculada directamente a choque hipovolémico. Estos hallazgos de necropsias permitirían proyectar estrategias terapéuticas en pro de evitar la mortalidad.

INTRODUCTION: given the importance of dengue in America, it is indispensable to know the cause of death of the infected people and to evaluate the few necropsy studies available. OBJECTIVE: to describe and to analyze the relevant clinical and pathological findings in fatal dengue cases of dengue in a Venezuelan endemic area. METHODS: eight fatal cases, according to clinical and epidemiological dengue criteria and/or confirmed by complete serological tests were studied after complete clinical necropsy. The tissues were processed by standard histopathological techniques. RESULTS: all these cases showed severe lung disease (diffuse alveolar damage, non cardiogenic pulmonary edema, thromboembolism, bronchopneumonia, pneumonitis, intralveolar hemorrhage). Six presented with pleural or abdominal effusion. Focal hepatic necrosis was found in two cases. The cause of death was related to respiratory failure in six cases secondary to lung disease; two with hypovolemic shock, and one developed liver failure. CONCLUSIONS: the studied dengue cases showed fatal severe pulmonary compromise leading to death, unlike those reported in other studies of autopsies in The Americas. They also developed multiple organ failure, which in most cases led to death not directly associated to hypovolemic shock. These findings in autopsies will allow designing therapeutic strategies to avoid mortality.

Antimalarial activity and cytotoxicity of hydroalcoholic extracts from six plant species used in Cuban traditional medicine

INTRODUCCIÓN: la malaria es la enfermedad parasitaria de mayor importancia para la salud mundial. La carencia de diversidad estructural de los antimaláricos en uso convierte en una necesidad urgente la búsqueda de nuevas alternativas terapéuticas. Las plantas han demostrado su potencial para proveer antimaláricos efectivos. Una amplia muestra de plantas medicinales cubanas están siendo estudiadas con este propósito. OBJETIVO: evaluar la actividad antimalárica de extractos de 6 especies de plantas y determinar su selectividad midiendo la citotoxicidad frente a células humanas. MÉTODOS: se prepararon extractos hidroalcohólicos de partes aéreas de: Annona glabra L., Bidens pilosa L., Cecropia peltata L., Curcuma longa L., Hura crepitans L. y Pluchea odorata (L.) Cass. La actividad de los extractos se evaluó in vitro frente a Plasmodium falciparum y fibroblastos humanos MRC-5. Se calcularon la concentración inhibitoria media, concentración citotóxica media y el índice de selectividad. Se realizó un tamizaje fitoquímico preliminar del extracto más activo. RESULTADOS: solo el extracto de H. crepitans mostró buena actividad antiplasmodial (concentración inhibitoria media de 5,7 µg/mL) con excelente selectividad (índice de selectividad de 18,8). El tamizaje fitoquímico reveló la presencia de compuestos fenólicos, triterpenoides, alcaloides, quinonas, flavonoides y antocianidinas. CONCLUSIONES: se obtuvo un extracto con potente actividad antimalárica in vitro. Este resultado induce a continuar estudiando esta preparación vegetal.

INTRODUCTION: malaria is the most important parasitic disease for global health. Lack of the structural diversity in current antimalarials demands the urgent search for new therapeutic alternatives. The plants have shown their potential to provide effective antimalarials, therefore, a large sample of Cuban medicinal plants is being studied. OBJECTIVES: to evaluate antimalarial activity of extracts from six plant species and to determine their selectivity by meassuring cytotoxicity against human cells. METHODS: hydroalcoholic extracts from Annona glabra L., Bidens pilosa L., Cecropia peltata L., Curcuma longa L., Hura crepitans L. and Pluchea odorata (L.) Cass. were prepared. Their activity was evaluated in vitro against Plasmodium falciparum and human fibroblasts MRC-5. The mean inhibitory concentration, the mean cytotoxic concentration and the selectivity index were estimated. A preliminary phytochemical screening of the most active extract was made. RESULTS: H. crepitans extract was the only one that showed good antiplasmodial activity (mean inhibitory concentration of 5.7 µg/mL) with excellent selectivity (selectivity index of 18.8). Phytochemical screening revealed the presence of phenolic compounds, triterpenoids, alkaloids, quinones, flavonoids and anthocyanidins. CONCLUSIONS: one extract with potent antimalarial activity in vitro was obtained. This result is an incentive to continue studying this vegetal preparation.

Distribution and ecological characteristics of freshwater snails of medical importance in Santiago de Cuba province

INTRODUCCIÓN: los moluscos fluviales se caracterizan por su capacidad de servir como hospederos intermediarios de importantes parásitos causantes de enfermedades tropicales. OBJETIVO: se realizó un estudio malacológico en la provincia de Santiago de Cuba para determinar la distribución de las principales especies de importancia médica y su relación con los principales tipos de ecosistemas. MÉTODOS: se muestrearon 19 sitios de la provincia y se relacionó la abundancia de cada especie con el tipo de hábitat por medio de un análisis de correspondencia. Cada sitio fue referenciado geográficamente para analizar los patrones de distribución. RESULTADOS: se encontró un total de 12 especies de moluscos fluviales, de las cuales las más abundantes resultaron Tarebia granifera, Physa acuta y Pyrgophorus parvulus. Los ríos aparecen como los principales tipos de ecosistemas relacionados con estas especies, seguidos de los arroyos y zanjas. La especie Fossaria cubensis logró elevadas densidades en terrenos inundados mientras que Biomphalaria pallida fue la única especie de planórbido capaz de coexistir con los tiáridos. CONCLUSIONES: debido al tipo de especies presentes en esta provincia, la probabilidad de aparición de brotes de fasciolosis, así como el riesgo de introducción de esquistosomosis se consideran elevados.

INTRODUCTION: the ability of freshwater snails to serve as intermediary host of parasites responsible for some tropical diseases is well known. OBJECTIVE: a malacological study was carried out in the Santiago de Cuba province in order to determine the distribution of freshwater snails of medical importance and their relation with the main ecosystems. METHODS: nineteen sites were sampled in the province and the abundance of each of the species was compared to the type of habitat by means of the correspondence analysis. Each site was referred from the geographical viewpoint to determine the distribution patterns. RESULTS: a total amount of 12 freshwater snail species was found and the most abundant were Tarebia granifera, Physa acuta and Pyrgophorus parvulus. Rivers are the main types of ecosystems associated to these species followed by springs and ditches. Fossaria cubensis showed high density in flooded grounds whereas Biomphalaria pallida was the only planorbid species that could coexist with thiarid species. CONCLUSIONS: due to the species found in this province, the likelihood of possible outbreaks of fasciolosis as well as the introduction of schistosomiasis is considered as high.

**Bioecological studies of Aedes (St.) aegypti in an urban area with low vector density in Camagüey province**

INTRODUCCION: el control de los sitios de cría de mosquitos de relevancia médica es esencial en los programas de lucha antivectorial, sin embargo, los esfuerzos ejecutados hasta la actualidad no han sido suficientes por el aumento paulatino de casos confirmados de fiebre de dengue. OBJETIVO: informar sobre los principales sitios de cría de Aedes aegypti, en un ambiente urbano de Camagüey con baja densidad del vector. MÉTODOS: el universo urbano se inspeccionó en su totalidad entre enero y diciembre de 2007. En los depósitos positivos la colecta fue según metodología del Programa Nacional de Control de Vectores. Cada depósito fue caracterizado mediante una planilla de investigación de manzana positiva implementada al efecto. Se determinó el porcentaje de representatividad de cada depósito positivo, así como la proporción de larvas por cada depósito. RESULTADOS: Aedes aegypti colonizó 44 depósitos diferentes con destaque para artificiales (97,73 %). La mayoría fueron permanentes, útiles y no modificables. Siguiendo el criterio de la población la combinación permanentes + útiles se cumple en 17 tipos de depósitos que representan 38,63 %, y aportan un total de 180 recipientes positivos para 81,08 %. Los tanques bajos contribuyeron a 36,03 % de la positividad. CONCLUSIONES: la elevada positividad en depósitos que pudieron ser evitados por la población obliga a elevar la responsabilidad individual en el mejoramiento del saneamiento doméstico y, con ello, la concientización cívica para alcanzar una activa participación comunitaria en este sentido. Esto junto al fortalecimiento de la transectorialidad, permitirá impactar en la eliminación y disposición final de todo material inservible y que pueda servir de criadero a los mosquitos.

INTRODUCTION: the control of the breeding sites of mosquitoes of medical importance is essential for the anti-vector fighting programs; however, the efforts made so far have not great enough since the confirmed dengue fever cases gradually increase. OBJECTIVE: to provide information on the main breeding sites of Aedes aegypti in an urban area with low vector density in Camagüey province. METHODS: the urban universe was fully surveyed from January to December 2007. The collection procedure in the positive containers followed the National Vector Control program methodology. The characteristics of each container were written in a customized study form of positive blocks. The representative percentage of each positive container, as well as the proportion of larvae per container were determined. RESULTS: Aedes aegypti formed colonies in 44 different containers, being the artificial reservoirs the predominant ones (97.73%). The majority were permanent, useful and unchangeable. Following the population's criteria, the combination of permanent plus useful is valid in 17 types of containers accounting for 38.36% and contributing 180 positive containers for 81.08% of the total number. The tanks placed on the ground reached 36.03% positivity. CONCLUSIONS: the high number of mosquito-positive tanks demands greater individual responsibility in improving domestic sanitation and thus, the increase of awareness in order to achieve more active community involvement in this regard. The latter together with the strengthening of transectoriality will allow having an impact on the elimination and final disposal of all the useless materials that may serve as possible breeding sites of mosquitoes.

High performance liquid chromatography-validated analytical method for 1 % permethrin quantification

INTRODUCCIÓN: en Cuba, al igual que en otros países, la infestación por Pediculus capitis se ha incrementado notablemente a partir de la década de los setenta, por lo que se desarrolla un intenso programa dirigido a su control y prevención, en el cual se incluyen estudios sobre la calidad de la permetrina, que es un piretroide sintético, activo frente a una amplia gama de parásitos, con actividad pediculicida a 1 % y escabicida a 5 %. Dada su baja toxicidad y por responder favorablemente a la relación riesgo/beneficio, constituye uno de los pediculicidas de elección para disminuir la infestación por piojos. OBJETIVO: revalidación de una metódica analítica por cromatografía líquida de alta resolución y su aplicación en la cuantificación de 12 muestras de 2 lotes de loción de permetrina 1 %, de producción nacional. MÉTODOS: los parámetros evaluados fueron linealidad, precisión y exactitud. Se prepararon 7 estándares de calibración y soluciones de trabajo con concentraciones que se encontraban entre 100 y 15 000 µg/mL. Estos parámetros de validación fueron verificados a través del coeficiente de correlación, el coeficiente de variación y el error relativo porcentual. RESULTADOS: la especificidad del método fue corroborada a través de los cromatogramas realizados, en los cuales los tiempos de retención fueron entre 8,8 y 9,2 min para el isómero trans y entre 10,7 y 11,2 min para el isómero cis. El coeficiente de correlación determinado para ambos isómeros fue mayor que 0,99; el coeficiente de variación fue menor que 3 % y el error relativo porcentual estuvo entre -3 y 1 %, tanto para los estudios interdía como intradía. Se determinó que la media de la concentración de permetrina en lotes de solución tópica 1 % resultó de 6 780,14 µg/mL. CONCLUSIONES: el método revalidado fue lineal, preciso y exacto dentro del rango de concentraciones estudiadas. La concentración de permetrina calculada estuvo por debajo de lo esperado según la información de la composición de la solución de permetrina 1 % (9 100-10 900 µg/mL). Este método resulta útil para la cuantificación de solución de permetrina 1 % en los estudios de calidad del producto farmacológico que se distribuye a la población.

INTRODUCTION: in Cuba, as well as in other countries, Pediculus capitis infestation has increased since the 70´s; this is the reason why a program aimed at controlling and preventing this infestation was designed. This program includes quality control studies of the active synthetic pyrethroid Permethrin and its activity at 1 % on lice and 5 % on scabies. Due to its low toxicity and positive risk/benefit ratio, Permethrin is a pediculicide of choice to decrease Pediculus capitis infestation. OBJECTIVE: to validate an analytical method using high performance liquid chromatography and its application in the quantification of 12 samples from 2 batches of Cuban-made 1 % permethrin pediculicidal preparation. METHODS: linearity, precision and accuracy parameters were determined. Seven calibration standards and working solutions with concentrations ranging from 100 to 15 000 µg/mL were prepared. These validation parameters were verified through the correlation coefficient, the variation coefficient and the percentage relative error. RESULTS: the specificity of this method was proved in the chromatograms that showed retention times of 8.8 to 9.2 min for the isomer trans and 10.7 to 11.2 min for the isomer cis. The correlation coefficient for both isomers was higher than 0.99; the variation coefficient was under 3 % and the percentage relative error was -3 and 1 % for the inter-day and intraday studies, respectively. The mean permethrin concentration in 1 % solution batches was estimated at 6 780.14 µg/mL. CONCLUSIONS: the validated method was linear, precise and exact within the range of the studied concentrations. The estimated concentration of permethrin was below the expected rate according to the composition of 1% permethrin solution (9 100-10 900 µg/mL). This method may be useful for the quantification of 1 % permethrin solutions in the quality studies of the product sold to the population.

**Phenotypic characterization of Aeromonas isolated from patients with acute diarrheal diseases**

INTRODUCCIÓN: las enfermedades diarreicas agudas constituyen una de las principales causas de morbilidad y mortalidad en los niños menores de 5 años y en la población general, esto ocasiona una gran demanda de atención en los servicios de salud. La situación se agrava por el abuso de los antimicrobianos y el desarrollo de resistencia bacteriana, suceso que hoy día constituye un problema emergente de salud en diversas regiones del mundo. Entre los microorganismos causantes de enfermedades diarreicas agudas se encuentran los pertenecientes al género Aeromonas, los cuales han sido reconocidos como patógenos emergentes de riesgo II. OBJETIVOS: determinar las especies de Aeromonas más frecuentemente aisladas a partir de muestras de heces de pacientes con enfermedades diarreicas agudas y su susceptibilidad antimicrobiana. MÉTODOS: se determinó la susceptibilidad mediante el método de Bauer-Kirby frente a diferentes antimicrobianos a 100 aislamientos remitidos desde los centros provinciales de higiene y epidemiología del país durante 2007-2008. RESULTADOS: En 67 % de los aislamientos se logró la identificación hasta especie, se observó el predominio de A. caviae (33 %) y A. hydrophila (29 %). Se demostró que 100 % de los aislamientos resultaron resistentes al menos a un antimicrobiano de los investigados. El porcentaje más elevado de resistencia se observó frente a la cefalotina, las sulfonamidas y el ácido nalidíxico. CONCLUSIONES: se propone a la tetraciclina y el cloranfenicol como fármacos de elección para el tratamiento de las infecciones intestinales producidas por estos microorganismos en Cuba.

INTRODUCTION: the acute diarrheal diseases are one of the main causes of morbidity and mortality in children aged under 5 years and in the general population; this demands a great deal of care in the healthcare services. The situation worsens due to the overuse of antimicrobials and the development of bacterial resistance, being the latter an emerging health problem in different areas of the world. Among the causative microorganisms of acute diarrheal diseases are those of Aeromonas genus, recognized as second risk emerging pathogens. OBJECTIVES: to determine the most frequently isolated Aeromonas species in fecal samples from acute diarrheal patients and their antimicrobial susceptibility. METHODS: the Bauer-Kirby´s method allowed identifying the susceptibility to several antimicrobials of 100 isolated samples coming from the provincial hygiene and epidemiology centers during 2007 and 2008. RESULTS: identification of the species was accomplished in 67% of isolates, being A. caviae (33 %) y A. hydrophila (29 %) the predominant species. It was demonstrated that 100% of isolates got resistant to at least one of the studied antimicrobials. Drug resistance to cefalotine, sulfonamides and nalidixic acid showed the highest percentages. CONCLUSIONS: tetracycline and chloramphenicol are recommended as the drugs of choice for treating intestinal infections caused by these microorganisms in Cuba.

**Operational impact of the use of insecticidal products on Aedes aegypti larvae in Havana province**

INTRODUCCIÓN: a pesar de los enormes esfuerzos que realiza el programa de erradicación de Aedes aegypti en Cuba, persisten en algunas regiones del país determinados índices de infestación que favorecen el desarrollo de epidemias o brotes de dengue. En este negativo indicador se destaca la provincia La Habana, donde desempeña un papel importante el uso de insecticidas. OBJETIVOS: evaluar el impacto del uso de insecticidas, por el programa de erradicación de Ae. aegypti, en el desarrollo de resistencia en esta especie en La Habana. MÉTODOS: se utilizaron 15 cepas de Ae. aegypti, procedentes de los 15 municipios de La Habana, colectados en 2008. El nivel de susceptibilidad a insecticidas se determinó mediante bioensayos recomendados por la Organización Mundial de la Salud. RESULTADOS: 60 % de las cepas mostró susceptibilidad a clorpirifos; de los piretroides evaluados, se observó mayor resistencia a cipermetrina, seguido por lambdacialotrina y ciflutrina. CONCLUSIONES: el insecticida clorpirifos es un buen candidato a utilizar con los piretroides, de forma rotacional, para retardar el desarrollo de la resistencia a los piretroides en Ae. aegypti de La Habana.

INTRODUCTION: in spite of the huge efforts of the Aedes aegypti eradication program in Cuba, there are still certain infestation indexes favoring the development of outbreaks or epidemics in some regions of the country. Havana province holds a leading position in this negative indicator, in which the use of insecticides plays an important role. OBJECTIVES: to evaluate the impact of the use of insecticides in the development of drug resistance by this species in Havana. METHODS: fifteen Ae. aegypti strains from the fifteen municipalities of the province were used. They were all collected in 2008. The level of susceptibility to insecticides was measured by means of the WHO-recommended bioassays. RESULTS: sixty percent of the strains were susceptible to chlorpirifos; more resistance to pyrethroid cypermethrin was observed followed by lambdacyalothrin and cifluthrin. CONCLUSIONS: the insecticide Chlorpirifos is a good candidate to be used with pyrethroids, on a rotational scheme, to delay the development of resistance to pyrethroids in Ae. aegypti vectors in Havana province.

Alteration in superficial anionic charge of erythrocytes and desialated erythrocytes caused by Ascaris lumbricoides

INTRODUCCIÓN: eL ácido siálico del eritrocito tiene importancia hemorreológica y hemodinámica. Su disminución promueve la agregación eritrocitaria y la reducción del flujo sanguíneo. OBJETIVO: estudiar el efecto producido por A. lumbricoides sobre la carga aniónica de eritrocitos y eritrocitos desializados, en función del tiempo de contacto de los glóbulos rojos con extractos del parásito. MÉTODOS: se trabajó con 20 extractos parasitarios ([EA]) y con suspensiones de eritrocitos Grupo O en medio salino (GR) y en medio enzimático de bromelina (GR B). Se realizó el tratamiento de los glóbulos incubando el sedimento globular con igual volumen de extractos parasitarios a 37 ºC durante 15, 30, 45, 60, 90 y 120 min. Para cada tiempo de tratamiento hubo un control (eritrocitos sin contacto con extractos parasitarios). Se aplicó simultáneamente el método de Polibrene en el control, GR y GR B. Se asignó una puntuación a cada agregación obtenida. Se calculó CexpCAS[EA] como el cociente entre la puntuación del control y de los eritrocitos tratados. RESULTADOS: los análisis estadísticos permitieron concluir que el tiempo de tratamiento de GR y GR B tuvo un efecto altamente significativo sobre el valor del CexpCAS[EA]; la mediana de CexpCAS[EA] fue significativamente mayor para GR respecto de GR B; la captación de ácido siálico en GR fue mayor a partir de los 90 min, mientras que en GR B fue menor a los 15 min, sin diferencias significativas entre los demás tiempos de tratamiento. Los resultados mostraron que la captación de ácido siálico por el parásito dependió del tiempo de tratamiento y que el extracto parasitario provocó mayor alteración en la carga superficial de GR B. CONCLUSIONES: la disminución de ácido siálico podría relacionarse con la trombosis y la anemia comunicadas en ascariosis. La experiencia permite suponer que el efecto del parásito puede tener mayor relevancia en individuos con diabetes e hipertensión.

INTRODUCTION: sialic acid of the erythrocytes has hemorreologic and hemodynamic importance, so its reduction causes erythrocyte aggregation and low blood flow. OBJECTIVE: to study the effect of A. lumbricoides on the anionic charge of erythrocytes and of desialated erythrocytes, taking the time of contact of the erythrocytes with parasite extracts into account. METHODS: twenty parasite extracts and Group O erythrocyte suspensions in saline medium (GR) and in bromelin enzymatic medium (GRb) were used. The erythrocytes were treated by incubating the globular sediment with the same volume of parasite extracts, at 37 ºC for 15, 30, 45, 60 , 90 and 120 min. There was a control for each treatment interval (erythrocytes without contact with parasite extracts). The polybrene´s method was simultaneously applied to the controls, the GR ad the GRb. Each obtained aggregation was given a scoring. CexpCAS[EA] was calculated as the quotient between the treated erythrocytes scoring and the control scoring. RESULTS: the statistical analysis allowed arriving to the conclusion that the time of GR and GR B treatment had a highly significant effect on the value of CexpCAS[EA]; the median of CexpCAS[EA]; was significantly higher for GR than for GR B; the sialic acid uptake in GR was higher from 90 minutes on, whereas this parameter was lower in GR B at 15 min; no significant differences were observed for the rest of the treatment times. The results showed that the sialic acid uptake by the parasite depended on the time of treatment and that the parasite extract caused more alteration in the superficial charge of GR B. CONCLUSIONS: the reduction of sialic acid could be related to thrombosis and anemia in ascariosis. The experience gained allows us to consider that the effect of the parasite may be more significant in diabetic and hypertensive individuals.