Revista Cubana de Hematología, Inmunología y Hemoterapia

Impact of the development of the Institute of Hematology and Immunology at the Cuban Medical Sciences

Emergencies in Hematology: metabolic and leukocyte alterations

Las urgencias que pueden surgir durante la evolución de las enfermedades hematológicas son diversas, tanto por el comportamiento de la enfermedad de base como por el momento en que se presentan. Pueden ser la primera manifestación de la enfermedad o aparecer en el curso de su evolución, y sus secuelas pueden ser menores si se diagnostican y tratan adecuadamente. Se hace una revisión de algunas de las alteraciones metabólicas y leucocitarias más frecuentes que se pueden presentar en el paciente oncohematológico.

Emergencies which may appear during the evolution of hemopathies are diverse due to their basic behavior as well as according to the moment the disease comes into view. They may be the first sign of the disease or could appear during the course of its evolution. Consequences might be milder if diagnosed and treated properly. A revision of some of the most frequent metabolic and leukocyte alterations that could arise in the patient with an oncohematological disease is shown.

Hemophilia: historical and genetic aspects

La hemofilia es un trastorno hemorrágico con disminución o ausencia de la actividad procoagulante del factor VIII o del IX. Las primeras descripciones de esta enfermedad son tan antiguas como la propia humanidad. A lo largo de los años, la hemofilia ha sido nombrada "enfermedad real" debido a que la padecieron diversos miembros de las familias reales europeas. En la actualidad, mediante estudios moleculares, se encontró el defecto genético causante de la enfermedad en los varones hemofílicos de la familia de la Reina Victoria y se encontró que sus descendientes padecieron una hemofilia B severa. El fenotipo de esta enfermedad es hemorrágico; se observan sangramientos en diversos sitios de la economía condicionados fundamentalmente por los niveles del factor deficiente. Existen otros factores que intervienen en las características fenotípicas variables de estos pacientes, entre ellos: las características intrínsecas de los factores VIII/IX, la presencia de genes modificadores y factores ambientales que influyen sobre la severidad de la enfermedad. Se revisa la correlación genotipo-fenotipo en esta enfermedad mediante las mutaciones más frecuentes en cada tipo de hemofilia. En cuanto a la presencia de los inhibidores, se destacan las evidencias actuales en relación con los factores de riesgo relacionados con su aparición y los aspectos moleculares presentes en la variante de hemofilia B Leyden.

Hemophilia is a hemorrhagic disorder characterized by decreasing or absence of the procoagulant activity in factor VIII or IX. First descriptions of this disease are as old as mankind itself. During time, hemophilia has been called "royal disease" since different members of European royal families suffered from it. Currently, by molecular studies, it was found the causing genetic defect of this disease in hemophilic male members of Queen Victoria´s family; and it was found that her descendants suffered a severe hemophilia B. This disease phenotype is hemorrhagic; bleeding in different sites is observed which are mainly conditioned by the levels of the deficient factor. There are other factors participating in the variable phenotype characteristic of these patients, such as: intrinsic characteristics of factors VIII/IX, the presence of modifying genes and environment factors which influence on this disease severity. It is revised here the correlation genotype-phenotype in this disease through the most frequent mutations in each type of hemophilia. Concerning the presence of inhibitors, it is highlighted the current evidences in relation with risk factors related to its emergence and molecular aspects present in hemophilia variant B Leyden.

Importance of physical exercise to achieve a healthy elderly

Evidencias aportadas por el estudio realizado en personas de la tercera edad con práctica sistemática de ejercicios físicos, demuestran que la tercera edad puede ser una etapa activa y vital, pero para lograr mejor calidad de vida en ella, es imprescindible el conocimiento del estado de salud de los adultos mayores. Se estudiaron 46 adultos de la tercera edad que asistían al círculo de abuelos auspiciados por el Instituto de Medicina Deportiva, donde practican t´ai chi y cuentan con control médico sistemático. A todos se les realizó hemograma completo, colesterol, triglicéridos, proteínas totales y albúmina, determinación de hierro sérico y capacidades, dosificación de ferritina y vitamina B12. Se observó un predominio del sexo femenino. El 97,8 % refirió padecer una o más enfermedades, la más frecuente fue la hipertensión arterial seguida de la gastritis, la insuficiencia cardíaca y la diabetes mellitus. El 50 % de los casos no tenía alterado ninguno de los parámetros de laboratorio estudiados. No se encontró ningún caso con anemia. Solo 13 casos mostraron alteraciones del perfil lipídico. La incidencia de hábitos tóxicos encontrados fue baja, pues solo 3 casos refrieron ser fumadores y otros 3 consumir alcohol de forma ocasional. En cuanto al consumo de multivitaminas, fue referido por el 67,4 %. Mantener hábitos de vida saludables unidos a la práctica sistemática de ejercicio físico, son las mejores credenciales para una vejez saludable.

Evidences from the study in elderly people with physical exercise routine practice show that the elderly can be an active and vital stage. To achieve better quality of life in it is essential to understand the health status of older adults. We studied 46 older adults attending the club of grandparents sponsored by the Institute of Sports Medicine. In this club, there was female predominance. They practiced tai chi and they have medical management control. Tests were performed such as complete blood count, cholesterol, triglycerides, total protein and albumin, serum iron determination and capacities, determination of ferritin and vitamin B12. 97.8 % reported having one or more diseases, the most frequent was hypertension followed by gastritis, heart failure and diabetes mellitus. 50 % of cases had not altered any of the laboratory parameters studied. We found no case with anemia. Only 13 cases showed changes in lipid profile. The incidence of toxic habits found was low: only 3 cases referred to smoke and other 3 referred alcohol intake occasionally. 67.4 % reported multivitamin use. The best credentials for a healthy old age are to maintain a healthy lifestyle with a practice exercise routine.

Characterization of autoantibodies in autoimmune hemolytic anemia following treatment with interferon alfa

Se estudiaron 13 pacientes con leucemia mieloide crónica y anemia hemolítica autoinmune inducida por el interferón alfa, a quienes se les realizó la detección de inmunoproteínas y la caracterización de las subclases de IgG en los hematíes mediante la prueba de antiglobulina directa (PAD) y la técnica de microplacas. Se aplicó además un ELISA para la cuantificación de inmunoglobulinas en los hematíes. Se detectó la presencia de IgG y C3 en el 53,84 % de los casos, IgG sola en el 23,07 % y en el 15,38 % se identificaron autoanticuerpos IgG e IgA. En 11 pacientes se demostró la presencia de IgG1 y en un caso se identificaron además autoanticuerpos de la subclase IgG3. El ELISA detectó autoanticuerpos en concentraciones de 183 moléculas de IgG por hematíe en un paciente con PAD negativa. En los pacientes con hemólisis de alto grado se encontró una concentración de autoanticuerpos entre 1 500 y 3 180 moléculas de IgG por hematíe, mientras que en los casos con hemólisis de bajo grado se comportó entre 183 y 1 000 moléculas. Se observó una correlación negativa entre las cifras de Hb y los valores de haptoglobina plasmática con el número de moléculas de IgG por hematíe y una correlación positiva entre este último con el conteo de reticulocitos.

We studied 13 patients with chronic myeloid leukemia and autoimmune hemolytic anemia induced by interferon alfa. They underwent tests for immune protein detection and characterization of IgG subclasses in RBCs by direct antiglobulin test (PAD) and the microplate technique. Also they were applied ELISA test for quantifying immunoglobulins in the red blood cells. It was detected the presence of IgG and C3 in 53.84 % of cases, IgG alone in 23.07 % and in 15.38 % were identified IgG and IgA autoantibodies. In 11 patients the presence of IgG1 was showed and also in one case the subclass IgG3 autoantibodies was identified. The ELISA detected antibodies at concentrations of 183 IgG molecules per erythrocyte in a patient with negative PAD. In high-grade hemolysis patients, it was found a concentration of autoantibodies between 1 500 and 3 180 molecules of IgG per erythrocyte, while in low-grade hemolysis patients it behaved between 183 and 1 000 molecules. There was a negative correlation between Hb and plasma haptoglobin values with the number of IgG molecules per erythrocyte and a positive correlation between the latter with the reticulocyte count.

**In vitro effect of a Passiflora incarnata L. solution on the response of human lymphocytes from healthy donors and from patients with cellular immunodeficiency**

La Passiflora incarnata L. es una especie que se ha utilizado por el hombre con diversos fines. Se estudió el efecto in vitro de un extracto fluido de esta planta sobre los linfocitos de 20 donantes voluntarios de sangre y de 20 enfermos con diagnóstico de inmunodeficiencia celular, mediante la técnica de formación de roseta activa, roseta espontánea y el ultramicrométodo inmunocitoquímico, así como en la función fagocítica de los neutrófilos. No se hallaron diferencias estadísticamente significativas entre las condiciones experimentales sin pasiflora y con pasiflora, en las técnicas de formación de rosetas ni en la expresión de los marcadores de linfocitos CD2 y CD3. Similares resultados se hallaron con la función fagocítica de los neutrófilos en la misma dilución.

Passiflora incarnata L. is a species that has been used by man for various purposes. It was studied the effect in vitro of a fluid extract of this plant on lymphocytes from 20 blood donors and 20 patients with cellular immunodeficiency diagnosis, using the technique of active rosette formation, and spontaneous rosette immunocytochemical ultramicromethod and in the phagocytic function of neutrophils. We found no statistically relevant differences between experimental conditions with and without Passiflora, neither in the rosette formation techniques or the expression of lymphocyte markers CD2 and CD3. Similar results were found with the phagocytic function of neutrophils in the same dilution.

Impact of cell therapy in carpal tunnel syndrome

Se expone una pequeña serie de pacientes con síndrome del túnel del carpo a quienes se les realizó implante de células mononucleares autólogas de sangre periférica para evaluar la factibilidad y seguridad de estas al sexto mes de realizado el proceder. Se incluyeron 6 pacientes atendidos en el Servicio de Ortopedia del Hospital General Docente "Enrique Cabrera". La mejoría de los síntomas comenzó a la semana de realizado el proceder. El dolor y el calambre fueron los primeros en desaparecer; la mejoría aumentó al mes y se mantuvo hasta el sexto mes de evaluados. Las manifestaciones clínico-neurológicas mejoraron en el 80,3 % de los pacientes con mejoría, además, en el estudio de conducción motora y sensitiva. No hubo reacción al implante. La mejoría de las manifestaciones clínicas y de los estudios de conducción apoyan la mediación de las células madre en la acción antiinflamatoria, la revascularización y la remielinización del nervio mediano, lo que se expresa en las respuestas favorables obtenidas.

We present a small series of patients with carpal tunnel syndrome who underwent implantation of autologous mononuclear cells from peripheral blood to assess the feasibility and safety of these in the sixth month after that procedure. We included 6 patients treated at the Department of Orthopedic in The Enrique Cabrera General Teaching Hospital. The improvement in symptoms began one week after the procedure. Pain and cramping were the first to disappear, the improvement increased one month after and it was maintained until the sixth month of evaluation. The clinical-neurological manifestations improved in 80.3 % of patients, as well as in the study of motor and sensory conduction. There was no reaction to the implant. The improvement of the clinical manifestations and conduction studies support the mediation of stem cells in inflammatory action, revascularization and remyelination of the median nerve, which is expressed in the positive responses obtained.

Stromal rat cell culture. Influence of fetal calf serum

Las células madre estromales humanas y de roedores cultivadas pueden ser inducidas a diferenciarse en neuronas, enfatizando su utilidad potencial en la terapia celular neurorrestaurativa. Los sistemas de cultivo para la expansión de estas células describen el uso de diferentes proporciones de suero fetal, lo que motivó a estudiar qué concentración de suero fetal bovino era capaz de garantizar un adecuado rendimiento celular. Las células de la médula ósea de rata se cultivaron en medio a-MEM suplementado con 10 y 20 % de suero fetal bovino y se subcultivaron hasta 3 veces. La viabilidad celular de los cultivos primarios y los subcultivos estuvo por encima del 98 % en ambos experimentos. Los cultivos primarios demoraron 17,4 días en confluir y los subcultivos 7,7 días. La concentración de suero fetal al 20 % no aumentó significativamente la velocidad de multiplicación celular; no obstante, se obtuvo un mayor número de células estromales. El sistema de expansión in vitro podría utilizarse en estudios futuros para la expansión de las células estromales humanas, lo que sienta mejores bases para su aplicación clínica.

Cultured human and rodents stromal stem cells can be induced to differentiate into neurons, emphasizing its potential use in neurorestorative cell therapy. Cropping systems for the expansion of these cells describe the use of different ratios of fetal serum, which led to study what concentration of fetal calf serum was able to ensure an adequate cell yield. Cells from rat bone marrow were cultured in medium supplemented with a-MEM 10 and 20 % fetal bovine serum and subcultured up to 3 times. Cell viability of primary cultures and subcultures was above 98% in both experiments. Primary cultures converge delayed in 17.4 days and 7.7 days subcultures. The concentration of 20 % fetal calf serum did not significantly increase the speed of cell division, however, we obtained a greater number of stromal cells. The expansion in vitro system could be used in future studies for the expansion of human stromal cells, which feels better basis for clinical application.

Sickle cell anemia and Castleman disease

La enfermedad de Castleman es un proceso linfoproliferativo poco frecuente que se caracteriza por hiperplasia benigna de los ganglios linfáticos. Existen 2 variedades histológicas bien diferenciadas: la hialino-vascular y la plasmo-celular, que a su vez, pueden ser localizadas o multicéntricas. La forma hialino-vascular suele ser asintomática y localizada con mayor frecuencia en mediastino, mientras que la plasmo-celular se presenta frecuentemente con sintomatología sistémica y suele ser difusa o multicéntrica. Por lo poco frecuente de la asociación, presentamos un caso con antecedentes de anemia drepanocítica que después de 12 años de diagnóstico de una enfermedad de Castleman localizada, variante de células plasmáticas y exéresis total, hizo una recaída ganglionar con la misma variante, con buena respuesta clínica al tratamiento.

Castleman's disease is a rare lymphoproliferative process characterized by benign hyperplasia of the lymph nodes. There are 2 distinct histologic variants: hyaline-vascular and cellular plasmodia, which in turn, may be localized or multicentric. The hyaline vascular form is usually asymptomatic and most often located in the mediastinum, whereas cellular plasmodia frequently presents with systemic symptoms and it is usually diffuse or multicentric. Due to the rarity of this association, we present a case with a history of sickle cell disease 12 years after diagnosis of localized Castleman's disease, plasma cell variant and total excision, lymph node had a relapse with the same variant, having good clinical treatment response.

Cell therapy in femur fractures

La medicina regenerativa ha abierto una posibilidad más para la consolidación efectiva y la recuperación rápida de los pacientes con lesiones traumáticas. Se presenta un paciente masculino, blanco, de 46 años de edad con antecedentes de accidente de tránsito. Se diagnosticó fractura del tercio medio del fémur izquierdo y las radiografías simples evidenciaron conminución Grado IV. Egresó después de 20 días de internamiento con persistencia del dolor a pesar de habérsele administrado analgésicos cada 4-6 horas. Se indicó terapia celular que se realizó en régimen ambulatorio. A partir de las primeras 48 horas la mejoría se incrementó progresivamente, logró estabilidad y desapareció el dolor en el foco de fractura, síntoma que mantenía desde el accidente. A las 8 semanas después de la terapia celular se observó mejoría radiológica. En general, su evolución se consideró satisfactoria por la pronta mejoría y su incorporación a la vida social. Este es el primer paciente en la provincia de Artemisa en que se ha realizado este nuevo tipo de terapia y hasta donde conocemos en el momento de la redacción de este trabajo, también el primero informado en la literatura científica en Cuba.

Regenerative medicine has opened another opportunity for effective consolidation and rapid recovery of patients with traumatic injuries. We present a 46 year- old white male patient with a history of traffic accident. A middle third left femur fracture was diagnosed and plain radiographs showed IV grade comminution. He was released after 20 days of hospitalization with persistent pain despite of pain medication every 4-6 hours. Cell therapy was prescribed and it was performed on outpatient basis. After 48 hours the improvement was increased progressively, stability was achieved and pain disappeared in the fracture site, this was a symptom present since the accident. 8 weeks after cell therapy, radiological improvement was observed. In general, his eveolution was considered satisfactory for the fast recovery and its incorporation into social life. This is the first patient in Artemisa province who underwent this new type of therapy and as far as we know at the time of this writing, it is also the first reported in the scientific literature in Cuba.

Electrophoretic techniques in HYDRASYS 2. Diagnostic usability in different diseases

Se presentan los resultados de la estandarización de las técnicas de electroforesis de hemoglobina (Hb), isoenzimas de la deshidrogenasa láctica (LDH) y proteinuria en el equipo Hydrasys 2, así como el estudio de pacientes atendidos en el Instituto de Hematología e Inmunología y en otros centros hospitalarios del país. Se realizó el diagnóstico de 149 portadores de hemoglobinopatías (AS, AC, b talasemia heterocigótica, variante rápida), 60 enfermos (SS, SC, CC), 24 pacientes con a talasemia o deficiencia de hierro y se cuantificó la hemoglobina fetal a 93 casos con hemoglobinopatía S. Se determinaron los valores normales de actividad e isoenzimas de LDH en la población mediante el estudio de 50 donantes de sangre. En los pacientes con anemia drepanocítica se encontró un aumento significativo de la isoenzima 1 (p= 0,000) y disminución de isoenzimas 3 (p= 0,002). Se realizó el estudio de proteínas en orina a 8 pacientes con enfermedades hematológicas que presentaron microalbuminuria al menos en 2 ocasiones, con concentraciones ³ 0,04 g/L. En 2 pacientes el resultado fue normal; en 2 se encontraron proteínas de origen tubular; y en otros 2, proteínas de origen glomerular.

We present the results of the standardization of the techniques of electrophoresis of hemoglobin (Hb), lactate dehydrogenase isoenzymes (LDH) and proteinuria in HYDRASYS 2 equipment, and the study of patients treated at the Institute of Hematology and Immunology and other hospitals in the country. 149 hemoglobinopathies carriers were diagnosed (AS, AC, b thalassemia heterozygous fast variant), 60 patients (SS, SC, CC), 24 patients with athalassemia or iron deficiency. Fetal hemoglobin was quantified in 93 cases with hemoglobinopaty S. Normal values of activity and LDH isoenzymes were determined in the population through the study of 50 blood donors. In patients with sickle cell anemia we found a significant increase in isoenzyme 1 (p=0.000) and isozyme 3 decreased (p=0.002). We performed the study of proteins in urine in 8 patients with hematologic malignancies who had microalbuminuria at least 2 times, with concentrations ³ 0.04 g / L. In 2 patients the results were normal, in 2 proteins were tubular origin, and in 2, proteins of glomerular origin.

Abstracts of the Institute of Hematology and Immunology 45th Anniversary Scientific Meeting