Revista Cubana de Investigaciones Biomédicas

Caracterización de indicadores bioquímicos de estrés oxidativo en el asma bronquial

Se estudiaron 120 pacientes con diagnóstico de asma bronquial atendidos en el servicio de Neumología de los hospitales "Hermanos Ameijeiras" y "Calixto García". Fueron agrupados atendiendo a la frecuencia de aparición de las crisis; pacientes en intercrisis: los que tuvieron ausencia de signos y síntomas de asma bronquial por más de 2 meses, pacientes en crisis: aquellos que manifestaban síntomas y signos, y criterios clínicos de severidad de la enfermedad: asma severo, asma moderado y asma leve. Grupo control: individuos aparentemente sanos, donantes de sangre en el Banco Provincial. Como expresión del daño oxidativo al parénquima pulmonar se utilizó la determinación de malonildialdehído, un producto de la peroxidación lipídica. La concentración de malonildialdehído resultó superior en los pacientes en crisis y no existieron diferencias significativas atendiendo al grado de severidad de la enfermedad. La fosfolipasa A2 desempeña un papel central en el recambio de las membranas y la exocitosis. En los pacientes en crisis severa la actividad fosfolipasa A2 fue mayor que en el grupo control. En el estudio se encontró una disminución significativa de la actividad superóxido dismutasa durante las crisis, más baja en el asma leve y asma moderada. Parece ser que a pesar de que en los asmáticos en general la actividad de la enzima disminuye, existe sobreexpresión durante la exacerbación de la enfermedad. No se encontraron diferencias significativas en la actividad catalasa

120 patients with diagnosis of bronchial asthma that were attended at the Service of Pneumology of "Hermanos Ameijeiras" and "Calixto Garcia" hospitals were studied. They were grouped according to the frequence of appearance of the crisis into patients in intercrises: those with absence of signs and symptoms for more than 2 months, and patients in crisis: those who had symptoms and signs. The clinical criteria used to refer to the severity of the disease were: severe asthma, moderate asthma and mild asthma. The control group was composed of apparently sound individuals who were blood donors at the Provincial Blood Bank. The determination of malondialdehyde, a product of lipid peroxidation was used as an expression of the oxidative damage to the pulmonary parenchima. The concentration of malondialdehyde proved to be higher among patients in crisis. No significant differences were observed according to the severity of the disease. Phospholipase A2 played an important role in the rechange of membranes and exocitosis. The activity of phospolipase A2 was higher among patients with severe crisis than in the control group. In the study, it was found a remarkable reduction of the superoxide dismutase activity during the crisis that was lower in mild and moderate asthma. It seems that in spite of the fact that the enzime activity decreases in the asthmatic patients in general, there is an overexpression during the exacerbation of the disease. There were no significant differences in the catalase activity

Caracterización de indicadores bioquímicos de estrés oxidativo en pacientes quemados muy graves

Se caracterizó el comportamiento de algunos indicadores de estrés oxidativo sistémico en 33 pacientes quemados muy graves, y se tomaron muestras de sangre venosa durante 4 puntos experimentales a partir de su admisión. Se cuantificaron las concentraciones de malonildialdehído, productos de oxidación de las proteínas, vitamina A y b-carotenos así como la actividad superóxido dismutasa, catalasa, fosfolipasa A2 (FLA2), elastasa y el porcentaje de inhibición de tripsina. En los pacientes quemados las concentraciones de malonildialdehído fueron mayores respecto al control en todos los tiempos. De igual manera se evidenciaron diferencias estadísticamente significativas entre los pacientes fallecidos y los sobrevivientes, y resultaron siempre mayores los valores de este indicador en los primeros. Las proteínas, también dianas del daño oxidativo, en general se encontraron elevadas en los pacientes quemados con respecto al control. La actividad de las enzimas FLA2 y elastasa fue mayor en los pacientes quemados que en los sujetos supuestamente sanos. Contrario a esto, la superóxido dismutasa exhibió una mayor actividad en estos últimos, sin mostrarse diferencias significativas con respecto a los pacientes quemados no fallecidos en los días 3 y 14. La actividad de la catalasa fue mayor en todos los tiempos de estudio en los pacientes que fallecieron respecto al control y a los que sobrevivieron a la agresión térmica. Estos últimos no fueron significativamente diferentes del control. Los valores de vitamina A fueron superiores en los pacientes quemados mientras que las concentraciones de b-carotenos fueron menores. El porcentaje de inhibición de tripsina fue mayor en los pacientes que no fallecieron respecto a los fallecidos y a los individuos que integraron el grupo control, este aumento fue significativo en los días 3 y 7. Los resultados permiten concluir que los indicadores de daño oxidativo aumentan en el paciente quemado muy grave y que los indicadores bioquímicos de defensa antioxidante se modifican con el tiempo de evolución

The behaviour of some indicators of systemic oxidative stress was characterized in 33 very critical burned patients. Samples of venous blood were taken during 4 experimental points starting from their admission. The concentrations of malondialdehyde, the products of protein oxidation, vitamin A and b-carotenes, as well as the superoxide dismutase, catalase, phospholipase A2 (PLA2) and elastase activity and the percentage of tripsyn inhibition were quantified. The concentrations of malondialdehyde were higher in the burned patients than in the controls all the time. Likewise, statistically significant differences were observed between the dead patients and the survivors. The values of this indicator were always higher in the first. Proteins, which are also targets of the oxidative damage, were generally elevated in burned patients compared with the controls. The activity of the FLA2 enzymes and elastase was greater in burned patients than in the apparently sound. On the contrary, the superoxide dismutase had a higher activity in the latter. No significant differences were observed among the burned patients who had not died on the 3rd and 14th day. The catalase activity during the study was higher among the patients who died than in the control group and in those who survived the thermal aggression. The latter were not significantly different from the control group. The values of vitamin A were higher in burned patients, whereas the concentrations of b-carotenes were lower. The percentage of inhibition of tripsyn was higher among those patients that did not die compared with the dead and with the individuals from the control group. This increase was remarkable on the 3rd and 7th day.The results allowed to conclude that the indicators of oxidative damage are higher in the very severe burned patient and that the biochemical indicators of antioxidant defense change according to the time of evolution

Determinación de actividad elastasa y tripsina en niños asmáticos

El asma bronquial es una de las enfermedades crónicas que ha presentado un aumento de la mortalidad en Cuba durante los últimos años. Las enzimas proteolíticas han sido implicadas en numerosas enfermedades inflamatorias, entre ellas, el asma. Es por ello que se realizó la evaluación de actividad elastasa y tripsina en muestras de niños asmáticos que se dividieron en 3 grupos (asma ligero, asma moderado y asma severo) y se compararon con un grupo control de niños sanos. Se obtuvieron resultados preliminares muy alentadores que muestran un incremento en los niveles de elastasa en el paciente asmático y una deficiencia de inhibidores de serín proteasas

Bronchial asthma is one of the chronic diseases, whose mortality has increased in Cuba during the last years. The proteolytic enzimes have been involved in numerous inflammatory diseases as asthma, among them. That's why the elastase and trypsin activity was evaluated in samples of asthmatic children, who were divided into 3 groups (mild astma, moderate asthma and severe asthma) and compared with a control group of sound children. Very encouraging preliminary results were obtained that showed an increase in the levels of elastase in the asthmatic patient and a deficiency of serine proteases inhibitors

Capacidad inhibitoria de la actividad proteolítica del Elhibin: su efecto en suero de pacientes quemados

Elhibin es un inhibidor de proteinasas obtenido de semillas de leguminosas. Es capaz de inhibir la elastasa leucocitaria, fibroblástica y también la triptasa. Estas enzimas desempeñan un papel importante en los procesos de envejecimiento e irritación de la piel, por lo tanto, una aplicación específica del Elhibin contribuye a mantener la piel elástica, suave, tersa y húmeda. También contrarresta la inflamación e irritación producto de exposiciones excesivas al sol, agresividad de sustancias químicas y otras influencias ambientales. Teniendo en cuenta estas propiedades se decidió evaluar la capacidad inhibitoria del Elhibin sobre algunas enzimas proteolíticas, utilizando para ello técnicas colorimétricas que emplean la elastina rojo congo y la azocaseína como sustratos naturales específicos, y de manera complementaria la difusión radial. En busca de nuevas aplicaciones para el Elhibin se realizaron ensayos de inhibición de actividad proteolítica en muestras de sueros de pacientes quemados con comportamientos cinéticos o puntuales, de los cuales se conocen que aparecen alteraciones del balance de proteasas y sus inhibidores y el correspondiente descontrol de sus procesos fisiológicos. Los resultados mostraron inhibición de la actividad elastasa y tripsina dependiente de la concentración de Elhibin, no así en el caso de la colagenasa y una aplicación específica para ayudar a contrarrestar desbalances dañinos en las muestras de quemados. Se obtuvo inhibición de la actividad de elastasa y tripsina mayor que 30 % en todos los sueros analizados

Elhibin is a proteinase inihibitor obtained from seeds of Leguminosae. It is able to inhibit the leucocitary and fibroblastic elastase and also triptase. These enzymes play an important role in the aging and skin irritation processes, therefore, an specific application of Elhibin contributes to maintain the skin elastic, soft, glossy and moist. It also counteracts the inflammation and irritation caused by excesive exposures to the sun, the aggresiveness of chemical substances and other environmental influences. Taking into account these properties, it was decided to evaluate the inhibitory capacity of Elhibin on some proteolytic enzimes by using some colorimetric techniques that utilize the Congo red elastin and azocasein as specific natural substrates and the radial diffusion as a complement. In order to find new applications for Elhibin, assays of proteolytic activity inhibition were carried out in samples of serum from burned patients with kinetic or punctual behaviours and with alterations of the balance of proteases and their inhibitors and the corresponding discontrol of their physiological processes. The results showed inhibition of the elastase and trypsin activity depending on the concentration of Elhibin. This did not occur in the case of colagenase and a specific application helping to counteract harmful unbalances in the samples of burned patients. It was obtained inhibition of the elastase and trypsin activity over 30% in all the analyzed sera

Introducción de la determinación del colesterol inmune en la práctica investigativa de la aterosclerosis coronaria

El objetivo de este trabajo consistió en el montaje y la estandarización de un método para la evaluación de la lipoproteína de baja densidad oxidada contenida en los inmunocomplejos, mediante la cuantificación del colesterol total presente en el precipitado de polietilénglicol denominado "colesterol inmune". El valor de "colesterol inmune" fue comparado con los demás parámetros lipídicos en un grupo de sujetos normales de banco de sangre, y 103 pacientes escogidos consecutivamente al azar entre los asistentes como "casos patológicos" a la consulta de cardiopatía isquémica en el Instituto de Cardiología y Cirugía Cardiovascular, a los cuales se les realizó la angiografía coronaria como parte de su estudio. Como resultado de este trabajo se obtuvo que sólo el "colesterol inmune" se correlacionó significativamente con la severidad de la aterosclerosis coronaria. La sensibilidad y especificidad del método fue de 80 %, los valores predictivos positivo y negativo fueron 84 y 76 % respectivamente. La concentración del "colesterol inmune" fue menor en sujetos normales que en pacientes con aterosclerosis coronaria. Se concluyó que el "colesterol inmune" puede ser empleado como un nuevo marcador diagnóstico en estadios tempranos de la aterosclerosis coronaria

The objective of this paper was the mounting and standardization of a method for the evaluation of the low density oxidated lipoprotein contained in the immunocomplexes by the quantification of the total cholesterol present in the precipitate of polyethylenglycol denominated "immune cholesterol". The value of the "immune cholesterol" was compared with that of other lipid parameters in a group of normal subjects from the blood bank and 103 patients selected consecutively at random among those "pathological cases" attending the department of ischemic heart disease in the Institute of Cardiology and Cardiovascular Surgery. They underwent coronary angiography as part of the study. It was observed that only the "immune cholesterol" correlated significantly with the severity of coronary atherosclerosis. The sensitivity and specificity of the method was 80% and the negative and positive predictive values were 84 and 76%, respectively. The concentration of "immune cholesterol" was lower in normal individuals that in patients with coronary atherosclerosis. It was concluded that "immune cholesterol" may be used as a new diagnostic marker in early stages of coronary atherosclerosis

Efecto del estrés oxidativo sobre la calidad del semen de pacientes infértiles con leucocitospermia

La leucocitospermia se ha asociado con alteraciones de la calidad del semen. No obstante no se han precisado con exactitud los mecanismos implicados en este daño. El propósito de este trabajo fue conocer si la leucocitospermia así como su contribución al estrés oxidativo generado en el aparato reproductor pueden afectar la calidad del semen. Para esto se estudió una muestra de 52 pacientes, hombres miembros de parejas infértiles que acudieron a la consulta de infertilidad del Instituto Nacional de Endocrinología, en los años 1998 y 1999. Se les realizó el análisis seminal según los procedimientos habituales y además la determinación de malonildialdehído, catalasa y superóxido dismutasa. La actividad superóxido dismutasa se correlacionó negativamente con el número de leucocitos, y positivamente con la movilidad b y la movilidad a + b. El trabajo realizado permitió concluir que los leucocitos en semen pueden afectar el balance entre los factores que favorecen y los que previenen el estrés oxidativo. La protección contra el estrés oxidativo es beneficiosa para la calidad del semen

Leucocytospermia has been associated with alterations of the quality of semen. However, the mechanisms involved in this damage have not been exactly determined yet. This paper was aimed at knowing whether leucocytospermia and its contribution to the oxidative stress generated in the reproductive system may affect the quality of semen. To this end, a sample of 52 male patients members of infertile couples that were attended in the department of infertility of the National Institute of Endocrinology, in 1998 and 1999, was studied. The semen was analyzed according to the habitual procedures. Malondialdehyde, catalase and superoxide dismutase were also determined. The superoxide dismutase activity was negatively correlated to the number of leucocytes and positively to the mobility b and the mobility a+ b. It was concluded that leucocytes may affect the balance between the factors that favor and prevent the oxidative stress. The protection against the oxidative stress is beneficial for the quality of semen

Un acercamiento a la teoría de los radicales libres y el estrés oxidativo en el envejecimiento

El aumento en la expectativa de vida ha originado un envejecimiento en la población y por consiguiente un incremento relativo de las enfermedades asociadas con este. En los últimos años se han incrementado los estudios relacionados con este tema y se han formulado numerosas hipótesis. En este trabajo se presentan algunas teorías del envejecimiento, entre ellas, aquellas teorías programadas desde el punto de vista genético, que suponen que el envejecimiento ocurre de forma predeterminada, y las teorías de envejecimiento no programado genéticamente, en particular la teoría de los radicales libres y el estrés oxidativo, cuyo dogma central radica en cómo durante el metabolismo aerobio se producen incidental y de forma incontrolable especies radicálicas derivadas del oxígeno, las macromoléculas se dañan irreversiblemente, daño que se acumula en el tiempo, y esto resulta en una pérdida gradual de los mecanismos homeostáticos, interferencia de patrones de expresión génica y pérdida de la capacidad funcional de la célula

The increase of life expectancy has caused an aging of the population and consequently a relative rise of the diseases associated with it. During the last years more studies have been conducted on this topic and numerous hypotheses have been made. In this paper some theories on aging are presented, among them, those ones programmed from the genetic point of view that state that aging occur in a predetermined way, and the theories on non-genetically programmed aging, in particular, the theory of free radicals and oxidative stress, whose central dogma is based on how during the aerobial metabolism radical species derived from oxygen are produced incidentally and in an uncontrollable way, the molecules are irreversibly damaged, damage that is accumulated in the course of time, and this results in a gradual lost of the homeostatic mechanisms, interference of the patterns of genic expression and lost of the functional capacity of the cell

Diabetes mellitus, estrés oxidativo y embarazo

El estrés oxidativo es un estado que se caracteriza por un desequilibrio entre la producción de especies reactivas del oxígeno y la capacidad antioxidante de las células. La implicación del estrés oxidativo en diversas patologías, ha sido demostrada; entre ellas se encuentran la diabetes mellitus y el embarazo, aunque este último no es un estado patológico sino de adaptación metabólica. En el embarazo se producen modificaciones en el metabolismo de las biomoléculas celulares, en particular en los lípidos y proteínas, junto con modificaciones oxidativas que se incrementan si la embarazada es portadora de diabetes mellitus

The oxidative stress is a state that is characterized by an unbalance between the production of reactive oxygen species and the antioxidant capacity of the cells. The involvement of oxidative stress in different pathologies has been showed in, among others, diabetes mellitus and pregnancy, although the latter is not a pathological state but a state of metabolic adaptation. During pregnancy, there are modifications in the metabolism of cellular biomolecules, particularly in lipids and proteins, together with oxidative modifications that increase if the pregnant woman is a diabetes mellitus carrier

Medicina crítica y estrés oxidativo

Las especies reactivas del oxígeno intervienen en un sinnúmero de enfermedades y producen daño directo o indirecto a diferentes órganos. En el paciente críticamente enfermo se observa un conjunto de afecciones entre las que se tomaron como ejemplo el síndrome de distrés respiratorio del adulto, el infarto agudo del miocardio y los accidentes cerebrovasculares isquémicos. El síndrome de distrés respiratorio es una afección inflamatoria aguda donde se altera el endotelio vascular pulmonar con acúmulo excesivo de polimorfonucleares en los espacios intersticiales y alveolares, proceso favorecido por las especies reactivas del oxígeno que ocasionan el daño tisular. El síndrome de distrés respiratorio se produce por múltiples afecciones: politrauma, sepsis, estados de choque, politransfundidos, etc. y siempre con una elevada mortalidad. El infarto agudo de miocardio y los infartos cerebrales son un ejemplo de enfermedades donde está presente el síndrome de isquemia-reperfusión y se produce el daño tisular lo que provoca una lesión isquémica que compromete la capacidad para controlar el metabolismo de oxígeno. En la fase de reperfusión hay una liberación excesiva de especies reactivas del oxígeno que al interactuar con la membrana celular desencadenan el llamado proceso de peroxidación lipídica, destrucción y muerte celular

Reactive oxygen species take part in a large number of diseases and produce direct or indirect damage to different organs. A series of affections among which the respiratory distress syndrome of the adult (RDSA), the acute myocardial infarction (AMI) and the ischemic cerebral vascular accidents are taken as an example are observed in the critically ill patient. The respiratory distress syndrome is an acute inflammatory affection where the pulmonary vascular endothelium is altered with an excessive accumulation of polymorphonuclears in the interstitial and alveolar spaces, a process that is favored by the reactive oxygen species that cause the tissue damage. The respiratory distress syndrome is caused by multiple affections: polytrauma, sepsis, shock states, polytransfusions, etc., and mortality is always high. The acute myocardial infarctions and the cerebral infarctions are an example of diseases in which the ischemia-reperfusion syndrome is present and the tissue damage is produced, provoking an ischemic lesion that compromises the capacity to control oxygen metabolism. In the reperfusion stage an excessive release of reactive oxygen species occur that on interacting with the cellular membrane unchains the so-called process of lipid peroxidation, destruction and cellular death

Estrés oxidativo y sepsis

La sepsis hoy por hoy continúa siendo un problema de salud, y la morbilidad y mortalidad no han variado a pesar de la introducción de nuevos avances tecnológicos tanto diagnósticos como terapéuticos. En las últimas décadas ha existido una verdadera eclosión en la investigación relativa al papel de los radicales libres y su vinculación con las enfermedades. En el proceso de la sepsis como fenómeno inflamatorio, los órganos y sistemas de órganos que participan no escapan a la acción de los radicales libres; de ahí la necesidad de conocer cómo se involucran los radicales libres en el mecanismo fisiopatológico de esta

At present sepsis is still a health problem and morbidity and mortality have not changed in spite of the introduction of new diagnostic and therapeutic technological advances. During the last decades there has been a real development in the research related to the role of free radicals and their linking with diseases. In the process of sepsis as an inflammatory phenomenon, the organs and systems of organs that take part in it do not escape from the action of free radicals and that's why it is necessary to know how the free radicals involve themselves in its physiopathological mechanism

Papel del estrés oxidativo en la infertilidad masculina

Resulta incuestionable la participación del estrés oxidativo en la patogenia de la infertilidad masculina. Una buena parte de los pacientes que sufren de este padecimiento presentan niveles elevados de especies reactivas del oxígeno, cuya presencia en el semen constituye un reflejo del desbalance entre su producción por los elementos celulares y su degradación por los sistemas antioxidantes. Como consecuencia de este desequilibrio, los lipoperóxidos generados dan al traste con la capacidad fertilizante de los espermatozoides. La determinación de indicadores de daño oxidativo y defensa antioxidante proporciona una información muy útil sobre la calidad de la espermatogénesis y resulta de gran valor para el diagnóstico de la infertilidad que involucra al estrés oxidativo y en la selección de los pacientes para la terapia antioxidante

The participation of the oxidative stress in the pathogeny of male infertility in unquestionable. A considerable number of the patients suffering from this affection have elevated levels of reactive oxygen species, whose presence in semen is a reflex of the unbalance between their production by the cellular elements and their degradation by the antioxidant systems. As a result of this unbalance, the generated lipoperoxides spoil the fertilizing capacity of the spermatozoa. The determination of indicators of oxidative damage and antioxidant defense gives a very useful information on the quality of spermatogenesis and it is also of great value for the diagnosis of the infertility involving the oxidative stress and the selection of patients for antioxidant therapy

Relaciones del estrés oxidativo con el catabolismo de proteínas

En la actualidad comienzan a emerger evidencias de que las relaciones entre los radicales libres, las proteínas y los mecanismos de proteolisis son mucho más complejas de lo que inicialmente se pensó. Hoy día diversas proteínas son consideradas no sólo como blanco de la acción de los radicales libres sino que pueden comportarse como generadoras y propagadoras de estas dañinas sustancias. De igual forma, los efectos del estrés oxidativo no sólo modifican las propiedades de las proteínas consideradas como sustratos de los mecanismos de proteolisis, sino que pueden afectar los mecanismos proteolíticos propiamente dichos, incluidas las vías lisosomal, proteosomal y de las calpaínas en el catabolismo proteico intracelular. En este trabajo se propuso una visión holística e integradora de estas alternativas, se pretendió considerar toda la variada gama de posibilidades de interacción que podía producirse en el triángulo radicales libres -proteínas- proteolisis. Este esquema puede resultar de gran utilidad metodológica al analizar los resultados experimentales en este terreno, así como al abordar su interpretación

Nowadays, there are evidences that make us know that the relations among the free radicals, the proteins and the mechanisms of proteolysis are much more complex than what was initially thought. Today, different proteins are considered not only as the target of the action of the free radicals, but they can also behave themselves as generators and propagators of these harmful susbtances. Likewise, the effects of oxidative stress not only modify the properties of the proteins considered as substrates of the mechanisms of proteolysis, but they can affect the proteolytic mechanisms as such, including the lysosomal and proteosomal pathways and those of the calpains in the intracellular protein catabolism. In this paper it was proposed an integrating view of these alternatives and it was pretended to consider all the varied range of possibilites of interaction that may occur in the free radicals - proteins - proteolysis triangle. This scheme may be very useful from the methodological point of view on analyzing the experimental results attained in this field, as well as on approaching their interpretation

Evaluación de la posible incidencia de la varicocelectomía sobre el estrés oxidativo asociado con varicocele

En este trabajo se compararon sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico (TBARS) de espermios, actividad de catalasa seminal y sanguínea, luminiscencia urinaria, en pacientes infértiles antes y después de someterse a varicocelectomía. Se encontró una disminución en los niveles de lipoperoxidación espermática (expresado como nanomoles de malonildialdehído), de los pacientes en estado posoperatorio en relación con los mismos pacientes antes de la operación. Asimismo se aprecia disminución en la luminiscencia urinaria y en la actividad de catalasa tanto seminal como sanguínea en el mismo grupo de pacientes. Los resultados permiten concluir que la corrección quirúrgica mejora el estrés oxidativo sistémico, evaluado a través de la actividad enzimática y la luminiscencia urinaria, que ha sido propuesta como índice del estrés oxidativo sistémico. Los espermiogramas muestran un aumento en el número y la motilidad de los espermios. También el estrés oxidativo local disminuye, lo que se demuestra con el ensayo de TBARS

In this paper, TBARS of spermatozoa, the activity of seminal and blood catalase and the urinary luminiscence were compared in infertile patients before and after undergoing varicocelectomy. It was found a decrease in the levels of spermatic lipoperoxidation (expressed as nanomols of MDA) of the patients in postoperative stage compared with the same patientes before the operation. It was also observed a reduction in the urinary luminiscence and in the seminal and blood catalase activity in the same group of patients. The results allowed to conclude that the surgical correction improves the systemic oxidative stress evaluated through the enzimatic activity and the urinary luminiscence that has been proposed as an index of systemic oxidative stress. The spermiograms showed an increase in the number and motility of the spermatozoa. The local oxidative stress decreases, too, which is proved by the TBARS assay