Vaccimonitor

Toxicidad de VA-DIFTET® por administración a dosis repetida en ratones

Una vez estudiada la toxicidad de la vacuna VA-DIFTET® (vacuna antidiftérica antitetánica) por administración a dosis única en dos especies de animales, se impone la evaluación a dosis repetida, teniendo en cuenta que el esquema de inmunización en humanos prevé la aplicación de tres dosis cuando el componente pertusis de la DPT está contraindicado. Se emplearon 210 ratones OF-1 de ambos sexos. Los grupos experimentales fueron similares a los de la prueba a dosis única con la vacuna dúplex, anatoxina diftérica, anatoxina tetánica, adyuvante, tiomersal, solución salina fisiológica y un grupo control no tratado. Un grupo de hembras y otro de machos fue asignado aleatoriamente a cada tratamiento y para recibir 1, 2 ó 3 dosis por vía intramuscular. Tras cada aplicación se evaluó la aparición de síntomas clínicos, el incremento de peso, el consumo de agua y alimento y la dinámica de la respuesta inmune contra las anatoxinas tetánica y diftérica, específicamente de tipo IgG, mediante ELISA indirecto. Al término de las observaciones los animales fueron sacrificados y se realizaron estudios anatomopatológicos. Además, durante el sacrificio se evaluó el índice relativo de bazo y timo, así como la relación bazo/timo. No se comprobaron alteraciones que evidenciaran toxicidad por parte de la vacuna y sus componentes. Asimismo, se demostró una marcada respuesta inmune en los grupos vacunales e inoculados con las anatoxinas. Se considera que los resultados de la prueba fueron satisfactorios.

Considering that the expected immunization schedule for man includes three doses of VA-DIFTET®, once demonstrated that this vaccine is safe for two animal species, the study of its toxicity by repeated dosing in mice was imperative, taking into account that in humans a three-dose schedule is used when the pertusis component is contraindicated. Two-hundred and ten OF1 mice of both sexes were used. Experimental groups were similar to those used in the single-dose toxicity study: duplex vaccine, diphtheria toxoid, tetanus toxoid, adjuvant, thiomersal, physiologic saline solution), and a non-treated control group. One group of male and another of female mice were randomly assigned to each treatment to receive 1, 2 or 3 intramuscular doses. Clinical symptoms, body weight increase, water and food intakes and the antibody titers (IgG by indirect ELISA) against the tetanus and diphtheria toxoids were evaluated after each administration. Finally, all mice were sacrificed and anatomopathological studies performed. The relative indexes of spleen and thymus and the spleen/thymus rate were also studied post-mortem. No evidence of toxicity was observed; however, those mice inoculated with the vaccine or the toxoids showed a significant immune response. Final results were considered satisfactory.

Susceptibilidad a agentes antimicrobianos de cepas de Neisseria meningitidis aisladas en portadores

Cuando se necesita conocer la susceptibilidad de Neisseria meningitidis (Nm) a las drogas antimicrobianas, se debe tener en cuenta que ésta se sitúa en un doble contexto: el relacionado con las drogas utilizadas en el tratamiento médico específico y el quimioprofiláctico, ambos con un mismo objetivo, la selección correcta del antimicrobiano in vivo. Esto obliga a estudiar de forma sistemática, la sensibilidad y resistencia de cepas aisladas en enfermos y portadores. Con el propósito de profundizar en el comportamiento de las cepas que circulan en Cuba actualmente, se realizó un estudio de susceptibilidad antimicrobiana a 90 cepas aisladas en portadores durante el primer semestre de 1998. Se utilizó el método de dilución en agar, determinando las concentraciones mínimas inhibitorias (CMIs) a: penicilina, ampicilina, rifampicina, sulfadiacina sódica, cloranfenicol, ciprofloxacina, ceftriaxona y cefotaxima. Los resultados de Nm in vitro a estas tres últimas drogas se conocen por primera vez en nuestro país. Se realizó también la búsqueda de cepas productoras de β-lactamasa. Predominaron las cepas sensibles a penicilina (82,2%) y con susceptibilidad intermedia a ampicilina (57,8%), mientras que, a sulfadiacina sódica el 70% de las cepas resultaron resistentes. El 100% de las cepas fueron sensibles al resto de los antimicrobianos.Se presentan las CMIs para cada droga y se relacionan las características fenotípicas de las cepas con los patrones de sensibilidad y resistencia a penicilina y sulfadiacina sódica. No se detectaron cepas productoras de β-lactamasa.

When it is necessary to determine the susceptibility of Neisseria meningitidis (Nm) strains to antimicrobial drugs, it is important to consider that it should be analyzed in a double context. One of them related to the use of drugs in a specific medical treatment; and the other; to chemoprophylatic drugs, both with the same purpose: the accurate selection of the “in vivo” antimicrobial agent. This requires the study of the sensitivity and resistance of strains isolated in both carriers and patients. With the aim of further studying the behavior of the strains that currently circulate in Cuba, an antimicrobial drug susceptibility study was conducted in 90 strains isolated from carriers during the first half of 1998. The agar dilution method was used to determine the minimum inhibitory concentrations (MICs) to: penicillin, ampicillin, rifampin, sulfadiazine, chloramphenicol, ciprofloxacin, ceftriaxone, cefotaxime. The study of the three latter drugs was done for the first time in our country. The search for β- lactamase-producer strains was also performed. There was a predominance of penicillin sensitive strains (82,2%) with an intermediate sensitivity to ampicillin (57,8%), while 70% of the strains were sensitive to sulfadiazine. Regarding the rest of the antimicrobial drugs, 100% of the strains were sensitive. The paper shows the MICs for each drug as well as the phenotypic characteristics of the strains with the penicillin and sulfadiazine sensitivity and resistance patterns. No β-lactamase-producer strains were found.

Resultados preliminares de la evaluación de diferentResultados diferentes concentraciones de la suspensión bacteriana empleada como inóculo en el Ensayo bactericida de Sangre Total

El Ensayo Bactericida del Suero (EBS), está considerado como la “prueba de oro” para evaluar la eficacia serológica de vacunas antimeningocócicas, teniendo en cuenta que la presencia de anticuerpos bactericidas en el suero se relaciona con la protección frente a esta enfermedad. Los niveles de anticuerpos anticapsulares obtenidos frente a los serogrupos A y C de Neisseria meningitidis han confirmado la utilidad de esta técnica. Sin embargo, se señala una pobre correlación entre los resultados de laboratorio y la protección clínica demostrada después de la aplicación de vacunas compuestas por vesículas de membrana externa del serogrupo B. Ison y colaboradores desarrollaron el Ensayo de Sangre Total (EST), que evalúa la capacidad bactericida de la sangre. Los resultados obtenidos indican que es un marcador de inmunidad más sensible que el EBS para el serogrupo B. En un estudio de evaluación de la vacuna antimeningocócica cubana VA-MENGOC-BC®, realizado en infantes y empleando el EST, se obtuvo un 50% de respondedores a la cepa homóloga (B:4:P1.19,15). La respuesta contra cepas heterólogas resultó baja. Teniendo en cuenta estos resultados y los de otros estudios realizados por los autores, se evaluó el comportamiento de la prueba utilizando concentraciones menores de la suspensión bacteriana empleada como inóculo. Para este propósito se estudió la actividad bactericida de la sangre de dos adultos sanos, mediante el EST frente a las cepas B:4:P1.19,15 (Cu 385/83) y B:15:P1.7,16 (MC58). Se evaluaron, además de la concentración recomendada originalmente (106ó107 UFC/mL), dos inferiores (105 y 104 UFC/mL). El primer donante mostró una actividad lítica del 40% frente a la cepa homóloga, a una concentración de inóculo de 107 UFC/mL. Para las concentraciones de 105 y 104 UFC/mL la lisis fue de alrededor del 80%. El comportamiento frente a la cepa heteróloga fue de un 25% de lisis a la mayor concentración del inóculo y aproximadamente de un 60% para las concentraciones inferiores. El segundo donante no mostró actividad lítica alguna frente a un inóculo de 107 UFC/mL de la cepa homóloga, mientras que empleando inóculos de 105 y 104 UFC/mL se obtuvieron respuestas de alrededor del 55% y del 65% respectivamente. El comportamiento frente a la cepa heteróloga fue de un 40% de lisis a la mayor concentración del inóculo y de un 70% y 80% a las concentraciones 105 y 104 UFC/mL respectivamente

The Serum Bactericidal Assay (SBA) has been considered the “golden standard” to evaluate the serological efficacy of meningococcal vaccines, taking into account that the presence of serum bactericidal antibodies is related with protection. The levels of A and C capsular polysaccharide antibodies against these serogroups has confirmed the reliability of this assay. The SBA has also been used to asses the efficacy of serogroup B vaccines, but in some studies, the correlation between serological efficacy and protection has been poor. Ison et al developed the Whole Blood Assay (WBA) that measures the complete bactericidal activity in blood. The results obtained indicate that this model is a more sensitive marker of immunity than SBA for serogroup B. The results from the evaluation of the Cuban meningococcal vaccine (VA-MENGOC-BC®) in infants using WBA showed that after the immunisation around 50% of infants exhibited >50% lysis of the vaccine strain (B:4:P1.19,15). The results against heterologous strains were poor. Taking into account these and other results we evaluated the behavior of the WBA using lower concentrations of the bacterial suspension used as inoculum. Blood from two healthy adults was screened for bactericidal activity using the WBA, against B:4:P1.19,15(Cu 385/83) and B:15:P1.7,16 (MC58) strains. In addition to the recommended concentration (106 or 107 CFU/mL), two lower concentrations were used (105 and 104 CFU/mL). The first donor showed a lytic activity of 40% against the homologous strain, at a concentration of 107 CFU/mL. At 105 and 104 CFU/mL concentrations, lysis was around 80%. The behavior against the heterologous strain showed 25% of lysis at a concentration of 107 CFU/mL and around 60% at lower concentrations. The second donor did not show lytic activity against the homologous strain at a concentration of 107 CFU/mL, while it showed 55% and 65% lysis at 105 and 104 CFU/mL concentrations, respectively. The results against the heterologous strain were 40% of lysis for the highest concentration and 70% and 80% for concentrations of 105 and 104 CFU/mL respectively.

La vacuna contra la hepatitis B, un reto al cáncer hepático

El cáncer hepático es el tipo de neoplasia más difundido en las regiones donde el virus de la hepatitis B (VHB) tiene alta prevalencia. Actualmente existe en el mundo una cantidad considerable de portadores asintomáticos, lo que hace que sea cada vez más complejo el control de la infección. Sin embargo, con el advenimiento de la vacuna contra el virus de la hepatitis B y su inclusión en el Programa Ampliado de Inmunización, esta situación pudiera cambiar, e ir reduciendo en el futuro el número de nuevos casos y los portadores, lo que traería como consecuencia una disminución de la mortalidad por cáncer hepático como secuela de este virus.

In geographical regions where the hepatitis B virus (HBV) has high prevalence, liver cancer is the most common neoplasm. Infection control is becoming more complex because of the considerable amount of asymptomatic carriers that exist in the world now. Nevertheless, with the discovery and production of a vaccine against hepatitis B virus and its subsequent inclusion in the Expanded Program for Immunization, this situation could change, by reducing the number of new cases and carriers in the future. This should in consequence reduce the mortality by virus-caused liver carcinoma.

Ensayo in vivo para determinar agentes extraños en células BHK-21 empleadas en la obtención de biológicos

La controversia sobre los parámetros de calidad de las células de línea como substrato para la obtención de productos farmacéuticos ha sido un tema de interés desde 1987. Las pruebas realizadas a las células, generalmente siguen las recomendaciones de los “Puntos a considerar en la Caracterización de Líneas Celulares empleadas para la Producción de Biológicos” entre las que se encuentra que estén libres de agentes adventicios. En este estudio al clon 13 de células BHK-21 procedente de riñón de hámster sirio recién nacido, se le determina la presencia de agentes extraños in vivo; así como su inocuidad en animales de experimentación. La prueba in vivo incluyó la inoculación de embriones de pollo por cavidad alantoidea y saco vitelino, ratones lactantes y adultos, curieles y conejos. Todos los animales fueron observados para determinar signos clínicos de infección viral. En los embriones se observó la viabilidad. En todos los casos se mantuvo el 100% de los embriones y animales vivos y saludables durante el período de observación. Las células del banco estaban libres de virus hemaglutinantes y hemadsorbentes, virus de la coriomeningitis linfocítica y coxsackie. Los pesos de los animales inoculados fueron mayores que los de los animales controles. Las células no presentaron evidencia de agentes extraños en los ensayos in vivo y fueron bien toleradas e inocuas en los animales de experimentación.

Acceptance of cell lines as a substrate for production of pharmaceuticals has been a controversial topic since 1987. The cells are generally tested according to the recommendations that appear in “Points to Consider in the Characterization of Cell Lines Used to Produce Biologicals”. They should be free from adventitious agents; among others in vitro and in vivo tests are recommended for this purpose. In this report BHK-21-cell clone 13 from new born Syrian hamster kidney cells is assayed in vivo to determine adventitious agents; it is also tested for nonspecific innocuousness in experimental animals. In vivo tests included the inoculation of adult mice,suckling mice, guinea pigs, rabbits, and embryonated chicken eggs by the yolk sac and allantoic routes of inoculation. All animals were observed for clinical signs of viral infection. Egg viability was determined. The results showed that 100% of the animals and eggs remained healthy and survived the observation period. The cell bank was free of haemadsorbent, haemagglutinating, lymphocytic chroriomeningitis and Coxsakie viruses. The weights of the tested animals were higher than the weights of the control animals. The cells did not present evidences of adventitious agents in the in vivo assays and they were well accepted by the experimental animals.