Vaccimonitor

Phast System acrylamyde gel electrophoresis and chromatography method standardization for the characterization of new vaccine antigens and culture media components

En este trabajo se realizó un análisis de diferentes parámetros que caracterizan la estandarización para la determinación del tamaño molecular de nuevos antígenos de interés vacunal, a través de electroforesis en “Phast System” y de distintas matrices cromatográficas. La evaluación electroforética de la linealidad en las curvas de patrones indicó valores de coeficientes de correlación y determinación superiores a 0,98, con una adecuada repetibilidad; no se manifestaron diferencias entre los resultados obtenidos por varios analistas, en días diferentes y el método resultó ser exacto y robusto en las condiciones recomendadas. Se evaluaron los parámetros que caracterizan la eficiencia en el empaquetamiento de cuatro matrices cromatográficas (Superosa 12, Sephacryl S-100, Sepharosa CL- 4B y Sephacryl S-1000). Los resultados obtenidos para ambos sistemas de determinación permitieron la evaluación satisfactoria de muestras de proteínas de membrana externa y lipopolisacárido, procedentes de Vibrio cholerae, Leptospira ssp, Pseudomona aeruginosa y Shigella ssp.

We have analyzed different parameters to standardize the molecular weight determination of new vaccine antigens by gel electrophoresis in the Phast System and by a chromatography method. Linearity was obtained by SDS-PAGE using the reference curves with correlation and determination coefficients higher than 0.98. Repeatability was acceptable and there were no differences between the results of several analysts obtained on three different days. This method is exact and robust under the recommended conditions. Column efficiency was evaluated in four chromatographic matrixes (Superosa 12, Sephacryl S-100 y Sepharosa CL- 4B y Sephacryl S-1000). Good results in both systems allowed the evaluation of outer membrane proteins and lipopolysaccharide from Vibrio cholerae, Leptospira ssp., Pseudomona aeruginosa, Shigella ssp.

VA-MENGOC-BC® efficacy evaluation in Balb/c mice challenged with serogroups A, B and C

Hasta la fecha se han desarrollado varios modelos experimentales para la reproducción experimental de la enfermedad meningocócica humana, cuya utilidad en la evaluación de la eficacia de medios de inmunización y terapia, así como en el estudio de la patogenia de la enfermedad es incuestionable. En el presente trabajo se describe la evaluación de la eficacia de VA-MENGOC-BC® y la Inmunoglobulina Humana Antimeningocócica BC frente a Neisseria meningitidis de los serogrupos A, B y C, empleando el ratón Balb/c tratado con mucina y dextrana férrica como estimulantes de la virulencia. Los ratones fueron inmunizados por vía intraperitoneal con una, dos o tres dosis de 0,5 mL de VA-MENGOC-BC®. El intervalo entre dosis fue de tres semanas entre la primera y segunda dosis y de 15 días entre la segunda y la tercera. El reto se realizó con dosis letales (1-3 x DL50) de N. meningitidis A, B ó C a los 15 ó 21 días después de aplicada la última dosis de vacuna. Para evaluar la actividad de la Inmunoglobulina Antimeningocócica BC como medio de inmunización pasiva, se trató otro grupo de ratones, 30 min, 2 y 6 h después habérseles inoculado los gérmenes. Se administraron en cada caso 5 mg de la inmunoglobulina por vía intraperitoneal o intravenosa en un volumen de 0,1 mL. Los resultados demostraron que tanto VA-MENGOC-BC® como la Globulina Antimeningocócica BC confieren protección significativa contra un reto letal con N. meningitidis en el modelo de ratón tratado con factores estimulantes de la virulencia.

There are several animal models for the experimental reproduction of human meningococcal disease. Their usefulness in the evaluation of immunization and therapy, as well as in the pathogenesis of the disease is unquestionable. The present paper describes the assessment of the efficacy of VA-MENGOCBC ® and the Human BC Antimeningococcal Globulin against Neisseria meningitidis groups A, B and C using mice treated with iron dextran and mucin as virulence enhancers. Mice were immunized intraperitoneally with one, two or three doses (0.5 mL) of VA-MENGOC-BC®. The time elapsed between the first and a second dose was three weeks and 15 days between the second and the last one. The challenge was performed with lethal doses (1-3xDL50) of N. meningitidis A, B or C, 15 or 21 days after the last immunizing dose. In order to test the efficacy of the Human Antimeningococcal Globulin as a means of passive immunization, a different group of mice was treated 30 min, 2 h and 6 h after bacterial inoculation. Five milligrams of globulin were administered intravenously or intraperitoneally to each mouse. Results demonstrated that VA-MENGOC-BC® and the Human BC Antimeningococcal Globulin confer significant protection against a lethal challenge with N. meningitidis A, B and C in mice treated with virulence enhancement agents.

Procedures for obtaining the biological reagents for the DAVIH Ag P24 and DAVIH Ac P24 kits

La pandemia de SIDA es uno de los problemas actuales más graves que afectan a la humanidad. Como todavía no se cuenta con una vacuna efectiva a pesar de los esfuerzos realizados por científicos en todo el mundo, la utilización de drogas antirretrovirales para mejorar la calidad de vida de los pacientes es lo que ha resultado más exitoso, de ahí la importancia de poseer medios para realizar un diagnóstico temprano de la infección y para monitorear su progresión con el objetivo de poder actuar sobre ella. El presente trabajo describe la obtención de los componentes biológicos que se requieren para la producción de dos estuches que se utilizan en nuestro país en todos los estudios que tienen relación con la infección VIH-SIDA. Para ello se realizó un protocolo que incluyó varias etapas de purificación e inmovilización de diferentes moléculas. Como resultado se obtuvieron la proteína de 24 Kd del VIH-1 y anticuerpos monoclonales y policlonales humanos contra esta proteína, con adecuados grados de pureza y actividad biológica. La combinación de etapas en este protocolo, permitió ir obteniendo productos que además de utilizarse en la etapa siguiente también por sí mismos, algunos de ellos, constituyeron reactivos de los estuches.

AIDS epidemic is one of the most serious problems affecting humanity today. Since science, despite all the great efforts made by scientists throughout the world, has not been able to find an effective vaccine to cure this disease, the use of anti-retroviral drugs has given the most successful results in improving life quality of AIDS patients. Hence, the importance of having the means to carry out an early diagnosis of the infection, as well as monitoring its progression with the purpose of having an influence on it. The present research work describes the obtaining of biological components required for the production of two kits used in Cuba for all HIV-AIDS related studies. To achieve this, a protocol was made that included different stages in the purification and immobilization of several molecules. Monoclonal antibody anti p24, HIV-1 p24, and polyclonal human antibodies anti p24 were obtained, with an adequate level of purity and biological activity allowing its use as intermediate products in the above mentioned stages and as reagents comprised in the kits.