Revista de Protección Vegetal

POTYVIRUS: CARACTERÍSTICAS GENERALES, SITUACIÓN DE SU DIAGNÓSTICO Y DETERMINACIÓN DE SU PRESENCIA EN EL CULTIVO DEL PIMIENTO EN CUBA

El género Potyvirus es responsable de cuantiosas pérdidas económicas en el cultivo del pimiento (Capsicum annuum L.) en el mundo entero. Los miembros de este género pueden ser transmitidos a través de las semillas, de forma mecánica y por más de 25 especies de áfidos de forma no persistente, lo cual constituye un desafío para el desarrollo de estrategias efectivas de control. La problemática del diagnóstico de dichas entidades virales se ha abordado con diferentes enfoques; los cuales han transitado desde el análisis de síntomas en plantas indicadoras, la microscopía electrónica, el empleo de métodos serológicos e inmunoenzimáticos, hasta las metodologías moleculares de nueva generación. Dado el impacto que conllevan las pérdidas ocasionadas por estos virus en la mayoría de los cultivos de interés económico y el incremento a nivel mundial de estas infecciones, el presente artículo refiere aspectos sobre las principales características de este género viral, además de abordar resultados preliminares de la determinación de su presencia en el cultivo del pimiento en Cuba.

The genus Potyvirus is responsible for important economic losses in the pepper crop (Capsicum annuum L.). Members of this genus can be transmitted by seeds and by more than 25 species of aphids in a non-persistent manner, what is a challenge for the development of effective control strategies. The diagnosis of these viral entities has been approached by different techniques such as the analysis of symptoms in specific plants, electronic microscopy, serological and inmunoenzymatic techniques, and even by using molecular methodologies of new generations. Due to the impact of the damages caused by potyviruses on most of the crops of economic interest and the increase of these infections around the world, the present paper refers to aspects about the main characteristics of this viral genus, in addition to preliminary results on the determination of its presence in the pepper crop in Cuba.

EVALUACIÓN DE LOS PARÁMETROS ANALÍTICOS PARA LA DETECCIÓN MOLECULAR DE POTYVIRUS QUE AFECTAN AL CULTIVO DEL PIMIENTO EN CUBA

El género Capsicum (Solanaceae), es originario del continente americano y comprende alrededor de 25 especies, de las cuales cinco son cultivables. Las condiciones ambientales en que se desarrolla esta hortaliza, su forma de explotación, así como los tipos y variedades utilizadas, han traído consigo una amplia diversidad en cuanto a plagas y epifitias que causan importantes mermas en su producción. Entre ellas, las enfermedades virales constituyen la principal dificultad para el desarrollo del cultivo y de estas, las causadas por los miembros del género Potyvirus, se consideran entre las de mayor importancia económica. Este trabajo tiene como objetivo validar un ensayo de RT-PCR para el diagnóstico molecular de potyvirus, empleando cebadores genéricos. Los resultados evidencian que la RT-PCR resulta eficiente para el diagnóstico de potyvirus en el cultivo del pimiento con parámetros analíticos de desempeño superiores al 97%, validándose por primera vez en Cuba una técnica molecular para el diagnóstico de potyvirus. Además, se aportan nuevos elementos metodológicos en la validación de ensayos moleculares de nueva generación facilitando la reproducibilidad de los procedimientos en los laboratorios de diagnóstico.

The genus Capsicum (Solanaceae) is originally from the American continent and includes around 25 species, but only 5 are used in agriculture. The environmental conditions in the development of this crop, the kind of exploitation, and the different cultivars have led to a large diversity of diseases causing important reductions in pepper production. Among them, the viral diseases are the first difficulty for the development of the crop. At the same time, pepper plants are primarily affected by potyviruses (Potyviridae family). The main goal of this work was the validation of a technique for the molecular diagnosis of potyviruses using RT-PCR with generics primers. The results showed that RT-PCR was efficient for potyvirus diagnosis in pepper plants with analytical parameters higher than 97%. It is the first time that a molecular technique is validated in Cuba for potyvirus diagnosis

DIVERSIDAD GENÉTICA DE ESPECIES SILVESTRES DEL GÉNERO Nicotiana I: CARACTERIZACIÓN MEDIANTE MARCADORES BIOQUÍMICOS

La caracterización de especies silvestres del género Nicotiana resulta de gran interés en los programas de mejoramiento genético de la especie Nicotiana tabacum L. ya que pueden ser empleadas como fuente de genes de resistencia a plagas, a la vez que permiten incrementar la variabilidad genética en la única especie comercial del género en el país. El presente trabajo tuvo como objetivo caracterizar la variabilidad genética en 10 especies del banco de germoplasma del género Nicotiana en Cuba, mediante el análisis de nueve sistemas isoenzimáticos y las proteínas totales. Se emplearon los sistemas peroxidasas, polifenoloxidasas, esterasas, anhidrasa carbónica, superóxido dismutasa, diaforasa, fosfatasas ácidas, fosfatasas alcalinas, enzima málica, así como las proteínas totales. Se realizaron las electroforesis en geles de poliacrilamida (PAGE) en lámina vertical. El grado de polimorfismo total entre las especies para los sistemas estudiados fue de un 92,7%, siendo los sistemas peroxidasas, fosfatasas ácidas y enzima málica los más polimórficos con un 100%. Estos sistemas junto a las fosfatasas alcalinas y las proteínas totales fueron los de mayor importancia en la identificación y caracterización de estas especies por presentar patrones de bandas propios para cada una de ellas. Este resultado constituye el primer estudio isoenzimático en especies silvestres del banco de germoplasma del género Nicotiana en nuestro país, lo que permitió conocer el grado de variabilidad presente en dichas especies.

The characterization of wild species of the genus Nicotiana is very important for the genetic breeding programs of Nicotiana tabacum L. because they can be a source of pest resistance genes to increase the genetic variability in the only commercial species of this genus in Cuba. The objective of this work was to characterize the genetic variability in ten species of the Nicotiana genus of the germoplasm bank in Cuba through the analysis of nine isozyme systems and total proteins. The isozymes assayed were peroxidase, polyphenol oxidase, esterase, carbonic anhidrase, superoxide dismutase, diaphorase, acid phosphatase, alkaline phosphatase and malic enzyme, as well as total proteins. Isozyme electrophoresis was performed on vertical slab polyacrylamide gels (PAGE). The total polymorphism level among species in the systems studied was 92,7%, where the most polymorphic systems were peroxidase, acid phosphatase and malic enzyme with 100%. These polymorphic systems, jointly with alkaline phosphatase and total protein, were the most important markers for the identification and characterization of Nicotiana species since they allowed distinguishing band patterns for each of them. This result is a first approach to the isozyme studies in wild species from the germoplasm bank in Cuba, leading to the knowledge of the variability level of those species.

COMPORTAMIENTO DE POBLACIONES DE TRIPS SOBRE TRES ESPECIES DE ALIÁCEAS EN DOS SISTEMAS DE CULTIVOS EN LA PROVINCIA LA HABANA

En Cuba, resultan escasos los estudios dirigidos a determinar la presencia de las especies de trips que pueden encontrarse en los cultivos de la familia Aliaceae. La mayor cantidad de investigaciones se han realizado sobre Thrips tabaci, por ser una de las principales plagas de estos cultivos. Para conocer la presencia de tisanópteros sobre este grupo de plantas en dos sistemas de cultivo, se muestrearon los cultivos de la cebolla, ajo y cebollino en la provincia de La Habana durante los años 2003 y 2004. Los individuos se recolectaron mediante la técnica de golpeo sobre una cartulina se sometieron a las técnicas convencionales de aclaración y montaje en portaobjeto y se utilizaron para la identificación las claves de la región. Los resultaron mostraron la presencia de siete especies para la cebolla, ocho para el cebollino y 13 para el ajo. El total de individuos en estos cultivos mostró diferencias significativas a favor del sistema de cultivo a campo abierto con relación al organopónico, debido a la marcada influencia de las poblaciones T. tabaci que se mostró como especie dominante. Con relación al empleo de los plaguicidas, la efectividad fue variable en los diferentes sistemas de cultivos y especies de plantas. Es importante señalar que las especies Bayleyothrips limbatus; Chaetanaphothrip leeuweni; Chaetanaphothrips orchidii y Chaetisothrips striatus constituyen nuevos informes para Cuba.

Few studies have been done in Cuba for determining the thrips present on crops of the family Aliaceae. The major researches have been carried out on Thrips tabaci Lindenman, which is considered the major pest on these crops. For detecting the presence of thrips on this group of plants, three botanical species, onion, garlic and chive, were sampled in Havana province in 2003 and 2004. The specimens were collected by striking the plants over a white cardboard and the adults clarified and mounted on slides; and for identification, regional taxonomic keys were used. Results showed the presence of 7 species of thrips on onion, 8 on chive and 13 on garlic. The total number of individuals on these crops showed significant differences favoring the open field system with regard to the organic garden. It was due to the high influence of T. tabaci populations, which was the dominant species. Regarding the use of pesticides, the effectiveness varied according to the crop systems and plant species. It must be pointed out that the species Bayleyothrips limbatus, Chaetanaphothrip leeuweni, Chaetanaphothrips orchidii and Chaetisothrips. Striatus are new records for Cuba.

**ÁCAROS DEPREDADORES ASOCIADOS A Steneotarsonemus spinki SMILEY (ACARI: TARSONEMIDAE) EN PANAMÁ**

Se informa por primera vez para Panamá los ácaros depredadores asociados a Steneoptarsonemus spinki. Los muestreos se realizaron entre noviembre y diciembre de 2008. Se detectaron las especies Neoseiulus baraki, Neoseiulus parabensis (Phytoseiidae) y los géneros Hypoaspis y Pseudoparasitus (Laelapidae).

Predator mites associated with Steneotarsonemus spinki were reported for the first time in Panama. The survey was carried out from November to December 2008. The species Neoseiulus baraki, Neoseiulus parabensis (Phytoseiidae), and the genus Hypoaspis, Pseudoparasitus (Laelapidae) were detected.

**EVALUACIÓN DE SUSTRATOS SÓLIDOS PARA LA PRODUCCIÓNMASIVA DE Nomuraea rileyi (FARLOW) SAMSON**

En esta investigación se utilizó el aislamiento Nr-003 del hongo entomopatógeno Nomuraea rileyi (Farlow) Samson, conservado en el laboratorio de Sanidad Vegetal de la Facultad de Agronomía de la Universidad Agraria de La Habana, con el objetivo de evaluar la producción de conidios en diferentes sustratos sólidos, así como determinar el momento óptimo de cosecha. Para la producción de conidios se utilizaron los sustratos sólidos siguientes: arroz entero, trigo y maíz partido, con una cantidad de 100 g de sustrato en bolsas de polipropileno, inoculados con 35 mL de biomasa, obtenida en un medio líquido a base de melaza (20 mL.L-1) y extracto de levadura (20 g.L-1). A los 18 días se evaluó la producción de conidios.g de sutrato-1, g de polvo conidial.kg de sustrato-1 y conidios.g de polvo conidial-1. Por otro lado se realizó la dinámica de producción de conidios sobre arroz, a partir de los 6 días hasta los 18 días, constituyendo cada momento de evaluación un tratamiento. El hongo produjo conidios en todos los sustratos sólidos, destacándose el arroz entero por su mayor producción (8,93 x 10(9) conidios.g de sustrato-1, 27,10 g de polvo conidial.kg de sustrato-1 y 2,7 x 10(11) conidios.g de polvo conidial-1). El tiempo óptimo de cosecha de conidios fue a los 14 días, momento donde el hongo alcanza la mayor producción conidial.

The isolate Nr-003 of the entomopatogen fungus Nomuraea rileyi (Farlow) Samson from the Crop Protection Laboratory of the Agronomy Faculty, Agrarian University of Havana, was used in this research with the objective of producing conidia on different solid substrates, as well as determining the optimum harvest time on the substrate with the higher conidial production. The solid substrates used for the conidial production were whole rice, wheat and broken corn. Propylene bags with 100 g of each substrate were inoculated with 35 mL of biomass obtained in a liquid media containing molasses (20 mL.L-1) and yeast extract (20 g.L-1). The production of conidia.g of substrate-1, g of conidial powder.kg of substrate-1 and conidia.g conidial powder-1 were evaluated after 18 days. In addition, the dynamics of conidia production on whole rice was evaluated from day 6 to day 18, considering each evaluation time a treatment. The fungus produced conidia on all the solid substrates standing out the whole rice for its highest production (8,93 x 10(9) conidia.g of substrate-1, 27,10 g of conidial powder.kgof substrate-¹ and 2,7 x 10(11) conidia.g of conidial powder-1). The optimum time for harvesting conidia was on day 14, when the fungus reached the highest production of conidia.

**PATOGENICIDAD, VIRULENCIA Y POTENCIAL REPRODUCTIVO DE Heterorhabditis bacteriophora (CEPA HC1) SOBRE Cylas formicarius var. elegantulus (SUMMERS)**

Se evaluó la patogenicidad y la virulencia del nematodo Heterorhabditis bacteriophora Poinar (cepa HC1) sobre Cylas formicarius var elegantulus Summer en condiciones de laboratorio. Mediante un diseño completamente aleatorizado, con cuatro repeticiones se evaluó la patogenicidad del nematodo tomando en consideración la mortalidad del insecto usando una concentración de 1000 JI.mL-1 y un control. Con igual diseño experimental y número de repeticiones se evaluó la virulencia usando cinco niveles de concentración de JI y un control. Se evaluó además el potencial reproductivo del nematodo sobre el insecto. Se encontró un marcado efecto patogénico del nematodo sobre el insecto, observándose altos porcentajes de mortalidad; la virulencia DL50 y TL50 en gran medida está relacionada con la concentración de JI.mL-1. El potencial reproductivo del nematodo en el insecto puede llegar a valores de 2675 JI.insecto mostrando un valor promedio de 1832 JI.

The pathogenicity and virulence of the strain HC1 of the entomopatogenic nematode Heterorhabditis bacteriophora Poinar (Summer) was evaluated on Cylas formicarius var elegantulus in the laboratory. The nematode pathogenicity, taking into account the insect mortality, was evaluated in a completely randomized design with four repetitions using a concentration of 1000 JI.mL-1 and a control. A similar experimental design with the same number of repetitions was used to evaluate the virulence using five concentrations of JI. The reproductive potential of the nematode on the insect were also evaluated. In this conditions, a significant pathogenic effect of the nematode on the insect was found with high mortality percentages; the virulence DL50 y TL50 was closely related to the concentration of JI.mL-1. The reproductive potential of the nematode on the insect could reach 2675 JI/insect with an average of 1832.

**USO DE LA BIOFUMIGACIÓN PARA EL MANEJO DE Meloidogyne spp., EN LAPRODUCCIÓN PROTEGIDA DE HORTALIZAS**

Se evaluó el efecto de la biofumigación del suelo con estiércol vacuno sobreMeloidogyne spp., en un túnel de cultivo protegido durante dos ciclos sucesivos de tomate y pepino. El estiércol vacuno semi-descompuesto se incorporó al suelo de los canteros (10kg.m de suelo) antes del establecimiento de los cultivos. Para determinar el efecto de la biofumigación sobre las poblaciones de Meloidogyne spp. en el suelo, se determinó el índice de infestación antes y después de la biofumigación, utilizando el método indirecto de bioensayo por planta indicadora, a partir de muestras colectadas a lo largo de los cinco canteros del túnel. Previo a la conformación de los semilleros, las semillas de cada cultivo se peletizaron con ECOMIC (10% del peso de la semilla) y recibieron la aplicación de FITOMAS (3mL. L de agua). Al término de cada cosecha se extrajeron las raíces en su totalidad y se determinó el grado de agallamiento. También se registraron los rendimientos de cada cultivo, expresados en kg de producto.túnel. El índice de infestación en suelo por Meloidogyne spp., después de la biofumigación disminuyó de 4,8 a 1,8 grados. El grado de agallamiento al final de cada ciclo de los cultivos evaluados se mantuvo por debajo de tres y los rendimientos alcanzados superaron en un 50% el obtenido en cosechas anteriores. En este trabajo se confirma que la biogumigación de suelos es una alternativa práctica para el manejo de Meloidogyne spp. en la producción protegida de hortalizas.

The effect of soil biofumigation on Meloidogyne spp. during two crop cycles (tomatocucumber) grown under sheltered conditions was evaluated. Semi-rotted cattle manure, used as the biofumigation material, was incorporated in the soil of the plots at a dose of 10 kg.m of soil. Before and after biofumigation, the soil infestation index of Meloidogyne spp. was determined in soil samples taken along the five plots of the tunnel using the indirect bioassay method. The seeds of both tomato and cucumber crops were pelleted with ECOMIC(10% of seed weight) and FITOMAS (3 mL.L of water) before the seedbeds were set up. The entire root system of each crop was removed from the soil at the end of the harvest. The gall index in the root system of both crops was evaluated. The yields of each crop were also recorded as kg of product per tunnel. The infestation level of the soil after biofumigation decreased from 4,8 to 1,8 degree. The gall index at the end of each crop cycle was always below three. The yields achieved in both crops were 50% higher than those obtained in these crops before this experiment. The results of this work confirm that soil biofumigation is a practicable alternative for the management of the root-knot nematode Meloidogyne spp. in the vegetable production under sheltered conditions.

Jessicathrips cubensis (THYSANOPTERA: THRIPIDAE), NUEVO GÉNERO Y ESPECIE PARA LA CIENCIA

Jessicathrips cubensis, collected on leaves of Acalypha wilkesiana Muell. Arg. in San Antonio de las Vegas, Havana Province, Cuba, is reported as a new genus and species for science.

Jessicathrips cubensis, colectada sobre hojas de Acalypha wilkesiana Muell. Arg. en San Antonio de las Vegas, provincia La Habana, Cuba, se informa como un nuevo género y especie para la ciencia.

Scirtothrips saturherminii (THYSANOPTERA: THRIPIDAE), NUEVA ESPECIE PARA LA CIENCIA

Scirtothrips saturherminii, collected on leaves of Bixa orellana L., in a protected ecosystem in San José de las Lajas, Havana Province, Cuba, is reported as a new species for science.

Se informa Scirtothrips saturherminii, colectada sobre hojas de Bixa Orellana L., en un ecosistema protegido en San José de las Lajas, provincia La Habana, como una nueva especie para la ciencia.

**USO DEL CEPILLO MECÁNICO PARA EL CONTEO DE POBLACIONES DE Steneotarsonemus spinki SMILEY (ACARI: TARSONEMIDAE)**

El ácaro Steneotarsonemus spinki se encuentra en el interior de las vainas de las hojas de arroz. En base a la difícil localización y a la alta densidad poblacional, se hace necesario utilizar un método de extracción que facilite la estimación de sus poblaciones. Se realizó un experimento para demostrar la factibilidad del uso del cepillo mecánico de la Bio Quip Products, a través de la comparación de los niveles poblacionales estimados por el conteo directo al estéreo microscopio. La ausencia de diferencia estadística entre la media poblacional de S. spinki en el método de conteo directo con respecto al cepillo mecánico, indica que ambos métodos son igualmente confiables para estimar las poblaciones del fitófago. Además no se detectó diferencia significativa en la duración del tiempo invertido en efectuar los conteos entre ambos métodos. El método de extracción con el cepillo mecánico, puede realizarse por dos personas, una que extraiga los ácaros mediante el cepillo y la otra que pueda contar los ácaros en la placa Petri bajo el estéreo microscopio, lo que ayudaría a procesar más muestras en igual periodo de tiempo.

The mite Steneotarsonemus spinki is found inside the leaf sheaths of rice. Due to the difficult location and high population density that occur inside the leaf sheaths of rice, it is necessary to use an extraction method that facilitates the estimation of mite populations with less effort at the time of carrying it out. An experiment was conducted to demonstrate the efficient use of the mechanical brush from the Bio Quip Products, through comparison with population levels estimated by direct count method under the stereo microscope. The absence of statistical difference between the population mean of S. spinki in the direct count method with respect to the mechanical brush, indicates that both methods are equally reliable for estimating populations of this phytophagous. Furthermore, no significant difference was detected in the time spent in making the counts by both methods. The extraction method with the mechanical brush can be done by two persons, one to remove the mites using the brush and the other counting the mites in the Petri dish under the stereo microscope, what would help to process more samples in the same period of time.

Amblyseius largoensis (MUMA), THE ONLY SPECIES COLLECTED TOGETHER WITH THE RED PALM MITE

ABOUT THE IDENTIFICATION OF SOME Trichoderma ISOLATES REPORTED IN REVISTA DE PROTECCIÓN VEGETAL

**INTERACCIÓN DE Glomus mosseae-Pochonia chlamydosporia var. catenulata Y Meloidogyne incognita EN TOMATE (Solanum lycopersicum L.)**