Revista de Protección Vegetal

INTERACCIÓN PLANTA-BACTERIAS FITOPATÓGENAS: CASO DE ESTUDIO RALSTONIA SOLANACEARUM- PLANTAS HOSPEDANTES

Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi es el agente causal de la marchitez bacteriana. Esta enfermedad afecta a numerosos cultivos de importancia económica tales como: tomate, papa, tabaco, banana, berenjena y algunas plantas ornamentales, especialmente en las zonas tropicales y subtropicales. La amplia gama de hospedantes, su distribución y elevada variabilidad, hacen difícil el control de la enfermedad. En este trabajo se exponen los mecanismos de patogenicidad de esta bacteria, así como los mecanismos moleculares mediante los cuales se ejerce la resistencia natural e inducida en la planta.

IDENTIFICACIÓN DE NUEVOS BEGOMOVIRUS EN CUBA MEDIANTE EL EMPLEO DE LA AMPLIFICACIÓN POR CÍRCULO RODANTE

La amplificación por círculo rodante (ACR) constituye una alternativa eficaz y rápida para los estudios de diversidad biológica de geminivirus en diferentes regiones de mundo. El uso de esta tecnología permite obtener amplificaciones de ADN circulares pequeños y de simple cadena, sin tener en consideración sus posibles variaciones secuenciales. Además, la ACR tiene una alta fidelidad de copia y la cantidad de ADN molde empleada para la amplificación es ínfima. En Cuba, extensas áreas dedicadas al cultivo de hortalizas, papa, fríjol y tabaco, son afectadas por diferentes especies de begomovirus, cuya amplia diversidad ha impedido contar con cebadores genéricos efectivos para el estudio de este género viral. En los trabajos de prospección nacional se colectaron plantas de tomate, tabaco y pimiento con síntomas asociados a la posible presencia de begomovirus. Se realizaron extracciones del ADN viral y se sometieron a amplificación por círculo rodante con el objetivo de obtener copias del genoma viral íntegro. Como resultado, se determinó la presencia de dos nuevos virus, propuestos como nuevas especies de begomovirus bipartitos, nombrándose virus del amarillamiento y deformación de la hoja del tomate (Tomato yellow leaf distortion virus, ToYLDV), infectando este cultivo y virus del encrespamiento amarillo del tabaco (Tobacco yellow crinkle virus, TbYCV), infectando tabaco y pimiento. Los resultados obtenidos confirman la utilidad del uso de la ACR para estudios de diversidad de begomovirus y sus interacciones en los agroecosistemas productivos.

The rolling circle amplification (RCA) has been an effective and quick alternative to study the biological diversity of geminiviruses in different regions of the world. This technology allows obtaining the amplification of small circular DNA and of simple strand, without taking into account the possible sequential variations. In addition, the RCA has a high copy fidelity and the quantity of DNA template is extremely low. In Cuba, extensive areas dedicated to grow vegetables, potato, beans and tobacco are affected by different begomovirus species, with such a wide diversity that hinders to have appropriate generic primers to study this viral genus. In works of national prospecting, tomato, tobacco and pepper plants with symptoms associated with begomoviruses were collected. DNA was extracted and amplified by rolling circle with the objective of obtaining copies of the entire viral genome. As a result, the presence of two new bipartite begomoviruses was observed and proposed as new species. They were named Tomato yellow leaf distortion virus, found in tomato crops, and Tobacco yellow crinkle virus infecting tobacco and pepper. The results obtained confirm how useful the RCA is to study the diversity of begomoviruses and their interactions in the productive agroecosystems.

**IDENTIFICACIÓN DE GENES ESPECÍFICOS ASOCIADOS CON LA ELONGACIÓN DEL TALLO EN EL ARROZ (Oryza sativa L.) A TRAVÉS DEL MICROARREGLO DE ADNc**

El arroz (Oryza sativa L.) es uno de los cultivos más importantes en el mundo. La giberelina es una hormona que controla diferentes aspectos importantes en el desarrollo de las plantas. De ahí la necesidad de conocer como esta responden a la hormona y las posibles modulaciones de sus concentraciones. El presente trabajo tuvo como objetivo evaluar a través del microarreglo de ADNc la expresión de secuencias etiquetadas expresadas (Expressed sequences tag, ESTs) obtenidas a partir del tejido del tallo de la variedad Hangfeng tratada con aplicaciones de la fitohormona giberelina durante 36 horas. Para profundizar en el conocimiento sobre el genoma de este cultivo se realizó un análisis de la expresión de 2 535 secuencias etiquetadas expresadas mediante la construcción de un microarreglo de Ácido desoxirribonucleico complementario (ADNc). Las plantas se trataron con giberelina por 36 horas y las muestras de los tejidos del tallo se tomaron cuando se observaron en las plantas de cinco a seis hojas para proceder a la extracción del Ácido ribonucleico (ARN) total según el método del Trizol. Un total de 1129 ESTs se clasificaron en 18 categorías funcionales de acuerdo a lo establecido por el Centro de Información de Munich para Secuencias de Proteínas (Munich Information Center for Protein Sequences, MIPS). La mayoría de los transcriptos tentativos únicos estuvieron relacionados con las categorías de metabolismo (18.5%) y energía (16.19%) para un total de 214 y 181 ESTs respectivamente. Como resultado del microarreglo se obtuvieron 10 ESTs en el tratamiento durante 36 horas con la fitohormona, de las cuales cuatro secuencias: (Tubulina cadena beta-1, Auxinaa-IAA16, Actina factor de despolimerización 5 y Xiloglucan endotransglucosilasa) no se habían informado con anterioridad en Orysa sativa. Los resultados del microarreglo se confirmaron mediante la PCR en tiempo real.

Rice (Oryza sativa L.) is one of the most important crops in the world. For this reason it is necessary to know how plants respond to it and the possible modulation of their concentrations. The aim of this research was to evaluate through cDNA microarray the expression of expressed sequence tags obtained from the stem tissue in a variety of rice "Hangfeng" treated with applications of the phytohormone gibberellin for 36 hours. Gibibberellin is a hormone that controls several important aspects in the development of plants. Thus, to go deepen in knowledge about this crop genome, an analysis of 2535 expressed sequence tags (ESTs) was done using microarray technology. Plants were previously treated with gibberelen phytohormone at 36 hours and stem tissue samples were taken when plants had from five to six leaves to proceed with total ARN extraction (Trizol method). A total of 1129 ESTs was classified into 18 functional categories according to the requirements established by the Munich Information Center for Protein Sequences (MIPS). Unique transcripts were involved in metabolism (18.5%) and energy (16. 19%) for a total of 214 and 181 ESTs respectively. As microarray result, 10 ESTs were generated at the 36 hour-treatment with the phytohormone, and four of those ESTs (Tubulin beta-1 chain, Auxin-responsive protein IAA16, Actin-depolymerizing factor 5 and Xyloglucan endotransglucosylase) had never been reported before in Oryza sativa L. Array results were confirmed using real time PCR.

INDUCCIÓN DE ENZIMAS EXTRACELULARES CON HUEVOS DE Meloidogyne incognita Y DE Globodera pallida

La cepa cubana IMI SD 187 del hongo nematofago Pochonia chlamydosporia var. catenulata es un agente de control biológico potencial de nematodos formadores de agallas. Existen informes sobre la acción controladora de los hongos de la especie Pochonia chlamydosporia sobre nematodos de quistes. Sin embargo también se conoce de la especificidad de los aislamientos según su hospedante original. El objetivo de este trabajo fue estudiar el comportamiento de diferentes sistemas enzimáticos en la cepa IMI SD 187, frente a huevos de Meloidogyne incognita y Globodera pallida. Se realizaron los ensayos de inducción con huevos de ambos nematodos en medio líquido y se determinaron los contenidos de proteínas totales y niveles de actividad enzimática de proteasas, quitinasas, lipasas y VCP 1. La dinámica de la inducción de los sistemas enzimáticos estuvo relacionada con las fases del proceso de infección de los huevos de M. incognita en la cepa IMI SD 187. Esta cepa de P. chlamydosporia var. catenulata procedente de nematodos formadores de agallas es capaz de infectar huevos de nematodos de quistes.

The Cuban strain IMI SD 187 of the nematophagous fungus Pochonia chlamydosporia var. catenulata is a potential biological control agent for the root knot nematodes. There are reports about the controlling action of these fungi on cyst nematodes. However, isolate specificity according to the original host is also known. The aim of this work was to study the enzymatic performance induced by Meloidogyne incognita and Globodera pallida eggs. The induction assays were carried out in liquid media. The total protein content and the enzymatic activity levels for proteases, chitinases, lipases and VCP 1 were determined. The time course experiment for enzymatic activity induction was related to the infection process of M. incognita eggs by the strain IMI SD 187. The strain IMI SD 187 of P. chlamydosporia var. catenulata isolated from root knot nematodes is able to infect eggs from cyst nematodes.

**MÉTODO PARA EVALUAR LA RESPUESTA DE GENOTIPOS DE TOMATE INOCULADOS CON PASSALORA FULVA (COOKE) U. BRAUN Y CROUS EN INVERNADERO**

Se describen los métodos para la evaluación de la resistencia al moho de las hojas en genotipos de Solanum mediante el uso de suspensiones de conidios de Passalora fulva. Para la prueba de inoculación en el invernadero se utilizaron el cultivar Moneymaker y cuatro líneas isogénicas cercanas del propio cultivar: Cf-Ecp1, Cf-Ecp2, Cf-Ecp4 y Cf-Ecp5. La concentración del inóculo fue ajustada a 10(5) UFC.mL-1 y las hojas inferiores fueron inoculadas por el envés. Las plantas se evaluaron diariamente hasta los 21 días después de la inoculación. Para la evaluación de las hojas se utilizó una escala que permitió evitar la confusión del evaluador y describir el desarrollo de los síntomas de forma satisfactoria. Con excepción de las líneas isogénicas cercanas Cf-Ecp2, Cf-Ecp4 y Cf-Ecp5, los genotipos mostraron una respuesta similar contra el agente fitopatógeno en condiciones naturales. La resistencia expresada por estos se caracterizó por una respuesta hipersensible. La inoculación artificial de las plantas resultó ser un método fácil, rápido y factible para conocer la expresión de la resistencia de las plantas contra P. fulva. La utilización del inóculo con una concentración ajustable permitió obtener síntomas homogéneos y uniformes en la hoja inoculada. Este método representa una herramienta útil para la evaluación de las plantas en los programas de mejoramiento genético.

A method for evaluating the resistance to leaf mold on Solanum plants was developed using conidial suspensions of Passalora fulva. Moneymaker cultivar and four Near Isogenic Lines (NILs), Cf-Ecp1, Cf-Ecp2, Cf-Ecp4 and Cf-Ecp5 were tested in a greenhouse. The inoculum was adjusted to 10(5) UFC.mL-1 and applied to the lower leaves. The plants were daily evaluated after inoculation up to 21 days. A standardized scale of leaf symptoms ensured consistency between evaluators. The genotypes, except Cf-Ecp1, Cf-Ecp2, Cf-Ecp4 and Cf-Ecp5 NILs, showed a similar response to P. fulva in natural conditions. The resistance expressed in its NILs was characterized by a hypersensible reaction. Artificial inoculation of plants was an easy, rapid and practicable method to determine resistance to P. fulva. An inoculum adjusted to an appropriate concentration gave uniform symptoms on the inoculated leaves. The method used proved to be a promissory tool for the evaluation of tomato genotype response in breeding programmes.

**ACTIVIDAD ANTAGÓNICA FRENTE A Pyricularia grisea (Sacc.) Y FITOESTIMULACIÓN EN EL CULTIVO DEL ARROZ DE CEPAS AUTÓCTONAS DE Pseudomonas putida (Trev.)**

La aplicación de inoculantes de origen bacteriano en cultivos de importancia económica, constituye una alternativa ecológica que permite la obtención de mayores rendimientos y la conservación del medio ambiente. La obtención y caracterización de cepas autóctonas, potencialmente eficientes en la promoción del crecimiento vegetal y el control biológico de patógenos constituye un paso esencial para el desarrollo de inoculantes microbianos. Esta investigación se desarrolló con el objetivo de caracterizar cepas de Pseudomonas putida previamente aisladas del cultivo del arroz variedad J-104 en cuanto a su actividad promotora del crecimiento vegetal y su efecto antagónico frente a Pyricularia grisea. Se realizaron experimentos in vitro para detectar la producción de compuestos indólicos, producción de sideróforos, actividad antagónica contra P. grisea y el efecto estimulador del crecimiento vegetal de las cepas, en plantas de arroz de 12 días de edad sembradas en tubos de ensayo con medio Murashige y Skoog (MS). Los resultados mostraron la capacidad de producir metabolitos del tipo ácido 3-indolacético (45,8 - 56 µg.mL-1) y sideróforos (7,3-39,4 µM) por las cepas en estudio, las que manifestaron efecto antagónico frente a P. grisea (82-86% de inhibición del crecimiento fúngico) y como promotor del crecimiento vegetal, esto último, a través de su efecto sobre algunos parámetros del crecimiento evaluados (altura de la planta, largo de la raíz, masa fresca aérea y de raíz), destacándose un comportamiento integral en las cepas de P. putida AJ9, AJ14, AJ20 y AJ18. Desde el punto de vista práctico estos resultados indican las potencialidades de las cepas estudiadas para su utilización como inoculantes microbianos en beneficio del cultivo del arroz.

The application of bacterial inoculants in crops economicaly important crops has been an ecological alternative to improve crop yield and to preserve the environment. The obtaining and characterization of native strains associated with several crops and potentially efficient to promote plant growth and to biocontrol the phytopathogens are key steps to the development of microbial inoculants. This research was carried out to characterize strains of Pseudomonas putida, isolated from rice (Oryza sativa L. var. J-104) as phytostimulators and antagonistic agents against Pyricularia grisea. In vitro experiments were carried out to detect the production of indolic compounds and siderophores, antagonistic activity against P. grisea and to assess the phytostimulating effect of the strains in 12-day-old rice plants grown in Murashige and Skoog medium. The results showed the ability of the strains to produce indolacetic acid-like metabolites (45,8 to 56 µg·mL-1) and siderophores (7,3 to 39,4µM) . The strains showed antagonistic effect against P. grisea (82-86% of fungal growth inhibition) and were also capable of promoting plant growth (by increase in plant height, root length, root fresh weight and aerial part fresh weight), standing out the strains AJ9, AJ14, AJ20 and AJ18 for the best performance. From the practical point of view, these results show the potential of these strains to be used as inoculants in rice crop.

FACTORES LIMITANTES DE LOS RENDIMIENTOS Y CALIDAD DE LAS COSECHAS EN LA PRODUCCIÓN PROTEGIDA DE HORTALIZAS EN CUBA

Se aplicó una encuesta a 14 unidades de producción protegida de hortalizas ubicadas en Cuidad de La Habana, La Habana, Matanzas, Villa Clara, Ciego de Ávila, Camagüey, Granma, Holguín y Santiago de Cuba. La misma tuvo como objetivo conocer la percepción de los productores acerca de las principales limitantes que afectan los rendimientos y calidad de las cosechas en esta tecnología en Cuba. El 100% de los encuestados señalaron que Meloidogyne spp. constituye el principal problema en tomate y melón, seguido de plagas de insectos y fitopatógenos varios. En el caso del pimiento el ácaro Polyphagotarsonemus latus constituye su principal problema, seguido de insectos y Meloidogyne spp. En el 87% de los polos productivos tienen lugar indisciplinas tecnológicas que, junto a lo difícil que resulta el manejo de Meloidogyne, pudieran estar incidiendo en la compleja situación que representa esta plaga en la producción protegida a nivel nacional. El 100% de los encuestados coinciden en que la falta de disciplina y el cultivo intensivo sin rotación, son las principales causas que pudieran estar relacionadas con la situación nematológica en la producción protegida de hortalizas en Cuba.

A survey was applied in 14 vegetable production units under protected agricultural system from Habana City, La Habana, Matanzas, Villa Clara, Ciego de Avila, Camagüey, Granma, Holguín and Santiago de Cuba. The main objective was to know about the criteria of the producers about the main problems affecting the yield and quality of their products obtained by this technology. From the survey, 100% pointed out that Meloidogyne spp. represented the most important pest in tomato and water melon, following by insects pest and other plant pathogens. In the case of peppers, the mite Poliphagotarsonemus latus was the most important pest, followed by insect and Meloidogyne spp. Eight seven percent of the productive farms showed technological indiscipline which, together with the difficulties of Meloidogyne management, could be inside on the complex situation this pest represents for the protected system at national level. One hundred percent of the producers under surveyed considered that the not observation of discipline and the intensive cropping without rotation were the main causes which could be related with the nematological situation in this system for vegetable production.

FAUNA DE CHINCHES HARINOSAS (HEMIPTERA: COCCOIDEA) ASOCIADA A PLANTAS DE INTERÉS: V FLORES DE CORTE Y DE JARDÍN

Se da a conocer la fauna de chinches harinosas asociadas a flores. Se realizaron muestreos en diferentes localidades del país en ocho especies de flores y se hallaron 10 especies de chinches harinosas de los géneros: Dysmicoccus Ferris; Ferrisia Fullaway; Mammicoccus Balachowsky; Nipaecoccus Sulc; Paracoccus Ezzat y Mc Connell; Phenacoccus Cokerell, y Pseudococcus Westwood. Las chinches de mayor frecuencia fueron: Nipaecoccus nipae (Maskell), Paracoccus marginatus Williams y Granara de Willink y Pseudococcus longispinus (Targioni) con tres hospedantes y el mayor número de chinches se registró en Papaver rhoeas L. (Amapola) y Tithonia diversifolia Hemsl (Margarita) con cuatro especies cada una.

Samplings carried out in eight flowers in different regions of the country showed the presence of 10 mealybug species belonging to the genera Dysmicoccus Ferris; Ferrisia Fullaway;, Mammicoccus Balachowsky, Nipaecoccus Sulc; Paracoccus Ezzat and Mc Connell; Phenacoccus Cokerell and Pseudococcus Westwood. Nipaecoccus nipae (Maskell), Paracoccus marginatus Williams and Granara de Willink and Pseudococcus longispinus (Targioni) were the species with the highest frequency; and Papaver rhoeas L. (amapola) and Tithonia diversifolia Hemsl. (margarita) were the two species with the highest number of mealybugs with four species each one.

SITIO WEB PARA EL ESTUDIO DE ÁCAROS DEPREDADORES (ACARI: PHYTOSEIIDAE) DE CUBA

El diagnóstico de los ácaros depredadores es la base para establecer un adecuado control biológico de los fitófagos presa de estos ácaros. El presente trabajo presenta un sitio Web que contiene una información actualizada de los ácaros de la familia Phytoseiidae presentes en Cuba, lo cual propicia un diagnóstico rápido y efectivo de los mismos. El sitio permite visualizar los resultados más recientes de la taxonomía y manejo de estos ácaros, fomenta la realización de inventarios biológicos y la formación de un sistema de colecciones biológicas complementarias en cobertura taxonómica. Además, este trabajo, permite incorporar nuevas tecnologías de la información a la investigación y en los planes de estudio de pre y posgrado, impulsa la formación y actualización de profesores, investigadores y estudiantes. El sitio se confeccionó empleando Macro media DreamWeaver8 y se encuentra en fase de validación utilizado por estudiantes de la Universidad Agraria de La Habana e investigadores del Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria y el Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal.

The diagnosis of the predators' mites is the base to establish an appropriate biological control. The present work presents a Web that contains current information of the mites belonging to the family Phytoseiidae present in Cuba to propitiate their quick and effective diagnosis. The site allows visualizing the most recent results of the research about taxonomy and management of these mites. It foments to carry out biological inventories and the formation of a complementary biological collection system in the taxonomic covering. This work also allows incorporating new information technologies to research and the plans for pre and post-grade studies. It impels the training and updating of researchers and students. This software was made using Macromedia DreamWeaver8. It is in validation phase and it is used by students of the Agrarian University of Havana and researchers of National Centre for Animal and Plant Health and the Plant Health Research Institute.

Anisopilothrips venustulus (PRIESNER) (THYSANOPTERA: THRIPIDAE) NUEVO INFORME PARA CUBA

Se informa por primera vez en Cuba, la presencia del género Anisopilothrips, representado por la especie Anisopilothrips venustulus, colectado en hojas de tangelo (Citrus paradisi x Citrus reticulata) y en limero persa (Citrus aurantifolia) en San Antonio de las Vegas.

The genus Anisopilothrips, represented by the species Anisopilothrips venustulus is reported, for the first time in Cuba, on tangelo (Citrus paradisi x Citrus reticulata) and on lemon (Citrus aurantifolia) in San Antonio de las Vegas.

ISOLATION AND IDENTIFICATION OF TWO NEW STRAINS OF TRICHODERMA IN MATANZAS PROVINCE FOR THE CONTROL OF PHYTOPATHOGEN FUNGUS

New REPORTS OF PARASITOIDS OF coleopterans IN food WAREHOUSES OF MATANZAS CITY

INTRODUCCIÓN DE ACERIA MALHERBAE NUZZACI (ACARI: ERIOPHYIDAE) PARA EL CONTROL BIOLÓGICO DE CONVOLVULUS ARVENSIS L. (SOLANALES: CONVOLVULACEAE) EN EL ESTADO DE SONORA, MÉXICO